Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Estreptococos do grupo B (EGB) é a principal causa de sepse e meningite neonatal e tem sido recentemente reconhecido como patógeno responsável por infecções invasivas em adultos imunocomprometidos (idosos ou portadores de doenças crônicas). Os EGB produzem inúmeras enzimas extracelulares, várias das quais interagem com o sistema imune do hospedeiro e são importantes durante a interação EGB-hospedeiro, bem como para o desenvolvimento da doença. Estudos anteriores mostraram que metaloproteases estão envolvidas em várias vias metabólicas em diferentes tipos celulares. Por esta razão, nós decidimos investigar o possível envolvimento de metaloproteases de EGB durante a interação celular e apoptose/necrose induzida pelo micro-organismo em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) e da linhagem de epitélio respiratório (A549). Tratamento de EGB com inibidores de metaloproteases (EDTA, EGTA e FEN) não induziu alterações no crescimento bacteriano, mas promoveu alterações na expressão de proteínas de superfície, capacidade adesiva e perfil de sobrevivência intracelular do patógeno. O EGB e o sobrenadante do crescimento bacteriano (meio condicionado; MC) promoveram a morte das células HUVEC e A549. Contudo, o tratamento com inibidores de metaloproteases restauraram a viabilidade celular induzida pelos EGB e o MC, sugerindo que metaloproteases bacteriana estão envolvidas no rompimento da barreira celular, promovendo a disseminação bacteriana. Este trabalho descreve pela primeira vez apoptose e necrose induzidas pelo EGB e MC em HUVEC e células A549 após 24h de incubação, respectivamente. Nós também observamos redução da pró-caspase-3 após infecção das HUVEC com EGB e MC, sugerindo ativação da caspase-3. Além disso, o aumento da expressão da proteína pró-apoptótica Bax e diminuição dos níveis da proteína anti-apoptótica Bcl-2 em HUVEC, demonstram o envolvimento do mecanismo apoptótico mitocondrial (via intrínseca). A melhor compreensão das bases moleculares da patogênese do EGB contribui para identificar novas moléculas bacterianas e hospedeiras que podem representar novos alvos terapêuticos ou imunoprofiláticos contra a doença causada por esse patógeno neonatal. / Group B streptococcus (GBS) is the leading cause of neonatal sepsis and meningitis and has recently been recognized as an increasingly common cause of invasive disease in immunocompromised adults (elderly or chronic diseases). GBS produces a number of extracellular enzymes, several of which interact with the host immune system and are important for the GBS- host interaction and for the development of disease. Previous studies showed that metalloproteases are involved in several metabolic pathways in different cellular types. For this reason, we decided to investigate the possible involvement of GBS metalloproteases during cell interaction and apoptosis/necrosis induced by microorganism in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and epithelial respiratory cells line (A549). Treatment of GBS with metalloproteases inhibitors (EDTA, EGTA and PHEN) did not induce alteration on bacterial growth, but promoted changes in the expression of surface proteins, adhesive capacity and profile of intracellular survival of the pathogen. The GBS and supernatant of bacterial growth medium (conditioned medium; MC) promoted the death of HUVEC and A549 cells. However, the metalloproteases inhibitors treatment restored the cellular viability induced by GBS and MC, suggesting that GBS metalloproteases are involved in the disruption of cell barrier, promoting bacterial dissemination. This study describes for the first time apoptosis and necrosis induced by GBS and MC in HUVEC and A549 cells after 24h incubation, respectively. We also observe reduction of pro-caspase-3 after infection of HUVEC with GBS and MC, suggesting activation of caspase-3. Moreover, the over-expression of pro -apoptotic protein Bax and decrease of anti-apoptotic protein Bcl-2 levels in HUVEC show the involvement of mitochondrial apoptotic mechanism (intrinsic via). Enhanced understanding of the molecular basis of GBS pathogenesis may pinpoint novel bacterial and host molecules that can represent novel therapeutic or immunoprophylactic targets against disease caused by this foremost of neonatal pathogens.

A viticultura é uma atividade de grande importância econômica, destacando-se a sustentabilidade da pequena propriedade e o desenvolvimento territorial associados às atividades ligadas ao turismo. As plantas cultivadas se tornam vulneráveis a patógenos e insetos-praga e a videira apresenta diversas espécies consideradas pragas que reduzem sua produção e rentabilidade, entre estas, Spodoptera frugiperda, causando danos em diferentes partes da planta. Fungos entomopatogênicos podem oferecer uma alternativa aos pesticidas convencionais para o controle de pragas, pois produzem enzimas que degradam o exoesqueleto do inseto como quitinases e proteases facilitando o modo de infecção. Neste trabalho foi avaliado o potencial inseticida do fungo Nomurea rileyi, linhagem UCS03, contra S. frugiperda e o perfil eletroforético por SDS-PAGE das proteínas secretadas por N. rileyi em presença da cutícula do inseto em diferentes intervalos de tempo em gel unidimensional. O fungo N. rileyi apresentou virulência contra S. frugiperda, determinando um CL50 de 2 x 109conídios/mL com a linhagem UCS03 demonstrando atividade bionseticida. Na avaliação do perfil proteico do secretoma de N. rileyi em presença da cutícula do inseto, em diferentes tempos de cultivo, foi possível verificar um perfil altamente diferenciado. A maior concentração de proteína foi encontrada no 14° dia de incubação (0,3507 mg/mL) reduzindo a quantidade de proteínas após este período. Na análise por SDS-PAGE foi possível verificar diferentes proteínas de diferentes massas moleculares, nos intervalos de tempo considerados, sendo muitas inferiores a 75 kDa. Estas proteínas com diferentes massas moleculares podem estar envolvidas no metabolismo do fungo. Desta forma, estes resultados podem contribuir para a compreensão do processo de infecção de N. rileyi em S. frugiperda, oferecendo potencial para o desenvolvimento de novas pesquisas e aplicações destas em processos biotecnológicos. / Viticulture is an activity of great economic importance with emphasis on the sustainability of small property and territorial development associated with tourism related activities. Cultivated plants become vulnerable to pathogens and insect pests and the vine has several species considered as pests that reduce their production and profitability, among them, Spodoptera frugiperda, with causes damage in different parts of the plant. Entomopathogenic fungi can provide an alternative to conventional pesticides for controlling pests, they produce enzymes that degrade the insect exoskeleton, such aschitinases and proteases facilitating the infection. In this work, the insecticide potential of the fungus Nomurea rileyi and S. frugiperda was evaluated, as well as the proteins secreted by N. rileyi in the presence of insect cuticle at different time intervals in one-dimensional gel. The fungus N. rileyi presented virulence against S. frugiperda, determining a CL50 of 2 x 109 con / mL with UCS03 strain demonstrating bionseticida activity. In assessing the protein profile of secretome N. rileyi in the presence of insect cuticle, at different times of cultivation, a highly differentiated profile was verified. The highest concentration of protein was found at day 14 of incubation (0.3507 mg / ml) reducing the amount of protein after this period. In the one-dimensional gel analysis was verified different molecular weights of proteins, in the time interval considered being many less than 75kDa. These proteins with different molecular weights may be involved in fungal metabolism. Thus, these results can contribute to the understanding of the infection process of N. rileyi in S. frugiperda, offering potential for the development of new researches and applications in biotechnological processes.