A maioria dos compostos naturais do mundo ainda não foi testada, visto a vasta biodiversidade disponível. As plantas do gênero Rheedia apresentam propriedades farmacológicas e químicas bem descritas na literatura e podem ser fonte de fungos endofíticos produtores de compostos bioativos. Os fungos endofíticos merecem especial destaque por sua grande diversidade de espécies e consequentemente, seus metabólitos tendem a apresentar diversidade química e moléculas inéditas com algumas atividades biológicas já descritas. Objetivou-se neste trabalho isolar fungos endofíticos das folhas de Rheedia brasiliensis, selecionar os de maior destaque e testá-los quanto à capacidade em produzir metabólitos bioativos com atividade antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. Foram analisados 245 fragmentos de folhas de R. brasiliensis com isolamento de 154 fungos (freqüência de isolamento de 62,86%). Selecionou-se dois fungos, por meio da triagem antimicrobiana, para estudos mais avançados, sendo eles o Paraconiothyrium sp. P83F4/1, que pertence a um novo gênero recentemente descrito e que pode vir a se destacar na produção de novas moléculas de interesse e, Colletotrichum gloeosporioides P67F1/1, o qual apresenta histórico de metabólitos bioativos e moléculas importantes descritas na comunidade científica. Assim, no primeiro estudo, avaliou-se as propriedades biológicas do extrato acetato de etila de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 obtido pela fermentação submersa em caldo czapek, testando-o quanto a sua capacidade em produzir compostos bioativos de interesse por meio de ensaios antimicrobianos, antioxidantes e antiproliferativos. As cepas de Staphylococcus aureus e Escherichia coli foram susceptíveis ao extrato de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 testado, sendo a concentração inibitória mínima (CIM) para S. aureus de 500-1000 g/mL. Utilizando o método do DPPH (radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazil), o extrato de Paraconiothyrium sp. P83F4/1 apresentou capacidade sequestrante (média da capacidade sequestrante+desvio padrão), a 90 ppm, de 58,92+0,024 (%), sendo significativamente superior (p<0,05) ao padrão comercial Butil Hidróxi Tolueno (BHT), 39,52+0,095 (%). Ainda, o extrato deste fungo também apresentou destaque pela seletividade sobre as células HaCat (queratinócito humano), importante em patologias como psoríase, sendo o valor de GI50 de 0,95 µg/mL (média do log GI50 = -0,02). Estes resultados apontam para a potencialidade do extrato da fermentação do fungo Paraconiothyrium sp P83F4/1 e estimulam a continuidade dos estudos, elucidando o(s) composto(s) que exerce(m) estas atividades em potencial e aprofundando os conhecimentos sobre os mecanismos de ação envolvidos em tais atividades. No segundo estudo, objetivou-se avaliar o potencial biológico do extrato bruto de farelo de trigo e demonstrar sua influência em processos fermentativos, utilizando-se o fungo endofítico C. gloeosporioides P67F1/1 para a obtenção dos compostos bioativos. Verificou-se que o extrato diclorometânico do farelo de trigo apresentou atividades biológicas iguais ou superiores ao extrato fúngico. No ensaio antimicrobiano, ambos os extratos apresentaram CIM de 250-500 g/mL. A capacidade sequestrante (%) dos extratos, revelada pelo DPPH, mostrou valores de (média da capacidade sequestrante+desvio padrão): 17,7+0,037 (farelo de trigo) e 10,56+0,004 (fungo), sendo o extrato do farelo significativamente (p<0,05) melhor que o extrato de C. gloeosporioides P67F1/1. No ensaio antiproliferativo, o extrato bruto do farelo de trigo apresentou atividade fraca frente à maioria das linhagens tumorais avaliadas (25,34<GI50 (g/mL)<47,75; 1,40<média logGI50<1,68). Por outro lado, o extrato fúngico mostrou-se inativo frente a todo painel celular testado (GI50>250 g/mL, média logGI50>2,40), conforme critério do National Cancer Institute. Diante dos resultados, verificou-se que o farelo de trigo não se apresentou como substrato inerte no processo fermentativo. Desta forma, alerta-se a necessidade de maiores cuidados ao empregá-lo como substrato em determinados tipos de fermentação (cujos objetivos assemelham-se aos deste trabalho), evitando assim, influências de sua composição química (direta e/ou indiretamente) sobre atividades esperadas para os extratos em estudo, provenientes de processos fermentativos fúngicos. / The majority of natural compounds in the world has not been tested yet, due to vast biodiversity available. Plants of the genus Rheedia can be sources of endophytic fungi producers of bioactive compounds because it presented chemical and pharmacological properties well described in the literature. Endophytic fungi deserve particularly consideration because they include microorganisms with high species diversity and consequently, high chemistry diversity and uniqueness of molecules with biological activities proven. This study aimed isolate endophytic fungi from Rheedia brasiliensis leaves, selecting the most outstanding and testing their ability to produce bioactive metabolites with antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activity. In all, 245 fragments of leaves of R. brasiliensis were analyzed with isolation of 154 fungi (isolation frequency of 62.86%). Two fungi were selected, through the antimicrobial screening, for more advanced studies: the first one was Paraconiothyrium sp. P83F4/1, which belongs to a new genus recently described and it may be important in the production of new molecules of interest, and, the second was Colletotrichum gloeosporioides P67F1/1, which presents a historical of metabolites and bioactive molecules that are outlined by the scientific community. The first part of this study evaluated biological properties of extract obtained from submerged fermentation into czapek broth of the Paraconiothyrium sp. P83F4/1 endophytic fungus. So, this extract was tested for its capacity to produce bioactive compounds with antimicrobial, antioxidant and antiproliferative properties of interest. The strains of Staphylococcus aureus and Escherichia coli were susceptible to fungal extract tested, with greater emphasis against S. aureus, whose minimum inhibitory concentration (MIC) values were 500-1000 µg/mL. Using the method of DPPH (1,1-diphenyl-2-picril-hydrazyl radical), Paraconiothyrium sp. P83F4/1 extract showed scavenging capacity (average sequestrant capacity + standard deviation), at 90 ppm, of 58.92+0.024 (%), and was significantly higher (p<0.05) than commercial standard Butyl Hidroxi Toluene (BHT), of 39.52+0.095 (%). The Paraconiothyrium sp. P83F4/1 extract also stood out for selectivity on HaCat cells (human keratinocytes), important in diseases such as psoriasis, with GI50 value of 0.95 mg/mL (mean log GI50 = -0.02). These results indicate extract powerfull of the Paraconiothyrium sp. P83F4/1 and stimulate continuation of studies, with elucidating of compounds and deep knowledge about action mechanisms involved in such activities. The second part of this study aimed to analyze the biological potential of crude wheat bran extract and demonstrate its influence on fermentation processes using the C. gloeosporioides P67F1/1 to obtain bioactive compounds. The dichloromethane extract of wheat bran presented biological activities equal or higher than the fungal extract. For antimicrobial assay, both extracts showed MIC of 250-500 µg/mL. The scavenging capacity (%) of extracts, revealed by the DPPH, showed values (average sequestrant capacity + standard deviation): of 17.7+0.037 (wheat bran) and 10.56+0.004 (fungus), with the bran extract significantly (p <0.05) better than the fungal extract. For the antiproliferative assay, the wheat bran crude extract showed weak activity for the most part of tumor lines tested (25.34<GI50 (µg/mL)<47.75, 1.40<average of logGI50<1.68). On the other hand, the fungus extract was inactive for all tested cell panel (GI50>250 µg/mL, average of logGI50>2.40), according to National Cancer Institute criteria. According to results obtained, we verified that wheat bran was not an inert fermentation substrate. So, for some fermentation processes is necessary more care to use it, in order to avoid influences of (direct and/or indirect) chemical composition on activities expected for the extracts on analysis, originated from fungal fermentation processes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/307 |
| Date | 19 December 2011 |
| Creators | CARVALHO, Patrícia Lunardelli Negreiros de |
| Contributors | IKEGAKI, Masaharu, http://lattes.cnpq.br/2288114070031007, RUIZ, Ana Lúcia Tasca Gois, LACAVA, Paulo Teixeira |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Faculdade de Ciências Farmacêuticas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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