Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / As infecções causadas por P. aeruginosa são freqüentemente de difícil tratamento devido à virulência e a resistência a vários antimicrobianos apresentados por este patógeno. Os carbapenens são geralmente o tratamento de escolha para infecções causadas por P. aeruginosa multirresistentes, porém, a resistência a estes compostos tem aumentado rapidamente, principalmente, devido ao surgimento de amostras produtoras de metalo-ß-lactamases. Os objetivos deste estudo foram: i) avaliar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos das amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens isoladas de hospitais brasileiros; ii) avaliar a freqüência da produção de MPL entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens; iii) avaliar o perfil de sensibilidade a antimicrobianos das amostras de P. aeruginosa produtoras de MβL pela técnica de microdiluição em caldo; iv) detectara presença dos genes biasSPM-1, blaIMP-1, blaVIM-1, e blaVIM-2 entre as amostras de P. aeruginosa produtoras de MßL; v) avaliar a presença de variantes alélicos do gene blasIPM-1, entre as amostras de P. aeruginosa produtoras da MPL do tipo SPM-1, e vi) avaliar a similaridade genética entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens produtoras de MßL. Foram avaliadas 206 amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenens isoladas entre 2001 e 2003, de 25 centros médicos. As 206 amostras foram testadas pelo método de disco-difusão. Os testes de sensibilidade foram realizados de acordo com a padronização do "National Committee for Clinical Laboratory Standards" (NCCLS). Os isolados resistentes aos carbapenens foram triados para a produção de metalo-ß-lactamases pelo teste de aproximação de discos utilizando dois inibidores enzimáticos (EDTA e ácido 2mercaptopropiônico). A produção de MßL foi confirmada pela metodologia do Etest® (fita Etest©MBL). Em seguida foi realizada a técnica de PCR para a pesquisa dos genes blaIMP-1, blaVIM-1, bIaVIM-2 e blaSPM-1. A avaliação da similaridade genética entre as amostras produtoras de MßL foi realizada pela técnica da ribotipagem automatizada e PFGE. Para fins comparativos, também foram selecionadas para análise da similaridade genéticaamostras não produtoras de MßL isoladas em centros médicos, que apresentavam amostras de P. aeruginosa produtoras de MPL. Altas taxas de resistência a maioria dos antimicrobianos foram observadas entre as amostras de P. aeruginosa resistentes aos carbapenes…(au). / Infections caused by Pseudomonas aeruginosa are often difficult to treat because of its virulence and antimicrobial resistance. Carbapenems are usually active against multiresistant P. aeruginosa, but resistant to these compounds has been increasing rapidly. High-level resistance to carbapenems is still uncommon in P. aeruginosa and is usually indicative of metallo-β-lactamases (MβL). The purpose of the study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profiles of carbapenems resistant P. aeruginosa isolated from Brazilian Hospitals, were to detect the presence of gene blaSPM-1, blaIMP-1, blaVIM-1 e blaVIM-2 and to evaluate the genetic similarity of P. aeruginosa resistant to carbapenems. Were evaluated 206 P. aeruginosa resistant to carbapenems collected during 2001 – 2003 from 25 medical centers. Antimicrobial susceptibilities testing to selected agents were determined by disk diffusion to 206 strains. The suscepptibility testing were to using the reference “National Committee for Clinical Laboratory Standards” (NCCLS). Carbapenems resistant isolates were screened for MβL production by disk approximation test using 2 enzyme inhibitors (EDTA and 2-mercaptopropionic acid). The procedure was confirmed by Etest (Etest MBL strip) and also by PCR assays using the following primers blaIMP-1, blaVIM-1, blaVIM-2 e blaSPM-1. The genetic similarity was performed in MβL producers strains and one negative-MβL strains for medical centers by automated ribotyping and PFGE. High resistance rates to majority of the antimicrobial agents were demonstrated. The polymyxins were the most active antimicrobial agents evaluated with 100,0% of susceptibility rate to all strains. The MβL production was detected in 98 (47,6%) of 206 strains. The blaSPM-1 gene was detected in 82 strains (83,7%) and blaIPM-1 gene in 3 strains (16,3%). Thirteen isolates did not show PCR amplification for none of the primers used. The analysis of genetic similarity showed a clonal diversity among the 98 carbapenems-resistant strains (46 ribogroups). CONCLUSION: This study indicates high prevalence of MβL producing in carbapenems-resistant P. aeruginosa and clonal dissemination these microrganism to a wide geographic area of Brazil. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A capacidade de adquirir, com facilidade, resistência à terapia antimicrobiana torna-se uma das características mais estudadas em Acinetobacter sp., mundialmente conhecido por estar relacionado a surtos de infecções associadas à assistência a saúde (IAAS) e por ser apontado como um grave problema de saúde pública. Embora isolados clínicos desse gênero sejam extensivamente estudados quanto à presença e a diversidade de genes do tipo OXA-carbapenemases,existem poucos estudos sobre essa relação em isolados ambientais. Este trabalho teve como objetivo determinar a presença de carbapenemases do tipo OXA (e sua diversidade), de ISAba1 e de sua relação com as carbapenemases em isolados clínicos e de esgoto hospitalar de Acinetobacter sp. na cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. Um total de 310 isolados (145 clínicos e 165 ambientais) foram submetidos a análise por PCR das regiões genéticas de interesse. A diversidade dos genes do tipo blaOXA-51 foi realizada por DGGE. Os resultados indicam a presença do gene blaOXA-58 em um isolado, pela primeira vez no Brasil. A sequência ISAba1 foi frequentemente encontrada (92,9%), porém, a sua associação com blaOXA-51 foi baixa e encontrada em 9,8% dos isolados clínicos e em 6,5% dos isolados ambientais. A análise de diversidade revelou uma baixa freqüência de alelos de OXA-51 entre os isolados estudados, sendo blaOXA-65 a variante mais encontrada. Contudo, podemos afirmar que o esgoto hospitalar analisado constitui-se de uma fonte de contaminação de bactérias patogênicas e que as precárias políticas de saneamento podem proporcionar a disseminação de multirresistência para o meio ambiente. / The ability of easily acquiring resistance to antimicrobial therapy becomes one of the most studied features in Acinetobacter sp., world renowned for being related to outbreaks of infection associated with health care and for being appointed as a serious public health problem. Although clinical isolates of this genus are extensively studied for the presence and diversity of OXAcarbapenemase genes, there are few studies about this relationship in environmental isolates. This study aimed to determine the presence of OXAtype carbapenemases (and yours diversity), of ISAba1 and its relationship with carbapenemases in clinical and hospital sewage isolates of Acinetobacter sp. in Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A total of 310 strains (145 of clinical origin and 165 of environmental origin) were subjected to PCR analysis of genetic regions of interest. The diversity of blaOXA-51-like genes was performed by DGGE. The results indicate the presence of the gene blaOXA-58 in an isolated, for the first time in Brazil. ISAba1 was frequently found (92.9%) but its association with blaOXA-51-like was low and was found in 9.8% of clinical isolates and in 6.5% of environmental isolates. The diversity analysis showed that there is a low frequency of alleles of OXA-51 among the studied isolates being blaOXA-65 variant the most often found. However, we can state that the hospital sewage is considered to be a source of pathogenic bacteria contamination and that the poor sanitation politics contributes to the spread of multidrug resistance in the environment.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: K. pneumoniae e um importante patogeno no ambiente hospitalar. Os antimicrobianos da classe dos carbapenens tem sido amplamente utilizados para o tratamento das infeccoes causadas por amostras de K. pneumoniae produtoras de β-lactamases de amplo espectro. As metalo-β-Iactamases (MβL) sao enzimas bacterianas com habilidade de hidrolisar os carbapenens e, embora, ainda sejam raras, amostras de K. pneumoniae produtoras de MβL tem sido reportadas com uma frequencia cada vez maior. Objetivo: Avaliar os mecanismos de resistencia a carbapenens em amostras de K. pneumoniae. Metodologia: Nove amostras de K. pneumoniae isoladas ate o momento na cidade de São Paulo foram avaliadas. A relacao genetica entre estas amostras foi estudada utilizando-se a tecnica de PFGE. Os testes de sensibilidade aos antimicrobianos foram realizados pela tecnica de diluicao em agar, segundo as padronizacoes do NCCLS. A tecnica da reacao em cadeia da polimerase (PCR) foi utilizada para determinar a presenca dos genes responsaveis pela codificacao das MβL, assim como para 0 contexto genetico que abriga estes genes. A deteccao de outros mecanismos de resistencia, como alteracoes da permeabilidade da membrana externa e a presenca de efluxo, tambem foi realizada em todas as amostras. Resultados: Todas as amostras foram altamente resistentes a ceftazidima (MIC, 128 µg/ml), apresentando tambem resistencia a imipenem (MIC, 128 µg/ml) e a meropenem (MIC, 64 µg/ml). Dentre as nove amostras de K. pneumoniae, todas apresentaram produto de amplificacao de PCR positivo para o gene blaIMP-1. A resistencia aos carbapenens tambem foi correlacionada a ausencia de uma proteina de membrana externa de aproximadamente 36 kDa. A diminuicao da expressao...(au) / Background: The increasing prevalence of multi-drug resistant Klebsiella pneumoniae (KPN) isolates is an emerging problem worldwide. Integrons are common among these bacteria and play an important role in the development, capture and expression of resistance genes. Methods: The genetic context around the blaIMP-1 gene was evaluated in 8 clonally related KPN isolates, recovered from a hospital from the city of Sao Paulo (SP), Brazil. The integron was revealed by a walking sequencing strategy. The plasmid obtained from the index isolate was electroporated into Escherichia coli XL1 Blue. Selection of recipient cells was performed in 5 µg/ml ceftazidime plates. Plasmid size was calculated based on the size of the plasmid restriction fragments. The amplicon of the dfr gene was cloned in TOPO vector and transformed into E. coli host. Trimethoprim MICs were performed by NCCLS agar dilution. Results: PCR and sequence analysis revealed that the strain carried two different class 1 integrons, a copy of the previously described In86 and a new integron, named In87. In86 carried blaIMP-1 in the first position, followed by aacA30 and aadA1 genes. The second integron, In87, carried a single gene cassette closely related to dfr22. The product of dfr23 showed 99% of amino-acid homology with DFR22 (one amino-acid substitution, Ser121-Tyr). Further characterization of the isolates revealed that In86 was likely to be located in a non-transferable 30 Kb plasmid. Conclusions: IMP-1 producing Acinetobacter spp. recently isolated in SP was the likely source of In86 acquisition since they carry an identical integron to those encountered in the studied KPN isolates. The presence of trimethoprim resistance gene cassettes in class 1 integrons which normally harbor sul1 gene at the 3’CS is most likely driven by the use of trimethoprimsulfamethoxazole combination. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo – FAPESP / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A capacidade de adquirir, com facilidade, resistência à terapia antimicrobiana torna-se uma das características mais estudadas em Acinetobacter sp., mundialmente conhecido por estar relacionado a surtos de infecções associadas à assistência a saúde (IAAS) e por ser apontado como um grave problema de saúde pública. Embora isolados clínicos desse gênero sejam extensivamente estudados quanto à presença e a diversidade de genes do tipo OXA-carbapenemases,existem poucos estudos sobre essa relação em isolados ambientais. Este trabalho teve como objetivo determinar a presença de carbapenemases do tipo OXA (e sua diversidade), de ISAba1 e de sua relação com as carbapenemases em isolados clínicos e de esgoto hospitalar de Acinetobacter sp. na cidade de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. Um total de 310 isolados (145 clínicos e 165 ambientais) foram submetidos a análise por PCR das regiões genéticas de interesse. A diversidade dos genes do tipo blaOXA-51 foi realizada por DGGE. Os resultados indicam a presença do gene blaOXA-58 em um isolado, pela primeira vez no Brasil. A sequência ISAba1 foi frequentemente encontrada (92,9%), porém, a sua associação com blaOXA-51 foi baixa e encontrada em 9,8% dos isolados clínicos e em 6,5% dos isolados ambientais. A análise de diversidade revelou uma baixa freqüência de alelos de OXA-51 entre os isolados estudados, sendo blaOXA-65 a variante mais encontrada. Contudo, podemos afirmar que o esgoto hospitalar analisado constitui-se de uma fonte de contaminação de bactérias patogênicas e que as precárias políticas de saneamento podem proporcionar a disseminação de multirresistência para o meio ambiente. / The ability of easily acquiring resistance to antimicrobial therapy becomes one of the most studied features in Acinetobacter sp., world renowned for being related to outbreaks of infection associated with health care and for being appointed as a serious public health problem. Although clinical isolates of this genus are extensively studied for the presence and diversity of OXAcarbapenemase genes, there are few studies about this relationship in environmental isolates. This study aimed to determine the presence of OXAtype carbapenemases (and yours diversity), of ISAba1 and its relationship with carbapenemases in clinical and hospital sewage isolates of Acinetobacter sp. in Porto Alegre, Rio Grande do Sul. A total of 310 strains (145 of clinical origin and 165 of environmental origin) were subjected to PCR analysis of genetic regions of interest. The diversity of blaOXA-51-like genes was performed by DGGE. The results indicate the presence of the gene blaOXA-58 in an isolated, for the first time in Brazil. ISAba1 was frequently found (92.9%) but its association with blaOXA-51-like was low and was found in 9.8% of clinical isolates and in 6.5% of environmental isolates. The diversity analysis showed that there is a low frequency of alleles of OXA-51 among the studied isolates being blaOXA-65 variant the most often found. However, we can state that the hospital sewage is considered to be a source of pathogenic bacteria contamination and that the poor sanitation politics contributes to the spread of multidrug resistance in the environment.

Submitted by Marcelo Andrade Silva (marcelo.andradesilva@ufpe.br) on 2015-03-09T14:41:01Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Valdemir Vicente da Silva Júnior.pdf: 1457648 bytes, checksum: c499026f0a26b07d06d850f098d6dc61 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-09T14:41:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Valdemir Vicente da Silva Júnior.pdf: 1457648 bytes, checksum: c499026f0a26b07d06d850f098d6dc61 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Pseudomonas aeruginosa é uma bactéria gram-negativa conhecida por causar infecções oportunistas em diversos sítios do corpo humano principalmente tendo como destaque as infecções das vias aéreas. Estes patógenos apresentam resistência intrínseca a várias classes de agentes antimicrobianos, e notável habilidade em adquirir outros mecanismos de resistência, como por exemplo, a ação de enzimas beta-lactamases. Os genes que codificam essas enzimas geralmente são adquiridos através de mecanismos de transferência genética intra e/ou interespécies. A ação dessas beta-lactamases juntamente com outros mecanismos de resistência é frequentemente a razão das falhas terapêuticas durante o tratamento das infecções. Sendo assim, o presente estudo visou determinar a frequência genotípica de beta-lactamases do tipo ESBL (Beta-lactamases de espectro estendido) em isolados de P.aeruginosa provenientes do Hospital das Clínicas de Pernambuco (HC-UFPE). Os 159 isolados tiveram seu DNA extraído através do kit Brazol. O DNA obtido da extração foi quantificado e diluído para então iniciar a pesquisa genética através da técnica de PCR. Os isolados foram selecionados para pesquisa molecular de acordo com o perfil de resistência. Para o gene blaTEM, 1,41% (1/71) apresentou positividade; com relação ao blaGES observou-se que 2 isolados dos 54 testados (3,92%) carreavam o gene, após sequenciamento e análise in silico verificou-se que se tratava da GES-1; a tipagem molecular por ERIC-PCR demonstrou que os dois isolados são geneticamente relacionados. Esses achados possuem importância epidemiológica molecular dado que o gene blaGES em P.aeruginosa ainda não foi descrito no nordeste Brasileiro e o gene blaTEM em P.aeruginosa não foi relatado no Brasil; e portanto, servem de alerta para uma possível disseminação desses genes que contribuem de forma expressiva na resistência apresentada por isolados de P.aeruginosa.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-11T19:15:47Z No. of bitstreams: 2 TESE Dyana Leal Veras.pdf: 6559035 bytes, checksum: 43988c4ed7fb791a6e593067fb17b1eb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T19:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Dyana Leal Veras.pdf: 6559035 bytes, checksum: 43988c4ed7fb791a6e593067fb17b1eb (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / O objetivo deste trabalho foi determinar a ação in vitro de antibióticos β-lactâmicos em isolados de Klebsiella pneumoniae portadores dos genes blaKPC, blaSHV, blaTEM ou blaCTX-M, desenvolvendo embasamento teórico para futura proposição de novas combinações terapêuticas. Sete isolados de K. pneumoniae foram utilizados, sendo 3 clínicos, 2 de comunidade e 2 de microbiota. Os isolados clínicos e de comunidade são portadores de genes codificantes de ESBL ou KPC e os de microbiota de -lactamases clássicas. Os genes de resistência foram identificados por PCR e seqüenciados utilizando primers específicos. A primeira fase deste estudo identificou os efeitos ultra-estruturais causados por -lactâmicos in vitro nos isolados clínicos e de microbiota de K. pneumoniae. Os isolados clínicos foram submetidos a concentrações clinicamente relevantes de ceftazidima, cefotaxima, aztreonam e/ou imipenem e os isolados de microbiota a ampicilina e amoxicilina, para análise pela Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) e Varredura (MEV). Diferentes alterações morfológicas e ultra-estruturais foram identificadas, como filamentação celular, perda de material citoplasmático e deformação dos septos de divisão, após submissão aos antibióticos, tanto nos isolados clínicos de K. pneumoniae como nos obtidos de microbiota. A segunda fase deste estudo determinou a influência destes antibióticos na produção de cápsula polissacarídica (CPS) nos isolados clínicos e de comunidade de K. pneumoniae. Os isolados foram submetidos a concentrações clinicamente relevantes de cefotaxima, ceftazidima, aztreonam e/ou imipenem para analise pela MET, utilizando citoquímica de carboidratos. Todos os isolados tiveram confirmação da presença da região promotora do operon envolvido na produção de CPS, identificado através de PCR e sequenciamento. A ceftazidima e o aztreonam foram capazes de inibir a produção de CPS nos isolados de K. pneumoniae produtores de ESBLs mas não no isolado produtor de KPC, o qual teve sua síntese fortemente inibida apenas pelo imipenem. A cefotaxima não interferiu na produção de CPS em nenhum dos isolados analisados. Nossos resultados demonstraram que antibióticos -lactâmicos possuem ação residual in vitro nos isolados analisados, sugerindo que a produção de ESBL e KPC por isolados de K. pneumoniae não são capazes de evitar completamente a interação de antibióticos β-lactâmicos com as PBPs bacterianas. Podemos concluir ainda que a ceftazidima, o aztreonam e o imipenem, podem ser capazes de inibir a produção de CPS em isolados clínicos e de comunidade de K. pneumoniae, contribuindo para diminuir a expressão do fator de virulência mais importante desta espécie bacteriana.

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-06-10T18:51:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Natália Final.pdf: 1682940 bytes, checksum: 561b828b32fcd807e7f34e4daee835f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T18:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Natália Final.pdf: 1682940 bytes, checksum: 561b828b32fcd807e7f34e4daee835f6 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Staphlylococcus desenvolveu a resistência aos betalactâmicos através de dois principais mecanismos, a expressão das betalactamases e a produção de PBP2a, codificadas pelos genes blaZ e mecA, respectivamente. Apesar da detecção do gene mecA por técnicas moleculares ser considerado o padrão ouro para a identificação das cepas de Staphlylococcus resistentes à meticilina (MRS), alguns estudos têm verificado discrepância entre a apresentação fenotípica da resistência à meticilina nessas cepas e a presença do gene mecA.O presente estudo teve como objetivo verificar se existe diferença de frequência do gene blaZ entre isolados clínicos de Staphylococcus spp. resistentes à meticilina portadores do gene mecA e os não portadores do gene. Foram estudados 47 isolados provenientes de amostras clínicas de hospital universitário da cidade do Recife. Essas amostras foram submetidas aos testes de susceptibilidade antimicrobiana, detecção do gene mecA para separação dos grupos de comparação e posterior detecção da presença de betalactamase através dos testes de cefinase em disco, Clover-Leaf e detecção do gene blaZ por PCR. Desta forma, foram observadas diferenças na frequência quando utilizados os testes fenotípicos para detecção. No teste de cefinase em disco, foram positivos 33,3% dos isolados portadores do gene mecA e 56,25% dos não portadores. No teste de Clover-Leaf, foi detectada a produção de betalactamase em 33,3% dos isolados portadores do gene mecA e 65,62% dos não portadores. Na pesquisa do gene blaZ, no entanto, não foi verificada diferença significativa nas frequências de detecção entre os grupos. Desta forma, indica-se o uso dos testes fenotípicos de detecção de produção de betalactamase, por apresentarem baixo custo e fácil operação, além de demonstrarem boa sensibilidade. / Staphlylococcus developed resistance to beta-lactam via two major mechanisms of beta-lactamase expression and production of PBP2a encoded by gene mecA and blaZ, respectively. Although the detection of the mecA gene by molecular techniques be considered the gold standard for identifying Staphlylococcus of methicillin-resistant strains (MRS), some studies have found discrepancies between the phenotypic presentation of methicillin resistance in these strains and the presence of the mecA gene. This study aimed to verify if there is frequency difference of blaZ gene among clinical isolates of Staphylococcus spp. methicillin-resistant carriers of mecA gene and non-carriers of the gene.47 isolates from clinical samples of University Hospital in Recife were studied.These samples were subjected to antimicrobial susceptibility tests and subsequent detection of mecA gene by PCR for separation of the comparison groups. After this, was performed to detect the production of beta-lactamase using the disk Cefinase tests, Clover Leaf and detection of blaZ gene by PCR. Thus, diferences in frequency were observed when phenotypics tests were used for detection. In Cefinase test disk,were positive 33.3% of the isolates carrying the mecA gene and 56.25% of non-carriers. In Clover-Leaf assay, the production of beta-lactamase was detected in 33.3% of isolates carrying the mecA gene and 65.62% of non-carriers.In search of blaZ gene, however, there was no significant difference in the frequency detection between groups. In this way, it indicates the use of phenotypic tests for detection of beta-lactamase production for having low cost and easy operation as well as demonstrating good sensitivity.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:33:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo998_1.pdf: 1609980 bytes, checksum: 24a98edce3674f14a6034cad4970277e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Universidade Federal de Pernambuco / Klebsiella pneumoniae é uma enterobactéria associada a infecções hospitalares graves que acomete principalmente, o trato urinário e respiratório, causando também meningite e septicemia, particularmente, em pacientes imunocomprometidos. O objetivo desse trabalho foi caracterizar geneticamente isolados clínicos de K. pneumoniae através da investigação dos genes de resistência a β-lactâmicos blaTEM, blaSHV, blaCTX-M, blaKPC, blaVIM, blaIMP e blaSPM, do perfil plasmidial e da ERIC-PCR. Foram analisados 24 isolados clínicos de K. pneumoniae provenientes de hospital público e de um hospital particular nos anos de 2007 e 2008, respectivamente, da cidade de Recife-PE. O Teste de sinergia de disco duplo, o Teste de Hodge Modificado e o E-Test MBL foram aplicados para detecção fenotípica de ESBLs, KPC e MBL, respectivamente. Todos os isolados apresentaram o gene blaSHV, 62,5% blaCTX-M, 29% blaTEM. Dentre os isolados do Hospital particular 71% apresentaram blaKPC e 50% blaVIM. Este é o primeiro relato do gene blaVIM em K. pneumoniae em Recife-PE, Brasil. Os genes blaIMP e blaSPM não foram detectados. O achado de 14 isolados (58%) carreando no mínimo 3 dentre os 7 genes de β-lactamases pesquisados é preocupante, uma vez que não é frequentemente relatado. O perfil plasmidial, agrupou os isolados em 17 grupos e 3 subgrupos. A ERIC-PCR classificou os isolados em 19 perfis distintos com 6 isolados apresentando o mesmo perfil, mostrando relação clonal. Podemos concluir que os isolados estudados acumularam determinantes de resistência que, consequentemente, impõem uma limitação nas opções terapêuticas disponíveis, podendo explicar muitos episódios de insucesso na tentativa de controle das infecções hospitalares

Multidrug resistant (MDR) extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing and carbapenem-resistant Gram-negative bacteria have become an international health issue limiting treatment options. The objective of this study was to determine the prevalence of carbapenem-susceptible (CS) and carbapenem-resistant (CR) Enterobacteriaceae, Acinetobacter baumannii and Pseudomonas aeruginosa and investigate clinical isolates for their resistant genes/ determinants. A total of 98 bacterial isolates (59 CS and 39 CR) were collected between February 2012 and February 2013 at NHLS, after being recovered from various clinical specimens from PE hospital complex. Antimicrobial susceptibility testing was performed using the VITEK 2® system, E-test and microbroth dilution method. PCR and DNA sequencing were used to investigate: (i) ESBLs: CTX-M, TEM, SHV and OXA-1; (ii) plasmidmediated quinolone resistance (PMQR) genes: qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA and aac(6’)-lb-cr; (iii) Escherichia coli sequence type 131 (ST131); (iv) carbapenemases: NDM, VIM, IMP, KPC, BIC, SME, IMI, NMC-A, GES, OXA-23, OXA-24, OXA-48, OXA-51 and OXA-58; and (v) insertion sequence ISAba1 upstream blaOXA-23/-24/-51/-58 genes. Porin loss in CR isolates was determined by SDSPAGE while genetic relatedness between E. coli ST131 isolates was determined by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). MDR ESBL-producing Enterobacteriaceae (mainly K. pneumoniae) and CR A. baumannii isolates were recovered from neonatal/ infant specimens. The majority of CS and CR isolates were MDR, possessing multiple ESBL genotypes (CTX-M, TEM, SHV and OXA-1). ESBL variants identified included: CTX-M-1, CTX-M-3, CTX-M-15, CTX-M-22, CTX-M-9, CTX-M-14, TEM-1, SHV-1, SHV-11 and OXA-1. PMQRs identified included: aac(6’)- lb-cr, qnrB1, qnrB2, qnrB13 and qnrS1. Twelve of 21 (57.1 percent) E. coli isolates belonged to the ST131 clonal complex and were genetically diverse, mainly producing CTX-M-15. Carbapenem resistance mechanisms identified included: (i) OXA-23 preceded by ISAba1 in 10 A. baumannii and 2 P. aeruginosa isolates; (ii) IMI-2 carbapenemase in an E. asburiae isolate; and (iii) combination of porin loss and ESBL production in 1 K. pneumoniae and 1 E. coli isolate. This is the first report in South Africa describing the occurrence of CTX-M-9, CTX-M-22 and IMI-2 among Enterobacteriaceae; CTX-M-15 in A. baumannii; and OXA-23 in combination with OXA-51 in P. aeruginosa. However, resistance determinants could not be detected for 24 carbapenem-resistant isolates which requires further investigation.

A retrospective study (1990-1994) of the activities of ampicillin, unisyn, augmentin, ticarcillin, tinentin, piperacillin, and zosyn against several thousand isolates belonging to 8 species of bacteria (Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Serratia marcensens, Morganella morganii, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus) in the Stockton area was reviewed. In addition, 233 isolates of the same species examined in 1994 were tested against the six penicillins and zosyn (in-house). The study shows that clavulanic acid 1 amoxicillin (Augmentin) combination has better activity than sulbactam 1 ampicillin combination (Unisyn) against E. coli, equal efficacy against K. pneumoniae, P. mirabilis, s. aureus but lesser active against E. cloacae, S. marcensens and ~ morganii. A comparison between the combination-drugs of clavulanic acidlticarcillin (Timentin) and tazobactaml piperacillin (Zosyn) generally indicates that they are equally effective on s. marcensens, M. morganii, ~ mirabilis, and s. aureus. Zosyn shows slightly better activity against E. coli, K. pneumoniae, E. cloacae, and ~ aeruginosa.