Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2009. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 71-75.

Thèse ou mémoire avec insertion d'articles / Le virus respiratoire syncytial (VRS) et le métapneumovirus humain (MPVH) sont deux pathogènes respiratoires majeurs qui représentent un fardeau important pour la santé publique dans le monde entier, affectant particulièrement les populations vulnérables telles que les nourrissons, les personnes âgées et les patients immunodéprimés. Les deux virus appartiennent à la famille des *Pneumoviridae* (pneumovirus) et sont relativement similaires dans leur structure et leur réplication. Malgré plus de 60 ans de recherche dans ce domaine, les deux premiers vaccins contemporains pour la prévention du VRS ont été approuvés cette année, mais il n'existe toujours pas de vaccin contre le MPVH. Cette thèse donne un aperçu complet de la virologie moléculaire du VRS et du MPVH, de l'épidémiologie, du fardeau de la maladie, des modèles d'infection, de la réponse immunitaire et du paysage actuel des modalités de traitement et de prophylaxie du VRS et du MPVH, en mettant l'accent sur le développement d'un vaccin. Notre équipe de recherche a déjà développé Metavac®, un candidat vaccin vivant atténué contre le MPVH qui s'est avéré sécuritaire, immunogène et protecteur contre l'infection par le MPVH chez la souris. Cette thèse présente une tentative réussie de conception, de génération et de caractérisation d'un vaccin chimérique atténué MPVH/VRS basé sur la plateforme d'expression Metavac® en vue de son utilisation comme vaccin chimérique atténué bivalent contre les deux pneumovirus. Le projet de recherche comprend trois parties principales : I) Biologie moléculaire : L'étude de la génétique des pneumovirus et la tentative de trouver une localisation appropriée dans le génome du MPVH pour l'insertion de l'antigène principal du VRS. II) *II) In vitro :* Génération d'un virus viable par génétique inverse et production d'un stock de virus concentré pour son utilisation comme vaccin chimérique atténué MPVH/VRS. Caractérisation des virus chimériques. III) *In vivo*: Vaccination de souris BALB/c avec des virus chimériques MPVH/VRS et évaluation de leur efficacité protectrice contre le défi létal MPVH et VRS. / Respiratory Syncytial Virus (RSV) and Human Metapneumovirus (HMPV) are two major respiratory pathogens that pose a significant public health burden worldwide, particularly affecting vulnerable populations such as infants, elderly individuals, and immunocompromised patients. Both viruses belong to the family *Pneumoviridae* (pneumovieus) and are relatively similar in structure and replication. Despite over 60 years of research in the field, the first two contemporary vaccines for RSV prevention have been approved this year, and yet there is still no vaccine available against HMPV. This thesis provides a comprehensive overview of RSV and HMPV molecular virology, epidemiology, disease burden, models of infection, immune response, and the current landscape of RSV and HMPV treatment and prophylactic modalities with a focus on vaccine development. Our research team has previously developed Metavac®, a live attenuated HMPV vaccine candidate that proved safe, immunogenic, and protective against HMPV infection in mice. This work presents a successful attempt to design, generate, and characterize a chimeric attenuated HMPV/RSV virus based on the Metavac® expression platform for its use as a bivalent attenuated chimeric vaccine against both pneumoviruses. The research project includes three main parts: IV) Molecular biology: The study of pneumovirus genetics and the attempt to find an appropriate localization in the genome of HMPV for the insertion of the main antigen of RSV. V) *In vitro*: A rescue of a viable virus by reverse genetics and the production of a concentrated virus stock for its use as an attenuated chimeric HMPV/RSV vaccine. Characterization of chimeric viruses. VI) *In vivo*: Vaccination of BALB/c mice with chimeric HMPV/RSV viruses and evaluation of their protective efficacy against HMPV and RSV lethal challenge.

Thèse d'exercice : Médecine. Pédiatrie : Université de Nantes : 2004. / Bibliogr. f. 28-29 [23 réf.].

Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine vétérinaire : Toulouse 3 : 2007. / Titre provenant de l'écran titre. Bibliogr. p. 108-125.

Les vecteurs permettant la transmission des infections nosocomiales ne sont pas toujours bien identifiés. Les risques représentés par les virus aéroportés dans les milieux de soins doivent être étudié davantage. Ce mémoire présente des méthodologies pour détecter la présence de virus aéroportés et évaluer leur résistance dans cet état. Le virus influenza, le norovirus et le virus respiratoire syncytial y sont à l’étude. Deux techniques d’échantillonnage furent utilisées soit un échantillonnage à sec (NIOSH 251) et un échantillonneur liquide (Coriolis µ®). Les ADNc viraux furent détectés par qPCR. La résistance des norovirus à l’aérosolisation a été démontrée à l’aide d’un virus-modèle, le norovirus murin. La première détection des norovirus dans l’air de milieux de soins y est décrite. La présence du virus influenza dans l’air a aussi été démontrée. Le virus respiratoire syncytial n’a pu être mis en évidence dans l’air. Les virus pathogènes peuvent être aéroportés et représenter un risque infectieux. / The route of transmission of healthcare associated infections is not always well defined. The airborne dissemination of influenza virus, norovirus and respiratory syncytial virus has to be assessed. This thesis presents methodologies to detect airborne viruses and some innovative way to assess their resistance through the airborne route. Two sampling techniques were used, more precisely a dry sampling using a NIOSH 251 impactor and a liquid sampling using a Corriolis µ®. Viral cDNA was detected by real-time PCR. To assess the resistance of norovirus through the air route we used a cultivable experimental model; the murine norovirus. This thesis presents the first detection of airborne norovirus in a healthcare setting. Influenza virus was detected in the air of an emergency department and in the room of influenza positive patient. Respiratory syncytial virus could not be detected in an airborne state. Pathogenic virus can be disseminated through the airborne route and could represent an infectious risk.

Le virus respiratoire syncytial (VRS) est le principal agent responsable desbronchopneumonies du jeune veau et des bronchiolites du nourrisson. Il n’existe pas devaccin ni d’antiviraux spécifiques pour l’homme. La réplication du génome et la transcriptiondes gènes viraux sont assurées par un ensemble de protéines virales constituant le complexeARN polymérase ARN-dépendant : la nucléoprotéine N, la phosphoprotéine P, le facteur detranscription M2-1 et la grosse sous-unité L. L’objectif principal de ma thèse était d’obtenirde nouvelles données structurales et fonctionnelles sur le complexe ARN-polymérase ARNdépendante(RdRp) du VRS, en particulier sur le couple P-L. Pour ceci j’ai tout d’aborddéveloppé un protocole de production et purification de la protéine L sous formerecombinante en cellules d’insecte. Ceci m’a permis ensuite de cartographier le sited’interaction de P avec L. J’ai ainsi mis en évidence que la protéine L interagit avec la partieC-terminale de la protéine P, au-niveau des résidus 216 à 239. Les données obtenuessuggèrent que ce domaine peut former un nouvel élément de reconnaissance moléculaire(« MoRE ») se structurant en hélice alpha lors de l’interaction avec la protéine L. De plus, lacartographie de ce domaine d’interaction m’a permis d’identifier entre les résidus 164 et 205de P une nouvelle région impliquée dans le recrutement de la protéine L aux corpsd’inclusions viraux. Ces nouvelles données ouvrent la voie à de nouvelles études structuralesde l’ARN-polymérase du VRS et nous permettent d’envisager de nouvelles stratégiesantivirales ciblant ce complexe. / Respiratory syncytial virus (RSV) is the leading cause of calves bronchopneumonia andinfants bronchiolitis. Neither vaccine nor antiviral treatments are currently available for use inhumans. Viral genome is replicated and transcribed by a set of viral proteins constituting theviral RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) complex: the nucleoprotein (N), thephosphoprotein (P), the transcription factor (M2-1) and the large subunit (L). This workaimed to unveil new structural and functional data regarding the viral RdRp, especially the PLcouple. With this aim in view, I have first conceived a protocol to produce and purifyrecombinant L and P proteins expressed in insect cells. This tool enabled the fine mappingand characterization of the L binding domain of the RSV phosphoprotein. This highlightedthe interaction between the L protein and the C-terminal region of the P protein, especiallyresidues 216 to 239. Further data suggests that this area constitutes an alpha helix formingmolecular recognition element (« MoRE ») during P-L interaction. Furthermore, this studyunveiled a new region of the P protein encompassing residues 164 to 205, involved in therecruitment of L protein to viral inclusion bodies. These new results open the way toupcoming structural studies of RSV RdRp and allow us to define a new target for thedevelopment of antiviral drugs against RSV.

De nombreuses études ont impliqué des TLR dans le développement et la progression tumorale. Précédemment, il a été démontré que les cellules tumorales expriment TLR7, un récepteur à ARNsb, et qu’une forte expression de TLR7 par les cellules tumorales de patients atteints de cancer du poumon est associée à un mauvais pronostic. Dans un modèle murin de cancer du poumon, cet effet pro-tumoral a été reproduit lors de l’injection d’agoniste de TLR7. Mes travaux de thèse ont eu pour objectif de déterminer les mécanismes impliqués dans les effets pro-tumoraux de TLR7. La stimulation de ce récepteur au niveau des cellules tumorales induit une production plus importante de CCL2 et GM-CSF, ainsi qu’un fort recrutement de MDSC au site de la tumeur. Ces MDSC, de par leurs propriétés immunosuppressives sont responsables de l’effet pro-tumoral à la suite de la stimulation de TLR7. Nous avons également mis évidence que la stimulation de TLR7 était pro-métastatique dans un modèle murin de cancer du poumon et que les MDSC étaient également impliquées dans cet effet. Ces effets pro-métastatiques associés au TLR7 ont été confirmés chez l’homme, grâce à l’étude de transcrits de molécules associées à l’invasion, l’angiogénèse, la transition épithélio-mésenchymateuse et les métastases. Enfin nous avons démontré la présence de ligand de TLR7 chez les patients atteints de cancer du poumon et démontré que l’injection intratumorale de virus respiratoires, IAV et RSV, a un effet pro-tumoral dans notre modèle de cancer du poumon. Ces virus respiratoires pourraient donc être à l’origine de la surexpression de TLR7 et du mauvais pronostic associé à ce récepteur chez les patients atteints de cancer du poumon. Ces recherches ont donc permis de mettre en évidence de nouveaux facteurs aggravants dans le cancer du poumon, dont les virus respiratoires, et de découvrir les mécanismes impliqués. / Numerous studies have implicated some TLR in tumor development. Previously, we have demonstrated that lung tumor cells express TLR7, a receptor for ssRNA, and that high TLR7 expression confers to NSCLC patients bad clinical outcome. In mice models of lung cancer, we further demonstrated that the injection of TLR7 agonists led to a pro-tumoral effect.My thesis work has firstly demonstrated the mechanisms involved in the pro-tumoral effects of TLR7 in lung cancer: TLR7 stimulation on tumor cells induces a high production of CCL2 and GM -CSF, as well as a sharp MDSC recruitment within the tumor. These MDSC, by their immunosuppressive properties, are implicated in the pro-tumoral effect upon TLR7 stimulation. We also demonstrated that TLR7 stimulation was pro-metastatic in a mice model of lung cancer and that MDSC were also involved in this effect. These pro-metastatic effects associated with TLR7 have been confirmed in humans through the studies of transcripts and proteins involved in invasion, angiogenesis, Epithelial–mesenchymal transition and metastasis. Finally, we demonstrated that TLR7 ligands are present in tumor microenvironment of lung cancer patients and that intratumoral injection of respiratory viral infections such as IAV and RSV, have a pro-tumoral effect in lung cancer mice model. These respiratory viruses could therefore be at the origin of the overexpression of TLR7 and the poor clinical outcome associated with this receptor in lung cancer patients. This research has thus made possible to highlight new aggravating factors in lung cancer, including respiratory viruses, and to discover the mechanisms involved.

Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2009. / Bibliogr.: f. 107-115. Publié aussi en version électronique dans la Collection Mémoires et thèses électroniques.

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