A produção de uva possui um papel importante na história e na economia mundial. Atualmente os vinhedos podem ser encontrados em dois sistemas distintos de cultivos, o orgânico, onde utilização de pesticidas, fertilizantes e recursos de engenharia genética são proibidos, e o convencional que podem receber tratamento com diferentes produtos químicos. A cada safra de uva é produzida uma grande quantidade de folhas de videira, as quais são principalmente descartadas no meio ambiente ou em alguns países utilizadas na preparação de bebidas, alimentos e na medicina popular. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, antigenotóxica e antimutagênica de extratos aquosos de folhas de Vitis labrusca variedade Isabel. Os polifenóis, o conteúdo de ácido ascórbico e os compostos majoritários foram determinados. Nos ensaios com linhagem celular, as células V79 foram tratadas durante 3 horas com os extratos das folhas e, em seguida, expostos durante uma hora com o agente oxidante peróxido de hidrogênio ou o agente mutagênio Metil metano sulfonado (MMS). Após, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução MTT e sobrevivência clonogênica. O nível de peroxidação lipídica e presença de grupos carbonil das proteinas foram também verificados. O efeito antigenotóxico dos extratos foi analisado pelo ensaio cometa alcalino e com a utilização das enzimas endonuclease III (ENDO III) e fosfatidil-pirimidina de DNA glicosilase (FPG), enzimas que reconhecem os danos oxidativos à purinas e pirimidinas. A atividade antimutagênica dos extratos foi avaliada pelo ensaio de micronúcleos, através de MMS, um composto reconhecidamente mutagênico. Para a determinação da atividade antioxidante in vitro, a capacidade de varredura do radical livre DPPH· e a capacidade dos extractos para mimetizar a atividade das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliados. O extrato orgânico apresentou quantidade superior de polifenóis, ácido ascórbico e também de quercetina-3-glucósido e rutina que o extrato convencional. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular, ambos os extratos, orgânico convencional e preveniram a morte celular de maneira semelhante. Em se tratando de atividade antigenotóxica e antimutagênica e atividade antioxidante in vitro, o extrato orgânico apresentou efeitos mais pronunciados. É possível que os polifenóis e também o ácido ascórbico presente nos extratos sejam responsáveis pelos resultados encontrados nesse trabalho. Embora outros estudos sejam necessários, os dados obtidos nesse trabalho mostram que os extratos aquosos de videiras da variedade Isabel, orgânico e convencional, tem importante atividade antigenotóxica antimutagênica e antioxidante e podem estar relacionados com a diminuição na incidência de diferentes patologias. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T12:54:15Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T12:54:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Giovana Vera Bortolini.pdf: 2254846 bytes, checksum: a57ea9d9c74a54282a3c60874efea349 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The grape production plays an important role in world’s economy and history. Currently, vineyards can be found in organic management, which use of pesticides, fertilizers and genetic engineering resources are prohibited, and conventional vineyards, which can be treated with different chemicals. On each harvest is produced a large amount of vine leaves, which are mainly disposed in the environment or in some countries, used in folk medicine and as food and beverage. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antioxidant antigenotoxic and antimutagenic activities of aqueous extracts of Vitis labrusca leaves cv. Isabella variety. The polyphenols and ascorbic acid content and the major compounds were determined. The cell line V79 was treated for 3 hours with the leaves extracts and then exposed for one hour to the oxidiative agent hydrogen peroxide or MMS mutagen. After that, the cell viability was analysed by MTT reduction and clonogenic survival assays, the lipid peroxidation level and protein carbonyl formation were also observed. The antigenotoxic effect of the extracts was analyzed by the alkaline comet assay and using enzyme endonuclease III (ENDO III) and phosphatidyl pyrimidine DNA glycosylase (FPG), enzymes that recognize damage to purines and pyrimidines. The antimutagenic activity of the extracts was evaluated by micronucleus assay, using MMS, a known mutagenic compound. For the determination of in vitro antioxidant activity the scavenging activity of the DPPH● was verified, and the ability of extracts to mimic the enzymes SOD and CAT. The organic extract present highest polyphenol, ascorbic acid content and also quercetin-3-glucoside and rutin. However, treatment with organic and conventional extract prevented cell death, lipid peroxidation and protein carbonyl the same manner. Moreover, the organic extract showed a better antimutagenic and antigenotoxic activity than conventional extract. Although it was observed that both extracts have in vitro antioxidant activity, and the organic extract showed better ability to scavenging DPPH●, and greater SOD and CAT-like activity than the conventional. It is possible that the polyphenols and ascorbic acid present in extracts are responsible for the results found in this work. Although other studies are necessary, the data obtained in this work shows that the aqueous extracts of grapevines leaves, cv. Isabella, both organic and conventional management, have important antigenotoxic, antimutagenic and antioxidant activity and can minimize the damage associated with different pathologies.

A produção de uva possui um papel importante na história e na economia mundial. Atualmente os vinhedos podem ser encontrados em dois sistemas distintos de cultivos, o orgânico, onde utilização de pesticidas, fertilizantes e recursos de engenharia genética são proibidos, e o convencional que podem receber tratamento com diferentes produtos químicos. A cada safra de uva é produzida uma grande quantidade de folhas de videira, as quais são principalmente descartadas no meio ambiente ou em alguns países utilizadas na preparação de bebidas, alimentos e na medicina popular. Assim sendo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antioxidante, antigenotóxica e antimutagênica de extratos aquosos de folhas de Vitis labrusca variedade Isabel. Os polifenóis, o conteúdo de ácido ascórbico e os compostos majoritários foram determinados. Nos ensaios com linhagem celular, as células V79 foram tratadas durante 3 horas com os extratos das folhas e, em seguida, expostos durante uma hora com o agente oxidante peróxido de hidrogênio ou o agente mutagênio Metil metano sulfonado (MMS). Após, a viabilidade celular foi determinada pelo ensaio de redução MTT e sobrevivência clonogênica. O nível de peroxidação lipídica e presença de grupos carbonil das proteinas foram também verificados. O efeito antigenotóxico dos extratos foi analisado pelo ensaio cometa alcalino e com a utilização das enzimas endonuclease III (ENDO III) e fosfatidil-pirimidina de DNA glicosilase (FPG), enzimas que reconhecem os danos oxidativos à purinas e pirimidinas. A atividade antimutagênica dos extratos foi avaliada pelo ensaio de micronúcleos, através de MMS, um composto reconhecidamente mutagênico. Para a determinação da atividade antioxidante in vitro, a capacidade de varredura do radical livre DPPH· e a capacidade dos extractos para mimetizar a atividade das enzimas Superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) foram avaliados. O extrato orgânico apresentou quantidade superior de polifenóis, ácido ascórbico e também de quercetina-3-glucósido e rutina que o extrato convencional. No entanto, nos ensaios de viabilidade celular, ambos os extratos, orgânico convencional e preveniram a morte celular de maneira semelhante. Em se tratando de atividade antigenotóxica e antimutagênica e atividade antioxidante in vitro, o extrato orgânico apresentou efeitos mais pronunciados. É possível que os polifenóis e também o ácido ascórbico presente nos extratos sejam responsáveis pelos resultados encontrados nesse trabalho. Embora outros estudos sejam necessários, os dados obtidos nesse trabalho mostram que os extratos aquosos de videiras da variedade Isabel, orgânico e convencional, tem importante atividade antigenotóxica antimutagênica e antioxidante e podem estar relacionados com a diminuição na incidência de diferentes patologias. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The grape production plays an important role in world’s economy and history. Currently, vineyards can be found in organic management, which use of pesticides, fertilizers and genetic engineering resources are prohibited, and conventional vineyards, which can be treated with different chemicals. On each harvest is produced a large amount of vine leaves, which are mainly disposed in the environment or in some countries, used in folk medicine and as food and beverage. Therefore, the objective of this study was to evaluate the antioxidant antigenotoxic and antimutagenic activities of aqueous extracts of Vitis labrusca leaves cv. Isabella variety. The polyphenols and ascorbic acid content and the major compounds were determined. The cell line V79 was treated for 3 hours with the leaves extracts and then exposed for one hour to the oxidiative agent hydrogen peroxide or MMS mutagen. After that, the cell viability was analysed by MTT reduction and clonogenic survival assays, the lipid peroxidation level and protein carbonyl formation were also observed. The antigenotoxic effect of the extracts was analyzed by the alkaline comet assay and using enzyme endonuclease III (ENDO III) and phosphatidyl pyrimidine DNA glycosylase (FPG), enzymes that recognize damage to purines and pyrimidines. The antimutagenic activity of the extracts was evaluated by micronucleus assay, using MMS, a known mutagenic compound. For the determination of in vitro antioxidant activity the scavenging activity of the DPPH● was verified, and the ability of extracts to mimic the enzymes SOD and CAT. The organic extract present highest polyphenol, ascorbic acid content and also quercetin-3-glucoside and rutin. However, treatment with organic and conventional extract prevented cell death, lipid peroxidation and protein carbonyl the same manner. Moreover, the organic extract showed a better antimutagenic and antigenotoxic activity than conventional extract. Although it was observed that both extracts have in vitro antioxidant activity, and the organic extract showed better ability to scavenging DPPH●, and greater SOD and CAT-like activity than the conventional. It is possible that the polyphenols and ascorbic acid present in extracts are responsible for the results found in this work. Although other studies are necessary, the data obtained in this work shows that the aqueous extracts of grapevines leaves, cv. Isabella, both organic and conventional management, have important antigenotoxic, antimutagenic and antioxidant activity and can minimize the damage associated with different pathologies.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-29Bitstream added on 2014-06-13T20:36:36Z : No. of bitstreams: 1 almeida_dc_me_botfm.pdf: 330108 bytes, checksum: 81beba7a4d6ff8045b1bfcf3c2d5173d (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Considerando que as estratégias para a prevenção de doenças relacionadas a danos no DNA, ou que envolvam a eliminação da exposição humana a fatores de risco nem sempre são possíveis, a identificação de agentes quimioprotetores torna-se uma alternativa relevante. Nesse contexto, a própolis, por seu amplo espectro de ação biológica e devido a sua complexa composição química, fácil obtenção e importância econômica para o país, é um composto que vem sendo bastante estudado, especialmente com relação a sua atividade terapêutica na saúde humana. Assim sendo, o presente estudo objetivou avaliar a ação protetora do extrato aquoso de própolis verde (12,5, 25, 50, 100 e 200 μg/ml) e duas de suas frações (F4 e F5; 25, 50 e 100 μg/ml) sobre danos quimicamente induzidos no DNA de células das linhagens CHO (células de ovário de hamster chinês) e HepG2 (células de hepatoblastoma humano), sob três protocolos de tratamento. Como agentes indutores de danos genéticos foram utilizados o peróxido de hidrogênio (H2O2), a 4-n-óxido-nitroquinolina (4NQO), o metil metano sulfonato (MMS) e a n-dietilnitrosamina. Os dados mostraram que tanto o extrato aquoso da própolis quanto suas frações foram eficientes na proteção contra danos genotóxicos, nas duas linhagens celulares e nos diferentes protocolos de tratamento, quando avaliados pelo teste do cometa. No entanto, quando a própolis foi testada pelo teste do micronúcleo, sua atividade antimutagênica foi menos evidente, sendo detectada apenas em situações específicas. Concluindo, os resultados demonstraram que tanto o extrato aquoso da própolis como suas frações foram capazes de reduzir os danos quimicamente induzidos no DNA, por mecanismos antioxidantes e de modulação de sistema enzimático de metabolismo de drogas. / Since it is not always possible to reduce human exposure to mutagens, attempts have been directed to identify potential antimutagens and anticarcinogens for protecting human population against environmental diseases. Propolis has been used in folk medicine since ancient times, and its antimicrobial, antiparasitic, antiviral, antiinflammatory, antitumoral and antioxidant properties have been described. In view of the great therapeutic interest on this bee product, this study was designed to evaluate the antigenotoxic and antimutagenic effect of an aqueous extract of propolis (AEP) and two of its fractions (F4 and F5) on Chinese Hamster Ovary (CHO) and Human Hepatoblastoma (HepG2) cell lines by using comet assay and cytokinesis-block micronucleus assay (CBMN). Chemicals with different mechanisms of mutagenicity (hydrogen peroxide, 4-nitroquinoline-1-oxide, methyl methanesulphonate (MMS), and or n-nitrosodiethylamine) were used in order to better understand propolis chemopreventive action. Data showed that both AEP and the fractions reduced genotoxicity as depicted by the comet assay. However, lower protective effect was detected in the micronucleus assay. In conclusion, the results confirmed propolis as an effective chemopreventive agent, mainly on primary-induced DNA damage. This effect might be attributed to its antioxidant activity and also to its capability in modulate drug metabolizing enzymes.

Araucarea angustifolia (Bert.) O. Kuntze é uma espécie dioica, isto é, flores masculinas e femininas originam-se em árvores separadas. As flores femininas apresentam-se como estróbilo, mais conhecido como pinha. A pinha é constituída por sementes (pinhões) e brácteas (sementes não desenvolvidas), as quais apresentam elevada concentração de compostos fenólicos. Esses compostos são conhecidos por reduzir danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácidos nucleicos, contribuindo para minimizar a incidência de doenças relacionadas com o estresse oxidativo, tais como doenças cardiovasculares, neurológicas e câncer. O objetivo deste estudo foi caracterizar quimicamente, avaliar a atividade antioxidante e antigenotóxica do extrato aquoso de brácteas de A. angustifolia. Neste trabalho, os polifenóis totais do extrato de A. angustifolia foram determinados pelo método de Folin- Ciocalteu e sua composição química foi confirmada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O potencial do extrato para neutralizar espécies reativas foi avaliado através do ensaio com 2,2-difenil 1-picrilhidrazil (DPPH●) e pelas atividades like das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Em linhagem celular de fibroblasto de pulmão humano (MRC5), avaliou-se o efeito protetor do extrato na viabilidade celular através da redução de 3-(4,5-dimetiltiazol 2-il)-2,5difenil brometo de tetrazolina (MTT), na atividade das enzimas SOD e CAT, nos danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácido desoxirribonucléico (DNA) (ensaio cometa alcalino e enzimático) induzidos pelo peróxido de hidrogênio (H2O2). O teor de fenólicos totais do extrato de A. angustifolia foi de 670,93 ± 17,79 mg catequina /100 g de brácteas, sendo a catequina, epicatequina, quercetina e apigenina os principais polifenóis encontrados. O extrato de A. angustifolia foi capaz de reduzir o radical DPPH● e apresentou atividade SOD e CAT-like. Além disso, o extrato de A. angustifolia nas concentrações estudadas (25 e 50 μg/mL) reduziu a mortalidade celular, danos oxidativos a lipídios, proteínas e DNA, e diminuiu a depleção das enzimas antioxidantes SOD e CAT induzida pelo H2O2 em células MRC5. Apesar de não ter sido observado correlação entre os polifenois e marcadores de danos oxidativos, verificou-se uma correlação negativa entre danos a lipídos, proteínas e ácidos nucleicos e a atividade das enzimas SOD e CAT, sugerindo que essas enzimas desempenham um importante papel na prevenção de danos ás biomoléculas. Esses resultados mostram que a A. angustifolia apresenta potencial como fonte de compostos fitoquímicos com atividade biológica relevante. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-11T13:43:58Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marcia Denize Oliveira de Souza.pdf: 1692835 bytes, checksum: df8d66ab76d9a357820549d73b1c5332 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-11T13:43:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Marcia Denize Oliveira de Souza.pdf: 1692835 bytes, checksum: df8d66ab76d9a357820549d73b1c5332 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Araucaria angustifolia (Bert.) O. Kuntze is a dioecious species, with male and female flowers found on separate trees. The A. angustifolia female cone consists of fully developed edible seeds and non-developed seeds called bracts. These bracts have high concentration of phenolic compounds, which have the potential to prevent oxidative damage to lipids, proteins and nucleic acids, and decreasing the incidence of diseases related to oxidative stress, such as cardiovascular and neurological diseases, and cancer. The aim of the present study was to evaluate the chemical characterization and antioxidant and antigenotoxic activities of the extract of A. angustifolia bracts. In this work the polyphenols total of A. angustifolia extract was determinate by Folin-Ciocalteu reagent and its chemical composition was confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The extract potential to neutralize reactive species was evaluated by 2,2- diphenyl 1-picrylhydrazyl (DPPH●) method and by the ability to mimic the activities of superoxide antioxidants like dismutase (SOD) and catalase (CAT). In human cell line of lung fibroblast (MRC5), we evaluated the protective effect of the extract on cell viability by reduction of 3 - (4,5 dimethylthiazol - 2 - yl ) -2,5 diphenyl tetrazolina bromide (MTT), in the activity of SOD and CAT enzymes in oxidative damage to lipids, proteins and the deoxyribonucleic acid (DNA) (enzymatic and alkaline comet assay) induced by hydrogen peroxide (H2O2). The total phenolic content of the A. angustifolia extract was 670.93 ± 17.79 mg catechin / 100 g bracts, and catechin, epicatechin, quercetin and apigenin the main polyphenol found. The A. angustifolia extract was able to reduce DPPH● and presented like activity of SOD and CAT enzymes. Furthermore, the A. angustifolia extract at the concentrations studied (25 and 50 mg/mL) reduced cell death , oxidative damage to lipids, proteins and DNA, and decreased depletion of antioxidant enzymes SOD and CAT induced by H2O2 in MRC5 cells . Although, no correlation between polyphenols and bookmarks of oxidative injury have been observed. There was a negative correlation between damage to lipids, proteins and DNA with enzymes SOD and CAT, suggesting that these enzymes play a role in the regulation of cellular redox metabolism. These results showed that the A. angustifolia has potential as a source of phytochemical compounds with relevant bioactivities.

Orientador: Daisy Maria Fávero Salvatori / Banca: José Maurício Sforcin / Banca: Verônica Pimenta Vicentini / Resumo: Considerando que as estratégias para a prevenção de doenças relacionadas a danos no DNA, ou que envolvam a eliminação da exposição humana a fatores de risco nem sempre são possíveis, a identificação de agentes quimioprotetores torna-se uma alternativa relevante. Nesse contexto, a própolis, por seu amplo espectro de ação biológica e devido a sua complexa composição química, fácil obtenção e importância econômica para o país, é um composto que vem sendo bastante estudado, especialmente com relação a sua atividade terapêutica na saúde humana. Assim sendo, o presente estudo objetivou avaliar a ação protetora do extrato aquoso de própolis verde (12,5, 25, 50, 100 e 200 μg/ml) e duas de suas frações (F4 e F5; 25, 50 e 100 μg/ml) sobre danos quimicamente induzidos no DNA de células das linhagens CHO (células de ovário de hamster chinês) e HepG2 (células de hepatoblastoma humano), sob três protocolos de tratamento. Como agentes indutores de danos genéticos foram utilizados o peróxido de hidrogênio (H2O2), a 4-n-óxido-nitroquinolina (4NQO), o metil metano sulfonato (MMS) e a n-dietilnitrosamina. Os dados mostraram que tanto o extrato aquoso da própolis quanto suas frações foram eficientes na proteção contra danos genotóxicos, nas duas linhagens celulares e nos diferentes protocolos de tratamento, quando avaliados pelo teste do cometa. No entanto, quando a própolis foi testada pelo teste do micronúcleo, sua atividade antimutagênica foi menos evidente, sendo detectada apenas em situações específicas. Concluindo, os resultados demonstraram que tanto o extrato aquoso da própolis como suas frações foram capazes de reduzir os danos quimicamente induzidos no DNA, por mecanismos antioxidantes e de modulação de sistema enzimático de metabolismo de drogas. / Abstract: Since it is not always possible to reduce human exposure to mutagens, attempts have been directed to identify potential antimutagens and anticarcinogens for protecting human population against environmental diseases. Propolis has been used in folk medicine since ancient times, and its antimicrobial, antiparasitic, antiviral, antiinflammatory, antitumoral and antioxidant properties have been described. In view of the great therapeutic interest on this bee product, this study was designed to evaluate the antigenotoxic and antimutagenic effect of an aqueous extract of propolis (AEP) and two of its fractions (F4 and F5) on Chinese Hamster Ovary (CHO) and Human Hepatoblastoma (HepG2) cell lines by using comet assay and cytokinesis-block micronucleus assay (CBMN). Chemicals with different mechanisms of mutagenicity (hydrogen peroxide, 4-nitroquinoline-1-oxide, methyl methanesulphonate (MMS), and or n-nitrosodiethylamine) were used in order to better understand propolis chemopreventive action. Data showed that both AEP and the fractions reduced genotoxicity as depicted by the comet assay. However, lower protective effect was detected in the micronucleus assay. In conclusion, the results confirmed propolis as an effective chemopreventive agent, mainly on primary-induced DNA damage. This effect might be attributed to its antioxidant activity and also to its capability in modulate drug metabolizing enzymes. / Mestre

Araucarea angustifolia (Bert.) O. Kuntze é uma espécie dioica, isto é, flores masculinas e femininas originam-se em árvores separadas. As flores femininas apresentam-se como estróbilo, mais conhecido como pinha. A pinha é constituída por sementes (pinhões) e brácteas (sementes não desenvolvidas), as quais apresentam elevada concentração de compostos fenólicos. Esses compostos são conhecidos por reduzir danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácidos nucleicos, contribuindo para minimizar a incidência de doenças relacionadas com o estresse oxidativo, tais como doenças cardiovasculares, neurológicas e câncer. O objetivo deste estudo foi caracterizar quimicamente, avaliar a atividade antioxidante e antigenotóxica do extrato aquoso de brácteas de A. angustifolia. Neste trabalho, os polifenóis totais do extrato de A. angustifolia foram determinados pelo método de Folin- Ciocalteu e sua composição química foi confirmada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O potencial do extrato para neutralizar espécies reativas foi avaliado através do ensaio com 2,2-difenil 1-picrilhidrazil (DPPH●) e pelas atividades like das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Em linhagem celular de fibroblasto de pulmão humano (MRC5), avaliou-se o efeito protetor do extrato na viabilidade celular através da redução de 3-(4,5-dimetiltiazol 2-il)-2,5difenil brometo de tetrazolina (MTT), na atividade das enzimas SOD e CAT, nos danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácido desoxirribonucléico (DNA) (ensaio cometa alcalino e enzimático) induzidos pelo peróxido de hidrogênio (H2O2). O teor de fenólicos totais do extrato de A. angustifolia foi de 670,93 ± 17,79 mg catequina /100 g de brácteas, sendo a catequina, epicatequina, quercetina e apigenina os principais polifenóis encontrados. O extrato de A. angustifolia foi capaz de reduzir o radical DPPH● e apresentou atividade SOD e CAT-like. Além disso, o extrato de A. angustifolia nas concentrações estudadas (25 e 50 μg/mL) reduziu a mortalidade celular, danos oxidativos a lipídios, proteínas e DNA, e diminuiu a depleção das enzimas antioxidantes SOD e CAT induzida pelo H2O2 em células MRC5. Apesar de não ter sido observado correlação entre os polifenois e marcadores de danos oxidativos, verificou-se uma correlação negativa entre danos a lipídos, proteínas e ácidos nucleicos e a atividade das enzimas SOD e CAT, sugerindo que essas enzimas desempenham um importante papel na prevenção de danos ás biomoléculas. Esses resultados mostram que a A. angustifolia apresenta potencial como fonte de compostos fitoquímicos com atividade biológica relevante. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Araucaria angustifolia (Bert.) O. Kuntze is a dioecious species, with male and female flowers found on separate trees. The A. angustifolia female cone consists of fully developed edible seeds and non-developed seeds called bracts. These bracts have high concentration of phenolic compounds, which have the potential to prevent oxidative damage to lipids, proteins and nucleic acids, and decreasing the incidence of diseases related to oxidative stress, such as cardiovascular and neurological diseases, and cancer. The aim of the present study was to evaluate the chemical characterization and antioxidant and antigenotoxic activities of the extract of A. angustifolia bracts. In this work the polyphenols total of A. angustifolia extract was determinate by Folin-Ciocalteu reagent and its chemical composition was confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The extract potential to neutralize reactive species was evaluated by 2,2- diphenyl 1-picrylhydrazyl (DPPH●) method and by the ability to mimic the activities of superoxide antioxidants like dismutase (SOD) and catalase (CAT). In human cell line of lung fibroblast (MRC5), we evaluated the protective effect of the extract on cell viability by reduction of 3 - (4,5 dimethylthiazol - 2 - yl ) -2,5 diphenyl tetrazolina bromide (MTT), in the activity of SOD and CAT enzymes in oxidative damage to lipids, proteins and the deoxyribonucleic acid (DNA) (enzymatic and alkaline comet assay) induced by hydrogen peroxide (H2O2). The total phenolic content of the A. angustifolia extract was 670.93 ± 17.79 mg catechin / 100 g bracts, and catechin, epicatechin, quercetin and apigenin the main polyphenol found. The A. angustifolia extract was able to reduce DPPH● and presented like activity of SOD and CAT enzymes. Furthermore, the A. angustifolia extract at the concentrations studied (25 and 50 mg/mL) reduced cell death , oxidative damage to lipids, proteins and DNA, and decreased depletion of antioxidant enzymes SOD and CAT induced by H2O2 in MRC5 cells . Although, no correlation between polyphenols and bookmarks of oxidative injury have been observed. There was a negative correlation between damage to lipids, proteins and DNA with enzymes SOD and CAT, suggesting that these enzymes play a role in the regulation of cellular redox metabolism. These results showed that the A. angustifolia has potential as a source of phytochemical compounds with relevant bioactivities.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2018-04-18T19:00:37Z No. of bitstreams: 1 RODRIGO ANSALONI DE OLIVEIRA.pdf: 564136 bytes, checksum: 846f6a16985a9180c2d4d7056354c90d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T19:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RODRIGO ANSALONI DE OLIVEIRA.pdf: 564136 bytes, checksum: 846f6a16985a9180c2d4d7056354c90d (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / The use of medicinal plants, including extracts, of popular use as a therapeutic resource is a widespread trend in the Brazilian population. Euphorbia tirucalli is widely used by Brazilian popular medicine in the treatment of lesions, infectious diseases, tumors and inflammatory diseases. Through this work. Objective: To evaluate the genotoxic and antigenotoxic activity of Euphorbia tirucalli (aveloz). Methodology: Latex was obtained from a plant specimen, in the city of Goiânia, and diluted to the concentration of 1mg / ml. To evaluate the genotoxic and antigenotoxic activity of the aqueous solution of Euphorbia tirucalli latex were performed by the micronucleus test in the hematopoietic bone marrow of mice. The cytogenetic analysis of the slides was performed in order to detect possible chromosomal changes and / or losses (micronuclei) in the polychromatic erythrocytes of the bone marrow of the animals submitted to the different treatments. Results: In the treatments concomitant with the aqueous solutions of latex of Euphorbia tirucalli and Mitomycin C, there was a decrease in micronuclei numbers in 2000 EPC. The results allowed to conclude that the aqueous solutions of Euphorbia Tirucalli latex presented genotoxic, antigenotoxic, cytotoxic and anticitotoxic activity and the concomitant use of the aqueous solutions of the latex of Euphorbia tirucalli and Mitomycin C was not indicated, as the genotoxic and cytotoxic effects of MMC were decreased And thus not achieving the expected effect of this highly genotoxic agent. / A utilização de plantas medicinais, incluindo os extratos, de uso popular como recurso terapêutico é uma tendência generalizada na população brasileira. A Euphorbia tirucalli é amplamente utilizada pela medicina popular brasileira no tratamento de lesões, doenças infecciosas, tumores e doenças inflamatórias. Por meio deste trabalho. Objetivo: Avaliar a atividade genotóxica e antigenotóxica de Euphorbia tirucalli (aveloz). Metodologia: O látex foi obtido de um exemplar da planta, na cidade de Goiânia, e diluído para a concentração de 1mg/ml. Para a avaliação da atividade genotóxica e antigenotóxica da solução aquosa do látex da Euphorbia tirucalli foram realizadas pelo teste de micronúcleo na medula óssea hematopoiética de camundongos. A análise citogenética das lâminas foi realizada com a finalidade de se detectar possíveis alterações e/ou perdas cromossômicas (micronúcleos) nos eritrócitos policromáticos (EPC) da medula óssea dos animais submetidos aos diferentes tratamentos. Resultados: Nos tratamentos concomitantes com as soluções aquosas do látex da Euphorbia tirucalli e Mitomicina C, houve diminuição dos números de micronúcleos em 2.000 EPC. Os resultados permitiram concluir que as soluções aquosas do látex da Euphorbia Tirucalli apresentaram atividade genotóxica, antigenotóxica, citotóxica e anticitotóxica e não indicado o uso concomitante das soluções aquosas do látex da Euphorbia tirucalli e Mitomicina C, pois os efeitos genotóxicos e citotóxicos da MMC foram diminuídos e assim não obtendo o efeito esperado deste agente altamente genotóxico.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Petiveria alliacea L. é uma planta pertencente à família Phytolaccaceae, conhecida popularmente no país como guiné, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Região Amazônica tem sido cultivada em muitas áreas tropicais com propósito medicinal ou ritualístico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicação de plantas de P. alliacea L. através de métodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoquímico das culturas, e (ii) avaliação comparativa das potencialidades genotóxica e antigenotóxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populações ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicação das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentrações e combinações, que forneceu como melhor resultado em média 8 plantas por explante na concentração de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A análise fitoquímica foi baseada em métodos cromatográficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populações estudadas resultando em diferentes substâncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram também avaliados por cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substâncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradação de tiosulfinatos com importantes atividades biológicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos à avaliação da potencialidade genotóxica e antigenotóxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentrações utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alterações na conformação estrutural do DNA, indicando a ocorrência de quebras simples e duplas nesta molécula. Observou-se também que as lesões aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentração dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados também apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relação aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, também, uma potencialidade antigenotóxica do extrato aquoso. / Petiveria alliacea L. popularly known in Brazil as Guiné, Amansa-senhor or Tipi belongs to the Phytolaccaceae family. Native from the Amazon region, it has been cultivated in many tropical areas for medicinal or ritualistic purposes. The aim of this study was: i) the development and multiplication of plants of P. alliacea L. through tissue culture methods as well as monitoring phytochemical cultures; ii) comparative assessment of genotoxic and antigenotoxic potentialities between field collected and in vitro grown plants. Specimens from different populations occurring in the state of Rio de Janeiro were used as matrices for the culture. It was established a protocol for propagation in MS medium supplemented with different BAP + ANA concentrations and combinations whose best result (BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM) provided 8 plants per explant in average. The phytochemical analysis was based on chromatographic methods of different extracts both of field and in vitro plant populations resulting in different substances identified through the Thin-layer chromatography analyzing samples. The extracts were also assayed by cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas having identified various substances, including the dibenzyl disulfide, a degradation tiosulfinatos product with important function in plant defense and increasing use by the pharmaceutical industry. Field and in vitro plant aqueous extracts were evaluated for genotoxic and antigenotoxic potentialities using PUC 9.1 plasmid DNA. These results showed changes in the DNA structural conformation indicating the occurrence of single and double strand breaks induced by the extracts in a dose-response way. Finally, data also pointed to a protective effect of aqueous extract against stannous chloride oxidative damage, characterizing an antigenotoxic potentiality of aqueous extract.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Petiveria alliacea L. é uma planta pertencente à família Phytolaccaceae, conhecida popularmente no país como guiné, erva-de-alho, erva-tipi ou amansa-senhor. Nativa da Região Amazônica tem sido cultivada em muitas áreas tropicais com propósito medicinal ou ritualístico. O objetivo desse trabalho foi (i) o desenvolvimento e a multiplicação de plantas de P. alliacea L. através de métodos de cultura de tecidos, e monitoramento fitoquímico das culturas, e (ii) avaliação comparativa das potencialidades genotóxica e antigenotóxica entre plantas coletadas no campo e produzidas in vitro. Exemplares de diferentes populações ocorrentes no estado do Rio de Janeiro foram utilizados como matrizes para a cultura. Foi estabelecido um protocolo para multiplicação das plantas em meio MS suplementado com BAP e ANA em diferentes concentrações e combinações, que forneceu como melhor resultado em média 8 plantas por explante na concentração de BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM. A análise fitoquímica foi baseada em métodos cromatográficos de diferentes extratos de plantas de campo e plantas in vitro das populações estudadas resultando em diferentes substâncias identificadas nas amostras analisadas por cromatografia em camada delgada. Os extratos foram também avaliados por cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas, sendo identificadas diferentes substâncias, entre as quais o dibenzil dissulfeto, um produto de degradação de tiosulfinatos com importantes atividades biológicas na defesa das plantas. Os extratos aquosos das plantas de campo e daquelas estabelecidas in vitro foram submetidos à avaliação da potencialidade genotóxica e antigenotóxica, usando-se como modelo o DNA plasmidial pUC 9.1. Os resultados demonstraram que as concentrações utilizadas do extrato aquoso foram capazes de induzir alterações na conformação estrutural do DNA, indicando a ocorrência de quebras simples e duplas nesta molécula. Observou-se também que as lesões aumentaram, proporcionalmente ao aumento da concentração dos extratos, caracterizando-se, assim, um efeito dose-resposta. Os dados também apontaram para um efeito protetor do extrato aquoso, em relação aos danos oxidativos causados pelo cloreto estanoso, indicando, também, uma potencialidade antigenotóxica do extrato aquoso. / Petiveria alliacea L. popularly known in Brazil as Guiné, Amansa-senhor or Tipi belongs to the Phytolaccaceae family. Native from the Amazon region, it has been cultivated in many tropical areas for medicinal or ritualistic purposes. The aim of this study was: i) the development and multiplication of plants of P. alliacea L. through tissue culture methods as well as monitoring phytochemical cultures; ii) comparative assessment of genotoxic and antigenotoxic potentialities between field collected and in vitro grown plants. Specimens from different populations occurring in the state of Rio de Janeiro were used as matrices for the culture. It was established a protocol for propagation in MS medium supplemented with different BAP + ANA concentrations and combinations whose best result (BAP 4,4 μM + ANA 0,54 μM) provided 8 plants per explant in average. The phytochemical analysis was based on chromatographic methods of different extracts both of field and in vitro plant populations resulting in different substances identified through the Thin-layer chromatography analyzing samples. The extracts were also assayed by cromatografia gasosa acoplada á espectrometria de massas having identified various substances, including the dibenzyl disulfide, a degradation tiosulfinatos product with important function in plant defense and increasing use by the pharmaceutical industry. Field and in vitro plant aqueous extracts were evaluated for genotoxic and antigenotoxic potentialities using PUC 9.1 plasmid DNA. These results showed changes in the DNA structural conformation indicating the occurrence of single and double strand breaks induced by the extracts in a dose-response way. Finally, data also pointed to a protective effect of aqueous extract against stannous chloride oxidative damage, characterizing an antigenotoxic potentiality of aqueous extract.

The green tea is considered a functional food with antioxidant activity, and this delays the process of old age and helps in the prevention of chronicle and degenerative diseases, such as cancer and heart affections. Of catechins, present in green tea, may is extremely important in the inactivation of free radicals, which provoke damages to the DNA molecules and to the cell membranes prevent the cytotoxicity induced by the oxidative stress in different tissues, by actuating in the process of chemoprevention. In this study two crosses, ST and HB aimed at evaluating the protective effects of green tea in three different concentrations (25, 50 e 75mg/mL), combined with the antitumor agent, doxorrubicin (DXR), of the genotoxic action; by the of wing spot test (SMART) of Drosophila melanogaster. The results obtained demonstrated that in MH descendants there was not a statistically significant increase in the frequencies of spots, in the individuals treated with green tea, in standard cross (ST) as well as in the high bioactivation cross (HB - characterized by a high constitutive level of cytochrome P450) . However we could observe a statistically significant decrease in the sum of mutant spots, in MH descendants of both crossings (ST and HB), in all concentrations of green tea associated to DXR. These results suggest that green tea does not present genotoxic effect, but presents protective affect against the mutagenic and recombinagenic action of DXR in the somatic cells of D. melanogaster, in the experimental concentrations used in this study. / O chá verde (CV) é considerado um alimento funcional com atividade antioxidante, que retarda o processo de envelhecimento e auxilia na prevenção de doenças crônicas e degenerativas, como o câncer e doenças cardiovasculares. As catequinas, presentes neste chá, podem inativar os radicais livres que causam danos na molécula de DNA e dessa maneira, prevenir a citotoxicidade induzida pelo estresse oxidativo, em diferentes tecidos, atuando no processo de quimioprevenção. Neste estudo dois diferentes cruzamentos, ST e HB foram utilizados para avaliar o efeito do CV em três diferentes concentrações (25, 50 e 75mg/mL) combinados com um agente tumoral, doxorrubicina (DXR), de comprovada ação genotóxica; através do teste para detecção de manchas (SMART) na asa de Drosophila melanogaster. Os resultados obtidos demonstram que para os descendentes MH não houve aumento, estatisticamente significativo, nas freqüências de manchas, nos indivíduos tratados apenas com CV, tanto no cruzamento padrão (ST) quanto no cruzamento de alta bioativação (HB - caracterizado pelo alto nível constitutivo de citocromo 450). Contudo, foi observada uma redução, estatisticamente significativa, no total de manchas mutantes, nos descendentes MH, de ambos os cruzamentos (ST e HB), em todas as concentrações do CV quando associadas com a DXR. Estes resultados sugerem que o CV não possui efeito genotóxico, e, apresenta efeito protetor contra a ação mutagênica e recombinogênica induzida pela DXR em células somáticas de D. melanogaster, nas concentrações experimentais utilizadas neste estudo. / Mestre em Genética e Bioquímica