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Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A desnutrição proteica é considerada um fator de risco primário para o desenvolvimento da leishmaniose visceral (LV), contudo, as bases imunológicas desta associação são majoritariamente desconhecidas. Este trabalho pretendeu determinar os efeitos da desnutrição proteica no timo e baço de camundongos BALB/c infectados com L. infantum. Os animais foram submetidos à dieta controle (CP, 14% em proteína) ou baixa em proteína (LP, 4% em proteína). Após sete dias de dieta, cada grupo foi dividido em dois e cada um foi infectado com L. infantum (CPi, e LPi). As dietas foram mantidas após a infecção e os animais foram eutanasiados 14 dias pós-infecção. Os animais LPi mostraram uma desnutrição moderada e uma diminuição significativa no peso do timo e baço, acompanhado de níveis séricos reduzidos de IGF1 e Leptina e de IGF1 hepático obedecendo aos padrões esperados em um quadro de desnutrição proteica. Além disso, animais LPi apresentaram uma carga parasitaria significativamente maior que animais CPi. A desnutrição e infecção induziram danos na arquitetura tímica, gerando alterações na distribuição de laminina e fibronectina, e redução na secreção de varias citocinas e quimiocinas no fluido intersticial tímico tais como: IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 e CXCL10, sugerindo que a entrada de progenitores ao timo e sua maturação intratímica e migração pode estar comprometida nestes animais
A análise proteômica deste fluido permitiu gerar um perfil de proteínas secretadas tímicas e revelou a importância de proteínas exossomais na fisiologia do timo, assim como a participação de vias metabólicas como a fosforilação oxidativa e \03B2-oxidação de ácidos graxos na proliferação e diferenciação dos timócitos LPi. O baço, por sua vez, apresentou desorganização tecidual e diminuição no número de folículos, assim como uma redução significativa de moléculas pró-inflamatórias e de moléculas envolvidas na quimiotaxia no fluido intersticial esplênico de animais LPi (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL9 e CXCL10). Esta diminuição se correlaciona positivamente com a carga parasitaria esplênica incrementada, e pode ser uma causa da mesma. A análise proteômica do fluido intersticial esplênico revelou um aumento na abundância de proteínas relacionadas com estresse oxidativo sugerindo um desequilibro no estado oxidante/anti-oxidante em animais LPi. Observou-se também uma diminuição na abundância de proteínas envolvidas na via das pentoses fosfato e na síntese de purinas indicando potenciais defeitos na proliferação de esplenócitos. A identificação de proteínas envolvidas na resposta pró-inflamatória e quimiotaxia, cuja abundância estava diminuída, reforça os resultados moleculares relatados no grupo LPi. Em síntese, identificaram-se novos elementos na patogênese da LV, tanto no timo quanto no baço, que contribuem ao entendimento do aumento da susceptibilidade a desenvolver LV quando há uma condição desnutrição pré-existente / Protein malnutrition is considered a primary risk factor for the development of visceral leishmaniasis (VL); however, the immunological bases of this association are mainly unknown. This thesis aims to determine the effects of protein malnutrition in the thymus and spleen of BALB/c mice infected with L. infantum. The animals were fed with control (CP, 14% protein) or low-protein (LP, 4% protein) diet. After seven days of diet, each group was divided in two and one of them was infected with L. infantum (CPi, and LPi). The diets were maintained after infection and animals were euthanized after 14 post-infection. LPi animals showed a moderate malnutrition and a significant decrease in thymus and spleen weight. This was accompanied by a reduced serum levels of IGF1 and Leptin, and hepatic IGF1, showing the expected patterns of protein malnutrition. In addition, malnutrition induced a significant increase in the splenic parasite load of infected animals. Malnutrition and infection induced damage to the thymic architecture, causing changes in the distribution of laminin and fibronectin, and a reduction in the secretion of various cytokines and chemokines such as IL-12, CCL5, CXCL12, IGF1, CXCL9 and CXCL10 into the thymic interstitial fluid, suggesting that the entrance of progenitors into the thymus and intrathymic maturation and migration can be compromised in these animals. Quantitative proteomic analysis of this fluid allowed the identification thymic secreted proteins and revealed the importance of exosomal proteins in the thymus physiology. Proteomics also revealed that metabolic pathways such as oxidative phosphorylation and β-oxidation of fatty acids are potentially involved in the proliferation and differentiation of LPi thymocytes. Malnutrition also induced a drastic disorganization of splenic architecture including a severe reduction in the number of follicles, as well as a significant decrease of pro-inflammatory and chemotactic molecules in the splenic interstitial fluid of LPi animals (IL-1a, IL-1b, IL-2, IL-12, IGF1, CCL5, CXCL12, CXCL10 and CXCL9), which is related to the increased splenic parasitic load. Proteomic analysis of splenic interstitial fluid revealed increased abundance of proteins related to oxidative stress suggesting an imbalance in the oxidant/anti-oxidant state in LPi animals. On other hand, proteins with decreased abundance were mainly involved in the pentose phosphate pathway and purine synthesis suggesting potential defects on splenocytes proliferation. Also, a decreased abundance of proteins associated with proinflammatory response and chemotaxis was observed in the splenic interstitial fluid, supporting the molecular data obtained in the LPi group. In summary, we identified new elements in the pathogenesis of VL both in the thymus as the spleen that contribute to the understanding of the increased susceptibility to develop VL when a malnutrition condition pre-exists. / 2100-03-04
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/14225 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Losada Barragán, Monica |
| Contributors | Pessolani, Maria Cristina Vidal, Almeida, Vinicius Cotta de, Jeronimo, Selma Maria Bezerra, Bonomo, Adriana Cesar, Dutra, Patricia, Cuervo Escobar, Patricia |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Restricted Acess, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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