La mortalité cardiovasculaire représente la première cause de mortalité chez les sujets diabétiques de type 2. La dyslipidémie de ces patients caractérisée par le quatuor : hypertriglycéridémie, baisse du HDL-cholestérol, augmentation du nombre de LDL petites et denses et hyperlipidémie postprandiale, constitue un facteur de risque prépondérant. Cette dyslipidémie est en grande partie expliquée par l’accumulation sanguine des lipoparticules riches en triglycérides (TRL) d’origine hépatique (VLDL) et intestinale (chylomicrons). L’hyperproduction des chylomicrons, déjà connue pour les VLDL, est une composante nouvellement reconnue d’insulinorésistance. L’action inhibitrice aigüe de l’insuline sur la production des VLDL est absente chez le sujet diabétique de type 2. Dans notre étude, nous avons montré l’absence d’effet aigu de l’insuline sur la production des chylomicrons chez les sujets diabétiques de type 2 grâce à une étude cinétique utilisant un isotope stable (D3-leucine). / The cardiovascular mortality represents the first cause of mortality in human type 2 diabetes. The typical diabetic dyslipidemia characterized by the quartet: high triglyceride levels, low HDL-cholesterol, increased number of small and dense LDL particles and postprandial hyperlipidemia, is a major cardiovascular risk factor. This dyslipidemia is mainly explained by the accumulation of triglyceride-rich lipoproteins (TRL) from liver (VLDL) and intestine (chylomicrons).The overproduction of chylomicrons, as is known for VLDL, is a newly characteristic of insulin resistant states. The acute inhibitory effect of insulin on VLDL production is absent in type 2 diabetic patients. In our study, we have shown the absence of acute inhibitory effect of insulin on chylomicron production in type 2 diabetic patients, using a kinetic study with stable isotope (D3-leucine).

Le diabète de type 2 résulte d’une diminution de la masse fonctionnelle de cellules bêta pancréatiques, possiblement liée à une dédifférenciation cellulaire : les cellules bêta restent présentes, mais leur production d’insuline s’effondre. Ce phénomène, s’il est avéré, ouvrirait la voie à de nouvelles recherches thérapeutiques. Mais s’il est démontré dans certains modèles murins, il n’existe que des arguments très indirects chez l’Humain. Notre objectif est d’apporter de nouveaux arguments pour ce phénomène chez l’humain en modélisant la dédifférenciation de cellules bêta humaines, en utilisant la lignée de cellules bêta pancréatiques humaines EndoC-βH1 et des îlots pancréatiques humains primaires. Nous avons découvert qu’un traitement par FGF2 effondrait la production d'insuline, et des études par RNA-Seq ont révélé un effondrement de plusieurs marqueurs spécifiques de la cellule bêta, incluant INS, MAFB, SLC2A2, SLC30A8 and GCK. Parallèlement, le traitement par FGF2 induisait l'expression de gènes normalement absents d’une cellule bêta, tels les facteurs de transcription MYC, HES1, SOX9 et NEUROG3. La dédifférenciation induite par le FGF2 était temps- et dose-dépendante, et réversible après wash-out. En outre, nous démontrons que la dédifférenciation modifie l’interaction de la cellule bêta avec son environnement : l'expression de TNFRSF11B (ostéoprotégerine), un récepteur tronqué pour RANKL (receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand), est induite lors du traitement par FGF2, et les cellules β sont alors protégées contre la signalisation RANKL (TNFSF11) par inhibition de la phosphorylation de P38. Enfin, les analyses des données transcriptomiques ont révélé des niveaux accrus d'ARNm de FGF2 dans les cellules canalaires, endothéliales et stellaires dans les pancréas d’individus diabétiques de type 2, alors que les taux d'ARNm de FGFR1, SOX9 et HES1 sont augmentés dans les îlots pancréatiques d’individus diabétiques de type 2. Nous avons donc développé un modèle de dédifférenciation des cellules bêta humaines induit par le FGF2, identifié de nouveaux marqueurs de dédifférenciation, et trouvé des signes d'augmentation de FGF2, FGFR1 et des marqueurs de dédifférenciation au cours du diabète de type 2. / Clinical and experimental evidences indicate a reduced functional β cell mass in type 2 diabetes. A recent hypothesis implicates β cell dedifferentiation in this reduction of functional β-cell mass. The vast majority of data related to β cell dedifferentiation derive from rodent models, and only indirect evidences are available in human. Our goal was to model human β-cell dedifferentiation using the functional human pancreatic β-cell line, EndoC-βH1, and primary human pancreatic islets. By screening a number of molecules in EndoC-βH1 cells, we found that FGF2 treatment dramatically reduces insulin production and MAFA expression, a β cell specific transcriptional activator. RNASeq of EndoC-βH1 cells treated with FGF2 revealed the down-regulation of additional human β cell specific markers, including INS, MAFB, SLC2A2, SLC30A8 and GCK. In parallel, FGF2 treatment activated the expression of β cell disallowed genes. This is the case for transcription factors such as MYC, HES1, SOX9 and NEUROG3. This is also the case for hormones such as GASTRIN and PYY. Such data were further confirmed by qPCR and immunostaining on primary human islets, attesting that dedifferentiation process occurs in human primary β cells. FGF2-induced dedifferentiation was time- and dose-dependent, and reversible upon wash-out. Furthermore, transcriptomic analysis revealed an increase of TNFRSF11B (osteoprotegerin) expression upon FGF2 treatment. TNFRSF11B is a decoy receptor for the receptor activator of nuclear factor kappa B ligand (RANKL). Our experimental data on EndoC-βH1 demonstrated that FGF2-induced TNFRSF11B protected β cells against TNFSF11 (RANKL) signaling by preventing P38 phosphorylation. Finally, analyses of transcriptomic data revealed increased FGF2 mRNA levels in ductal, endothelial and stellate cells in pancreases from type 2 diabetic patients, whereas FGFR1, SOX9 and HES1 mRNA levels increased in islets from type 2 diabetic patients. In conclusion, we developed a robust model to study β-cell dedifferentiation in a human context. We discovered SOX9, HES1 and MYC as positive markers of human β cell dedifferentiation, demonstrating evidence for dedifferentiation process in human β cell.

by Annie Chi Kwan Lam. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (leaves 112-119). / Abstracts in English and Chinese ; questionnaires also in Chinese. / Acknowledgements --- p.i / Abstract --- p.ii-vi / List of Figures --- p.vii / List of Tables --- p.vii-x / List of Abbreviations --- p.xi / Table of Contents --- p.xii-xvi / Chapter Chapter One: --- Background / Chapter 1.1 --- Diabetes Mellitus: A public health burden / Chapter 1.1.1 --- Definition and Health Consequences --- p.2 / Chapter 1.1.2 --- Prevalence of Type 2 Diabetes Mellitus in Asia --- p.3 / Chapter 1.1.3 --- Prevalence of Type 2 Diabetes Mellitus in the Hong Kong Chinese Population --- p.4 / Chapter 1.1.4 --- Medical Burden of Diabetes Mellitus in Hong Kong --- p.7 / Chapter 1.2 --- Clinical Intervention To Improve Glycemic Control / Chapter 1.2.1 --- The United Kingdom Prospective Studies (UKPDS) --- p.8 / Chapter 1.2.2 --- The Diabetes and Complications Trial (DCCT) --- p.9 / Chapter 1.2.3 --- Another Clinical Trial of Lifestyle Intervention --- p.10 / Chapter 1.2.4 --- Physical Activity in Diabetes Management --- p.12 / Chapter 1.3 --- Dietetic Situation in Hong Kong / Chapter 1.3.1 --- Survey of the Hong Kong Dietetics Situation --- p.15 / Chapter 1.3.2 --- Current Situation of Prince of Wales Hospital --- p.17 / Chapter 1.3.3 --- Diabetes Knowledge and Compliance Level in Hong Kong Patients --- p.22 / Chapter 1.4 --- Medical Nutrition Therapy and Practice Guidelines / Chapter 1.4.1 --- Definition --- p.24 / Chapter 1.4.2 --- Development of the Practice Guidelines --- p.24 / Chapter 1.4.3 --- Recommended Procedure for the Practice Guidelines in Type 2 Diabetic Patients --- p.28 / Chapter 1.5 --- Study Purpose and Objectives --- p.32 / Chapter Chapter Two: --- Study Design and Method / Chapter 2.1 --- Research Design --- p.34 / Chapter 2.2 --- Sample Selection --- p.34 / Chapter 2.2.1 --- Method of Randomization --- p.35 / Chapter 2.2.2 --- Sample Size Calculation --- p.36 / Chapter 2.2.3 --- Inclusion Criteria --- p.37 / Chapter 2.2.4 --- Exclusion Criteria --- p.38 / Chapter 2.3 --- Summary of Patient Procedure --- p.38 / Chapter 2.3.1 --- Definition Of The Two Treatments --- p.41 / Chapter 2.3.2 --- Research Procedure For PGC Group --- p.43 / Chapter 2.3.3 --- Research Procedure For CC Group --- p.49 / Chapter 2.4 --- Outcome Measures / Chapter 2.4.1 --- Anthropometrics Variable --- p.50 / Chapter 2.4.2 --- Laboratory Data --- p.51 / Chapter 2.4.3 --- Pre-testing For Questionnaires --- p.51 / Chapter 2.4.4 --- Dietary Variables --- p.52 / Chapter 2.4.5 --- Measurement of Diabetes Knowledge --- p.53 / Chapter 2.4.6 --- Measurement of Barriers To Diet Compliance --- p.54 / Chapter 2.4.7 --- Measurement of Physical Activity --- p.54 / Chapter 2.4.8 --- Measurement of Barriers To Exercise Compliance --- p.54 / Chapter 2.4.9 --- Measurement of Overall Compliance in MNT --- p.55 / Chapter 2.5 --- Statistical Analysis --- p.57 / Chapter 2.6 --- Ethics --- p.58 / Chapter Chapter Three: --- Results / Chapter 3.1 --- Subjects and Response Rate --- p.60 / Chapter 3.1.1 --- Baseline Characteristics of the PGC and CC Group --- p.61 / Chapter 3.2 --- Results of Intervention Process Between PGC and CC Group / Chapter 3.2.1 --- Attendance Rate --- p.67 / Chapter 3.2.2 --- Total Patient-Dietitian Contact Time --- p.67 / Chapter 3.2.3 --- Satisfaction With Dietetic Services --- p.68 / Chapter 3.2.4 --- Other Alternatives Treatment --- p.69 / Chapter 3.2.5 --- Changes In Medical Therapy After Intervention --- p.69 / Chapter 3.2.6 --- Hospital Admission --- p.71 / Chapter 3.3 --- Outcomes - Questionnaires Results Between PGC and CC Group / Chapter 3.3.1 --- Food Frequency Questionnaire --- p.72 / Chapter 3.3.2 --- Physical Activity Questionnaire --- p.72 / Chapter 3.3.3 --- Diabetes Knowledge --- p.72 / Chapter 3.3.4 --- Barrier To Diet Compliance --- p.72 / Chapter 3.3.5 --- Barrier To Exercise Compliance --- p.73 / Chapter 3.3.6 --- Overall Medical Nutrition Therapy Compliance --- p.78 / Chapter 3.4 --- Outcomes - Anthropometry Results Between PGC and CC Group --- p.79 / Chapter 3.5 --- Outcomes - Laboratory Results Between PGC and CC Group / Chapter 3.5.1 --- Glycemic Control --- p.83 / Chapter 3.5.2 --- Lipid --- p.84 / Chapter Chapter four: --- Discussion and Conclusion / Chapter 4.1 --- Enrollment / Chapter 4.1.1 --- Response Rates --- p.91 / Chapter 4.1.2 --- Behavior Change Model --- p.92 / Chapter 4.1.3 --- Participation of Subjects --- p.93 / Chapter 4.1.4 --- Randomization --- p.93 / Chapter 4.2 --- Measurements / Chapter 4.2.1 --- Questionnaire --- p.94 / Chapter 4.2.2 --- Blinding Process --- p.94 / Chapter 4.2.3 --- Laboratory --- p.94 / Chapter 4.3 --- Outcomes / Chapter 4.3.1 --- Questionnaire Outcomes --- p.95 / Chapter 4.3.2 --- Anthropometry Outcomes --- p.100 / Chapter 4.3.3 --- Glycemic Outcomes --- p.102 / Chapter 4.3.4 --- MNT Process Outcomes --- p.103 / Chapter 4.3.5 --- Limitations --- p.104 / Chapter 4.4 --- Clinical Significance and Implications --- p.104 / Chapter 4.5 --- Conclusions and Recommendations --- p.110 / References --- p.112 / Appendices --- p.120

Zhao Hailu. / "June 2002." / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2002. / Includes bibliographical references (p. 192-210). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. Ann Arbor, MI : ProQuest Information and Learning Company, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web. / Abstracts in English and Chinese.

Leung Yun Shing Wilson. / "May 2003." / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2003. / Includes bibliographical references (p. 157-184). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. Ann Arbor, MI : ProQuest dissertations and theses, [200-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Mode of access: World Wide Web. / Abstracts in English and Chinese.

Le diabète de type 2 (DT2) progresse dans le monde entier de manière alarmante. Les complications sont graves et les traitements sont souvent inefficaces et donnent beaucoup d'effets indésirables. Le resvératrol (RSV) et la curcumine (Cur), des polyphénols naturels, sont connus pour leurs différentes activités pharmacologiques, y compris antidiabétiques. Les objectifs de cette étude ont été d'évaluer les effets de la combinaison de ces deux polyphénols sur l'amélioration de la tolérance au glucose. Nos résultats montrent que chez des souris soumises à un régime riche en graisse (HFD), le RSV améliore la tolérance au glucose alors que la Cur n'a pas d'effet significatif. De manière surprenante, lorsque les deux polyphénols sont administrés simultanément, la Cur inhibe l'effet du RSV sur l'amélioration de la tolérance au glucose. Pour expliquer cet antagonisme, nous avons évalué l'effet de ces polyphénols associés ou pas sur le métagénome. Nos résultats indiquent que la Cur et le RSV normalisent la flore intestinale altérée par le HFD. Lors d'une association de ces polyphénols, la Cur inhibe aussi l'effet du RSV sur la croissance de certaines espèces bactériennes. Ainsi, la Cur bloque l'effet inhibiteur du RSV sur Alistipes putredinis. Nos données indiquent que ces polyphénols sont en général anti-inflammatoires mais leur association peut être synergique in vitro ou bien, à l'opposé, antagoniste in vivo pour l'expression de certaines cytokines. Afin d'évaluer l'effet physiologique de la modification de la flore intestinale par les polyphénols, nous avons étudié le métabolome. Parallèlement au métagénome, chacun des polyphénols améliore le profil métabolomique altéré par le HFD. Cependant, la Cur s'oppose à l'effet du RSV. Les données de ce travail indiquent que la Cur n'est pas associable au RSV pour améliorer la tolérance au glucose. / Each year, the worldwide impact of type 2 diabetes (T2D) increases significantly. The complications are serious and treatments are often ineffective and provide a lot of side effects. Resveratrol (RSV) and curcumin (Cur) are natural polyphenols known for their different pharmacological activities, including anti-diabetic. The objectives of this study were to evaluate the effects of the combination of these polyphenols on glucose tolerance improvement. Our results show that in animals fed with a high fat diet (HFD), RSV improved glucose tolerance while Cur displayed no significant effect. Surprisingly, when both polyphenols were administered simultaneously, Cur inhibited the effect of RSV on glucose tolerance improvement. To explain this antagonism between both polyphenols on glucose tolerance, we have evaluated the effect of these compounds on the metagenome associated or not. Our results indicate that RSV and Cur normalized gut flora altered by HFD. When Cur and RSV were administrated simultaneously, Cur inhibited the effect of RSV on the growth of some bacterial species. Thus, Cur blocked the inhibitory effect of RSV on Alistipes putredinis. Our data indicate that these polyphenols displayed generally anti-inflammatory effects, but their combination may be either synergistic in vitro or antagonistic in vivo on the expression of some cytokines. To evaluate the physiological effect of the gut flora changes induced by polyphenols, we have drawn a parallel between metagenome and metabolome data. Each of the polyphenols improved by itself the metabolomic profile altered by HFD. However, Cur hindered the effect of RSV. In a whole, this study indicates that combination of Cur with RSV is not successful to further enhance the RSV-induced improvement of glucose tolerance.

Contexte : Le schwannome vestibulaire (SV) est une tumeur bénigne de la gaine du nerf vestibulaire. La plupart des SV présentent une inactivation somatique bi-allèlique du gène suppresseur de tumeur NF2. L’inactivation congénitale du gène NF2 est impliquée dans le développement de la Neurofibromatose de type 2, une maladie génétique autosomique dominante prédisposant au développement de tumeurs multiples du système nerveux central et en particulier de schwannomes vestibulaires bilatéraux. Le traitement des schwannomes vestibulaires repose sur la chirurgie ou la radiothérapie délivrée en conditions stéréotaxiques. La réduction de la dose d’irradiation des schwannomes vestibulaires a permis d’améliorer le pronostic fonctionnel auditif tout en garantissant un taux de réponse satisfaisant. Pourtant de nombreux patients présenteront une surdité neurosensorielle progressive. Afin de poursuivre cette réduction de dose d’irradiation, des modèles biologiques fidèles récapitulant le statut d’inactivation du gène NF2 et la surdité neurosensorielle sont nécessaires à l’élaboration d’une approche préclinique.Problématique : Nous avons proposé de développer des systèmes modèles in-vitro et in-vivo compatibles avec l’étude de la radiosensibilité des schwannomes vestibulaires en combinaison avec des thérapies ciblant les voies de signalisation spécifiquement activées par la perte de fonction NF2.Méthodes : Les lignées cellulaires humaines de schwannomes vestibulaires NF2 (HEI_193, HEI_182), et de cellules de Schwann vestibulaire contrôle (HEI_286) ont été cultivées en essai clonogénique afin de déterminer le nombre d’unité formatrices de colonies à doses croissantes d’inhibiteur mTOR (Rapamycine), PI3K (GDC_0941), mTOR et PI3K (BEZ_235) pour déterminer le 50% d’inhibition de croissance (GI50%) puis en combinaison à doses croissantes de radiation gamma (Co60). La lignée cellulaire murine inactivée pour nf2 (SC4#9) a été utilisée pour réaliser des greffes syngéniques orthotopiques. La croissance des tumeurs a été suivie par IRM et bioluminescence et l’audition déterminée par potentiels évoqués auditifs. L’analyse histologique des cochlées a été réalisée par coloration en hématoxyline et éosine puis par fluorescence après clarification cochléaire. Des volumes complets ont été obtenus par microscopie confocale à balayage laser.Résultats : Les essais clonogéniques réalisés en Agarose ont identifié une radiorésistance relative des lignées humaines de schwannomes mutées pour NF2 par comparaison au contrôle humain non muté. Cette résistance identifiée en réponse à l’exposition à une dose unique d’irradiation gamma peut être contournée par l’inhibition de la voie mTOR au moment de l’irradiation restituant une sensibilité comparable au contrôle humain non muté. Une tendance à un bénéfice de l’association d’une inhibition mTOR à un inhibiteur PI3 kinase a été retrouvée à une dose maximum d’irradiation. Un modèle murin de schwannome vestibulaire qui récapitule la croissance dans l’angle ponto-cérébelleux et la perte d’audition a été développé par injection stéréotaxique dans le paquet acoustico faciale. Le suivi de croissance de ce schwannome a été caractérisé par IRM et bio-luminescence in-vivo. Enfin un protocole de clarification cochléaire a été adapté aux mammifères murins pour permettre l’étude histologique de cochlées intactes compatible avec l’étude de l’otoxicité des schwannomes et/ou de leur traitement .Conclusion : Les modèles décrits dans cette thèse permettent l’évaluation pré-clinique de stratégies thérapeutiques combinant thérapie ciblée et irradiation gamma en dose unique. L’amélioration des connaissances des mécanismes participant à l’ototoxicité des schwannomes et de leur traitement permettra d’améliorer le ciblage moléculaire afin de réduire les effets auditifs secondaires de la radiochirurgie. / Context: Vestibular schwannomas (VS) are benign neoplasm arising from the Schwann cells of the vestibular nerve. Most of sporadic VS carry a bi-allelic inactivation of the tumor suppressor gene NF2. Congenital inactivation of the NF2 gene is linked to the onset of Neurofibromatosis type 2 (NF2), a genetic condition predisposing to the development of multiple benign tumor of the central nervous system with bilateral VS as a hallmark. Treatment of VS is either surgical or by use of radiation therapy delivered in stereotactic condition. A significant dose reduction has led to improving the hearing outcomes while maintaining good tumor control. Meanwhile a significant number of treated patients will develop a progressive sensorineural hearing loss (SNHL). Laboratory models that faithfully recapitulate NF2 gene inactivation and SNHL are needed to pursue the reduction of the dose delivered.Aim: We aimed at developing new models in-vitro and in-vivo for the study of vestibular schwannoma radio sensitivity in combination with selected compounds that selectively target the pathways activated secondary to NF2 loss of function.Methodes: Human vestibular schwannoma cell lines (HEI_193, HEI_182) and control human Schwann cell line (HEI_286) were used in clonogenic assay to determine the number of colony forming unit (CFU) spontaneously and at increasing dosing of mTOR inhibitor (Rapamycin), PI3 kinase inhibitor (GDC_0941), PI3K-mTOR dual inhibitor (BEZ_235) to determine the 50% growth inhibitory threshold (GI50%) then in combination with increasing radiation regimen of gamma radiation emitted by a source of Co60. The mouse cell line inactivated for nf2 (SC4#9) was used to generate orthotropic syngrafts. The growth of the tumor was monitored using MRI and bioluminescence imaging and hearing was tested by recording auditory brainstem responses. Pathology of the cochlea were obtained from paraffin embedded sections and then using fluorescence confocal microscopy of whole mounted transparent cochleae.Results: Soft agar clonogenic assays were used and identified a resistance to radiation therapy in human cell lines of VS inactivated for NF2 when compared to the non-mutated control. This radiation resistance could be overcome by pre-exposure to the mTOR inhibitor Rapamycin allowing a return to the radiosensibility of non-mutated control. There was a tendency toward a beneficial effect when using a dual inhibition of the mTOR and PI3 kinase at a maximum dose of exposure to radiation. A mouse model of VS has been developed by stereotactic seeding of nf2 deficient cell line SC4#9 targeting the cochleo-vestibular nerve complex. It recapitulates the growth in the suitable micro-environment and secondary SNHL. The growth has been characterized using MRI and in-vivo bioluminescence imaging. Hearing loss was confirmed using sequential ABR. Last a protocol for the clarification of whole mounted cochleae has been adapted to species of rodents suitable for the pathological study of ototoxic change secondary to VS and/or its treatment.Conclusion: The models presented in this thesis may be used for the preclinical evaluation of combined therapeutic approaches with single dose gamma radiation. A better understanding of the mechanisms involved in ototoxicity secondary to VS and of its treatment would improve the molecular targeting in order to warrant better auditory outcomes.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1995. / Vita. Includes bibliographical references (leaves [188]-209).