[pt] Neste trabalho, a fosforimetria em temperatura ambiente em substrato de celulose foi avaliada como técnica analítica para a determinação de dois derivados do indol (2 metil indol e 7 metil indol). As características fosforescentes dos dois analitos foram estudadas de modo univariado em função de diversos parâmetros experimentais como a taxa de decaimento do sinal fosforescente; tipo e quantidade de sal de átomo pesado indutor de fosforescência; quantidade de surfactante modificador de superfície da celulose e influência da concentração hidrogeniônica da solução de analito. Uma vez definidos os fatores relevantes, planejamentos fatoriais do tipo composto central foram realizados com o intuito de obter superfícies de resposta que apontassem possíveis interações entre os fatores e ajudassem na escolha da melhor condição experimental. As melhores condições para o 2 metil indol foram obtidas com soluções carreadoras de etanol/água no seu pH original e em substratos contendo TlNO3/SDS ou KI. Condições similares foram obtidas para o 7 metil indol. Para cada uma das condições selecionadas, foram realizados estudos para avaliação dos parâmetros de desempenho que incluíram: seletividade, linearidade da faixa de trabalho, limite de detecção, limite de quantificação, exatidão, precisão, robustez e cálculo de incerteza de medição do sinal fosforescente em substrato sólido. Em todos os casos estudados, a resposta analítica apresentou comportamento linear em função da massa depositada no substrato [R(2) > 0,99]. Os limites de detecção (média dos valores de branco + 3sb) e de quantificação (média dos valores de branco + 10sb) ficaram na ordem de 10(-5) de mol L(-1) (na ordem de dezenas de ng em termos absolutos). A repetitividade do método apresentou valores entre 15 e 23 % sendo a principal componente da incerteza de medição de sinal fosforescente. Este valor foi calculado seguindo o procedimento indicado pelo ISO GUM, ficando entre 22 a 35% (incerteza combinada) dependendo da condição experimental e do analito usado no processo de cálculo. A seletividade foi avaliada por meio da comparação das características espectrais de quatro indóis (indol, 2 metil indol, 3 metil indol e 7 metil indol) e entre compostos nitrogenados de diferentes famílias (quinolina, 7,8 benzoquinolina e acridina). Os resultados mostraram que não é possível discriminar os compostos indólicos. Entretanto é possível obter seletividade para compostos nitrogenados de diferentes famílias. / [en] In this work, room-temperature phosphorimetry using cellulose substrates was evaluated as analytical technique for the determination of two indol derivatives (2 methyl indol and 7 methyl indol). The phosphorescence from both analytes were studied in a univaried way in function of several experimental parameters such as the phosphorescence decay rate; type and quantity of phosphorescence inducer (heavy atom salt); amount of surfactant used as cellulose surface modifier and the influence of the hidrogenionic concentration of the analyte carrier solution. Once defined the relevant factors, central composite designs were performed in order to obtain response surfaces that pointed out possible interactions among factors and lead to the best experimental conditions. For 2 methyl indol, the best conditions were achieved by using ethanol/water analyte carrier solution at its original pH, and substrates containing TlNO3/SDS or KI. Simillar conditions were found for 7 methyl indol. For each of the selected conditions, studies were performed aiming to find the analytical figures of merit which included: selectivity, linearity of the working range, limit of detection, limit of quantification, accuracy, precision, robustness and the uncertainty of the phosphorescence measurement from the solid substrate. In all cases, the linear response presented a linear behavior in function of the mass of the analytes placed on the substrate [R(2) > 0,99]. Limits of detection (blank signals average + 3sb) and limits of quantification (blank signals average + 10sb) were in the mol L(-1) range (absolut values of tenths of ng). The repeatability of the method presented values between 15 and 23%, being the main components of the phosphorescence measurement, which were calculated based on the procedure indicated in the ISO GUM. The uncertainty value was between 22 and 35% (combined uncertainty) epending on the experimental condition and on the analyte used in the calculation process. The selectivity towards other indols (indol and 7 methyl indol) and other classes of nitrogenated polycyclic aromatic compounds was evaluated by comparing phosphorescence characteristics from these substances. While no discrimination was possible for the indols, selectivity in the determination of 2 methyl indol and 7 methyl indol in the presence of acridine, 7,8 benzoquinoline and quinoline) was found.

[pt] No presente trabalho, a cromatografia eletrocinética capilar micelar (MECC) e a fosforimetria em temperatura ambiente em substrato sólido (SSRTP) foram utilizadas como técnicas analíticas para a determinação de duas estrobilurinas (picoxistrobina e piraclostrobina) e de uma fluoroquinolona (enrofloxacina), respectivamente. As condições ótimas de analise por MECC foram determinadas a partir de um estudo univariado dos seguintes parâmetros experimentais e instrumentais: pH do eletrólito de corrida, concentração do tampão, concentração de surfactante (dodecil-sulfato de sódio - SDS), tipo e quantidade de modificador orgânico, temperatura de trabalho e diferença de potencial aplicada. Depois de definidas as condições ótimas (tampão borato 40 mmol L-1, pH igual a 8,5; SDS 30 mmol L-1; acetonitrila 15 por cento em volume, 25 gruas Celsius e 25 kV) foi realizado um estudo para diminuir o limite de detecção (LD) e o limite de quantificação (LQ) do método. Para tal, foi usado o modo de pré-concentração no capilar denominado modo de empilhamento normal (NSM). Nessa abordagem, as soluções de padrões e amostras foram dissolvidas em uma solução de maior impedância (água: borato 40 mmol L-1 pH igual a 8,5 50:50 por cento v/v). Uma cela de caminho óptico alongado também foi utilizada para a tentativa de aumentar a sensibilidade do método. As curvas analíticas foram construídas com o uso de padrão interno (azoxistrobina) e apresentaram comportamento linear e homocedástico com valores de R2 próximos a 0,999. Com o modo NSM, os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) para a picoxistrobina e para a piraclostrobina ficaram na ordem de 10-7 mol L-1. A precisão do método (repetitividade e reprodutibilidade interna) apresentaram valores entre 5 e 8 por cento para tempo de migração e área dos picos. O método foi aplicado na análise de urina e água de riacho, ambas fortificadas com as estrobilurinas. As amostras de urina foram previamente passadas em coluna de extração em fase sólida (C-18). As recuperações obtidas para a piraclostrobina foram 75 mais ou menos 4 por cento para as amostras de urina e 94 ou menos 10 por cento para as amostras de água de riacho. Para a picoxistrobina os valores de recuperação foram de 109 mais ou menos 9 por cento e 102 mais ou menos 9 por cento para as amostras de urina e água do riacho respectivamente. As características fosforescentes da enrofloxacina foram estudadas de modo univariado em função de vários parâmetros experimentais tais como o tipo e quantidade de sal de átomo pesado indutor de fosforescência, presença de surfactante modificador de superfície de celulose, influência de concentração hidrogeniônica na solução do analito e estudo do tempo de exposição ao UV para a formação de fotoproduto de sinal mais estável. As melhores condições para o método fosforescente para enrofloxacina foram obtidas em solução básica (solução acetona: NaOH 0,05 mol L-1 50:50 por cento v/v) irradiada com UV por 30 min e substrato contendo 80 Vg de TlNO3. O método foi aplicado em formulações farmacêuticas contendo enrofloxacina e que são utilizadas na medicina veterinária (solução e comprimidos). Um método com a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) adaptado da literatura foi utilizado para análise das amostras de enrofloxacina, sendo os resultados comparáveis àqueles obtidos por SSRTP. A curva analítica apresentou resposta linear e homoscedástica na faixa de trabalho escolhida com R2 maior que 0,99. Os valores de LD (xb mais 3sb) e de LQ (xb mais 10sb) foram respectivamente 2,1 and 4,8 ng respectivamente. A precisão (repetitividade e reprodutibilidade interna com troca de analista) do método apresentaram valores entre 2 e 19 por cento. A incerteza de medição do sinal fosforescente foi calculada usando o método sistemático indicado no ISO GUM e valores entre 18 e 26 por cento foram alcançados, com valores de repetitividade com troca de substrato a fonte mais importante de incerteza. No procedimento de validação, os valores de concentração de enrofloxacina encontrados nas amostras de medicamento analisadas por SSRTP e por HPLC foram estatisticamente semelhantes (valor de texperimental iguais a 0,48 e 1,04 sendo menor que o valor de tcrítico igual a 2,23). / [en] In the present work, micellar electrokinectic capillary chromatography (MECC) and solid surface room-temperature phosphorimetry (SSRTP) were used as analytical techniques for the determination of two strobilurins (picoxystrobin and pyraclostrobin) and of one fluoroquinolones (enrofloxacin), respectively. The experimental conditions for MECC have been optimized using an univariate approach for the following experimental and instrumental parameters: pH of the working electrolyte, concentration of the buffer, concentration of surfactant (sodium dodecyl-sulphate - SDS), type and amount of organic modifier, working temperature and applied potential. After defined the best conditions (borate buffer 40 mmol L(-1) pH=8.5; 30 SDS mmol L(-1); acetonitrile 15% in volume, 25 ºC and 25 kV), a study was carried through to improve the limit of detention (LD) and the limit of quantification (LQ) of the method. In order to do that, an on-line analyte pre-concentration called normal stacking mode (NSM) was used. In such approach, the standards and samples have been dissolved in a solution of higher impedance (water: borate 40 mmol L(-1) pH=8.5 50:50% v/v). A high sensitivity detection cell also was used to attempt the increasing of the sensitivity of the method. The analytical curves have been constructed with the use of an internal standard (azoxystrobin) and a linear response and homocedastic behavior were observed with R2 values of at least 0.999. The NSM mode allowed the values of LD (x(b) + 3(sb)) and of LQ (x(b) + 10(sb)) in the order of 10(-7) mol L(-1) for picoxystrobina and pyraclostrobina. The precision of the method (repeatability and intermediate precision) was characterized by values between 5 and 8%. The method was applied in the analysis urine and stream water, both type of samples fortified with the strobilurins. The urine sample was previously passed through a solid phase extraction column (C-18). The recoveries achieved for pyraclostrobina were 75  +- 4% for urine and 94  +- 10% for stream water samples. For picoxystrobin, the recovery values were 109  +- 9% and 102  +- 9% respectively for urine and stream water samples. The phosphorimetric characteristics of enrofloxacin have been studied in an unvaried way for experimental parameters such as the type and quantity of phosphorescence inducer (heavy atom salt), surfactant used as cellulose surface modifier, influence of the hidrogenionic concentration in the analyte solution and study of the UV exposition time for the formation of a more signal stable photoproduct. The best conditions for the phosphorimetric method for enrofloxacin were the use of basic solution (solution acetone: NaOH 0.05 mol L-1 50:50% v/v) irradiated with UV for 30 min and cellulose substrates containing 80 Vg of TlNO3. The method was applied in pharmaceutical formulations containing enrofloxacin employed in veterinary medicine (solution and pills). A method based on high efficiency liquid chromatography (HPLC), adapted from literature, was used as a reference method and the the results obtained for enrofloxacin was comparable to the ones achieved by SSRTP. The analytical curve presented linear and homocedastic behavior with R2 values higher than 0.99. The LD (x(b) + 3(sb)) and the LQ (x(b) + 10(sb)) values were 2.1 and 4.8 ng respectively. The precision (repeatability and intermediate precision with change of analyst) of the method presented values between 2 and 19%. The uncertainty of the phosphorescence measurement was calculated using the systematic method indicated in the ISO GUM. Values between 18 and 26% had been achieved, with the repeatability with substrate change the most important source uncertainty. In the validation procedure, enrofloxacin concentration values found in the medicine samples analyzed by SSRTP and HPLC were statistically similar ( t(experimental) value of 0.48 and 1.04 smaller than the t(critic) value of 2.23).

[pt] Neste trabalho, métodos analíticos baseados na fosforimetria na temperatura ambiente foram desenvolvidos para a determinação de sete compostos policíclicos aromáticos (CPA) sulfurados e nitrogenados presentes do petróleo. Mais especificamente, o objetivo foi o de fornecer ferramentas analíticas que permitissem avaliar e quantificar estes CPA em gasolina e em uma amostra ambiental (sedimento). Adicionalmente, a informação obtida através da fosforimetria mostrou potencial para permitir diferenciar amostras (por exemplo, a identificação de amostras contaminadas) por meio de perfil em três dimensões ou curvas de nível. A aplicação de técnica de varredura sincronizada e o uso do efeito externo seletivo do átomo pesado aumentaram o grau de seletividade e de discriminação entre amostras, pois induziu fosforescência de componentes específicos na amostra e melhorou a resolução espectral dos resultados. Inicialmente, foi feito um estudo das características fosforescentes das substâncias em diferentes condições experimentais, seguido da maximização do sinal fosforescente de cada uma das substâncias nas condições experimentais mais propícias para observação do sinal fosforescente. Para tal, o papel filtro, previamente tratado para redução do sinal de fundo, foi utilizado como substrato sólido para imobilização dos analitos, permitindo a observação de intensa fosforescência na temperatura ambiente. Os parâmetros de mérito das metodologias desenvolvidas para cada um dos analitos em questão foram obtidos. As faixas lineares se estenderam entre 1,0 x 10-7 e 5,0 x 10-4 mol L-1, considerando as concentrações das soluções dos analitos aplicadas no substrato. Os coeficientes de determinação (r2) obtidos ficaram sempre acima de 0,9784. Os limites de detecção absolutos (para 5 µL de amostra) foram todos na ordem do ng, mostrando a capacidade para detecção sensível em termos de massa efetiva de analito. Os testes de repetibilidade mostraram valores variando entre 12 e 18%, o que pode ser considerado satisfatório para a técnica realizada em substrato sólido. Também foram conduzidos estudos de robustez e reprodutibilidade. Alternativamente, sinais fosforescentes foram maximizados em condições experimentais secundárias do ponto de vista da magnitude de sinal, mas potencialmente relevantes do ponto de vista da seletividade. Testes de recuperação indicaram, na maioria dos casos, resultados bastante satisfatórios no caso das misturas sintéticas contendo quantidades eqüimolares de componentes (nesse caso, foram testadas várias combinações de analitos e de interferentes) ou contendo interferentes, em concentrações cinco vezes maior que a do analito de interesse. Nos casos mais críticos em termos de interferências, recursos instrumentais ou quimiométricos foram aplicados para melhorar a seletividade e possibilitar a quantificação. Os métodos desenvolvidos foram testados em amostras simuladas de gasolina, em gasolina comercial e em uma matriz ambiental (sedimento) fortificadas com os analitos de interesse. As recuperações obtidas foram bastante satisfatórias e compreendidas entre 90% e 117%. Estudos envolvendo varreduras de fosforescência total (TPS) também foram realizados, com o intuito de se obter uma impressão digital característica para cada um dos analitos. Testes de TPS em gasolina comercial indicaram a presença de pelo menos seis dos sete analitos estudados, devido à obtenção de perfis espectrais muito semelhantes aos dos padrões. Testes adicionais mostraram a capacidade de identificar contaminações (misturas) na gasolina pela adição de diesel e de querosene. / [en] In this work, analytical methods based on room-temperature phosphorimetry were developed aiming the quantification of seven polycyclic aromatic compounds (PAC) containing sulfur and nitrogen present in petroleum. More specifically, the goal was to obtain analytical tool to allow the evaluation and the quantification of these PCA in sediment and gasoline. In addition, the phosphorimetric information displayed potential for the discrimination of samples (for instance, the identification of contaminated samples) by means of three dimension plots or level curves. The application of synchronized sweeping technique and the use of the selective external heavy atom effect had increased the degree of selectivity and discrimination between samples, since it induces phosphorescence from specific components of the sample and improved the spectral resolution of the results. Initially, a study of the phosphorescent characteristics of the compounds in different experimental conditions was made, followed of the signal maximization in the most appropriate experimental conditions for the observation of phosphorescence. Filter paper, previously treated for background reduction, was employed as solid substrate for the immobilization of analytes. The analytical figures of merit for each one of the methods had been obtained. The linear range varied between 1,0 x 10-7 mol L-1 and 5,0 x 10-4 mol L-1, taking into consideration the concentration of the solutions spotted on the substrate. The determination coefficient values (r2) were always above of 0.9784. The absolute limits of detection (5 µL sample) were in ng order, showing the sensitivity of the developed methods. The repeatability tests had enabled values varying between 12 and 18%, which can be considered satisfactory for solid substrate technique. Robustness and reproducibility studies were also carried out. Additionally, secondary experimental conditions, in terms of signal magnitude, were optimized since these could be relevant from the selective point of view. Recovery tests indicated, in most of the cases, satisfactory results for synthetic mixtures containing equimolar quantities of components (in these cases, several analyte/interferent combinations were tested) and containing interferents in concentrations five times higher than the one of the analytes. In the most critical cases in terms of interferences, instrumental or quimiometric approaches had been applied to improve selectivity and make the quantification possible. The developed methods had been tested in simulated gasoline samples, commercial gasoline and in a sediment sample fortified with the analytes of interest. The obtained recoveries had been considered satisfactory and within 90 and 117%. Total phosphorescence scanning (TPS) studies had been also carried out in order to get the characteristic fingerprint for each one of the compounds of interest. TPS tests in gasoline had indicated the presence of six out of seven of the studied analytes, since very similar fingerprints were obtained. Additional tests had demonstrated the capability of this procedure to detect gasoline contaminations with diesel or kerosene.

[pt] Neste trabalho foi avaliado o uso da Fosforimetria na Temperatura Ambiente em Substrato Sólido (FTASS) como técnica analítica aplicável na determinação de dois derivados da β-carbolina (harmane e harmine). Como suporte sólido foi utilizado o papel de filtro de baixo sinal de fundo. As características fosforescentes dos analitos foram estudadas em função de diversos parâmetros experimentais, que foram posteriormente otimizados visando a maximização do sinal fosforescente. Estes parâmetros foram: efeito de íons de átomos pesados; uso de surfactante como modificador de superfície; pH e volume de tampão; sistema de solventes e irradiação prévia das β-carbolinas com UV. As melhores situações para ambos os analitos foram obtidas em pH natural com a adição de Tl+ e em pH básico na presença de Ag+. Após a otimização das condições experimentais relevantes, os parâmetros analíticos de mérito foram obtidos. Para o harmane, faixas lineares dinâmicas (a partir do limite de quantificação, LQ) de 0,39 - 456 ng (Ag+/pH=12) e de 8,10 - 911 ng (Tl+/pH=7,7) foram obtidas. Para o harmine, a faixa linear dinâmica, partindo do LQ, foi de 0,59 - 1244 ng (dividido em duas faixas distintas) quando Ag+/pH=9 foi empregado. Com o uso de Tl+/pH=5,1, a faixa obtida foi de 0,53 a 249 ng. A precisão do método para as duas substâncias ficou dentro do esperado para esta técnica. Também foi estudado o potencial interferente de algumas substâncias (AZT, talidomida e outros) e da matriz urina. O desempenho do método foi testado através de testes de recuperação em formulações farmacêuticas simuladas e em urina enriquecida com o(s) analito(s), sendo as recuperações encontradas dentro da faixa recomendada de 90 a 110 %. Estudos envolvendo a determinação seletiva em misturas contendo ambos os derivados da β-carbolina mostraram a viabilidade da determinação seletiva de harmine na presença de harmane usando apenas um ajuste de pH. / [en] In the present work a Solid Surface Room-Temperature Phosphorimetry (SSRTP) based analytical method was developed aiming the determination of two â-carbolines derivatives (harmane and harmine). A low background filter paper was employed as solid support. The phosforimetric characteristics of the analytes were studied as function of several parameter, afterwards optimized aiming the maximization of phosphorescence. Among the studied parameters were the effect of heavy atom ions; the use of surfactants as substrate surface modifier; pH and volume of buffer; solvent system and the previuos UV irradiation of the analytes. The best results for both analytes were achieved using Tl+ in natural pH and using Ag+ in basic pH. After optimization of the relevant experimental conditions, the analytical figures of merit were obtained. For harmane, linear dynamic ranges (starting from the limit of quantification, LQ) from 0.39 to 456 ng (Ag+/pH=12) and from 8.10 to 911 ng (Tl+/pH=7.7) were achieved. For harmine, the linear dynamic ranges, stating from LQ, were from 0.59 to 1244 ng (divided in two linear ranges) when Ag+/pH=9 was used. When Tl+/pH=5.1 was employed, linear ranges were from 0.53 to 249 ng. The precision of the method was in accordance with the values expected for this technique. The potential interferent effect of some substances (AZT, thalidomide and others) as well as the effect of urine matrix were also studied. The performance of the method was evaluated by recovery tests using simulated pharmaceutical formulations and analyte spiked urine samples. In both cases, recoveries within the recomended range (from 90 to 110 %) were achieved. Studies involving the selective determination of â-carbolines derivatives have indicated that the determination of harmine in the presence of harmane is feasable only by a simple sample pH adjustment.