This study aimed to evaluate the antioxidant activity in vitro, as well as and the possible
neuroprotective effect in vivo of the isoflavonoid formononetin (FORM) in an
experimental model for the study of Parkinson's disease (PD). Among the methods
used to determine the antioxidant activity of FORM in vitro, they were elected the
DPPH, ABTS and FRAP. In the in vivo assays, FORM was evaluated for its biological
activity on experimental PD induced by 6- hydroxydopamine (6-OHDA, 10 μg in 2 μL)
injection in the right striatum. Control groups received saline containing 0.02% of
ascorbic acid. The animals were subjected to the open field behavioral test after 21
days of surgery. The immunohistochemical analysis of tyrosine hydroxylase TH was
performed in the substantia nigra pars compacta (SNc) and the inflammatory response
was evaluated at the striatum (hystochemical for hematoxylin eosin) after sacrifice 28
days of surgery. Statistical analysis was performed by one way analysis of variance or,
in the case of graduated inflammatory response, by the Kruskal-Wallis test with Dunn's
extension. The in vitro results of DPPH, ABTS and FRAP showed significant
antioxidant action of FORM, similar to that of the vitamins A and E (p > 0.05) and
synergism between FORM and vitamin A (for equivalent vitamin C and Trolox, p <
0.001). In the open field test the rearing, crossings, ambulation (to the right and left),
the immobility time and latency to onset the movement were similar between the group
treated with FORM 20 mg/kg and the lesioned group and different from the groups
treated with vehicle and FORM 10 mg/kg. In immunostaining for TH SNc, it was
observed that 6-OHDA caused a decrease in the mean number of dopaminergic
neurons (22% remaining) in the lesioned group, whereas the treatment with FORM 10
mg/kg promoted an increase to 51% and FORM 20 mg/kg in 79%, p < 0.0001. The
data were also indicative of anti-inflammatory action of FORM evidenced in
histopatholological analysis and by the reduction in the microglial inflammatory
infiltrate. It was found that lesioned rats treated with vehicle exhibited severe grade of
inflammatory response (more than 50% of the microglial infiltrate) while in the group
without lesion less than 10% of inflammatory infiltrate. On the other hand, in the groups
treated with FORM (10 and 20 mg/kg), there was a moderate inflammatory response,
(10 to 50% infiltrate p < 0.0001). Therefore, the treatment with FORM promoted a
neuroprotective and anti-inflammatory effects, which may be associated with high
antioxidant activity. / Considerando a demanda de tratamentos efetivos para prevenção e tratamento
da doença de Parkinson (DP) e o papel do estresse oxidativo em desordens
neurológicas e neurodegenerativas, o presente trabalho teve por objetivo
avaliar a atividade antioxidante in vitro, bem como a possível ação
neuroprotetora in vivo do isoflavonóide formononetina (FORM) em modelo
experimental para estudo da DP. Dentre os métodos usados para determinar a
atividade antioxidante da FORM in vitro, foram eleitos o DPPH, o ABTS e o
FRAP. Em ensaios in vivo, foi avaliada sua atividade biológica frente à lesão da
via nigroestriatal causada por 6- hidroxidopamina (6-OHDA, 10 μg em 2 μL),
com o lado direito utilizado como parâmetro para microinjeção no estriado.
Animais controle receberam solução salina contendo 0,02% de ácido
ascórbico. Os animais foram submetidos a teste comportamental de campo
aberto, 21 dias após a cirurgia e procedeu-se à análise imunohistoquímica para
a enzima tirosina hidroxilase (TH) e análise histoquímica (hematoxilina eosina)
para avaliação de alterações estruturais e da resposta inflamatória, no estriado
e na substância negra compacta (SNc), após eutanásia aos 28 dias. Os dados
foram submetidos à análise de variância de uma via (ANOVA) seguida do pósteste
de Tukey, à exceção do escore da resposta inflamatória, que foi analisado
por meio de Teste Kruskal-Wallis, com extensão de Dunn. Nos resultados in
vitro, através dos testes DPPH, ABTS e FRAP encontrou-se ação antioxidante
de FORM semelhante à das vitaminas A e E e sinergismo entre a FORM e a
vitamina A (por Equivalente de vitamina C e Trolox, p < 0,001). Nos resultados
in vivo, para os testes de comportamento em campo aberto, foram avaliados os
parâmetros de elevações (rearing), explorações (crossing), ambulações para a
direita e esquerda, o tempo de imobilidade e de latência para início do
movimento, sendo os resultados do grupo tratado com FORM a 20 mg/kg
semelhantes aos do grupo não lesionado e diferentes dos grupos lesionados
tratados com veículo e FORM a 10 mg/kg. Na imunomarcação para TH na
SNc, a 6-OHDA promoveu diminuição de neurônios, ficando remanescentes
em média 22% no grupo lesionado e tratados com veículo, enquanto que o
tratamento com FORM a 10 mg/kg promoveu aumento do número médio em
51% e o tratamento com FORM a 20 mg/kg em 79%. Os dados foram
indicativos também de efeito anti-inflamatório da FORM, evidenciada na análise
de infiltrado inflamatório microglial. Verificou-se que animais lesionados e
tratados com veículo apresentaram grau severo de inflamação (mais de 50%
de infiltrado inflamatório), o grupo controle apresentou menos de 10% de
infiltrado inflamatório, enquanto nos grupos tratados com FORM (10 e 20
mg/kg) observou-se grau moderado de inflamação (10 a 50% de infiltrado p <
0,0001). Portanto, o tratamento com a FORM promoveu aumento na
sobrevivência de neurônios dopaminérgicos e diminui a resposta inflamatória
no estriado, efeitos que podem estar associados a sua atividade antioxidante.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/3267 |
| Date | 30 May 2016 |
| Creators | Oliveira, Juciele Valéria Ribeiro de |
| Contributors | Gomes, Margarete Zanardo |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Biotecnologia, UFS, Brasil |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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