A presente tese trata da análise conformacional e estudo das interações eletrônicas de algumas 2-(fenilselanil)-2-(metoxi)-4\'-substituídas-acetofenonas (série I) e das 2-(4-substituídasfenilsulfanil)-2-(metoxi)-4\'-substituídas-acetofenonas (série II) contendo grupos doadores, hidrogênio e atraentes de elétrons na posição para dos anéis fenacílico [4\'-Y-PhC(O)] e fenilsulfanílico (S-Ph-4-X). Através da resolução das bandas de νCO, foi constatada a ocorrência de isomerismo conformacional nos solventes de constante dielétrica crescente (n-C6H14, CCl4, CHCl3, CH2Cl2, CH3CN) em ambas as séries. Cinco compostos da série II apresentaram ressonância de Fermi (RF) no infravermelho e precisaram ser deuterados. Os dados espectroscópicos são concordantes tanto com os resultados dos cálculos de otimização e frequência em fase gasosa quanto com a simulação do efeito do solvente (PCM), no nível de teoria B3LYP/6-31+G(d,p). Em ambas as séries, foram encontradas três conformações estáveis c1, c2 e c3, sendo que c2 é significativamente mais estável que c1 e c3. O confôrmero c1 possui o oxigênio metoxílico e o carbonílico em sinperiplanar enquanto os grupos -SePh/- SPh estão em anticlinal. Os confôrmeros c2 e c3 possuem o hidrogênio metínico em sinperiplanar com a carbonila enquanto os grupos -OMe e -SePh/-SPh estão na anticlinal. O confôrmero c1 pode ser atribuído ao componente de banda (IR) de maior frequência νCO. Da mesma forma, c2 e c3 são o componente de frequência intermediária e de menor frequência, respectivamente, na série I enquanto que na série II eles coalescem em apenas um componente de menor frequência. Os cálculos de PCM mimetizam os dados espectroscópicos, i.e. é possível constatar a inversão populacional entre c1 e c2, conforme a polaridade do solvente aumenta. Através do cálculo de frequências anarmônicas e construção da PED, foram encontrados dois modos vibracionais que combinados interagem com νCO originando a RF (série II). Um modo é de alta frequência e envolve uma porcentagem considerável de &#948C-H(metínico), o outro modo é esqueletal. A análise das interações orbitalares (NBO) mostrou que os confôrmeros c1 e c2 são estabilizados pela transferência de cargas entre LpO5→σ*CS/Se (ca. 18 kcal mol-1) enquanto c3 é estabilizado pela interação menos intensa LpO5→σ*C-C (ca. 9,5 kcal mol-1). As interações eletrônicas foram investigadas a partir dos contatos interatômicoscurtos com apoio das cargas atômicas parciais. Apesar de c1 e c2 apresentarem praticamente a mesma estabilidade em termos de interações orbitalares, o primeiro é fortemente desestabilizado pela repulsão eletrostática entre os átomos O&#948-CO...O&#948-OMe negativamente carregados separados por uma distância menor que a soma dos raios de van der Waals. Este contato curto entre os dipolos C&#948+=O&#948- e C&#948+−O&#948- é responsável pela maior frequência de νCO de c1 frente c2 e c3. A maior estabilidade de c1 nos solventes mais polares, porém, deve-se à melhor solvatação local destes dipolos. As análises dos monocristais (raios-X) indicou que os compostos assumem, no estado sólido, a conformação menos estável c1, obtida em fase gasosa. Não foram encontradas diferenças significativas no que se refere aos substituintes Y e X. Conclui-se que a estabilidade global das conformações é determinada pelo balanço energético entre as interações orbitalares e eletrostáticas, nas duas séries estudadas. / This thesis reports the conformational analysis and the electronic interactions study of some 2-(phenylselanyl)-2-(methoxy)-4\'-substituted-acetophenones (series I) and 2-(4-substitutedphenylsulphanyl)-2-(methoxy)-4\'-substituted-acetophenones (series II) bearing electron donating, hydrogen and electron attracting substituents in the para position of the phenacyl [4\'-Y-PhC(O)] and phenylsulphanyl (S-Ph-4-X). The occurrence of conformational isomerism in crescent dielectric constant solvents (n-C6H14, CCl4, CHCl3, CH2Cl2, CH3CN) in the two series was studied through the νCO infrared band decomposition. From the series II compounds, five presented Fermi resonance (FR) and had to be deuterated. The spectroscopic data are in line with theoretical calculations results for optimization and frequency in gas phase as well as for solvent effect simulation (PCM), both in B3LYP/6-31+G(d,p) level. Three stable conformers (c1, c2 and c3) were found for both series being the c2 significantly more stable than c1 and c3. Particularly in the c1 conformer, the methoxyl and the carbonyl oxygens are in sinperiplanar orientation while the -SePh/-SPh groups are in anticlinal. In the c2 and c3 conformers the methyne hydrogen assume a sinperiplanar geometry with respect to the carbonyl whereas both -OMe and -SePh/-SPh are in anticlinal. The c1 conformer can be ascribed to the highest frequency νCO band component (IR). So, c2 and c3 ones can be ascribed to the medium and the lowest frequency νCO component, respectively, in the series I whereas in the series II they come together (coalescence) in one single band component. The PCM calculations are in good agreement with spectroscopic data i.e. it is possible to observe a populational inversion between c1 and c2 conformers as the solvent polarity increases. The anharmonic frequencies and PED theoretical treatment revealed that the combination of two vibrational modes interact with the νCO giving rise to the FR (series II): the high frequency one involves a considerable δC-H(methyne) percentage; whilst the other is skeletal. The orbital interactions analysis (NBO) showed that the c1 and c2 conformers are mainly stabilized by charge transfer LpO5→σ*CS/Se (ca. 18 kcal mol-1) while c3 is stabilized by the less intense interaction LpO5→σ*C-C (ca. 9,5 kcal mol-1). The electronic interactions were investigated by means of interatomic short contacts supported by partial atomic charges calculations. In contrast with the almost similar orbital interactions stability of c1 and c2, the former is strongly destabilized by the electrostatic repulsion between Oδ-CO...Oδ-OMe atoms which are negatively charged separated by a distance shorter than the van der Waals radius sum. This short contact between Cδ+=Oδ- and Cδ+−Oδ- dipoles is responsible for the highest νCO frequency of c1 compared to c2 and c3. In the other hand, the greater stabilization of c1 in the more polar solvents is due to the better solvation of those local dipoles. Last, but not least, the X-ray analysis showed that the compounds in the solid state assume the less stable conformation c1, obtained in gas phase. No significative differences were found in terms of the Y and X substituents. It is suggestive that an energetic balance between orbital and electrostatic interactions determines the global stability of conformations in both studied series.

A periodontite é um processo inflamatório crônico de origem bacteriana mediado por citocinas, em especial, interleucina-1 (IL1) e fator de necrose tumoral (TNF&#945;). Polimorfismos genéticos de IL1 e TNFA têm sido associados com a variação de expressão dessas proteínas, o que poderia justificar as diferenças interindividuais de manifestação da doença. O objetivo do presente estudo foi investigar possíveis associações entre os genes IL1B, IL1RN e TNFA e a suscetibilidade à periodontite agressiva e à periodontite crônica severa. Foram selecionados 145 pacientes do Estado do Rio de Janeiro, 43 com periodontite agressiva (PAgr) (33,1 4,8 anos), 52 com periodontite crônica severa (PCr) (50,6 5,8 anos) e 50 controles (40,1 7,8 anos). Os DNAs genômicos dos integrantes dos grupos PAgr, PCr e controle foram obtidos através da coleta de células epiteliais bucais raspadas da parte interna da bochecha com cotonete. Os SNPs IL1B -511C>T, IL1B +3954C>T e TNFA -1031T>C foram analisados pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição Ava I Taq I e Bpi I, respectivamente. O polimorfismo de número variável de repetições in tandem (VNTR) no intron 2 do gene IL1RN foi feita pela análise direta dos amplicons. Todos os polimorfismos foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. As frequências alélica e genotípica do polimorfismo IL1B +3954C>T no grupo PCr foram significativamente diferentes das observadas no grupo controle (p=0,003 e p=0,041, respectivamente). A freqüência do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 no grupo PAgr foi significativamente maior do que no grupo controle (p=0,035). Não houve associação entre os polimorfismos IL1B -511C>T e TNFA -1031T>C e as periodontites agressiva e crônica. A presença dos alelos 2 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T no grupo PCr foi significativamente maior quando comparada ao grupo controle (p=0,045). Entretanto, não se observou associação entre as combinações genotípicas IL1B -511C>T / IL1B +3954C>T e IL1RN VNTR / IL1B -511C>T e a predisposição à doença periodontal. De acordo com os nossos resultados podemos sugerir que, para a população estudada, o polimorfismo IL1B +3954C>T interfere no desenvolvimento da periodontite crônica, enquanto a presença do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 pode ser considerado como indicador de risco para a periodontite agressiva. O presente estudo também nos permite sugerir que a ausência de homozigose dos alelos 1 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T pode representar maior suscetibilidade à periodontite crônica severa. / Periodontitis is a chronic inflammatory disease of bacterial origin mediated by cytokines, especially interleukin 1 (IL1) and tumor necrosis factor (TNF&#945;). Genetic polymorphisms of IL1 and TNF&#945; have been associated with expression variation of these proteins, what could justify interindividual differences in the disease forms. The aim of this study was to investigate possible associations between IL1B, IL1RN and TNFA genes and the susceptibility to aggressive periodontitis and severe chronic periodontitis. We selected 145 patients from Rio de Janeiro state, 43 with aggressive periodontitis (PAgr) (33.1 4.8 years old), 52 with severe chronic periodontitis (PCr) (50.6 5.8 years old), and 50 controls (40.1 7.8 years old). Genomic DNAs of patients of PAgr, PCr and control groups were obtained through the collection of oral epithelial cells scraped from the inside cheek with a swab. The SNPs IL1B -511C>(p<0,05) T, IL1B +3954C>T, and TNFA -1031T>C were analyzed by PCR-RFLP technique using the restriction enzymes Ava I, Taq I and Bpi I, respectively. The polymorphism of variable number of tandem repeats (VNTR) in intron2 of the IL1RN gene was done by direct analysis of amplicons. All polymorphisms were analyzed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. Allelic and genotypic frequencies of the IL1B +3954C>T polymorphism in the PCr group were significantly different as compared to those observed in the control group (p=0.003 and p=0.041, respectively). The frequency of A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism in the PAgr group was significantly higher than in the control group (p=0.035). There was no association between the polymorphisms IL1B -511C>T and TNFA -1031T>C and aggressive and chronic periodontitis. The presence of alleles 2 in combined genotypes of IL1RN intron 2VNTR and IL1B +3954 C>T in the PCr group was significantly higher as compared to the control group (p=0.045). However no associations between the genotypic combinations IL1B -511C>T IL1B +3954C>T and IL1RN VNTR / IL1B -511C>T and predisposition to periodontal disease were observed. According to our results one can suggest that for the studied population the IL1B +3954C>T polymorphism interferes in the development of chronic periodontitis, whereas the presence of the A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism may be considered as an indicator of risk for aggressive periodontitis. The present study also allows us to suggest that the absence of homozygous for alleles 1 in the combined genotypes of IL1RN intron 2 VNTR and IL1B +3954C>T may increase the susceptibility to severe chronic periodontitis.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) é a doença de maior incidência em cães senis. Assim, a caracterização da patogênese da doença é de suma importância, tal como a avaliação de animais submetidos a tratamento clínico ou cirúrgico (terapia com finasterida e orquiectomia). Neste contexto, o objetivo dessa pesquisa foi caracterizar as alterações seminais, hormonais e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães com HPB, submetidos a diferentes tratamentos. Assim, foram utilizados 25 cães entre doentes e hígidos e empregados as seguintes ferramentas experimentais: ultrassonografia Doppler com o intuito de caracterizar mudanças hemodinâmicas da próstata e testículos, imunohistoquímica e PCR para a expressão do fator VEGF na próstata, avaliação morfohistológica dos testículos, dosagem hormonal (testosterona, estrógeno e di-hidrotestosterona), análise andrológica, seminal e do estresse oxidativo e enzimas antioxidantes. Foi possível observar redução do escore de vascularização prostático (Doppler Colorido) em animais tratados com finasterida ou orquiectomizados, além de redução do volume prostático. O tratamento com finasterida reduziu a imunomarcação para o VEGF na próstata, porém a orquiectomia também inibiu a expressão gênica do VEGF. A finasterida, ainda, reduziu os níveis séricos de di-hidrotestosterona, não causando impactos significativos na qualidade seminal. Já a HPB promoveu alterações significativas na concentração de testosterona e na qualidade seminal (baixa concentração espermática, alteração da cinética espermática e altos índices de fragmentação de DNA espermático). Em conclusão, a atividade prostática do VEGF é dependente da ocorrência de HPB e dos diferentes tratamentos empregados, promovendo diferenças na vascularização e volume prostático. Ademais, cães com HPB possuem alterações no perfil hormonal e na espermatogênese, porém o período de tratamento com finasterida (2 meses) favorece a recuperação da doença, auxiliando em novas abordagens de diagnóstico e prognóstico da hiperplasia prostática benigna em cães. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is the disease of highest incidence in senile dogs. Thus, it is essential to characterize the pathogenesis of the disease, including the evaluation of animals submitted to clinical or surgical treatment (finasteride therapy and orchiectomy). In this context, the aim of this study was to characterize BPH changes of dogs submitted to different treatments. Therefore, a total of 25 dogs were used (BPH and healthy), applying distinct experimental tools: Doppler ultrasonography to characterize prostatic and testicular hemodynamic changes involved, immunohistochemistry and PCR for the expression of prostatic VEGF factor, testicular morphohistologic analysis, hormonal assay (testosterone, estrogen and dihydrotestosterone), breeding soundness examination, seminal analysis and oxidative stress and antioxidant enzymes evaluation of the prostatic fluid. It was possible to observe a reduction in prostatic vascularization score (by Color Doppler) in finasteride treated and orchiectomized animals, with an additional reduction of the prostatic volume. Finasteride treatment reduced VEGF expression by immunohistochemistry, however, orchiectomy also reduced VEGF gene expression. In addition, finasteride treatment reduced dihydrotestosterone concentration, without significant impact to seminal quality. On the other hand, BPH promoted significant changes in testosterone concentration and seminal quality, such as poor sperm concentration, changes in the sperm kinetics and high rates of sperm DNA fragmentation. In conclusion, prostatic VEGF activity in dogs is dependent on the occurrence of BPH and different therapies, promoting also differences in prostatic vascularization and volume. Furthermore, dogs with BPH had hormonal and spermatogenesis changes, however, the short course of finasteride treatment (2 months) was able to favor the disease overcome, favoring the application of new approaches to HPB diagnosis and prognosis in dogs.

A hiperplasia prostática benigna (HPB) é a doença de maior incidência em cães senis. Assim, a caracterização da patogênese da doença é de suma importância, tal como a avaliação de animais submetidos a tratamento clínico ou cirúrgico (terapia com finasterida e orquiectomia). Neste contexto, o objetivo dessa pesquisa foi caracterizar as alterações seminais, hormonais e hemodinâmicas da próstata e testículos de cães com HPB, submetidos a diferentes tratamentos. Assim, foram utilizados 25 cães entre doentes e hígidos e empregados as seguintes ferramentas experimentais: ultrassonografia Doppler com o intuito de caracterizar mudanças hemodinâmicas da próstata e testículos, imunohistoquímica e PCR para a expressão do fator VEGF na próstata, avaliação morfohistológica dos testículos, dosagem hormonal (testosterona, estrógeno e di-hidrotestosterona), análise andrológica, seminal e do estresse oxidativo e enzimas antioxidantes. Foi possível observar redução do escore de vascularização prostático (Doppler Colorido) em animais tratados com finasterida ou orquiectomizados, além de redução do volume prostático. O tratamento com finasterida reduziu a imunomarcação para o VEGF na próstata, porém a orquiectomia também inibiu a expressão gênica do VEGF. A finasterida, ainda, reduziu os níveis séricos de di-hidrotestosterona, não causando impactos significativos na qualidade seminal. Já a HPB promoveu alterações significativas na concentração de testosterona e na qualidade seminal (baixa concentração espermática, alteração da cinética espermática e altos índices de fragmentação de DNA espermático). Em conclusão, a atividade prostática do VEGF é dependente da ocorrência de HPB e dos diferentes tratamentos empregados, promovendo diferenças na vascularização e volume prostático. Ademais, cães com HPB possuem alterações no perfil hormonal e na espermatogênese, porém o período de tratamento com finasterida (2 meses) favorece a recuperação da doença, auxiliando em novas abordagens de diagnóstico e prognóstico da hiperplasia prostática benigna em cães. / Benign prostatic hyperplasia (BPH) is the disease of highest incidence in senile dogs. Thus, it is essential to characterize the pathogenesis of the disease, including the evaluation of animals submitted to clinical or surgical treatment (finasteride therapy and orchiectomy). In this context, the aim of this study was to characterize BPH changes of dogs submitted to different treatments. Therefore, a total of 25 dogs were used (BPH and healthy), applying distinct experimental tools: Doppler ultrasonography to characterize prostatic and testicular hemodynamic changes involved, immunohistochemistry and PCR for the expression of prostatic VEGF factor, testicular morphohistologic analysis, hormonal assay (testosterone, estrogen and dihydrotestosterone), breeding soundness examination, seminal analysis and oxidative stress and antioxidant enzymes evaluation of the prostatic fluid. It was possible to observe a reduction in prostatic vascularization score (by Color Doppler) in finasteride treated and orchiectomized animals, with an additional reduction of the prostatic volume. Finasteride treatment reduced VEGF expression by immunohistochemistry, however, orchiectomy also reduced VEGF gene expression. In addition, finasteride treatment reduced dihydrotestosterone concentration, without significant impact to seminal quality. On the other hand, BPH promoted significant changes in testosterone concentration and seminal quality, such as poor sperm concentration, changes in the sperm kinetics and high rates of sperm DNA fragmentation. In conclusion, prostatic VEGF activity in dogs is dependent on the occurrence of BPH and different therapies, promoting also differences in prostatic vascularization and volume. Furthermore, dogs with BPH had hormonal and spermatogenesis changes, however, the short course of finasteride treatment (2 months) was able to favor the disease overcome, favoring the application of new approaches to HPB diagnosis and prognosis in dogs.

A periodontite é um processo inflamatório crônico de origem bacteriana mediado por citocinas, em especial, interleucina-1 (IL1) e fator de necrose tumoral (TNF&#945;). Polimorfismos genéticos de IL1 e TNFA têm sido associados com a variação de expressão dessas proteínas, o que poderia justificar as diferenças interindividuais de manifestação da doença. O objetivo do presente estudo foi investigar possíveis associações entre os genes IL1B, IL1RN e TNFA e a suscetibilidade à periodontite agressiva e à periodontite crônica severa. Foram selecionados 145 pacientes do Estado do Rio de Janeiro, 43 com periodontite agressiva (PAgr) (33,1 4,8 anos), 52 com periodontite crônica severa (PCr) (50,6 5,8 anos) e 50 controles (40,1 7,8 anos). Os DNAs genômicos dos integrantes dos grupos PAgr, PCr e controle foram obtidos através da coleta de células epiteliais bucais raspadas da parte interna da bochecha com cotonete. Os SNPs IL1B -511C>T, IL1B +3954C>T e TNFA -1031T>C foram analisados pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição Ava I Taq I e Bpi I, respectivamente. O polimorfismo de número variável de repetições in tandem (VNTR) no intron 2 do gene IL1RN foi feita pela análise direta dos amplicons. Todos os polimorfismos foram analisados por eletroforese em gel de poliacrilamida 8%. As frequências alélica e genotípica do polimorfismo IL1B +3954C>T no grupo PCr foram significativamente diferentes das observadas no grupo controle (p=0,003 e p=0,041, respectivamente). A freqüência do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 no grupo PAgr foi significativamente maior do que no grupo controle (p=0,035). Não houve associação entre os polimorfismos IL1B -511C>T e TNFA -1031T>C e as periodontites agressiva e crônica. A presença dos alelos 2 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T no grupo PCr foi significativamente maior quando comparada ao grupo controle (p=0,045). Entretanto, não se observou associação entre as combinações genotípicas IL1B -511C>T / IL1B +3954C>T e IL1RN VNTR / IL1B -511C>T e a predisposição à doença periodontal. De acordo com os nossos resultados podemos sugerir que, para a população estudada, o polimorfismo IL1B +3954C>T interfere no desenvolvimento da periodontite crônica, enquanto a presença do alelo A2 do polimorfismo IL1RN VNTR intron2 pode ser considerado como indicador de risco para a periodontite agressiva. O presente estudo também nos permite sugerir que a ausência de homozigose dos alelos 1 nos genótipos combinados de IL1RN VNTR intron2 e IL1B +3954C>T pode representar maior suscetibilidade à periodontite crônica severa. / Periodontitis is a chronic inflammatory disease of bacterial origin mediated by cytokines, especially interleukin 1 (IL1) and tumor necrosis factor (TNF&#945;). Genetic polymorphisms of IL1 and TNF&#945; have been associated with expression variation of these proteins, what could justify interindividual differences in the disease forms. The aim of this study was to investigate possible associations between IL1B, IL1RN and TNFA genes and the susceptibility to aggressive periodontitis and severe chronic periodontitis. We selected 145 patients from Rio de Janeiro state, 43 with aggressive periodontitis (PAgr) (33.1 4.8 years old), 52 with severe chronic periodontitis (PCr) (50.6 5.8 years old), and 50 controls (40.1 7.8 years old). Genomic DNAs of patients of PAgr, PCr and control groups were obtained through the collection of oral epithelial cells scraped from the inside cheek with a swab. The SNPs IL1B -511C>(p<0,05) T, IL1B +3954C>T, and TNFA -1031T>C were analyzed by PCR-RFLP technique using the restriction enzymes Ava I, Taq I and Bpi I, respectively. The polymorphism of variable number of tandem repeats (VNTR) in intron2 of the IL1RN gene was done by direct analysis of amplicons. All polymorphisms were analyzed by 8% polyacrylamide gel electrophoresis. Allelic and genotypic frequencies of the IL1B +3954C>T polymorphism in the PCr group were significantly different as compared to those observed in the control group (p=0.003 and p=0.041, respectively). The frequency of A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism in the PAgr group was significantly higher than in the control group (p=0.035). There was no association between the polymorphisms IL1B -511C>T and TNFA -1031T>C and aggressive and chronic periodontitis. The presence of alleles 2 in combined genotypes of IL1RN intron 2VNTR and IL1B +3954 C>T in the PCr group was significantly higher as compared to the control group (p=0.045). However no associations between the genotypic combinations IL1B -511C>T IL1B +3954C>T and IL1RN VNTR / IL1B -511C>T and predisposition to periodontal disease were observed. According to our results one can suggest that for the studied population the IL1B +3954C>T polymorphism interferes in the development of chronic periodontitis, whereas the presence of the A2 allele of IL1RN intron 2 VNTR polymorphism may be considered as an indicator of risk for aggressive periodontitis. The present study also allows us to suggest that the absence of homozygous for alleles 1 in the combined genotypes of IL1RN intron 2 VNTR and IL1B +3954C>T may increase the susceptibility to severe chronic periodontitis.

nÃo hà / O presente trabalho relata a utilizaÃÃo de sementes de gergelim secas e germinadas como fonte de enzimas em reaÃÃes de reduÃÃo, hidrÃlise e esterificaÃÃo. Uma sÃrie de reaÃÃes de reduÃÃo utilizando como biocatalisador sementes de gergelim quimiotipo negra (SGN) foram realizadas, tendo como substratos: acetofenona e derivados halogenados de acetofenona: 2-bromo-acetofenona, 3-bromo-acetofenona, 4-bromo-acetofenona, 2-cloro-acetofenona, 3-cloro-acetofenona, 4-cloro-acetofenona, 2-fluor-acetofenona, 3-fluor-acetofenona, 4-fluor-acetofenona, 2,4-dicloro-acetofenona, 2,4-dibromo-acetofenona e 2,2,2-trifluor-acetofenona. TambÃm foram submetidos à anÃlise derivados de acetofenona substituÃdas com grupos retiradores como, 2-metoxi-acetofenona, 3-metoxi-acetofenona e 4-metoxi-acetofenona e por nitro compostos. TambÃm foram empregadas acetofenonas substituÃdas por grupo amina nas posiÃÃes 2, 3 e 4 do anel aromÃtico. Para vÃrios dos compostos citados, os alcoÃis foram obtidos com bons e excelentes conversÃes (43â99%), a SGN foi enantio e quimiosseletiva, apresentando exelentes excessos enantiomÃricos (80-99%). A segunda parte do trabalho consistiu na utilizaÃÃo do sistema enzimÃtico do gergelim com sementes germinadas (SGG) em reaÃÃes de esterificaÃÃo e na hidrÃlise de Ãsteres. A 1,2-difenil-&#945;-hidroxi-etanona, foi selecionada como substrato padrÃo, em mistura com o agente acilante acetato de vinila, observando como produto o composto identificado como &#945;-acetato de 1,2-difenil-etanona, com um excelente ee &#707;99% e conversÃo de 50%. Todos os produtos foram analisados atravÃs de CCD, CLAE, CG-EM e RMN1H e nas determinaÃÃes dos excessos enantiomÃricos utilizou-se CLAE em colunas quirais. / ABSTRACT The present work reports the use of enzyme present in the sesame seeds in the in reduction, hydrolysis and esterification reactions. A series of reactions using as seeds black chemotype extract (SBS) were performed, using selected substrates such as acetophenone and halogenated acetophenones: 2-bromo-acetophenone, 3-bromo-acetophenone, 4-bromo-acetophenone, 2-chloro-acetophenone, 3-chloro-acetophenone, 4-chloro-acetophenone, 2-fluoro-acetophenone, 3-fluoro-acetophenone, 4-fluoro-acetophenone, 2,4-dichloro-acetophenone, 2,4-dibromo-acetophenone and 2,2,2-trifluoro-acetophenone. Experiments were also performed with substituted acetophenone such as 2-methoxy-acetophenone, 3-methoxy-acetophenone and 4-methoxy-acetophenone as well as acetophenones having amine group at C-2, C-3 and C-4 of the aromatic ring. Chiral alcohols were obtained vary from good to excellent yields, in some cases reactions proceeded with chemoselectivity, in others, with enantioselectivity. The second part of research involved the use of the enzyme system of sesame seeds in the esterification and esters hydrolysis. In these reactions were used germinated seeds (GSS) using methodology adapted from the literature. The compound 1,2-diphenyl-&#945;-hydroxy-ethanone were selected as a standard substrate in acetylation reactions. The reactions using vinyl acetate as acylation agent and germinated seeds (GSS) yielded the product identified as &#945;-ethyl- 1,2-diphenyl-ethanone. Optimized parameters were obtained including: amount of seed and substrate, reaction time, solvent, speed and temperature. All products were analyzed by TLC, HPLC, GC-MS and 1H NMR and enantiomeric excess were determined using chiral columns using HPLC.

nÃo hà / The Protium heptaphyllum (almecegueira) exudes an amorphous resin consisting of four binary mixtures of triterpenoids, and the mixture of &#61537;,&#61538;-amyrin its major constituent. In folk medicine, the resin of Protium heptaphyllum is used as anti-inflammatory, gastroprotective, analgesic, expectorant and healing. The mixture of pentacyclic triterpenes &#61537;,&#61538;-amyrin (AB) (63:37) has gastroprotective, antipruritic, antiinflammatory and antioxidant properties. Experimental studies with pentacyclic triterpene compounds belonging to the groups ursan, oleanan and lupan showed inhibition of different enzyme systems intimately related to metabolism/absorption of carbohydrates and lipids. Thus the hypoglycemic and hypolipidemic activity of AB was evaluated in Swiss mice, the models of diabetes induced by streptozotocin (STZ) and alloxan (ALX) and hyperlipidemia induced by triton WR-1339 and hyperlipidemic diet (DH). AB (10, 30 and 100mg/kg) was able to reduce blood glucose in a model of acute treatment in STZ-induced diabetes, we observed two times (3 and 5 hours after administration of AB). In five days after treatment of diabetic animals by ALX, AB (30 and 100 mg/kg) also decreased hyperglycemia, an effect also observed for the use of glibenclamide (10 mg/Kg) in both models. But in normal animals, AB did not affect blood glucose, unlike the positive control glibenclamide (10 mg/kg). Although the model of diabetes for ALX, AB reduced total cholesterol (TC) serum at a dose of 100mg/kg, and triglycerides (TG) at doses of 30 and 100 mg/kg. In this same model, reduced the serum amylase AB (AB 30 and 100 mg/kg) and serum lipase (AB 100 mg/kg), a result also observed in normal animals, the same doses. In the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT), AB (30 and 100 mg/kg) was shown to reduce blood glucose levels 60 min after administration of glucose, and AB (10, 30 and 100 mg/kg) in 90 min. In the model of hyperlipidemia by triton, AB (10, 30 and 100 mg/kg) significantly reduced the levels of TC and TG, in times of 24 and 48 h after administration of triton, an effect also observed for fenofibrate (200 mg/kg) used as positive control. The levels of HDL-c elevation experienced with the use of AB at all doses and times observed, as well as fenofibrate. In the model of hyperlipidemia by HD, AB (10, 30 and 100 mg/kg) controlled weight gain of animals receiving HD, as well as reduced TC, TG, LDL-c and VLDL-c, although the latter only in doses 30 and 100 mg/kg. These two doses were also effective in raising HDL-c. All doses of AB administered reduced the atherogenic index. All doses of AB also reduced the hepatic cholesterol in this model. All effects reported were similar to the positive control (fenofibrate 200 mg/kg). AB (10, 30 and 100 mg/kg) was able to significantly improve the antioxidant defenses of the liver, because it elevated the activity of hepatic SOD and CAT when compared to control high-fat diet, and raised the level of NP-SH in dose of 100 mg/kg, as well as reduced lipid peroxidation by decreasing the MDA, at all doses. Together, these results indicate that &#945;,&#946;-amyrin has hypolipidemic and hypoglycemic effect and deserves further evaluation in larger animal models that simulate chronic conditions of diabetes and dyslipidemia, in addition to research on their mechanism of action. / O Protium heptaphyllum (almecegueira) exsuda uma resina amorfa constituÃda de quatro misturas binÃrias de triterpenÃides, sendo a mistura de &#61537;,&#61538;-amirina o constituinte majoritÃrio. Na medicina popular, a resina de Protium heptaphyllum à utilizada como antiinflamatÃria, gastroprotetora, analgÃsica, expectorante e cicatrizante. A mistura de triterpenos pentacÃclicos &#61537;,&#61538;-amirina (AB) (63:37) possui propriedades gastroprotetora, antipruriginosa, antiinflamatÃria e antioxidante. Estudos experimentais com compostos triterpÃnicos pentacÃclicos que pertencem ao grupo ursano, oleanano e lupano mostraram a inibiÃÃo de diferentes sistemas enzimÃticos intimamente relacionados ao metabolismo/absorÃÃo de carboidratos e lipÃdios, deste modo, a atividade hipoglicemiante e hipolipemiante de AB foi avaliada, em camundongos Swiss, nos modelo de diabetes induzida por estreptozotocina (STZ) e por aloxano (ALX) e hiperlipidemia induzida por triton WR-1339 e dieta hiperlipidÃmica (DH). AB (10, 30 e 100mg/Kg) foi capaz de reduzir a glicemia num tratamento agudo no modelo de diabetes induzida por STZ, nos dois tempos observados (3 e 5h apÃs administraÃÃo de AB). Em tratamento apÃs cinco dias de animais diabÃticos por ALX, AB (30 e 100mg/Kg) tambÃm diminuiu a hiperglicemia, efeito este, tambÃm observado para o uso de glibenclamida (10mg/Kg) nos dois modelos. PorÃm em animais normais, AB nÃo alterou a glicose sanguÃnea, ao contrÃrio do controle positivo glibenclamida (10 mg/Kg). Ainda no modelo de diabetes por ALX, AB reduziu o colesterol total (CT) sÃrico na dose de 100mg/Kg, bem como os triglicerÃdeos (TG) nas doses de 30 e 100 mg/Kg. Neste mesmo modelo, AB reduziu a amilase sÃrica (AB 30 e 100 mg/Kg) e a lipase sÃrica (AB 100mg/Kg), resultado este observado tambÃm em animais normais, nas mesmas doses. No Teste Oral de TolerÃncia à Glicose (TOTG), AB (30 e 100 mg/Kg) mostrou reduzir a glicemia 60 min apÃs a administraÃÃo de glicose, bem como AB (10, 30 e 100 mg/Kg) em 90 min. No modelo de hiperlipidemia por triton WR-1339, AB (10, 30 e 100mg/Kg) reduziu de forma significativa os nÃveis de CT e TG, nos tempos de 24h e 48h apÃs a administraÃÃo do triton WR-1339, efeito observado tambÃm para fenofibrato (200mg/Kg) utilizado como controle positivo. Os nÃveis de HDL-c sofreram elevaÃÃo com o uso de AB em todas as doses e tempos observados, assim como o fenofibrato. No modelo de hiperlipidemia por DH, AB (10, 30 e 100mg/Kg) controlou o ganho de peso dos animais que receberam a DH, bem como reduziram CT, TG, LDL-c e VLDL-c, porÃm este Ãltimo somente nas doses de 30 e 100mg/Kg. Estas duas doses tambÃm foram eficazes para elevar o HDL-c. Todas as doses de AB administradas reduziram o Ãndice aterogÃnico. Todas as doses de AB tambÃm reduziram o colesterol hepÃtico neste modelo. Todos os efeitos relatados foram similares ao controle positivo (fenofibrato 200mg/Kg). AB (10, 30 e 100 mg/Kg) foi capaz de melhorar significativamente as defesas antioxidantes do tecido hepÃtico, pois elevou a atividade das enzimas catalase e superÃxido dismutase hepÃticas, quando comparado ao controle dieta hiperlipÃdica, bem como elevou o nÃvel dos grupos sulfidrÃlicos nÃo protÃicos na dose de 100mg/Kg, assim como reduziu a peroxidaÃÃo lipÃdica ao diminuir o malondialdeÃdo, em todas as doses. Em conjunto, esses resultados indicam que &#945;,&#946;-amirina possui efeito hipoglicemiante e hipolipemiante e que merece maior avaliaÃÃo futura em modelos animais que simulem situaÃÃes crÃnicas de diabetes e dislipidemias, alÃm de pesquisa de seu mecanismo de aÃÃo.

A hipotermia é uma das respostas presentes em casos mais graves de sepse. Em modelos animais, essa hipotermia parece regulada e pode ter valor adaptativo quando a febre torna-se uma ameaça ao hospedeiro. A leptina é um hormônio produzido pelo tecido adiposo e está envolvido com balanço energético. Geralmente descrita como pró-inflamatória, a leptina ainda tem o seu papel controverso. Neste trabalho, avaliamos a leptina em doses fisiológicas em modelo de choque endotóxico em ratos. A leptina mostrou-se anti-inflamatória atenuando a hipotermia e a hipotensão induzidas por lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) e reduzindo a secreção de TNF-&#945;. O mesmo efeito não foi observado quando infundida no sistema nervoso central. In vitro, a leptina não alterou a produção de TNF-&#945;, IL-1&#946; e IL-10 em macrófagos peritoneais e alveolares estimulados com LPS. Podemos concluir que, em doses fisiológicas, a leptina pode atuar em outras células da periferia que contêm seu receptor alterando a produção de TNF-&#945; e mediando a inflamação sistêmica. / Hypothermia is associated with most severe cases of sepsis. In animal models, this hypothermia may be regulated and may have adaptive value when fever becomes harmful to the host. Leptin is a hormone produced by fat tissue and involved in energy balance. Generally described as pro-inflammatory, leptin also has its controversial role. In this paper, we evaluate leptin in physiologic doses in model of endotoxin shock in rats. Leptin was found to be anti-inflammatory attenuating hypothermia and hypotension induced by bacterial lipopolysaccharide (LPS) and also reducing TNF-&#945; secretion. The same effect was not observed when infused into the central nervous system. In vitro, leptin did not change the TNF-&#945;, IL-1&#946; and IL-10 in peritoneal and alveolar macrophages stimulated with LPS. We can conclude that in physiologic doses, leptin can act on other peripheric cells that contain its receptor, changing TNF-&#945; production and mediating systemic inflammation.

La &#945;-1,3-galactosiltransferasa (&#945;3GT) està involucrada en la biosíntesis d'oligosacàrids antigènics responsables del rebuig immunològic hiperagut (HAR) en el xenotransplant d'òrgans d'animals a humans, per la qual cosa aquesta enzima té un particular interès en biomedicina. Per altra banda, la &#945;3GT constitueix un model enzimàtic per a estudis mecanístics i estructurals de glicosiltransferasas. L'enzim transfereix galactosa (Gal) del UDP-Gal a la N-acetillactosamina (LacNAc), o a la lactosa (Lac).Actualment, els estudis cristalogràfics han mostrat dos tipus d'estructures amb diferents conformacions en la zona C-terminal (aa.358-368). En la forma I, aquesta zona està altament desordenada, però en la forma II està ben definida, la qual cosa suggereix que funciona com a tapa que tanca el lloc catalític. Aquests canvis conformacionals suggereixen que l'extrem C-terminal podria tenir un rol clau en l'activitat catalítica.En la present tesis doctoral es va abordar l'estudi estructural/funcional de l'extrem C-terminal des d'un enfocament d'anàlisi cinètic d'estabilitat de mutants d'alanina de cadascun dels aminoàcids de les posicions 358-368. D'aquesta manera, la comparació entre eficiència catalítica i estabilitat enzimàtica proporcionen un mètode que permet identificar els aminoàcids que tenen un paper important en la unió de lligand o en l'empaquetament estructural. Pels mutants K359A, Y361A, V363A y R365A no s'ha detectat activitat, per la qual cosa aquestes posicions són fonamentals per a l'activitat &#945;3GT. K359, Y361 i R365 interaccionen amb els fosfats del UDP-Gal, a més, K359A també interacciona amb l'hidroxil 3 de la lactosa segons modelització molecular, per la qual cosa s'ha proposat un paper d'àcid/base general a la lisina 359. Per altra banda, els mutants N367A i V368A van resultar ser de 2 a 3 vegades més actius que wt, respectivament. Els estudis d'estabilitat revelen que wt i mutants de residus no involucrats directament en la interacció amb els substracts, presenten major estabilitat que aquells que segons els models moleculars i les estructures cristal·logràfiques interaccionen directament amb el UDP o UDP-Gal. Per altra banda, es va trobar que la presència de UDP disminueix en mutants de residus directament implicats en les interacciones amb el UDP-Gal. / La &#945;-1,3-galactosiltransferasa (&#945;3GT) está involucrada en la biosíntesis de oligosacáridos antigénicos responsables del rechazo inmunológico hiperagudo (HAR) en el xenotransplante de órganos de animales a humanos, por lo que esta enzima tiene un particular interés en biomedicina. Por otra parte, la &#945;3GT constituye un modelo enzimático para estudios mecanísticos y estructurales de glicosiltransferasas. La enzima transfiere galactosa (Gal) del UDP-Gal a la N-acetillactosamina (LacNAc), o a la lactosa (Lac).Actualmente, los estudios cristalográficos han mostrado dos tipos de estructuras con diferentes conformaciones en la zona C-terminal (aa.358-368). En la forma I, esta zona está altamente desordenada, pero en la forma II está bien definida, lo cual sugiere que funciona como tapa que cierra el sitio catalítico. Estos cambios conformacionales sugieren que el extremo C-terminal podría tener un rol clave en la actividad catalítica.En la presente tesis doctoral se abordó el estudio estructural/funcional del extremo C-terminal desde un enfoque de análisis cinético y de estabilidad de mutantes de alanina de cada uno de los aminoácidos de las posiciones 358-368. De esta manera, la comparación entre eficiencia catalítica y estabilidad enzimática proporcionan un método que permite identificar los aminoácidos que tienen un rol importante en la unión de ligando o en el empaquetamiento estructural.Para los mutantes K359A, Y361A, V363A y R365A no se ha detectado actividad, por lo cual estas posiciones son fundamentales para la actividad de &#945;3GT. K359, Y361 y R365 interaccionan con los fosfatos del UDP-Gal, además, K359A también interaccionan con el hidroxilo 3 de la lactosa según modelización molecular, por lo cual se ha propuesto un rol de ácido/base general a la lisina 359. Por otra parte, los mutantes N367A y V368A resultaron ser de 2 a 3 veces más activos que wt, respectivamente. Los estudios de estabilidad revelan que wt y mutantes de residuos no involucrados directamente en la interacción con los sustratos, presentan mayor estabilidad que aquellos que según los modelos moleculares y las estructuras cristalográficas interaccionan directamente con el UDP o UDP-Gal. Por otra parte, se encontró que la presencia de UDP disminuye en mutantes de residuos directamente implicados en las interacciones con el UDP-Gal. / Mammalian &#945;-1,3-Galactosyltransferase (&#945;3GT) is involved in the biosynthesis of the oligosaccharide antigen responsible for hiperacute (vascular) rejection (HAR) in xenotransplantation of animal organs to humans [1]. &#945;3GT is also used as a model enzyme for studies of glycosyltransferase structure and mechanisms, as well as biocatalyst in enzymatic oligosacaride synthesis. The enzyme catalyzes the transfer of galactose (Gal) from UDP-Gal a la N-acetyllactosamyne (NAcLac), or to lactose.Currently, there are two types of &#945;3GT 3-dimensional structure. The previously reported form I [2] is similar to the form II [3,4], except at the C-terminal residues 358-368. The C-terminal region is highly disordered in form I but well defined in form II, suggesting that it functions as a lid that closes the active site. The conformational change at the C-terminus and the sequence conservation among other &#945;3GT suggest that this region could have key role in the catalytic action [4]. In the present Doctoral Thesis, the study structure/function of the end C-terminal was approached by a kinetic analysis and by stability analysis of alanine mutants for each one of the amino acids at positions 358-368. This way, the comparison of catalytic efficiency and enzymatic stability provides a method that allows identification of the amino acids that have an important role in the substrate binding or in structural packaging. For mutants K359A, Y361A, V363A and R365A no activity was detected, therefore these positions are fundamental for &#945;3GT activity. K359, Y361 and R365 interact with the UDP-Gal phosphates, also, K359A interacts with the 3-hydroxyl of the lactose according to molecular modeling, thereby it has been proposed to have the role as the general acid/base. On the other hand, the mutants N367A and V368A turned out to be 2 or 3 times more active than wt, respectively. The studies of stability reveal that amino acids mutants (wt including) which don't directly interact with the substrates do not present higher stability than the amino acid mutants which directly interact with the substrate UDP or UDP-Gal. On the other hand, the presence of UDP stabilizes de wt enzyme and the mutants of the amino acids that don't directly interact with the substrates, while this UDP stabilizing effect diminishes in mutants of amino acids directly implied in the interactions of UDP or UDP-Gal.

Žmogaus organizme širdies ir kraujagyslių sistema, kraujodaros organai bei kvėpavimo organų sistema leidžia organizmui palaikyti deguonies pusiausvyrą. Širdies ligos, vėžys, smegenų kraujagyslių ligos ir chroniška obstrukcinė plaučių liga- tai susirgimai, nuo kurių dažniausiai miršta žmonės visame pasaulyje. Visų šių ligų viena iš priežasčių yra deguonies pusiausvyros sutrikimas (Semenza, 2001). Ląstelės atsakas į stresines situacijas, tokias kaip deguonies trūkumas ląstelėje, seniai domino mokslininkus. Specifinis atsakas į deguonies koncentraciją ląstelėje buvo nustatytas bakterijose ir mielėse, bet ilgai buvo neaptinkamas aukštesniuose organizmuose. Atlikus visą eilę tyrimų, buvo aptikta sąsaja tarp deguonies kiekio ląstelėje kitimo ir transkripcijos įvykių kaskados, reguliuojančios aukštesniųjų organizmų ląstelių atsaką į hipoksiją. Vieno iš ryškiausių homeostazės atsako į hipoksiją- hematopoetinio augimo faktoriaus eritropoetino molekulinė analizė leido aptikti hipoksijos indukuojamą transkripcijos faktorių (HIF). Dabar jau nustatyta, kad ši sistema funkcionuoja visose žinduolių ląstelėse. (Schofield and Ratcliffe, 2004). HIF faktoriai- tai visa šeima baltymų, vaidinančių nemažą vaidmenį vėžinių auglių vystymesi žmogaus organizme. Tai daro šių faktorių raiškos reguliacijos tyrimus labai svarbiais, nes gauti rezultatai tiesiogiai turi ir praktinės reiksmės vėžinių auglių diagnostikoje bei gydyme. / Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) is a heterodimeric protein that consist of two proteins- HIF-1&#945; and HIF-1&#946;. HIF-1 activates the transcription of many genes that code for proteins that are involved in angiogenesis, glucose metabolism, cell proliferation/survival and invasion/metastasis. HIF-1&#945; protein degradation is regulated by O2-dependent prolyl hydroxylation, whitch targets the protein for ubiquitylation by E3 ubiquitin-protein ligases. These ligases contain the von Hippel-Lindau tumour-suppressor protein (VHL), whitch binds specifically to hydroxylated HIF-1&#945; and ubiqutinates it. Ubiquitylated HIF-1&#945; is rapidly degraded by the proteosome. HIF-1&#945; interacts with the molecular chaperone Hsp90. Hsp90 plays a pivotal role in mediating the proper folding and subsequent activation of its numerous “client” proteins. Hsp90 also cooperates with the proteosomal pathway to eliminate misfolded cellular proteins. The antibiotic geldanamycin (GA) binds to Hsp90 and modulates its chaperone function, thereby accelerating the degradative activity associated with Hsp90. However, whether Hsp90 modulates HIF-1&#945; activity by stabilization of the protein or by another mechanism is not clear. We tested the hypothesis weather and how inactivation (i.e. with geldanamycin) of Hsp90 protein function influences HIF-1&#945; protein expression levels. Our obtained results shows that Hsp90 is required to HIF-1&#945; protein under normoxia as well as hypoxia and is... [to full text]