A videira é uma frutífera de origem antiga e atualmente é a mais cultivada do mundo, sendo de extrema importância econômica para diversos países. Certos genótipos de Vitis vinifera L., como a ‘Sultanina’, produzem bagas com apenas traços de sementes. Esta característica, denominada de apirenia, é classificada como estenoespermocarpia uma vez que a fecundação ocorre para a formação do fruto, porém é seguida de aborto do embrião devido à degeneração do endosperma. A apirenia é uma das características mais apreciadas para a uva de mesa e a compreensão dos mecanismos genéticos e moleculares controladores dessa característica é justificada pelo crescimento e pela exigência do mercado de uvas in natura. Estudos anteriores de nosso grupo permitiram identificar o gene VvAGL11 como principal candidato atuante no controle do desenvolvimento de sementes em videira. Foi nosso objetivo, pelo presente trabalho, avaliar o gene VvAGL11 nas cultivares pirênica Chardonnay e apirênica Sultanina, visando uma maior compreensão de seu papel durante a morfogênese da semente. Por meio de sequenciamento alelo-específico, foi possível caracterizar as variações alélicas do gene, o qual apresenta duas isoformas transcritas na cultivar pirênica Chardonnay. Em ‘Sultanina’, uma das isoformas identificadas possui mutações únicas. Pela avaliação do perfil transcricional de VvAGL11 em diferentes estádios de desenvolvimento, da flor e do fruto, foi observado um grande acúmulo de transcritos em sementes de 2, 4 e 6 semanas em comparação com tecidos de flor e polpa. Na cultivar Sultanina, a expressão de VvAGL11 foi extremamente baixa em todos os estádios e tecidos analisados. Análises morfo-anatômicas foram empregadas para comparar a semente e o traço de semente. Foram identificadas alterações anatômicas que sugerem a perda da identidade da camada de integumento médio do traço de semente de Sultanina, uma vez que esta camada não apresentou o padrão de diferenciação normal. O padrão de expressão espaço-temporal de VvAGL11 foi determinado pela técnica de hibridização in situ. Foram utilizadas amostras das cultivares Chardonnay e Sultanina nos mesmos estádios de desenvolvimento analisados por RT-qPCR. Os níveis de transcritos de VvAGL11 aumentaram significativamente em frutos de ‘Chardonnay’ com 2 e 4 semanas de desenvolvimento, especificamente na camada dupla do integumento médio da semente. Em ‘Sultanina’, não houve detecção de transcritos do gene em quaisquer estádios de desenvolvimento. / Grapevine have ancient origins and is currently the most widely cultivated fruit in the world, with high economic importance to many countries. Certain genotypes of Vitis vinifera L. like 'Sultanina' produce berries with only seed traces. This characteristic, termed apireny, is classified as stenospermocarpy since fertilization occurs aiming the formation of fruits but it is followed by the abortion of the embryo due to endosperm degeneration. Seedlessness is one of the most appreciated features for table grapes. Thereby the understanding of genetic and molecular mechanisms that control this feature is justified by the growth and the demand of in natura grapes’ market. Our previous studies allowed us to identify a candidate gene, VvAGL11, possibly involved in the control of seed development in grapevine. Our objective with the present study was to evaluate VvAGL11 in a pirenic cultivar, Chardonnay, and in an apirenic cultivar, Sultanina, in order to better understand its role during seed morphogenesis. By allele-specific sequencing, it was possible to characterize the allelic variations of VvAGL11, which exhibited two transcript isoforms in ‘Chardonnay’. In ‘Sultanina’ one of the isoforms was identified with unique mutations. Evaluation of transcriptional profiles of VvAGL11 during different developmental stages, from flowers to mature fruits, it showed a large accumulation of transcripts in seeds of 2, 4 and 6 weeks old compared to flower and pulp tissues in the Chardonnay cultivar. In ‘Sultanina’ the expression of VvAGL11 was extremely low in all stages and tissues examined. Anato-morphological analyzes were performed in order to compare the seed and the seed trace. It was identified a loss of identity of the medium integument layer in the Sultanina seed trace since this layer neither elongated nor doubled in size as it should. The spatial-temporal expression pattern of VvAGL11 was determined by an in situ hybridization technique. Samples of ‘Chardonnay’ and ‘Sultanina’ in the same stages of development analyzed by RT-qPCR were employed. VvAGL11 transcript levels were significantly increased in ‘Chardonnay’ seeds with 2 and 4 weeks of development, specifically in the dual layer medium integument of the seed. In 'Sultanina', gene transcripts were undetectable during all stages of development.

A videira é uma frutífera de origem antiga e atualmente é a mais cultivada do mundo, sendo de extrema importância econômica para diversos países. Certos genótipos de Vitis vinifera L., como a ‘Sultanina’, produzem bagas com apenas traços de sementes. Esta característica, denominada de apirenia, é classificada como estenoespermocarpia uma vez que a fecundação ocorre para a formação do fruto, porém é seguida de aborto do embrião devido à degeneração do endosperma. A apirenia é uma das características mais apreciadas para a uva de mesa e a compreensão dos mecanismos genéticos e moleculares controladores dessa característica é justificada pelo crescimento e pela exigência do mercado de uvas in natura. Estudos anteriores de nosso grupo permitiram identificar o gene VvAGL11 como principal candidato atuante no controle do desenvolvimento de sementes em videira. Foi nosso objetivo, pelo presente trabalho, avaliar o gene VvAGL11 nas cultivares pirênica Chardonnay e apirênica Sultanina, visando uma maior compreensão de seu papel durante a morfogênese da semente. Por meio de sequenciamento alelo-específico, foi possível caracterizar as variações alélicas do gene, o qual apresenta duas isoformas transcritas na cultivar pirênica Chardonnay. Em ‘Sultanina’, uma das isoformas identificadas possui mutações únicas. Pela avaliação do perfil transcricional de VvAGL11 em diferentes estádios de desenvolvimento, da flor e do fruto, foi observado um grande acúmulo de transcritos em sementes de 2, 4 e 6 semanas em comparação com tecidos de flor e polpa. Na cultivar Sultanina, a expressão de VvAGL11 foi extremamente baixa em todos os estádios e tecidos analisados. Análises morfo-anatômicas foram empregadas para comparar a semente e o traço de semente. Foram identificadas alterações anatômicas que sugerem a perda da identidade da camada de integumento médio do traço de semente de Sultanina, uma vez que esta camada não apresentou o padrão de diferenciação normal. O padrão de expressão espaço-temporal de VvAGL11 foi determinado pela técnica de hibridização in situ. Foram utilizadas amostras das cultivares Chardonnay e Sultanina nos mesmos estádios de desenvolvimento analisados por RT-qPCR. Os níveis de transcritos de VvAGL11 aumentaram significativamente em frutos de ‘Chardonnay’ com 2 e 4 semanas de desenvolvimento, especificamente na camada dupla do integumento médio da semente. Em ‘Sultanina’, não houve detecção de transcritos do gene em quaisquer estádios de desenvolvimento. / Grapevine have ancient origins and is currently the most widely cultivated fruit in the world, with high economic importance to many countries. Certain genotypes of Vitis vinifera L. like 'Sultanina' produce berries with only seed traces. This characteristic, termed apireny, is classified as stenospermocarpy since fertilization occurs aiming the formation of fruits but it is followed by the abortion of the embryo due to endosperm degeneration. Seedlessness is one of the most appreciated features for table grapes. Thereby the understanding of genetic and molecular mechanisms that control this feature is justified by the growth and the demand of in natura grapes’ market. Our previous studies allowed us to identify a candidate gene, VvAGL11, possibly involved in the control of seed development in grapevine. Our objective with the present study was to evaluate VvAGL11 in a pirenic cultivar, Chardonnay, and in an apirenic cultivar, Sultanina, in order to better understand its role during seed morphogenesis. By allele-specific sequencing, it was possible to characterize the allelic variations of VvAGL11, which exhibited two transcript isoforms in ‘Chardonnay’. In ‘Sultanina’ one of the isoforms was identified with unique mutations. Evaluation of transcriptional profiles of VvAGL11 during different developmental stages, from flowers to mature fruits, it showed a large accumulation of transcripts in seeds of 2, 4 and 6 weeks old compared to flower and pulp tissues in the Chardonnay cultivar. In ‘Sultanina’ the expression of VvAGL11 was extremely low in all stages and tissues examined. Anato-morphological analyzes were performed in order to compare the seed and the seed trace. It was identified a loss of identity of the medium integument layer in the Sultanina seed trace since this layer neither elongated nor doubled in size as it should. The spatial-temporal expression pattern of VvAGL11 was determined by an in situ hybridization technique. Samples of ‘Chardonnay’ and ‘Sultanina’ in the same stages of development analyzed by RT-qPCR were employed. VvAGL11 transcript levels were significantly increased in ‘Chardonnay’ seeds with 2 and 4 weeks of development, specifically in the dual layer medium integument of the seed. In 'Sultanina', gene transcripts were undetectable during all stages of development.

A videira é uma frutífera de origem antiga e atualmente é a mais cultivada do mundo, sendo de extrema importância econômica para diversos países. Certos genótipos de Vitis vinifera L., como a ‘Sultanina’, produzem bagas com apenas traços de sementes. Esta característica, denominada de apirenia, é classificada como estenoespermocarpia uma vez que a fecundação ocorre para a formação do fruto, porém é seguida de aborto do embrião devido à degeneração do endosperma. A apirenia é uma das características mais apreciadas para a uva de mesa e a compreensão dos mecanismos genéticos e moleculares controladores dessa característica é justificada pelo crescimento e pela exigência do mercado de uvas in natura. Estudos anteriores de nosso grupo permitiram identificar o gene VvAGL11 como principal candidato atuante no controle do desenvolvimento de sementes em videira. Foi nosso objetivo, pelo presente trabalho, avaliar o gene VvAGL11 nas cultivares pirênica Chardonnay e apirênica Sultanina, visando uma maior compreensão de seu papel durante a morfogênese da semente. Por meio de sequenciamento alelo-específico, foi possível caracterizar as variações alélicas do gene, o qual apresenta duas isoformas transcritas na cultivar pirênica Chardonnay. Em ‘Sultanina’, uma das isoformas identificadas possui mutações únicas. Pela avaliação do perfil transcricional de VvAGL11 em diferentes estádios de desenvolvimento, da flor e do fruto, foi observado um grande acúmulo de transcritos em sementes de 2, 4 e 6 semanas em comparação com tecidos de flor e polpa. Na cultivar Sultanina, a expressão de VvAGL11 foi extremamente baixa em todos os estádios e tecidos analisados. Análises morfo-anatômicas foram empregadas para comparar a semente e o traço de semente. Foram identificadas alterações anatômicas que sugerem a perda da identidade da camada de integumento médio do traço de semente de Sultanina, uma vez que esta camada não apresentou o padrão de diferenciação normal. O padrão de expressão espaço-temporal de VvAGL11 foi determinado pela técnica de hibridização in situ. Foram utilizadas amostras das cultivares Chardonnay e Sultanina nos mesmos estádios de desenvolvimento analisados por RT-qPCR. Os níveis de transcritos de VvAGL11 aumentaram significativamente em frutos de ‘Chardonnay’ com 2 e 4 semanas de desenvolvimento, especificamente na camada dupla do integumento médio da semente. Em ‘Sultanina’, não houve detecção de transcritos do gene em quaisquer estádios de desenvolvimento. / Grapevine have ancient origins and is currently the most widely cultivated fruit in the world, with high economic importance to many countries. Certain genotypes of Vitis vinifera L. like 'Sultanina' produce berries with only seed traces. This characteristic, termed apireny, is classified as stenospermocarpy since fertilization occurs aiming the formation of fruits but it is followed by the abortion of the embryo due to endosperm degeneration. Seedlessness is one of the most appreciated features for table grapes. Thereby the understanding of genetic and molecular mechanisms that control this feature is justified by the growth and the demand of in natura grapes’ market. Our previous studies allowed us to identify a candidate gene, VvAGL11, possibly involved in the control of seed development in grapevine. Our objective with the present study was to evaluate VvAGL11 in a pirenic cultivar, Chardonnay, and in an apirenic cultivar, Sultanina, in order to better understand its role during seed morphogenesis. By allele-specific sequencing, it was possible to characterize the allelic variations of VvAGL11, which exhibited two transcript isoforms in ‘Chardonnay’. In ‘Sultanina’ one of the isoforms was identified with unique mutations. Evaluation of transcriptional profiles of VvAGL11 during different developmental stages, from flowers to mature fruits, it showed a large accumulation of transcripts in seeds of 2, 4 and 6 weeks old compared to flower and pulp tissues in the Chardonnay cultivar. In ‘Sultanina’ the expression of VvAGL11 was extremely low in all stages and tissues examined. Anato-morphological analyzes were performed in order to compare the seed and the seed trace. It was identified a loss of identity of the medium integument layer in the Sultanina seed trace since this layer neither elongated nor doubled in size as it should. The spatial-temporal expression pattern of VvAGL11 was determined by an in situ hybridization technique. Samples of ‘Chardonnay’ and ‘Sultanina’ in the same stages of development analyzed by RT-qPCR were employed. VvAGL11 transcript levels were significantly increased in ‘Chardonnay’ seeds with 2 and 4 weeks of development, specifically in the dual layer medium integument of the seed. In 'Sultanina', gene transcripts were undetectable during all stages of development.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-10Bitstream added on 2014-06-13T20:48:24Z : No. of bitstreams: 1 moreira_er_me_ilha.pdf: 890300 bytes, checksum: c50810a2fb7ce480ebe785b0bb4e4ee9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A ‘Niagara Rosada’ tem se apresentado como alternativa para a produção de uvas na região Noroeste do Estado de São Paulo, devido ao menor custo com mão-de-obra, não necessitando de raleio de bagas, menor suscetibilidade às doenças fúngicas, boa aceitação no mercado interno e aos bons rendimentos obtidos em condições irrigadas, com possibilidade de produção de frutos no período da entressafra das regiões tradicionais produtoras. Entretanto, devido às condições edafoclimaticas, os cachos e bagas da ‘Niagara Rosada’ são relativamente pequenos, o que torna desfavorável à comercialização. Com isso, para melhorar a qualidade dos frutos, a utilização de reguladores vegetais, pode auxiliar na melhoria das características morfológicas dos cachos e bagas. Dentre os reguladores, a aplicação das giberelinas tem sido usada em vinhedos visando melhorar suas características, obtendo-se com seu emprego bagas maiores e, conforme a variedade, mais alongadas. Outro regulador utilizado é o thidiazuron (TDZ) cujos estudos mostraram resultados promissores, como a melhoria das características dos cachos e bagas de uvas. Em função disso, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de concentrações de ácido giberélico (AG3) e thidiazuron (TDZ) nos cachos e bagas da cv. Niagara Rosada. O trabalho foi desenvolvido no período de agosto a dezembro de 2007, em um vinhedo experimental localizado na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão da UNESP – Campus de Ilha Solteira, localizada em Selvíria – MS. Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 4x4, correspondendo a 4 concentrações de AG3 (0, 50, 100 e 150mg.L-1) e 4 concentrações de TDZ (0, 5, 10 e 15mg.L-1). Os tratamentos foram avaliados aos 15 dias após o pleno florescimento, mediante imersão dos cachos. Foram avaliadas as seguintes variáveis... / 'Niagara Rosada' has been presented as an alternative for the production of grapes in the northwest region of São Paulo State, due to the lower cost of labor, without the need for berries thinning, less susceptibility to fungal diseases, good acceptance in the domestic market and good results obtained in irrigated conditions, with the possibility of production of fruits during the season of the traditional producing regions. However, because soil and climatic conditions, bunches and berries of 'Niagara Rosada' are relatively small, which makes the trading less attractive. Therefore, to improve fruit quality, the use of plant regulators, may help to improve the morphological characteristics of clusters and berries. Among the regulators, the application of gibberellins has been used in vineyards with the objective to improve its characteristics. The application of the Gibberelinns acid results in larger berries and depending of the variety provide more elongated fruits. Another regulator used is the Thidiazuron (TDZ) whose studies showed promising results, such as improving the characteristics of the grapes’ clusters and berries. Therefore the objective of this study was to evaluate the effect of concentrations of gibberellic (GA3) and thidiazuron (TDZ) acid in clusters and berries of cv. Niagara Rosada. Work was carried out during August to December 2007 at Experimental Station/UNESP- Ilha Solteira, located in Selviria-MS. Using the completely randomized tests scheme factorial 4x4, corresponding to 4 concentrations of GA3 (0, 50, 100 and 150mg.L-1) and 4 concentration of TDZ (0, 5, 10 and 15mg.L-1) . Treatments were evaluated at 15 days after full bloom, by immersion of the clusters. The following variables were evaluated: weight, length and width of clusters and berries, soluble solids (SS), titratable acidity (TA), ratio (the SS / TA) and pH. The tests... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Aparecida Conceição Boliani / Banca: Luiz de Souza Corrêa / Banca: Marco Antonio Tecchio / Resumo: A 'Niagara Rosada' tem se apresentado como alternativa para a produção de uvas na região Noroeste do Estado de São Paulo, devido ao menor custo com mão-de-obra, não necessitando de raleio de bagas, menor suscetibilidade às doenças fúngicas, boa aceitação no mercado interno e aos bons rendimentos obtidos em condições irrigadas, com possibilidade de produção de frutos no período da entressafra das regiões tradicionais produtoras. Entretanto, devido às condições edafoclimaticas, os cachos e bagas da 'Niagara Rosada' são relativamente pequenos, o que torna desfavorável à comercialização. Com isso, para melhorar a qualidade dos frutos, a utilização de reguladores vegetais, pode auxiliar na melhoria das características morfológicas dos cachos e bagas. Dentre os reguladores, a aplicação das giberelinas tem sido usada em vinhedos visando melhorar suas características, obtendo-se com seu emprego bagas maiores e, conforme a variedade, mais alongadas. Outro regulador utilizado é o thidiazuron (TDZ) cujos estudos mostraram resultados promissores, como a melhoria das características dos cachos e bagas de uvas. Em função disso, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito de concentrações de ácido giberélico (AG3) e thidiazuron (TDZ) nos cachos e bagas da cv. Niagara Rosada. O trabalho foi desenvolvido no período de agosto a dezembro de 2007, em um vinhedo experimental localizado na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão da UNESP - Campus de Ilha Solteira, localizada em Selvíria - MS. Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 4x4, correspondendo a 4 concentrações de AG3 (0, 50, 100 e 150mg.L-1) e 4 concentrações de TDZ (0, 5, 10 e 15mg.L-1). Os tratamentos foram avaliados aos 15 dias após o pleno florescimento, mediante imersão dos cachos. Foram avaliadas as seguintes variáveis... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: 'Niagara Rosada' has been presented as an alternative for the production of grapes in the northwest region of São Paulo State, due to the lower cost of labor, without the need for berries thinning, less susceptibility to fungal diseases, good acceptance in the domestic market and good results obtained in irrigated conditions, with the possibility of production of fruits during the season of the traditional producing regions. However, because soil and climatic conditions, bunches and berries of 'Niagara Rosada' are relatively small, which makes the trading less attractive. Therefore, to improve fruit quality, the use of plant regulators, may help to improve the morphological characteristics of clusters and berries. Among the regulators, the application of gibberellins has been used in vineyards with the objective to improve its characteristics. The application of the Gibberelinns acid results in larger berries and depending of the variety provide more elongated fruits. Another regulator used is the Thidiazuron (TDZ) whose studies showed promising results, such as improving the characteristics of the grapes' clusters and berries. Therefore the objective of this study was to evaluate the effect of concentrations of gibberellic (GA3) and thidiazuron (TDZ) acid in clusters and berries of cv. Niagara Rosada. Work was carried out during August to December 2007 at Experimental Station/UNESP- Ilha Solteira, located in Selviria-MS. Using the completely randomized tests scheme factorial 4x4, corresponding to 4 concentrations of GA3 (0, 50, 100 and 150mg.L-1) and 4 concentration of TDZ (0, 5, 10 and 15mg.L-1) . Treatments were evaluated at 15 days after full bloom, by immersion of the clusters. The following variables were evaluated: weight, length and width of clusters and berries, soluble solids (SS), titratable acidity (TA), ratio (the SS / TA) and pH. The tests... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2007. / Submitted by Luanna Maia (luanna@bce.unb.br) on 2009-03-09T12:48:41Z No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-03-09T16:04:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-09T16:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Loiselene Carvalho da Trindade.pdf: 3690145 bytes, checksum: 0c6bb1644820c1ea99648a03adf90c94 (MD5) / A bactéria Xanthomonas campestris pv. viticola (Nayudu) Dye, agente do cancro bacteriano da videira, foi relatada pela primeira vez nas áreas irrigadas do Submédio do Vale São Francisco em Petrolina, Pernambuco, em 1998. A doença também foi identificada em Juazeiro, Bahia, e posteriormente no Piauí, no Ceará, Roraima e Goiás. O uso de material propagativo livre do patógeno tornou-se uma preocupação, uma vez que a ocorrência da bacteriose ainda esta restrita a essas regiões no país e existe o risco de disseminação para outras regiões produtoras no sul e sudeste do Brasil. Com o objetivo de desenvolver um método molecular para detecção e identificação dessa bactéria, três oligonucleotídeos iniciadores foram desenhados com base no seqüenciamento parcial do gene hrpB. As combinações de iniciadores Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R foram testados quanto à especificidade e sensibilidade para detecção do DNA de X. campestris pv. viticola. Com os dois pares de iniciadores, a amplificação foi positiva com o DNA das 44 estirpes de X. campestris pv. viticola testados, com quatro estirpes da patovar mangiferaeindicae, e cinco estirpes de X. axonopodis pv. passiflorae. Contudo, a digestão dos produtos de PCR com HaeIII permitiu diferenciar as estirpes das três patovares. Nenhum dos dois pares de iniciadores amplificou o DNA de videira, de 20 bactérias não patogênicas da flora da videira, e de nove estirpes de outros sete gêneros de bactérias fitopatogênicas. A sensibilidade dos iniciadores Xcv1F/Xcv3R e RST2/Xcv3R foi de 10 pg e 1 pg de DNA purificado de X. campestris pv. viticola, respectivamente. O limiar de detecção de RST2/Xcv3R foi de 104 UFC/ml, mas empregando-se um segundo ciclo de amplificação com o iniciador interno Xcv1F, esse limiar foi reduzido para 102 UFC/ml. Os iniciadores foram testados na detecção da bactéria em pecíolos inoculados com a estirpe UnB 1186 e embora não se tenha tido sucesso na PCR com o extrato do macerado do tecido sintomático, foi possível detectar o patógeno usando-se lavado de placas após o crescimento por 72 h ou a partir de uma única colônia diluída em 200 l de água. A identidade da bactéria foi confirmada pela análise de RFLP, que gerou o padrão típico de X. campestris pv. viticola. Com o uso de nested-BIO-PCR utilizando dois ciclos de amplificação com os iniciadores RST2/Xcv3R e Xcv1F/Xcv3R foi possível detectar X. campestris pv. viticola em plantas assintomáticas e sintomáticas, coletadas em março de 2007, em Petrolina, PE. xiii Este método mostrou-se mais eficiente que a detecção direta, ou seja, sem uma etapa de enriquecimento em meio de cultura. Além disso, foi possível reduzir para 72 horas o tempo para detecção e identificação de X. campestris pv. viticola, tempo reduzido se comparado aos métodos convencionais. A alta similaridade observada entre as duas patovares, viticola e mangiferaeindicae de X. campestris foi comprovada através da análise de seqüências de nucleotídeos de diferentes regiões genômicas, ITS, 16S rRNA, hrpB6 e o gene do citocromo “b561-like”. Os resultados também sugeriram que as duas patovares estariam mais próximas filogeneticamente a X. campestris e X. axonopodis. Testes de inoculação cruzada em videira e mangueira mostraram a capacidade de X. campestris pv. mangiferaeindicae de infectar plantas de videira e confirmaram a patogenicidade de X. campestris pv. viticola à mangueira, quando a inoculação é feita por infiltração foliar. O estudo dos perfis plasmideais mostrou variabilidade entre as estirpes em relação ao número e tamanho dos plasmídeos, sendo o primeiro relato da presença de plasmídeos em X. campestris pv. viticola. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bacterium Xanthomonas campestris pv. viticola (Nayudu) Dye, causal agent of grapevine bacterial canker, was first detected in Brazil in the irrigated areas of the São Francisco river basin, in Petrolina, State of Pernambuco, in 1998. The disease was also reported in Juazeiro, Bahia and later in the states of Piauí, Ceará, Roraima and Goiás. The use of pathogen-free propagative material has become an important concern, considering the restricted occurrence of this pathogen in the country and the risk of dissemination to other grapevine production regions in the south and southeast of the country. In order to develop a molecular method for detection and identification of this pathogen, three primers were designed based on the partial sequences of the hrpB gene. The primers combinations Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R were tested for specificity and sensitivity in detecting X. campestris pv. viticola DNA. With the two sets of primers, amplification was positive with all 44 X. campestris pv. viticola isolates tested, 4 isolates of pathovar mangiferaeindicae and 5 of X. axonopodis pv. passiflorae. Digestion of PCR products with HaeIII allowed differentiation of these 3 pathovars. None of the primer pairs were able to amplify grapevine DNA, DNA from 20 non pathogenic bacterium from the grapevine microflora, or DNA from 9 isolates from 7 genera of plant pathogenic bacteria. Sensitivity of the primers Xcv1F/Xcv3R and RST2/Xcv3R was 10 pg and 1 pg of purified X. campestris pv. viticola DNA, respectively. The detection limit for RST2/Xcv3R was 104 UFC/ml, but this limit could be lowered to 102 CFU/ml with a second round of amplification using the internal primer Xcv1F. The primers were tested for detecting of X. campestris pv. viticola in grapevine petioles previously inoculated with strain UnB 1186, and although amplification was not possible using extracts of macerated plant tissue, detection was possible using agar plate washes after 72 h of growth, or from a single colony diluted in 200 l of water. Using Nested-BIO-PCR with two amplification rounds with RST2/Xcv3R and Xcv1F/Xcv3R primers, it was possible to detect X. campestris pv. viticola in both symptomatic and asymptomatic plants. This method was more effective than a method that employed direct detection from boiled macerated extracts with no previous enrichment on culture medium. The use of BIO-PCR reduced the time needed for detecting and identifying X. campestris pv. viticola to 72 hours, when compared to more traditional diagnostic methods. xv The high similarity observed between the two pathovars of X. campestris, viticola and mangiferaeindicae was cnfirmed by the analysis of nucleotide sequences from different genomic regions, ITS, 16S rRNA, hrpB6 and the cytochrome b561-like gene. The results also suggested that these two pathovars are phylogenetically related to X. campestris and X. axonopodis. Cross inoculation tests on grapevine and mango plants inoculation, showed the ability of X. campestris pv. mangiferaeindicae to infect grapevine and confirmed the pathogenicity of X. campestris pv. viticola to mango plants, when using the infiltration technique. Plasmid DNA extractions showed variability among strains of the two pathovars in plasmid number and size. This is the first report of plasmid occurrence in X. campestris pv. viticola.

A ausência de semente em videira, também chamada de apirenia, é amplamente apreciada pelo mercado consumidor de uvas de mesa. No entanto, os mecanismos moleculares que controlam a morfogênese da semente não são totalmente compreendidos. Por este trabalho, buscou-se caracterizar funcionalmente o gene candidato VviAGL11, avaliando seu papel na morfogênese de sementes de Vitis vinifera. Dados prévios permitiram determinar o padrão de expressão de VviAGL11 na camada da endotesta da casca da semente, que precisa alongar e aumentar o número de células para que haja a lignificação e a determinação do tamanho final da semente. No presente estudo, a função de VviAGL11 foi avaliada por meio de sua expressão ectópica no mutante de seedstick (AGL11) de Arabidopsis thaliana, o que restaurou o fenótipo e confirmou o papel direto deste gene no desenvolvimento da semente, sugerindo que a depleção de sua expressão é responsável pelo desenvolvimento errôneo da camada de endotesta da semente, culminando no fenótipo de apirenia típico. Além disso, a função de VviAGL11 foi avaliada em videira com o uso de plasmídeos vegetais. Os resultados permitiram demonstrar que a alta expressão de VviAGL11 na cultivar apirênica Linda, após tratamento, está relacionada com a presença de pequenas sementes que não foram encontradas nas amostras-controle não tratadas Além disso, cachos de ‘Italia’ e ‘Ruby’ tratados com o plasmídeo de silenciamento VviAGL11 mostraram diminuição da expressão desse gene, número reduzido de sementes e aumento do número de traços de sementes. Em conjunto, os resultados confirmam que VviAGL11 é um importante regulador da morfogênese de sementes em videira. Em adição, populações segregantes para ausência de sementes foram testadas com cinco marcadores SSR, dos quais três marcadores microssatélites mostraram-se relacionados à ausência de sementes e poderiam ser usados com 100% de eficiência em um haplótipo para seleção assistida. Ao mesmo tempo, nove marcadores do tipo SNPs e INDELs foram desenvolvidos com base na sequência do alelo de VviAGL11 associado à ausência de sementes em V. vinifera. Para os marcadores VvAGL11_KASP_2, VvAGL11_KASP_3, VvAGL11_KASP_8 e VvAGL11_KASP_9, polimorfismos foram observados segregando em indivíduos apirênicos genotipados, confirmando sua associação com a ausência de sementes e sugerindo seu uso na estratégia de seleção assistida rápida e eficaz de videiras apirênicas. / Grapevine seedlessness, also known as apyreny, is widely appreciated by the table grape’s market. Nevertheless, the molecular mechanisms that control seed morphogenesis are not fully understood. This study aimed to characterize the function of the candidate gene VviAGL11, evaluating its role in Vitis vinifera seed morphogenesis. Previous data allowed us to determine the VviAGL11 expression pattern in the endotesta layer of the seed coat, which needs to elongate and increase in cell number to accomplish seed lignification and final seed size. In the present study VviAGL11 function was evaluated by its ectopic expression in Arabidopsis thaliana seedstick (AGL11) mutant background, which restored the phenotype and confirmed the direct role of this gene in seed development, suggesting that depletion of its expression is responsible for the erroneous development of the endotesta layer of the seed, therefore culminating in the typical seedless phenotype. Furthermore, we evaluated VviAGL11 function in grapevine with the use of plant plasmids. The results showed that a high expression of VviAGL11 in the seedless cultivar Linda, after treatment, was related with the presence of small seeds that were not found in untreated control samples Additionally, seeded ‘Italia’ and ‘Ruby’ bunches treated with a VviAGL11-silencing plasmid showed decreased gene expression, reduced number of seeds and increased number of seed traces. Taken together, the results confirm that VviAGL11 is a key master regulator of seed morphogenesis in grapevine. Moreover, segregating populations for seedlessness were tested with five SSR markers of which three microsatellite markers were proven to be related with seedlessness and could be used with 100% efficiency in a haplotype for assisted selection. Additionally, nine unique SNPs and INDELs markers were developed based on VviAGL11 allele associated with the absence of seeds in V. vinifera. For the markers VvAGL11_KASP_2, VvAGL11_KASP_3, VvAGL11_KASP_8 and VvAGL11_KASP_9, polymorphisms were observed segregating in genotyped seedless individuals, confirming their seedlessness association and suggesting their use in fast and effective assisted selection strategy for seedlessness grapevines.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-11. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:47:21Z : No. of bitstreams: 1 000846547.pdf: 2363942 bytes, checksum: 9e3e3a053eea57e0c35038173c728430 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A videira é a frutífera economicamente mais importante no mundo e é cultivada para que seus frutos produzam uvas de mesa, suco, e uvas passas. As bagas da videira são também a base para o alto valor agregado dos vinhos e outras bebidas alcoólicas. O Rupestris stem pitting associated virus - RSPaV foi identificado como o agente causador da doença do lenho estriado ou cascudo (Rupestris stem pitting - RSP), um dos componentes do complexo do lenho rugoso da videira (Rugose wood - RW). Esta doença é transmitida por enxertia e constitui uma das viroses de videira mais disseminadas no mundo, sendo descrita no Brasil no final dos anos 60. Devido à dificuldade de purificação das partículas virais a partir da videira infectada, a expressão em larga escala da proteína capisidial do RSPaV em bactérias é uma estratégia promissora para o entendimento de suas propriedades. A cultura do feijão também tem produtividade grandemente afetada pela ocorrência de doenças que diminuem a produção e, conseqüentemente, reduzem a sua oferta, provocando um aumento nos preços de mercado. No Brasil, foram descritas mais de dez viroses em feijoeiro, citando-se aquela causada pelo Southern bean mosaic virus (SBMV) do gênero Sobemovirus. Este vírus tem uma restrita gama de hospedeiras, confinada quase exclusivamente a espécies da família das leguminosas, sendo algumas de interesse econômico como o feijoeiro comum e a soja. As proteínas do movimento (MP), serino protease e VPg, são produzidas em baixas concentrações, impossibilitando a purificação em larga escala a partir de plantas infectadas. A expressão e purificação em larga escala das proteínas VPg, serino protease e proteína do movimento do SBMV e proteína capisidial do RSPaV, foram realizadas utlizando os vetores pET28a e pMAL. Análises das proteínas, através de espalhamento dinâmico de luz mostraram que foi possível obter soluções proteicas monomodais... / The grapevine culture is the most economically important fruit plant in the world. The grapevine is the basic source of high valued wines and other alcoholic beverages. The Rupestris stem pitting associated virus-RSPaV was identified as the causative agent of the rupestris stem pitting (RSP) disease, a component ofthe the rugose wood (RW) complex, one of the major disease complexes affecting grapevines. This disease is transmitted by grafting and is one of the most widespread viruses of grapevine in the world. In brazil this disease was reported for the first time in late 1960s. As it is difficult to seperate the viral particles from the infected plant, the expression of large-scale of coat protein of RSPaV in bacteria is a promising strategy for understanding their properties. The bean crop productivity has also greatly affected by the occurrence of diseases that reduce the production and consequently reduce their supply, causing an increasein the prices. This virus has a narrow host range, confined almost exclusively to species of leguminous species, some of the species has a very high economical value such as the common bean and soybean. The movement protein (MP), serine protease and VPg, are produced in low concentrations, making impossible the large-scale purification from infected plants. In Brazil, more than ten virus were reported in beans, among them, Southern bean mosaic virus (SBMV) from the genus Sobemovirus. The large scale expression and purification of proteins VPg, serine protease and movement protein of SBMV and capisidial protein of RSPaV were performed using pMAL pET28a vectors. Analysis of the proteins by dynamic light scattering showed that was possible to obtain monomodal protein solutions. By circular dichroism was observed that the proteins were structured and the investigation of protein-ligand interactions was performed using nuclear magnetic resonance. These results contributed to increase the knowledge...

A produção de uva possui um papel importante na história e na economia mundial. Atualmente os vinhedos podem ser encontrados em dois sistemas distintos de cultivos, o orgânico, onde utilização de pesticidas, fertilizantes e recursos de engenharia genética são proibidos, e o convencional que podem receber tratamento com diferentes produtos químicos. A cada safra de uva é produzida uma grande quantidade de folhas de videira, as quais são principalmente descartadas no meio ambiente ou em alguns países utilizadas na preparação de bebidas, alimentos e na medicina popular. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, antigenotóxica e antimutagênica de extratos aquosos de folhas de Vitis labrusca variedade Isabel. Os polifenóis, o conteúdo de ácido ascórbico e os compostos majoritários foram determinados. Nos ensaios com linhagem celular, as células V79 foram tratadas durante 3 horas com os extratos das folhas e, em seguida, expostos durante uma hora com o agente oxidante peróxido de hidrogênio ou o agente mutagênio Metil metano sulfonado (MMS). Após, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução MTT e sobrevivência clonogênica. O nível de peroxidação lipídica e presença de grupos carbonil das proteinas foram também verificados. O efeito antigenotóxico dos extratos foi analisado pelo ensaio cometa alcalino e com a utilização das enzimas endonuclease III (ENDO III) e fosfatidil-pirimidina de DNA glicosilase (FPG), enzimas que reconhecem os danos oxidativos à purinas e pirimidinas. A atividade antimutagênica dos extratos foi avaliada pelo ensaio de micronúcleos, através de MMS, um composto reconhecidamente mutagênico. Para a determinação da atividade antioxidante in vitro, a capacidade de varredura do radical livre DPPH· e a capacidade dos extractos para mimetizar a atividade das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliados. O extrato orgânico apresentou quantidade superior de polifenóis, ácido ascórbico e também de quercetina-3-glucósido e rutina que o extrato convencional. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular, ambos os extratos, orgânico convencional e preveniram a morte celular de maneira semelhante. Em se tratando de atividade antigenotóxica e antimutagênica e atividade antioxidante in vitro, o extrato orgânico apresentou efeitos mais pronunciados. É possível que os polifenóis e também o ácido ascórbico presente nos extratos sejam responsáveis pelos resultados encontrados nesse trabalho. Embora outros estudos sejam necessários, os dados obtidos nesse trabalho mostram que os extratos aquosos de videiras da variedade Isabel, orgânico e convencional, tem importante atividade antigenotóxica antimutagênica e antioxidante e podem estar relacionados com a diminuição na incidência de diferentes patologias. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T12:54:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T12:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The grape production plays an important role in world’s economy and history. Currently, vineyards can be found in organic management, which use of pesticides, fertilizers and genetic engineering resources are prohibited, and conventional vineyards, which can be treated with different chemicals. On each harvest is produced a large amount of vine leaves, which are mainly disposed in the environment or in some countries, used in folk medicine and as food and beverage. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antioxidant antigenotoxic and antimutagenic activities of aqueous extracts of Vitis labrusca leaves cv. Isabella variety. The polyphenols and ascorbic acid content and the major compounds were determined. The cell line V79 was treated for 3 hours with the leaves extracts and then exposed for one hour to the oxidiative agent hydrogen peroxide or MMS mutagen. After that, the cell viability was analysed by MTT reduction and clonogenic survival assays, the lipid peroxidation level and protein carbonyl formation were also observed. The antigenotoxic effect of the extracts was analyzed by the alkaline comet assay and using enzyme endonuclease III (ENDO III) and phosphatidyl pyrimidine DNA glycosylase (FPG), enzymes that recognize damage to purines and pyrimidines. The antimutagenic activity of the extracts was evaluated by micronucleus assay, using MMS, a known mutagenic compound. For the determination of in vitro antioxidant activity the scavenging activity of the DPPH● was verified, and the ability of extracts to mimic the enzymes SOD and CAT. The organic extract present highest polyphenol, ascorbic acid content and also quercetin-3-glucoside and rutin. However, treatment with organic and conventional extract prevented cell death, lipid peroxidation and protein carbonyl the same manner. Moreover, the organic extract showed a better antimutagenic and antigenotoxic activity than conventional extract. Although it was observed that both extracts have in vitro antioxidant activity, and the organic extract showed better ability to scavenging DPPH●, and greater SOD and CAT-like activity than the conventional. It is possible that the polyphenols and ascorbic acid present in extracts are responsible for the results found in this work. Although other studies are necessary, the data obtained in this work shows that the aqueous extracts of grapevines leaves, cv. Isabella, both organic and conventional management, have important antigenotoxic, antimutagenic and antioxidant activity and can minimize the damage associated with different pathologies.

A vitivinicultura é uma atividade de grande importância econômica e social na Região da Serra Gaúcha, destacando-se na produção de vinhos, sucos e derivados. De acordo com a característica da produção vitícola da região, formada de pequenos produtores, com mão de obra familiar na grande maioria das propriedades rurais. As atividades de manejo cultural, que envolvem a utilização de mão de obra, são significativas e de grande importância, sendo necessária sua maximização para a redução de custos, sem comprometer a qualidade das uvas. Uma destas atividades é a poda seca, também chamada de poda de produção ou poda definitiva, que normalmente é realizada nos períodos de julho a setembro, sendo necessário um intenso uso de mão de obra. Assim, um maior período para a realização desta atividade é interessante do ponto de vista do escalonamento das atividades e para o aproveitamento da mão de obra familiar. O objetivo deste trabalho foi avaliar a produção e a qualidade das uvas produzidas em diversas épocas de poda. A poda foi realizada a cada quinze dias, a partir do dia 1º de abril até 15 de setembro de 2012. Foram utilizadas as variedades Cabernet Sauvignon e Isabel, em dois vinhedos localizados no município de Farroupilha-RS. Os principais parâmetros avaliados foram: época de brotação, floração, maturação, índices de produtividade, grau glucométrio, pH e Acidez Titulável. Os tratamentos (12 épocas de poda) foram aplicados em parcelas experimentais compostas por três plantas, em delineamento de blocos casualizados, com três repetições. Os dados foram submetidos à análise de variância (Anova) e comparação de médias utilizando o teste de Tukey a 5%. Os resultados mostraram que a poda antecipada realizada nos meses de abril e maio, pode ser utilizada sem comprometer a produção e qualidade das uvas em relação à época de poda normal (agosto e setembro). A época de poda precoce (junho e julho) provoca uma antecipação da brotação e prejudica a uniformização e o percentual de brotação das varas. Foi observado também que a poda antecipada e a tardia induzem uma brotação mais tardia, com menor risco de dano causado por geadas primaveris e um maior percentual de brotação nas varas com uma maior uniformidade. A poda antecipada contribui ainda para a redução na contratação da mão de obra externa e, consequentemente, na redução de custos, sendo realizada numa época de menor atividade agrícola. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-24T18:58:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Paulo Adolfo Tesser.pdf: 4085326 bytes, checksum: 91f21a9cdcb436f7d48f2a0b74264031 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-24T18:58:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Paulo Adolfo Tesser.pdf: 4085326 bytes, checksum: 91f21a9cdcb436f7d48f2a0b74264031 (MD5) / Viticulture is an activity of great economic and social importance in the region of Serra Gaúcha, especially the production of wines, juices and derivatives. According to the characteristic of the wine production in the region, formed by small producers, with family labor in most farms. The activities of cultural practices that involve the use of manpower, are significant and of great importance for maximizing their cost reduction is required, without compromising the quality of the grapes. One of these activities is dry pruning, also called pruning production or final pruning, which is usually held during the periods from July to September, requiring intensive use of manpower. Thus, a longer period for this activity is interesting from the point of view of scheduling activities and the use of family labor. The objective of this study was to evaluate the yield and quality of grapes produced in different pruning times. The pruning was done every fortnight, from the 1st of April until September 15, 2012. Cabernet Sauvignon and Isabel varieties were used in two vineyards, located in the city of Farroupilha-RS. The main parameters evaluated were leafing and flowering, maturity, productivity indexes, babo degreee, pH and Titratable Acidity. Treatments (12 of pruning) were applied in composite plots of three plants, in a randomized block design with three replications. Data were subjected to analysis of variance (ANOVA) and means were compared using the Tukey test at 5%. The results showed that early pruning during the months of April and May, may be used without compromising the yield and quality of grapes in relation to the normal pruning season (August and September). The early pruning season (June and July) causes an anticipation of budding and undermine the uniformity and percentage of shooting sticks. It was also observed that the early and late pruning induce a delayed sprouting with less risk of damage caused by spring frosts and a higher percentage of sprouting in the sticks with greater uniformity. It further helps to reduce the hiring of outside labor and, consequently, reduce costs, being held at a time of lower agricultural activity.