Objetivo: Identificar os principais fatores prognósticos patológicos do carcinoma urotelial tratado com cistectomia radical e linfadenectomia pélvica, analisar o impacto desses na sobrevida livre de doença (RFS), câncer específico (CSS), geral (OS) e propor um conjunto de fatores que possa prever a evolução. Métodos: Realizamos levantamento dos casos de cistectomia radical e linfadenectomia no período de 2006 a 2009 no Hospital das Clinicas da FMUSP. Correlacionamos fatores prognósticos patológicos estádio (pT), grau tumoral, presença de metástase linfática (pN), invasão linfovascular (LVI), perineural (PNI) e presença de CIS com RFS, CSS e OS. Consideramos significante quando p > 0,05. Resultados: Avaliamos 128 casos que obedeceram aos critérios sendo 20 (15,6%) femininos e 108 (84,4%) masculinos, idades variando de 41 a 84 anos e média de 67 anos. Constatamos associação de recidiva com estádio >pT2 (p=0,032) e pN+ (p=0,003). Os fatores estádio >pT2 (p=0,001), pN+ (p=0,034) LVI+ (p=0,038), e PNI+ (p=0,024) tiveram associação com óbito pela doença e a morte geral com estádio >pT2 (p=0,001), pN+ (p=0,038) e PNI+ (p=0,01). A análise multivariada demonstrou que apenas estádio >pT2 e pN+ são os fatores prognósticos independentes na RFS, CSS e OS. Conclusão: A análise dos fatores patológicos após cistectomia radical e linfadenectomia demonstrou que estádio >pT2 e pN+ são os fatores prognósticos mais importantes no CaB / Objective: To identify the most important pathologic prognostic factors for urothelial bladder cancer treated by cystectomy and pelvic lymphadenectomy, analyze the impact of these on recurrence and mortality and suggest a group of factors that can predict the outcome after surgery. Method: We review all radical cystectomy and lymphadenectomy cases at the Clinical Hospital of São Paulo Medical School from 2006 to 2009. We correlate the following pathologic prognostic factors tumor stage (pT), tumor grade, lymphonodal metastasis (pN), lymphovascular invasion (LVI), perineural invasion (PNI), presence of CIS with RFS, CSS and OS. We considered a significant association p<0.05. Results: We selected 128 cases for this study. There were 20 (15.6%) females and 108 (84.4%) males, ages ranging from 41 years to 84 years and an average 67 years old. The tumor recurrence was associated with stage >pT2 (0,032) and pN+ (p=0.003). Stage >pT2 (p=0.001), pN+ (p=0.034), LVI+ (p=0.038) and PNI+ (p=0.024) was associated with death by cancer and overall death with stage >pT2 (p=0.001), N+ (p=0.038) and PNI (p=0.01). The multivariate analysis found that only stage >pT2 and pN+ were independent prognostic variable for RFS, CSS and OS. Conclusion: The analysis of pathologic prognostic factors after radical cystectomy and pelvic lymphadenectomy show that stage >pT2 and pN+ has strong association with RFS, CSS and OS

Introdução: O carcinoma urotelial de bexiga (CUB) é o segundo tumor mais frequente do trato urinário. A perda da função do p53 é a alteração mais conhecida do carcinoma urotelial de alto grau invasivo. Prima-1 é uma pequena molécula, a qual restaura a função do p53 mutado promovendo a morte celular em vários tipos celulares. O objetivo do nosso estudo foi analisar o efeito do Prima-1 na indução da apoptose mediada por p53 após indução do dano ao DNA em linhagens de CUB. Material e métodos: O mecanismo de ação do Prima-1 foi avaliado em duas linhagens celulares de câncer de bexiga, T24 que tem como característica a mutação do p53 e RT4 que possui p53 intacto. Características morfológicas da apoptose, alterações no potencial de membrana mitocondrial e análise da expressão de treze genes envolvidos na apoptose mediada por p53 foram avaliados através de observação microscópica e reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (qRT-PCR). Resultados: Prima-1 foi capaz de reativar a função da P53 na linhagem de câncer de bexiga com p53 mt, promovendo a apoptose através da expressão de Bax e Puma, ativação da cascata das caspases e ruptura da membrana mitocondrial, independente de Bax, na linhagem celular T24 (p53 mt). Conclusão: Prima-1 foi capaz de restaurar a atividade transcricional de p53. Estudos experimentais in vivo poderiam ser conduzidos no intuito de testar essa molécula como um novo agente terapêutico do CUB de alto grau, invasivo, que apresenta caracteristicamente mutação de p53 / Introduction: Urothelial carcinoma of the bladder is the second most common tumor of the urinary tract. Loss of p53 function is the main genetic alteration related to the development of high-grade muscle-invasive disease. Prima-1 is a small molecule that restores tumor suppressor function to mutant p53 and induces cell death in various cancer types. Our aim is to investigate the ability of Prima-1 to induce apoptosis after DNA damage in BC cancer cell lines. Material and Methods: The therapeutic effect of Prima-1 was studied in two BC cell lines, T24, characterized by p53 mutation, and RT4, with no mutation in the p53 gene. Morphological features of apoptosis, mitochondrial membrane potential changes and expression of thirteen genes involved in p53-induced apoptosis were assessed by microscopic observation and quantitative real-time PCR (qRT-PCR) Results: Prima-1 is able to reactivate P53 function in p53-mutated bladder cancer cell line promote apoptosis through the induction of Bax and Puma expression, activating the caspase cascade and disruption of mitochondrial membrane, independent of Bak, in T24 cell line (p53 mt). Conclusion: Prima-1 is able to restore the transcriptional activity of p53. Experimental studies in vivo could be conducted in order to test this molecule as a new therapeutic agent of the urothelial carcinoma of the bladder, which characteristically presents p53 mutation

En España se diagnostican cada año unos 12.000 nuevos casos de carcinoma urotelial (CU). Más concretamente, en Cataluña este tumor representa entre un 9,9 y un 11,7% del total de tumores malignos, dando lugar a una mortalidad cáncer específica del 5,2% en el sexo masculino. Aunque en la mayoría de casos la enfermedad se acaba detectando en su fase más inicial, la alta frecuencia de recidivas y la posibilidad de progresión y diseminación debido a la agresividad de algunas formas limitarán la supervivencia del paciente.El método estándar para la detección y seguimiento del CU se basa en la combinación de la citología urinaria y la cistoscopia. Sin embargo, la primera de estas técnicas presenta baja sensibilidad en la detección de tumores de estadio inical y bajo grado, mientras que la segunda es una técnica invasiva que además no es lo suficientemente sensible para detectar todas las lesiones de crecimiento plano.Por otro lado, las técnicas histológicas convencionales para el diagnóstico de la diseminación linfática del CU no son lo suficientemente sensibles ya que alrededor del 50% de pacientes sometidos a cirugía radical con linfadenectomía N0, fallecen antes de los 5 años post-cirugía. Estos datos sugieren que existe una diseminación tumoral antes de la cirugía que no es detectada mediante estas técnicas histológicas.Debido a la elevada prevalencia y gravedad de la enfermedad, a la invasividad de las pautas utilizadas en su diagnóstico y a la falta de métodos de estadiaje refinados, el desarrollo de nuevos sistemas diagnósticos que permitan una detección temprana tanto del CU inicial como de sus recidivas y de su diseminación es esencial para mejorar la calidad de vida y el pronóstico de los pacientes con esta enfermedad.En el presente trabajo se ha evaluado la utilidad de la técnica "fluorescence in situ hibridization" (FISH) en el diagnóstico no invasivo del Cu de bajo estadio, en el diagnóstico no invasivo del CU localizado en el tracto urnario superior (TUS) y en el pronóstico de pacientes con CU de alto riesgo de recurrencia y progresión, tratados mediante inmunoterapia con el bacilo de Calmette Guérin (BCG). Por otro lado se ha intentado detectar la presencia de micrometástasis linfáticas así como de diseminación sanguínea del CU, mediante marcadores moleculares en pacientes sometidos a cistectomía y linfadenectomía radical.Los resultados obtenidos indican que la técnica FISH basada en los cromosomas 3, 7, 9 y 17 presenta mayor sensibilidad que la citología urinaria, y una similar especificidad equivalente en la detección del CU no músculo-infiltrante, así como en la detección del CU localizado en el TUS. La naturaleza no invasiva de este ensayo así como su elevada sensibilidad y especificidad podrían contribuir a mejorar el actual diagnóstico/seguimiento del CU en estas localizaciones. Otro resultado interesante fue que los pacientes con un resultado positivo de FISH tras la terapia BCG tienen mayor probabilidad de presentar una recurrencia del tumor. Así, la técnica FISH parece ser útil en el seguimiento de los pacientes con un tumor no músculo-infiltrante de alto riesgo de recurrencia y progresión sometidos a terapia BCG. Finalmente, se observó que la utilización de marcadores moleculares permite mejorar la sensibilidad del análisis histopatológico en la detección de la diseminación linfática tumoral y que la linfadenectomía juega un importante papel curativo eliminando la enfermedad microdiseminada. Sin embargo, el análisis de la expresión génica en muestras de sangre periférica no es adecuado para seleccionar a aquellos pacientes que desarrollarán metástasis detectables clínicamente, aunque sí permite distinguir entre pacientes con CU de controles sanos. / Cystoscopy and cytology are the standard methods to detect and monitor urothelial carcinoma (UC). Cystoscopy is an invasive technique (especially to visualize the upper urinary tract or UUT) that has a high sensitivity, except in flat malignancies. Cytology has the advantage of being non-invasive with a high specificity, but it lacks sensitivity and produces high rates of suspicious cases, especially for low-stage and low-grade tumors. Another weak point in the clinical management of UC is the fact that current methodologies to detect disseminated UC lack sensitivity.The aims of this study were: (1) to evaluate the performance of a multiprobe FISH (fluorescence in situ hybridization) assay for non-invasive detection of superficial UC in the bladder, in comparison to urinary cytology, (2) to assess the clinical utility of FISH as a non-invasive method for diagnosing and monitoring UC in UUT, (3) to evaluate the use of FISH for determining the response of patients with high-risk superficial bladder tumour (HRSBT) to bacillus Calmette-Guérin (BCG) therapy, (4) to identify and test potential mRNA markers of UC dissemination in lymph nodes, and to compare the performance of selected markers with patients' clinical outcome, and (5) to test the efficiency of such mRNA markers in detecting and monitoring UC haematogenous dissemination.According to our results, FISH assay for chromosomes 3, 7, 9, and 17 has higher sensitivity than cytology and a similar specificity in the detection of superficial UC and UC at UUT, which could be useful for reducing some cystoscopies in the follow-up of these patients. Moreover, a high percentage of positive pre-BCG FISH results were obtained, suggesting the need for adjuvant therapy in patients with HRSBT after the transurethral resection. In addition, patients with a positive post-BCG FISH result were more likely to relapse after therapy. Thus, FISH appears to be useful for the surveillance of patients with HRSBT following BCG therapy.Finally, using molecular markers it was possible to improve the sensitivity of LN histologic analysis. Also this methodology allowed distinguishing between UC patients and controls. However, despite its high sensitivity, it was not possible to monitor UC haematogenous dissemination.

Introdução: O carcinoma urotelial de bexiga (CUB) é o segundo tumor mais frequente do trato urinário. A perda da função do p53 é a alteração mais conhecida do carcinoma urotelial de alto grau invasivo. Prima-1 é uma pequena molécula, a qual restaura a função do p53 mutado promovendo a morte celular em vários tipos celulares. O objetivo do nosso estudo foi analisar o efeito do Prima-1 na indução da apoptose mediada por p53 após indução do dano ao DNA em linhagens de CUB. Material e métodos: O mecanismo de ação do Prima-1 foi avaliado em duas linhagens celulares de câncer de bexiga, T24 que tem como característica a mutação do p53 e RT4 que possui p53 intacto. Características morfológicas da apoptose, alterações no potencial de membrana mitocondrial e análise da expressão de treze genes envolvidos na apoptose mediada por p53 foram avaliados através de observação microscópica e reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa (qRT-PCR). Resultados: Prima-1 foi capaz de reativar a função da P53 na linhagem de câncer de bexiga com p53 mt, promovendo a apoptose através da expressão de Bax e Puma, ativação da cascata das caspases e ruptura da membrana mitocondrial, independente de Bax, na linhagem celular T24 (p53 mt). Conclusão: Prima-1 foi capaz de restaurar a atividade transcricional de p53. Estudos experimentais in vivo poderiam ser conduzidos no intuito de testar essa molécula como um novo agente terapêutico do CUB de alto grau, invasivo, que apresenta caracteristicamente mutação de p53 / Introduction: Urothelial carcinoma of the bladder is the second most common tumor of the urinary tract. Loss of p53 function is the main genetic alteration related to the development of high-grade muscle-invasive disease. Prima-1 is a small molecule that restores tumor suppressor function to mutant p53 and induces cell death in various cancer types. Our aim is to investigate the ability of Prima-1 to induce apoptosis after DNA damage in BC cancer cell lines. Material and Methods: The therapeutic effect of Prima-1 was studied in two BC cell lines, T24, characterized by p53 mutation, and RT4, with no mutation in the p53 gene. Morphological features of apoptosis, mitochondrial membrane potential changes and expression of thirteen genes involved in p53-induced apoptosis were assessed by microscopic observation and quantitative real-time PCR (qRT-PCR) Results: Prima-1 is able to reactivate P53 function in p53-mutated bladder cancer cell line promote apoptosis through the induction of Bax and Puma expression, activating the caspase cascade and disruption of mitochondrial membrane, independent of Bak, in T24 cell line (p53 mt). Conclusion: Prima-1 is able to restore the transcriptional activity of p53. Experimental studies in vivo could be conducted in order to test this molecule as a new therapeutic agent of the urothelial carcinoma of the bladder, which characteristically presents p53 mutation

Objetivo: Identificar os principais fatores prognósticos patológicos do carcinoma urotelial tratado com cistectomia radical e linfadenectomia pélvica, analisar o impacto desses na sobrevida livre de doença (RFS), câncer específico (CSS), geral (OS) e propor um conjunto de fatores que possa prever a evolução. Métodos: Realizamos levantamento dos casos de cistectomia radical e linfadenectomia no período de 2006 a 2009 no Hospital das Clinicas da FMUSP. Correlacionamos fatores prognósticos patológicos estádio (pT), grau tumoral, presença de metástase linfática (pN), invasão linfovascular (LVI), perineural (PNI) e presença de CIS com RFS, CSS e OS. Consideramos significante quando p > 0,05. Resultados: Avaliamos 128 casos que obedeceram aos critérios sendo 20 (15,6%) femininos e 108 (84,4%) masculinos, idades variando de 41 a 84 anos e média de 67 anos. Constatamos associação de recidiva com estádio >pT2 (p=0,032) e pN+ (p=0,003). Os fatores estádio >pT2 (p=0,001), pN+ (p=0,034) LVI+ (p=0,038), e PNI+ (p=0,024) tiveram associação com óbito pela doença e a morte geral com estádio >pT2 (p=0,001), pN+ (p=0,038) e PNI+ (p=0,01). A análise multivariada demonstrou que apenas estádio >pT2 e pN+ são os fatores prognósticos independentes na RFS, CSS e OS. Conclusão: A análise dos fatores patológicos após cistectomia radical e linfadenectomia demonstrou que estádio >pT2 e pN+ são os fatores prognósticos mais importantes no CaB / Objective: To identify the most important pathologic prognostic factors for urothelial bladder cancer treated by cystectomy and pelvic lymphadenectomy, analyze the impact of these on recurrence and mortality and suggest a group of factors that can predict the outcome after surgery. Method: We review all radical cystectomy and lymphadenectomy cases at the Clinical Hospital of São Paulo Medical School from 2006 to 2009. We correlate the following pathologic prognostic factors tumor stage (pT), tumor grade, lymphonodal metastasis (pN), lymphovascular invasion (LVI), perineural invasion (PNI), presence of CIS with RFS, CSS and OS. We considered a significant association p<0.05. Results: We selected 128 cases for this study. There were 20 (15.6%) females and 108 (84.4%) males, ages ranging from 41 years to 84 years and an average 67 years old. The tumor recurrence was associated with stage >pT2 (0,032) and pN+ (p=0.003). Stage >pT2 (p=0.001), pN+ (p=0.034), LVI+ (p=0.038) and PNI+ (p=0.024) was associated with death by cancer and overall death with stage >pT2 (p=0.001), N+ (p=0.038) and PNI (p=0.01). The multivariate analysis found that only stage >pT2 and pN+ were independent prognostic variable for RFS, CSS and OS. Conclusion: The analysis of pathologic prognostic factors after radical cystectomy and pelvic lymphadenectomy show that stage >pT2 and pN+ has strong association with RFS, CSS and OS

OBJETIVOS: Estudar variáveis anatomopatológicas relacionadas à progressão tumoral em carcinomas uroteliais primários de bexiga e sua associação com a imunoexpressão de metaloproteinases de matriz (MMPs) - 2, -9 e -14 no epitélio e no estroma dos tumores primários e nas metástases linfonodais. MÉTODOS: Sessenta e um casos de carcinomas uroteliais musculoinvasivos ou localmente avançados primários da bexiga operados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo, sendo 34 casos com metástase para linfonodo regional, foram caracterizados quanto ao gênero, idade, tamanho, focalidade, grau histológico, tipo/configuração neoplásica, tipo papilífero da neoplasia, padrão arquitetural de invasão tumoral, grau de atipia nuclear, componente sarcomatoide, diferenciações escamosa e glandular, variante histológica, invasões linfovascular e perineural, carcinoma in situ, estádio do tumor primário, metástase para linfonodo regional, tamanho da metástase e extensão extranodal. Amostras teciduais de 1,0 mm foram dispostas em micromatrizes teciduais (TMA) para pesquisa imuno-histoquímica (IH) das enzimas MMP-2, MMP-9 e MMP-14. A expressão IH das MMPs foi graduada em uma escala semiquantitativa de 0 (ausência de expressão) até 20 (maior expressão). As associações entre a imunoexpressão das MMPs de forma global, no epitélio e estroma do tumor primário e na metástase linfonodal com as variáveis anatomopatológicas foram avaliadas através do teste do qui-quadrado de Pearson, sendo consideradas significativas ao nível de p<0,05. RESULTADOS: Trinta e seis, 57 e 60 casos do tumor primário foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. Nas metástases linfonodais, 20, 27 e 26 casos foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. A imunoexpressão global de MMP-2 no tumor primário mostrou-se associada com o padrão arquitetural de invasão (p=0,022) e sua expressão no estroma com o grau de atipia nuclear (p=0,032) e a porcentagem de componente sarcomatoide (p=0,003). A imunoexpressão global de MMP-9 no tumor primário mostrou-se associada com diferenciação escamosa (p=0,033). O padrão arquitetural de invasão relacionou-se com a expressão de MMP-9 no epitélio (p=0,043) e no estroma (p=0,044). A expressão de MMP-9 no estroma mostrou-se associada com o grau de atipia nuclear (p=0,031), componente sarcomatoide (p=0,036) e com a porcentagem desse componente no tumor primário (p=0,013). O estádio tumoral agrupado pT2+pT3 vs pT4 demonstrou associação com a MMP-9 expressa no epitélio (p=0,049). Para a MMP-14, o padrão arquitetural de invasão demonstrou associação significativa com a imunoexpressão global (p=0,022) e no epitélio tumoral (p=0,045). A porcentagem de componente sarcomatoide relacionou-se ainda com a expressão estromal de MMP-14 (p<0,001). Considerando a imunoexpressão de MMPs apenas na metástase linfonodal, houve associação significativa da MMP-9 com o tipo de variante histológica do tumor (p=0,021) e da expressão de MMP-14 com a porcentagem de componente sarcomatoide no tumor primário (p=0,017). CONCLUSÃO: O estudo da imunoexpressão de MMP-2, MMP-9 e MMP-14 em amostras organizadas em TMA, tanto no epitélio como no estroma dos carcinomas uroteliais de bexiga e nas metástases de linfonodos regionais, demonstrou associações estatísticas com características anatomopatológicas reconhecidas como de prognóstico ruim para essas neoplasias, indicando a ação dessas enzimas na transição epitélio-mesênquima e nas etapas de progressão e metástase dos carcinomas uroteliais / OBJECTIVES: To study morphological features related to tumor progression in urothelial carcinoma of the urinary bladder and its association with immunohistochemical (IHC) expression of matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9 and -14 in epithelial and stromal cells of primary tumor and regional lymph node metastases. METHODS: Sixty-one cases of muscle-invasive or locally advanced urothelial carcinomas of the bladder operated on Clinic\'s Hospital of Faculty Medicine Sao Paulo University and the Cancer Institute of the State of Sao Paulo, with 34 cases showing regional lymph nodes metastases, were characterized regarding gender, age, tumor size, multifocality, histological grade, neoplastic type/configuration, papillary type, architectural pattern of invasive tumor, nuclear atypia, sarcomatoid component, squamous and glandular diffentiation, histological variants, lymphovascular and perineural invasion, carcinoma in situ, tumor stage, metastases to regional lymph nodes, metastases size and extranodal extension. Tissue samples of 1.0 mm were arranged in tissue microarrays blocks (TMA) for IHC detection of MMP-2, MMP-9 and MMP-14. The grading of expression of MMPs was determined to a semiquantitative scale from 0 (absence) to 20 (higher expression). The associations between the IHC global expression of MMPs, in epithelium and in stromal cells of the primary tumor and in the lymph node metastases with the morphological features were obtained through Pearson\'s chi-square (significant at p<0.05). RESULTS: Thirty-six, 57 and 60 cases of primary tumor were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. In the lymph nodes metastases, 20, 27 and 26 cases were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. The global IHC expression of MMP-2 in primary tumor has been associated with the architectural pattern of invasion (p=0.022). The expression in stromal cells were correlated with the degree of nuclear atypia (p=0.032) and the percentage of sarcomatoid component (p=0.003). The IHC expression of MMP-9 in primary tumor has been associated with squamous differentiation (p=0.033). The architectural pattern of invasion was related to the expression of MMP-9 in epithelium (p=0.043) and in the stroma (p=0.044). Expression of MMP-9 in the stroma was associated with the degree of nuclear atypia (p=0.031), sarcomatoid component (p=0.036) and the percentage of this component in primary tumor (p=0.013). The grouped tumoral stage pT2+pT3 vs pT4 showed association with MMP-9 expressed in epithelium (p=0.049). For MMP-14, the architectural pattern of invasion showed significant association with global IHC expression (p=0.022) and tumor epithelium (p=0.045). The percentage of sarcomatoid component related to the estromal expression of MMP-14 (p<0.001). Considering the IHC expression of MMPs in lymph nodes metastases, there was a significant association between MMP-9 with the type of histological variants (p=0.021) and the expression of MMP-14 with the percentage of sarcomatoid component in primary tumor (p=0.017). CONCLUSION: The study of IHC expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-14 in bladder carcinoma samples arranged in TMA, both in epithelium and in stromal cells and regional lymph nodes metastases, demonstrated significant association with morphological features recognized as prognostically important for these tumors. These findings herald the importance of action of these enzymes in epithelialmesenchymal transition, providing basis for the understanding of tumoral progression and metastases in urothelial carcinoma

Introdução: As moléculas de adesão celular (MAC) participam da interação entre o epitélio e a matriz extracelular (MEC) que são importantes para o desenvolvimento normal da célula. Alguns estudos têm revelado que alterações na expressão das MAC têm implicações no processo de carcinogênese. Nosso objetivo foi estudar a influencia da expressão da E-caderina e cateninas por imuno-histoquímica (IH) na previsão prognóstica de pacientes com carcinoma urotelial do trato urinário superior submetidos à cirurgia. Material e métodos: Avaliamos os espécimes de 20 pacientes com carcinoma urotelial da pelve renal e ureter tratados com nefroureterectomia ou ureterectomia com intenção curativa entre junho de 1997 e janeiro de 2007, todas realizadas pelo mesmo cirurgião (MS). A expressão das MAC foi avaliada através de IH pela técnica de microarranjo tecidual ou tissue microarray (TMA), e correlacionada com as características anatomopatológicas do tumor e sobrevida dos pacientes Resultados: Observamos uma relação entre a expressão de E-caderina com a recidiva da doença. Dos tumores com expressão forte de E-caderina, 85,7% sofreram recidiva contra 50,0% daqueles com moderada expressão (p=0,014). Também houve diferença na sobrevida livre de doença, sendo que aqueles com expressão forte evidenciaram media de sobrevida livre de doença de 49,1 meses, enquanto aqueles com expressão moderada ou ausente sofreram média de 83,9 meses (p=0,011). A ausência de expressão de -catenina se relacionou com maior frequência de tumores com mais de 3cm (p=0,003). Conclusões: Demonstramos que a imuno-expressão da E-caderina e - catenina estão relacionadas com recidiva e tamanho tumoral no carcinoma urotelial do trato urinário alto, podendo constituir novos marcadores prognósticos nessa neoplasia / Introduction: The cell adhesion molecules (CAM) participating in the interaction between epithelium and extracellular matrix (ECM) that are important for normal development of the cell. Some studies have shown that changes in the expression of CAM have implications in the process of carcinogenesis. We studied the E-cadherin and catenins expression profile by immunohistochemistry in patients with urothelial carcinoma of upper urinary tract underwent surgery. Materials and Methods: We evaluated specimens from 20 patients with urothelial carcinoma of renal pelvis and ureter treated with nephroureterectomy or ureterectomy between June 1997 and January 2007, all performed by one surgeon (MS). The expression of CAM was evaluated by tissue microarray technique (TMA). Results: We observed a relation between E-cadherin expression with disease recurrence. Tumors with strong expression of E-cadherin, 85.7% recurrence compared to 50.0% of those with moderate expression and 0.0% with weak expression (p = 0.014). There was also a difference in disease-free survival, and those with strong expression recurrence a median time of 49.1 months while those with moderate expression recurrence a median time of 83.9 months (p = 0.011). The absence of -catenin expression was associated with tumors larger than 3 cm (p = 0.003). Conclusions: We demonstrate that the immuno-expression of E-cadherin and -catenin are related to recurrence and tumor size in urothelial carcinoma of upper urinary tract, may be new prognostic markers in these disease

OBJETIVOS: Estudar variáveis anatomopatológicas relacionadas à progressão tumoral em carcinomas uroteliais primários de bexiga e sua associação com a imunoexpressão de metaloproteinases de matriz (MMPs) - 2, -9 e -14 no epitélio e no estroma dos tumores primários e nas metástases linfonodais. MÉTODOS: Sessenta e um casos de carcinomas uroteliais musculoinvasivos ou localmente avançados primários da bexiga operados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP e no Instituto do Câncer do Estado de São Paulo, sendo 34 casos com metástase para linfonodo regional, foram caracterizados quanto ao gênero, idade, tamanho, focalidade, grau histológico, tipo/configuração neoplásica, tipo papilífero da neoplasia, padrão arquitetural de invasão tumoral, grau de atipia nuclear, componente sarcomatoide, diferenciações escamosa e glandular, variante histológica, invasões linfovascular e perineural, carcinoma in situ, estádio do tumor primário, metástase para linfonodo regional, tamanho da metástase e extensão extranodal. Amostras teciduais de 1,0 mm foram dispostas em micromatrizes teciduais (TMA) para pesquisa imuno-histoquímica (IH) das enzimas MMP-2, MMP-9 e MMP-14. A expressão IH das MMPs foi graduada em uma escala semiquantitativa de 0 (ausência de expressão) até 20 (maior expressão). As associações entre a imunoexpressão das MMPs de forma global, no epitélio e estroma do tumor primário e na metástase linfonodal com as variáveis anatomopatológicas foram avaliadas através do teste do qui-quadrado de Pearson, sendo consideradas significativas ao nível de p<0,05. RESULTADOS: Trinta e seis, 57 e 60 casos do tumor primário foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. Nas metástases linfonodais, 20, 27 e 26 casos foram positivos para MMP-2, MMP-9 e MMP-14, respectivamente. A imunoexpressão global de MMP-2 no tumor primário mostrou-se associada com o padrão arquitetural de invasão (p=0,022) e sua expressão no estroma com o grau de atipia nuclear (p=0,032) e a porcentagem de componente sarcomatoide (p=0,003). A imunoexpressão global de MMP-9 no tumor primário mostrou-se associada com diferenciação escamosa (p=0,033). O padrão arquitetural de invasão relacionou-se com a expressão de MMP-9 no epitélio (p=0,043) e no estroma (p=0,044). A expressão de MMP-9 no estroma mostrou-se associada com o grau de atipia nuclear (p=0,031), componente sarcomatoide (p=0,036) e com a porcentagem desse componente no tumor primário (p=0,013). O estádio tumoral agrupado pT2+pT3 vs pT4 demonstrou associação com a MMP-9 expressa no epitélio (p=0,049). Para a MMP-14, o padrão arquitetural de invasão demonstrou associação significativa com a imunoexpressão global (p=0,022) e no epitélio tumoral (p=0,045). A porcentagem de componente sarcomatoide relacionou-se ainda com a expressão estromal de MMP-14 (p<0,001). Considerando a imunoexpressão de MMPs apenas na metástase linfonodal, houve associação significativa da MMP-9 com o tipo de variante histológica do tumor (p=0,021) e da expressão de MMP-14 com a porcentagem de componente sarcomatoide no tumor primário (p=0,017). CONCLUSÃO: O estudo da imunoexpressão de MMP-2, MMP-9 e MMP-14 em amostras organizadas em TMA, tanto no epitélio como no estroma dos carcinomas uroteliais de bexiga e nas metástases de linfonodos regionais, demonstrou associações estatísticas com características anatomopatológicas reconhecidas como de prognóstico ruim para essas neoplasias, indicando a ação dessas enzimas na transição epitélio-mesênquima e nas etapas de progressão e metástase dos carcinomas uroteliais / OBJECTIVES: To study morphological features related to tumor progression in urothelial carcinoma of the urinary bladder and its association with immunohistochemical (IHC) expression of matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9 and -14 in epithelial and stromal cells of primary tumor and regional lymph node metastases. METHODS: Sixty-one cases of muscle-invasive or locally advanced urothelial carcinomas of the bladder operated on Clinic\'s Hospital of Faculty Medicine Sao Paulo University and the Cancer Institute of the State of Sao Paulo, with 34 cases showing regional lymph nodes metastases, were characterized regarding gender, age, tumor size, multifocality, histological grade, neoplastic type/configuration, papillary type, architectural pattern of invasive tumor, nuclear atypia, sarcomatoid component, squamous and glandular diffentiation, histological variants, lymphovascular and perineural invasion, carcinoma in situ, tumor stage, metastases to regional lymph nodes, metastases size and extranodal extension. Tissue samples of 1.0 mm were arranged in tissue microarrays blocks (TMA) for IHC detection of MMP-2, MMP-9 and MMP-14. The grading of expression of MMPs was determined to a semiquantitative scale from 0 (absence) to 20 (higher expression). The associations between the IHC global expression of MMPs, in epithelium and in stromal cells of the primary tumor and in the lymph node metastases with the morphological features were obtained through Pearson\'s chi-square (significant at p<0.05). RESULTS: Thirty-six, 57 and 60 cases of primary tumor were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. In the lymph nodes metastases, 20, 27 and 26 cases were positive for MMP-2, MMP-9 and MMP-14 respectively. The global IHC expression of MMP-2 in primary tumor has been associated with the architectural pattern of invasion (p=0.022). The expression in stromal cells were correlated with the degree of nuclear atypia (p=0.032) and the percentage of sarcomatoid component (p=0.003). The IHC expression of MMP-9 in primary tumor has been associated with squamous differentiation (p=0.033). The architectural pattern of invasion was related to the expression of MMP-9 in epithelium (p=0.043) and in the stroma (p=0.044). Expression of MMP-9 in the stroma was associated with the degree of nuclear atypia (p=0.031), sarcomatoid component (p=0.036) and the percentage of this component in primary tumor (p=0.013). The grouped tumoral stage pT2+pT3 vs pT4 showed association with MMP-9 expressed in epithelium (p=0.049). For MMP-14, the architectural pattern of invasion showed significant association with global IHC expression (p=0.022) and tumor epithelium (p=0.045). The percentage of sarcomatoid component related to the estromal expression of MMP-14 (p<0.001). Considering the IHC expression of MMPs in lymph nodes metastases, there was a significant association between MMP-9 with the type of histological variants (p=0.021) and the expression of MMP-14 with the percentage of sarcomatoid component in primary tumor (p=0.017). CONCLUSION: The study of IHC expression of MMP-2, MMP-9 and MMP-14 in bladder carcinoma samples arranged in TMA, both in epithelium and in stromal cells and regional lymph nodes metastases, demonstrated significant association with morphological features recognized as prognostically important for these tumors. These findings herald the importance of action of these enzymes in epithelialmesenchymal transition, providing basis for the understanding of tumoral progression and metastases in urothelial carcinoma

Orientador: Maria Luiza Cotrim Sartor de Oliveira / Resumo: Ratos Wistar expostos por dois anos ao diuron (3-(3,4-diclorofenil)-1,1-dimetilureia) produto técnico (PT) à 2500ppm pela ração desenvolveram alta incidência de tumores uroteliais, sendo esse herbicida classificado pela U.S. Environmental Protection Agency como "provável cancerígeno para o homem''. Durante a última década, nosso laboratório tem realizado estudos sobre a toxicidade urotelial do diuron PT fornecido pela ração a ratos Wistar machos. Porém, o diuron na forma de produto formulado (PF) ou comercial, composto por 50% de diuron PT e 50% de ingredientes inertes, não tem sido avaliado em ratos. Em lagartos P. sicula machos expostos ao diuron PF à 50% na concentração de 1100ppm na ração ou na água de beber, durante 3 semanas, houve toxicidade direta no sistema reprodutivo com alteração na espermatogênese, morfologia do epidídimo e diminuição dos níveis plasmáticos dos hormônios sexuais, sendo os efeitos mais severos nos grupos que receberam diuron na água de beber. O presente estudo objetivou comparar o potencial tóxico do diuron PF ou PT à 1250ppm oferecido pela ração ou água de beber no urotélio e nos parâmetros reprodutivos de ratos. Cinquenta ratos Wistar machos de seis semanas de idade foram distribuídos em cinco grupos (ração basal, ração com PF, água de beber com PF, ração com PT, água potável com PT) e expostos ao diuron à 1250ppm por 13 semanas. Na eutanásia foram avaliados a morfologia, concentração, motilidade e viabilidade dos espermatozoides. Os rins, fígad... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Wistar rats exposed during two years to 2500ppm dietary diuron technical product (TP) (3-(3,4- dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea) developed high incidence of urothelial tumors, being classified by the U.S. Environmental Protection Agency as a ‘‘known/likely human carcinogen’’. During the last decades our laboratory conducted studies on the urothelial toxicity of the diuron (TP) provided through diet to male Wistar rats. The diuron formulated product (FP) composed by 50% diuron TP and 50% inert ingredients, has not been evaluated in rats. The diuron (FP) was harmful to reproductive system of male P. sicula lizards exposed to 1100ppm during 3 weeks; the toxic effects were more prominent in the groups receiving diuron FP in drinking water. This study aimed to compare the potential toxicity of diuron TP or FP 1250ppm offered through diet or drinking water on the urothelium and reproductive parameters of rats. Fifty six-week old Wistar male rats were allocated to five groups (basal diet, FP diet, FP drinking water, TP diet, TP drinking water) and exposed to 1250ppm diuron for 13 weeks. At the end, body weight and weight of kidneys, liver, spleen, testes and epididymis, histopathology of the kidneys and testes and sperm parameters were evaluated. Urinary bladders were bisected and processed for histologic and scanning electron microscopic (SEM) analyses. At the end of the study, all groups exposed to diuron had decreased body weight gain compared to control greater than 10%, indicat... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Introdução: As moléculas de adesão celular (MAC) participam da interação entre o epitélio e a matriz extracelular (MEC) que são importantes para o desenvolvimento normal da célula. Alguns estudos têm revelado que alterações na expressão das MAC têm implicações no processo de carcinogênese. Nosso objetivo foi estudar a influencia da expressão da E-caderina e cateninas por imuno-histoquímica (IH) na previsão prognóstica de pacientes com carcinoma urotelial do trato urinário superior submetidos à cirurgia. Material e métodos: Avaliamos os espécimes de 20 pacientes com carcinoma urotelial da pelve renal e ureter tratados com nefroureterectomia ou ureterectomia com intenção curativa entre junho de 1997 e janeiro de 2007, todas realizadas pelo mesmo cirurgião (MS). A expressão das MAC foi avaliada através de IH pela técnica de microarranjo tecidual ou tissue microarray (TMA), e correlacionada com as características anatomopatológicas do tumor e sobrevida dos pacientes Resultados: Observamos uma relação entre a expressão de E-caderina com a recidiva da doença. Dos tumores com expressão forte de E-caderina, 85,7% sofreram recidiva contra 50,0% daqueles com moderada expressão (p=0,014). Também houve diferença na sobrevida livre de doença, sendo que aqueles com expressão forte evidenciaram media de sobrevida livre de doença de 49,1 meses, enquanto aqueles com expressão moderada ou ausente sofreram média de 83,9 meses (p=0,011). A ausência de expressão de -catenina se relacionou com maior frequência de tumores com mais de 3cm (p=0,003). Conclusões: Demonstramos que a imuno-expressão da E-caderina e - catenina estão relacionadas com recidiva e tamanho tumoral no carcinoma urotelial do trato urinário alto, podendo constituir novos marcadores prognósticos nessa neoplasia / Introduction: The cell adhesion molecules (CAM) participating in the interaction between epithelium and extracellular matrix (ECM) that are important for normal development of the cell. Some studies have shown that changes in the expression of CAM have implications in the process of carcinogenesis. We studied the E-cadherin and catenins expression profile by immunohistochemistry in patients with urothelial carcinoma of upper urinary tract underwent surgery. Materials and Methods: We evaluated specimens from 20 patients with urothelial carcinoma of renal pelvis and ureter treated with nephroureterectomy or ureterectomy between June 1997 and January 2007, all performed by one surgeon (MS). The expression of CAM was evaluated by tissue microarray technique (TMA). Results: We observed a relation between E-cadherin expression with disease recurrence. Tumors with strong expression of E-cadherin, 85.7% recurrence compared to 50.0% of those with moderate expression and 0.0% with weak expression (p = 0.014). There was also a difference in disease-free survival, and those with strong expression recurrence a median time of 49.1 months while those with moderate expression recurrence a median time of 83.9 months (p = 0.011). The absence of -catenin expression was associated with tumors larger than 3 cm (p = 0.003). Conclusions: We demonstrate that the immuno-expression of E-cadherin and -catenin are related to recurrence and tumor size in urothelial carcinoma of upper urinary tract, may be new prognostic markers in these disease