Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-24T16:39:07Z No. of bitstreams: 1 Jose Menezes Araujo Junior.pdf: 362260 bytes, checksum: ad127ee31030ace5f6a04e4c2c1df8cb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T16:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jose Menezes Araujo Junior.pdf: 362260 bytes, checksum: ad127ee31030ace5f6a04e4c2c1df8cb (MD5) Previous issue date: 2008-02-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aphid, Lipaphis erysimi (Kalt.) (Hemiptera: Aphididae), is considered an important pest of kale in Brazil. Botanical insecticides and the fungi Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok., Beauveria bassiana (Bals.) Vuill., and Lecanicillium muscarium (Petch) Zare & Gams are promising alternatives to control aphids populations. This work aimed to evaluate isolates of entomopathogenic fungi and toxicity of the neem formulation (Neemseto®) to control L. erysimi, as well the compatibility of the selected isolates and neem oil. Survey done accros kale areas from five counties of the Agreste region in Pernambuco State resulted in presence of L. erysimi in four of them. Among 20 evaluated fungi isolates, the B. bassiana CG 001 and M. anisopliae CG 30 were the most pathogenic, providing 90 and 64% mortality towards the aphid, respectively. The CL50s for B. bassiana CG 001, M. anisopliae CG 30, and L. muscarium URPE-24 were 1,6x106,3,4x106 and 2,5x105 conidia mL-1, respectively. Bioassays with the neem formulation at concentrations 0.5, 1.0, and 2.0% were done either by leaf discs dipping or spraying the aphids on the leaf discs. All treatments caused mortality higher than 60 %, however the neem spraying treatment at 2.0% provided 90% mortality. Regarding the compatibility of B. bassiana CG001, M. anisopliae CG30 isolates with the neem oil formulation at 0.125, 0.25, and 0.5%, the 0.5% treatment did not affect the B. bassiana CG 001 viability. Compatibility test conducted with theisolates CG001 of B. bassiana and CG30 of M. anisopliae with Neemseto® at concentration 0.125, 0.25 and 0.5%, showed that the highest neem concentration caused negative impact on sporulation of the isolate CG001 and on vegetative growth and viability of the isolate CG30. These results show that the isolates B. bassiana CG001, M. anisopliae CG 30, L. muscariumURPE-24, and neem oil may be used to the control of L. erysimi. / O pulgão Lipaphis erysimi (Kalt.) (Hemiptera: Aphididae) tem-se destacado como praga das brássicas. Entre as medidas de controle de pulgões, o uso de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok., Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Lecanicillium muscarium (Petch) Zare & Gams, e de extratos de plantas têm sido considerado uma alternativa promissora. Assim, este trabalho objetivou selecionar isolados de fungos entomopatogênicos eficazes e estudar a aplicação de nim formulado para controle de L. erysimi e avaliar também, a compatibilidade entre os isolados e o nim. Levantamentos realizados em cultivos de brássicas, no Agreste de Pernambuco, mostraram que L. erysimi ocorreu em quatro das cinco localidades investigadas. Foram avaliados 20 isolados de fungos, onde CG001 de B. bassiana e CG30 de M. anisopliae apresentaram-se como os mais patogênicos causando 90 e 64% de mortalidade, respectivamente. Para a determinação da concentração letal (CL50) foram utilizou-se estes dois isolados e URPE-24 de L. muscarium. Osvalores para a CL50 foram de 1,6 x 106, 3,4 x 106 e 2,5 x 105 conídios mL-1, para B. bassiana, M. anisopliae e L. muscarium, respectivamente. O óleo de nim formulado foi testado em três concentrações (0,5; 1,0 e 2,0%) por imersão foliar e pulverização sobre os pulgões. Em todos os tratamentos observou-se mortalidade superior a 60%, porém o melhor resultado foi obtido com apulverização do nim a 2,0% proporcionando mortalidade de 90%. Testando a compatibilidade in vitro de CG001 de B. bassiana e CG30 de M. anisopliae com o Neemseto® a 0,125; 0,25 e 0,5%, observou-se que o tratamento a 0,5% afetou apenas a esporulação do isolado CG001 e o crescimento vegetativo e a viabilidade de CG30. Pode-se concluir que os isolados CG001, CG30 e URPE-24 de B. bassiana, M. anisopliae e L. muscarium, respectivamente, e óleo emulsionávelde nim podem ser utilizados para o controle de L. erysimi.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-12-02T12:00:19Z No. of bitstreams: 1 Ricardo Lopes de Melo.pdf: 1316234 bytes, checksum: 08d9d42be60b63426f274a63eaa26109 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-02T12:00:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ricardo Lopes de Melo.pdf: 1316234 bytes, checksum: 08d9d42be60b63426f274a63eaa26109 (MD5) Previous issue date: 2012-02-03 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Lipaphis erysimi (Kalt.) (Hemiptera: Aphididae) is a pest with Kale, in the absence of pesticides registered in Brazil for its control. The goal of this research was to evaluate the biological control with entomopatogênicos fungi and its association with Neem oil in aphids of Kale, with emphasis to L. erysimi. The participation of L. erysimi in complex of aphids-pest of kale in Pernambuco was evaluated. Among six municipalities monitored, L. erysimi was more frequent in João Alfredo (68,7%), Recife (63,9%) and Vitória de Santo Antão (74,6%). Cycloneda sanguinea (L.) (Coleoptera: Coccinelidae), Lysiphlebus testaiceipes (Cresson) (Hymenoptera: Aphidiidae), Lecanicillium muscarium (Petch) Zare & Gams, and Syrphidae were noted. Strains Beauveria bassiana URPE 27 and L. muscarium URPE 28 of were elected as more virulent, causing in nymphs mortality rate of 83% and 77%, survival 2,1 and 3,3 days and Lethal Concentration (LC50) of 2,4x107con./ml and 7,3x106con./ml, respectively. The neem oil when sprayed shower LC50 of 0.2mL/l and 3.7mL/l applied in immersion. The combination of neem with B. bassiana URPE 27 and L muscarium URPE 28 was compatible. In the field, the strain URPE 27 caused relative efficiency of 89.6%, 88.3% and 90.4%, while URPE 28 promoted 45.5%, 62% and 64.4% against L. erysimi, Myzus persicae (Sulzer) and Brevicoryne brassicae (L.) (Hemiptera: Aphididae), respectively. The association with the neem oil was more favorable to the strain URPE 27. In field monitoring in Viçosa-MG, to evaluate the effectiveness of Zoophthora aphids (Hoffman in Fresenius) Batko (1964b) on L. erysimi and M. persicae, which showed average proportion of infected of 0.24 and 0.30, respectively. The third instar stage L. erysimi more likely. / Lipaphis erysimi (Kalt.) (Hemiptera: Aphididae) é uma praga relevante para couve, não existindo agrotóxicos registrados no Brasil para o seu controle. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o controle biológico com fungos entomopatogênicos e a sua associação com óleo de nim em afídeos da couve, com ênfase para L. erysimi. A participação deste, no complexo de pragas da couve em Pernambuco foi avaliada. Dentre os seis municípios monitorados L. erysimi mostrou-se mais freqüente em João Alfredo (68,7%), Recife (63,9%) e Vitória de Santo Antão (74,6%). Cycloneda sanguinea (L.) (Coleoptera: Coccinelidae), Lysiphlebus testaiceipes (Cresson) (Hymenoptera: Aphidiidae), Syrphidae e Lecanicillium muscarium (Petch) Zare & Gams foram constatados. As linhagens de Beauveria bassiana URPE 27 e de Lecanicillium muscarium URPE 28 foram eleitas como mais virulentas, causando em ninfas taxa de mortalidade de 83% e 77%, sobrevivência 2,1 e 3,3 dias e Concentração Letal (CL50) de 2,4x107con/ml e 7,3x106con/ml, respectivamente. O óleo de nim, quando pulverizado apresentou CL50 de 0,2mL/l e de 3,7mL/l, aplicado em imersão. O óleo em concentração de 1,25mL/l causou mortalidade de 80% das ninfas em 24horas. Efeito fitotóxico foi promovido em concentrações acima de 2,5mL/L. A associação do nim com B. bassiana URPE 27 e L. muscarium URPE 28 mostrou-se compatível. Em campo, a linhagem URPE 27 causou eficiência relativa de 89,6%, 88,3% e 90,4%, enquanto que URPE 28 promoveu 45,5%, 62% e 64,4% contra L. erysimi, Myzus persicae (Sulzer) e Brevicoryne brassicae (L.) (Hemiptera: Aphididae), respectivamente. A associação com o óleo de nim mostrou-se mais favorável com a linhagem URPE 27. Em monitoramento de campo em Viçosa- MG, avaliou-se a eficácia de Zoophthora aphids (Hoffmann in Fresenius) Batko (1964b) sobre L. erysimi e M. persicae, que apresentou proporção média de infectados de 0,24 e 0,30, respectivamente. O terceiro ínstar foi a fase de L. erysimi mais susceptível.

nÃo hà / Neem (Azadirachta indica A. Juss.: Meliaceae) is a plant species originating in India introduced to Brazil mainly due to its insecticidal properties. However, the effect of such insecticidal properties on floral visitors, wild or reared, is not known. This study aimed to evaluate the toxicity of this plant species to Apis mellifera and its importance as a source of pollen and nectar for beekeeping. Experiments on the neem floral biology, floral visitors, A. mellifera colony development in areas with and without neem in the caatnga a coastal vegetations and larval and adult survivalship when fed with pollen or nectar of neem in controlled environment were carried out in the bee labs of the Universidade Federal do Cearà - UFC, Universidade Estadual Vale do Acaraà - UVA and private properties in the state of CearÃ, Brazil. Results showed that all neem individuals studied bore bissexual flowers, with anthesis occurring around 16:00h and most flower buds presenting receptive stigmas and releasing pollen, though still unviable, 24h before anthesis. The highest pollen viability was observed at anthesis. Flowers of A. indica produced nectar in diminute amounts that did not allow sampling with capilars. Apis mellifera workers were the only floral visitors registered showing higher frequency early in the morning, when searching for pollen and nectar, and pollinating neem flowers. The wind played no role in neem pollination. Results also showed that honeybee colonies placed in the area with neem produced significantly (p<0.05) larger brood area than those palcedwhere neem was absent, both in caatinga and coastal vegetations. This difference was significanlty (p<0.05) greater in caatinga, where there were less natural resources during the dry season than in the coastal vegetation. Regarding brood mortality, that in caatinga with neem was higher (p<0.05) than thaof coastal vegetation with neem, and when compared within the same biome, brood mortality in colonies placed in areas with neem was significantly (p<0.05) higher than that in colonies of areas without neem. Despite brood mortality be higher in areas with neem, such mortality percentual was less than 10%, and within normal mortality parameters for honeybee brood. Under controlled environment, adult A. mellifera fed exclusively on neem were the ones with the shortest lifespan, but as neem was progressively replaced in the diet for other food sources, the worker lifespan increased. Flower odor per si did not produce repelence nor affect bee lifespan. Honeybee brood reared in artificial cups in the lab receiving larval food + neem pollen presented 100% mortality, significantly (p<0.05) higher than the other treatments (larval food, larval food + 100% pollen from other sources, larval food + 50% pollen from other sources + 50% neem pollen). It was concluded that the use of neem in association with other sources of pollen and nectar seems to estimulate colony growth due to the augment in food availability compensating, in populational terms, the increase in brood mortality. This effect seems to be inversally proportional to the scarcity of other floral resources, being as higher as shorter becomes the availability of other sources of pollen and nectar. However, both neem pollen and neem nectar are toxic for adults and larvas of A. mellifera, and it is not advisable its use as exclusive food source to these bees. Regarding other floral vistors of caatinga and coastal vegetation fauna, apparently neem does not constitute any threat or food resource, because no native species was observed exploiting this plant species. There is a need for further studies to determine safety levels for use of neem in beekeeping, to learn about other possible effects on A. mellifera individuals and colony and to investigate better the relationship of this plant species with native floral visitors. / O nim (Azadirachta indica A. Juss.: Meliaceae) à uma planta de origem indiana introduzida no territÃrio brasileiro principalmente devido Ãs suas propriedades inseticidas. No entanto, nÃo se sabe ainda como essas propriedades afetam os visitantes florais e seus possÃveis efeitos sobre polinizadores silvestres e para a apicultura. O presente estudo objetivou, portanto, avaliar a toxicidade dessa espÃcie vegetal para Apis mellifera e sua importÃncia como planta apÃcola. Para tanto, experimentos sobre a biologia floral da espÃcie, visitantes florais, desenvolvimento de colÃnias de A. mellifera em Ãreas com e sem nim nos bioma caatinga e mata litorÃnea e sobrevivÃncia de larvas e adultos alimentados com pÃlen e/ou nÃctar de nim em ambiente controlado foram conduzidos no LaboratÃrio de Abelhas da Universidade Federal do Cearà - UFC, no LaboratÃrio de Apicultura da Universidade Estadual Vale do Acaraà - UVA e em propriedades particulares no Estado do CearÃ. Os resultados mostraram que todos os indivÃduos estudados de nim apresentaram flores bissexuadas, com antese por volta das 16 horas e que a maioria dos botÃes florais encontra-se com seus estigmas receptivos e suas anteras liberando pÃlen, ainda inviÃvel, 24 horas antes da antese. A maior viabilidade do pÃlen ocorre no momento da antese. Foi encontrado nÃctar nas flores de A. indica, porÃm em quantidades diminutas que nÃo permitiu a captura pelos tubos capilares. As abelhas Apis mellifera foram os Ãnicos visitantes florais, apresentando maior freqÃÃncia logo nas primeiras horas do amanhecer, onde procuraram coletar nÃctar e pÃlen, sendo as responsÃvÃis pela polinizaÃÃo do nim. O vento nÃo apresentou influÃncia na polinizaÃÃo. Os resultados mostraram que as colÃnias distribuÃdas na Ãrea com nim apresentaram uma populaÃÃo de crias significativamente maior (p<0,05) do que as dispostas na Ãrea sem nim, tanto na caatinga como na mata litorÃnea. Essa diferenÃa foi siginificativamente maior (p<0,05) na caatinga, onde havia menos recursos naturais no perÃodo seco do ano, do que na mata litorÃnea. Quanto à mortalidade de larvas das colÃnias, a da caatinga com nim foi mais elevada (p<0,05) do que a da mata litorÃnea com nim, e quando comparadas dentro do mesmo bioma, a mortalidade das larvas das colÃnias nas Ãreas com nim foi significativamente superior (p<0,05) Ãs das colÃnias colocadas nas Ãreas sem nim. Apesar da mortalidade das crias ter sido mais elevada em Ãreas com nim, este percentual de mortalidade geralmente foi inferior a 10%, valor limite considerado aceitÃvel. Em ambinete controlado, adultos de A. mellifera que se alimentaram exclusivamente dos recursos florais de A. indica foram os que apresentaram menor tempo mÃdio de vida. Verificou-se que na medida em que os recursos florais de A. indica eram substituÃdos por outras fontes alimentares na dieta, o tempo mÃdio de vida aumentava. O simples odor das flores nÃo apresentou efeito de repelÃncia e nÃo afetou a longevidade das operÃrias. As larvas de operÃrias de A. mellifera criadas em cÃpulas artificiais, sob condiÃÃes de laboratÃrio, que receberam alimento larval juntamente com pÃlen exclusivo de A. indica tiveram mortalidade de 100%, sendo significativamente superior (p<0,05) à mortalidade das demais dietas (alimento larval, alimento larval + 100 % pÃlen diverso, alimento larval + 50% pÃlen diverso + 50% pÃlen de nim). Conclui-se entÃo que o uso do nim associado à outras fontes de pÃlen e nÃctar parece estimular o desenvolvimento das colÃnias pelo acrÃscimo da oferta de alimento, compensando, em termos populacionais, o aumento da mortalidade larval. Esse efeito parece ser inversamente proporcional à escassez de outros recursos florais, sendo tÃo maior quanto menor for a disponibilidade de outras fontes de pÃlen e nÃctar. No entanto, tanto o nÃctar quanto o pÃlen do nim sÃo tÃxicos para adultos e larvas de A. mellifera, nÃo sendo aconselhÃvel o seu uso como fonte exclusiva de alimento para essas abelhas. No que se refere a outros visitantes florais da fauna da caatinga e mata litorÃnea cearense, aparententemente o nim nÃo constitui ameaÃa ou recurso alimentar, haja vista que nÃo foi verificada visitaÃÃo por parte de qualquer espÃcie nativa. Hà a necessidade de maiores estudos para determinar nÃveis seguros de utilizaÃÃo do nim na apicultura, conhecer outros possÃveis efeitos sobre os indivÃduos e colÃnia de A. mellifera e aprofundar o conhecimento da relaÃÃo dessa planta com os visitantes florais nativos.

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Katia.pdf: 198882 bytes, checksum: bd1173aa5b4a5537dec7db52bbd82ed1 (MD5) Previous issue date: 2006-02-20 / The neem tree (Azadirachta indica A. Jussieu) is an exotic tropical tree that has been studied because its gets azadiractin (AZ) an important active principle with medicinal and insecticide properties. However its forestry characteristics and its handling are few known, so this work comes to contribute with the knowledge of this specie. This work was carried out at west region of São Paulo state. The treatments were six nitrogen rates of urea corresponding at 0; 9; 18; 27; 36; e 45 g of N*plant-1. The experimental design was a randomized blocks with six treatments and five repetitions with four plants per fragment. The characteristics evaluated were: height of tree, Diameter at Breast Height (DBH at 1,30 m from soil) and Diameter at Lap Height (DLH at 0,05 m from soil) The evaluation system to collect measures was in a permanent plot system. There were no statisticals differences among the treatments at 5% of significance. / O nim, Azadirachta indica A Jussieu, é uma espécie arbórea exótica de clima tropical que tem sido muito pesquisada por apresentar azadiractina, princípio ativo com propriedades medicinais e inseticidas. No entanto, as características silviculturais e técnicas para seu manejo ainda são pouco conhecidas. Para contribuir com o conhecimento desta espécie, este experimento foi desenvolvido na região oeste do estado de São Paulo. Os tratamentos foram seis doses diferentes de adubação nitrogenada na forma de uréia equivalendo a 0; 9; 18; 27; 36; e 45 g de N*planta-1. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, com 6 tratamentos e 5 repetições, onde cada parcela conteve 4 plantas. Anotou-se a altura da planta e o Diâmetro à Altura do Colo (DAC a 0,05 m do solo), o Diâmetro à Altura do Peito (DAP a 1,30 m do solo). O sistema de avaliação para coleta de dados adotado foi o de parcelas permanentes. Os resultados foram submetidos a análise estatística, que demonstram efeito não significativo a 5% de probabilidade para os tratamentos aplicados.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:51:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Katia.pdf: 198882 bytes, checksum: bd1173aa5b4a5537dec7db52bbd82ed1 (MD5) Previous issue date: 2006-02-20 / The neem tree (Azadirachta indica A. Jussieu) is an exotic tropical tree that has been studied because its gets azadiractin (AZ) an important active principle with medicinal and insecticide properties. However its forestry characteristics and its handling are few known, so this work comes to contribute with the knowledge of this specie. This work was carried out at west region of São Paulo state. The treatments were six nitrogen rates of urea corresponding at 0; 9; 18; 27; 36; e 45 g of N*plant-1. The experimental design was a randomized blocks with six treatments and five repetitions with four plants per fragment. The characteristics evaluated were: height of tree, Diameter at Breast Height (DBH at 1,30 m from soil) and Diameter at Lap Height (DLH at 0,05 m from soil) The evaluation system to collect measures was in a permanent plot system. There were no statisticals differences among the treatments at 5% of significance. / O nim, Azadirachta indica A Jussieu, é uma espécie arbórea exótica de clima tropical que tem sido muito pesquisada por apresentar azadiractina, princípio ativo com propriedades medicinais e inseticidas. No entanto, as características silviculturais e técnicas para seu manejo ainda são pouco conhecidas. Para contribuir com o conhecimento desta espécie, este experimento foi desenvolvido na região oeste do estado de São Paulo. Os tratamentos foram seis doses diferentes de adubação nitrogenada na forma de uréia equivalendo a 0; 9; 18; 27; 36; e 45 g de N*planta-1. O delineamento experimental foi em blocos casualizados, com 6 tratamentos e 5 repetições, onde cada parcela conteve 4 plantas. Anotou-se a altura da planta e o Diâmetro à Altura do Colo (DAC a 0,05 m do solo), o Diâmetro à Altura do Peito (DAP a 1,30 m do solo). O sistema de avaliação para coleta de dados adotado foi o de parcelas permanentes. Os resultados foram submetidos a análise estatística, que demonstram efeito não significativo a 5% de probabilidade para os tratamentos aplicados.

O nim (Azadirachta indica) é conhecido na Ásia devido a várias propriedades biológicas conhecidas desde a antigüidade. Os estudos referentes à ação inseticida dessa planta restringem-se a análise de seus mecanismos de ação sobre insetos e também de seus efeitos sobre trabalhadores rurais que fazem uso de produtos a base de nim; não havendo, na literatura pesquisada, trabalhos relativos aos impactos causados sobre o sistema vegetal. As plantas, assim como outros organismos, possuem a capacidade de se defenderem contra ataque de patógenos. Uma das respostas desencadeadas pelo reconhecimento do patógeno pelas células vegetais é a reação de hipersensibilidade (RH), que envolve a morte imediata das células do sítio primário de infecção, oferecendo resistência ao crescimento do patógeno. A RH é caracterizada pela necrose dos tecidos onde primeiro se manifestou a infecção, e este processo de morte celular programada envolve uma série de sinais que ainda não estão completamente elucidados. Neste trabalho, foram estabelecidas as condições do meio de cultura de células de Rubus fruticosus para os estudos com extrato de sementes de nim, avaliado o efeito elicitor deste sobre a cultura. Foram obtidos extratos hidroalcoólicos E1 e E2 e suas respectivas frações lioflizadas, L1 e L2. Estes extratos apresentaram maior teor de açúcares e lipídeos em sua composição e revelaram potencial antioxidante. Detectou-se a presença de AZA-A em L1 e L2, por meio de CLAE, cujos teores foram de 5,03 e 1,1 mg/mL, respectivamente, com tempo de retenção em torno de 9,5 minutos, confirmado por meio de análises via espectrometria de massas. O extrato L2 foi fracionado nas frações L2 inicial e AZA2. O extrato L2, nas concentrações de 0,1; 0,5; 1 e 5 mg/mL, e destas frações AZA2 e L2 inicial nas proporções do extrato L2 nestas concentrações, elicitaram células de Rubus fruticosus. O extrato L2, nas concentrações de 0,1; 0,5; 1 e 5 mg/mL, e suas frações AZA2 e L2 inicial nas proporções do extrato L2 nestas concentrações, elicitaram células de Rubus fruticosus. As células de Rubus fruticosus (1,8g) foram incubadas em tampão citrato de sódio contendo o extrato L2 e as frações L2 inicial e AZA2, separadamente, até a concentração de 5 mg/mL, por 1h, em temperatura ambiente. Após este período, os compostos fenólicos, proteínas e açúcares redutores foram determinados no meio extracelular e intracelular por métodos colorimétricos. O efeito destas frações e do extrato L2, na produção de EROs em células intactas de Rubus fruticosus, foi analisado usando a sonda diacetato 2,7-diclorofluoresceína (LEE et al., 1999; MURATA et al., 2001). Os resultados obtidos indicam que AZA isolada não teve efeito sobre respostas de defesa. A fração L2 inicial teve aumento de fenólicos intracelulares, de açúcares redutores extracelulares e diminuição de EROs, com o aumento da concentração do elicitor, indicando potencial antioxidante e mecanismo de defesa. O extrato L2 também demonstrou potencial antioxidante e protetor das células com o aumento da concentração do elicitor, além de possuir ação inseticida. / The neem (Azadirachta indica) is known in Asia due to their several biological properties. The studies on the insecticide action of neem extracts have only been restrict to the insect mechanisms and their effects on rural workers; studies on the impact in the vegetable system are not available. The plants, like the other organisms, have the ability to self-defend against attack of patogens. The hypersensitive response (RH), a type of programmed cell death (PCD) in plants, is triggered by plant cells when they recognize the patogen, and is characterized by necrosis of tissues in the local region surrounding the infection; the signals involved are still not completely elucidated. The present study evaluated the effects of neem extracts in Rubus fruticosus cell. The powdered seeds were submitted to two consecutive extractions with ethanol:water (1:1, v/v) at room temperature for 10 minutes, yielding E1 and E2 fractions. The solvent was evaporated and the aqueous extracts were concentrated and lyophilized, resulting in two samples, L1 and L2. They are used for analyses by high performance liquid chromatograph (HPLC) in C-18 column (4.6 x 250 mm), with acetonitrile-water (4:6 v/v) as mobile phase, flow rate 1 mL/min, monitored at 214 nm. The principal compound of this fraction was azadirachtin (5.03 and 1.1 mg/mL, respectively), the retention time was 9.5 min; it was confirmed using mass spectrophotometry. The L2 extract was partially fractionated by high performance liquid chromatograph (HPLC) in semi preparative C-18 column. The main fractions, analyzed by colorimetric methods, ESI-MS, were L2 initial and AZA2. The Rubus fruticosus cells (18-21 days; 1.8 g) were incubated in sodium citrate buffer containing L2, L2 initial ans AZA2 at concentrations up to 5 mg/mL, for 1h, at room temperature. After this period, the phenolic compounds, proteins and reducing sugar were determined in the extracellular and intracellular medium by colorimetric methods. Also, the effects of these fractions over the production of reactive oxygen species (ROS) in intact cell of Rubus fruticosus, was analyzed using 2,7-dichloro-fluorescein diacetate. AZA2 had no effect on the defense response. The initial L2 fraction increased the phenolic compounds in the intracellular medium and the reducing sugars in the extracellular medium. The same fraction showed an inhibitory effect on ROS and also increased the concentration of the elicitor. These results indicate the antioxidant potential and protector effect of the L2 initial. The L2 extract also demonstrated antioxidant and protective potential of cells with the increase of the elicitor concentration. Therefore, in parallel with its insecticide action, the neem extract contributes to the self-defense ability of the plants.

As plantas, assim como outros organismos, possuem a capacidade de se defenderem contra ataque de patógenos. Uma das respostas desencadeadas pelo reconhecimento do patógeno pelas células vegetais é a reação de hipersensibilidade (RH), que envolve a morte imediata das células do sítio primário de infecção, oferecendo resistência ao crescimento do patógeno. Muitas evidências sugerem a participação da mitocôndria neste processo de morte celular programa. O nim (Azadirachta indica) é conhecido devido as suas propriedades medicinais e inseticidas, sendo que os estudos sobre a ação inseticida dessa planta restringem-se a análise de seus mecanismos de ação sobre insetos e também de seus efeitos sobre trabalhadores rurais que fazem uso de produtos a base de nim. Entretanto não há na literatura pesquisada, trabalhos de seus impactos sobre o sistema vegetal. A partir dos resultados previamente obtidos em nosso laboratório e com as análises dos dados da literatura, consideramos de grande importância dar continuidade a esse estudo do efeito do nim como elicitor, avaliando quais mecanismos que levam ao fenômeno de resistência vegetal. O extrato de nim (EB) foi preparado a partir das sementes, sendo caracterizado bioquimicamente pela quantificação de compostos fenólicos, açúcares e proteínas. A atividade antioxidante foi avaliada sendo possível observar que o extrato das sementes de nim possui forte atividade antioxidante de maneira dose-dependente com IC50 de 14,85 mg/mL. Para os ensaios biológicos foi utilizado EB nas concentrações de 0,1 a 5 mg/mL isolado ou em associação com AS a 1 µmol/L ou 1 mmol/L. Para determinação da morte celular foi observado o efeito do EB nas concentrações de 5 e 0,1 mg/mL isolado ou em associação com AS 1 µmol/L nos tempos de 0 a 8 horas. Diante dos resultados foi observado que o EB na concentração de 0,1 mg/mL isolado ou em associação com AS 1 µmol/L foi capaz de causar morte celular em células de Rubus fruticosus de forma mais significativa do que o EB isolado ou em associação com AS na concentração de 5 mg/mL. No tempo de 8 horas, foi observado uma porcentagem de morte celular de 64 % para células elicitadas com EB 0,1 mg/mL isolado e 71 % para células elicitadas com EB 0,1 mg/mL em associação com AS. A diminuição da produção de EROs e da produção de AS endógeno bem como o aumento da produção de compostos fenólicos foi observado em células intactas elicitadas com EB isolado. No entanto quando a células foram elicitadas com EB em associação com AS observamos uma diminuição da produção de compostos fenólicos com o aumento da produção de AS endógeno. Em mitocôndrias isoladas foi avaliado o consumo de oxigênio, o potencial de membrana e a produção de EROs com o EB isolado e sua associação com AS 1 mmol/L. Foi observado que o EB isolado ou em associação com AS foi capaz de diminuir a velocidade de consumo de oxigênio pela cadeia respiratória sendo este efeito mais acentuado quando o nim foi administrado juntamente com AS, onde a porcentagem de inibição da velocidade de consumo de oxigênio pela cadeia respiratória na presença de EB em associação com AS foi de 79 % no estado 3 da respiração e 62 % no estado 4. Sobre o potencial de membrana observamos que o EB isolado ou em associação com AS foi capaz de diminuir o potencial de membrana, porém de forma pouco significativa. Para a produção de EROs observamos que o EB isolado foi capaz de diminuir a produção de EROs em mitocôndrias isoladas em cerca de 55 a 20 % na presença de antimicina A e 39 a 10 % na presença de rotenona, porém quando o EB foi administrado juntamente com AS observamos uma diminuição da produção de EROs somente para o EB nas concentrações de 0,5; 1 e 5 mg/mL. Com os resultados apresentados neste trabalho e os resultados obtidos anteriormente em nosso laboratório é possível sugerir que o extrato das sementes de nim possui um efeito protetor sobre células de Rubus fruticosus. / Plants, like other organisms, have the capacity to defend themselves against attack by pathogens. One of the responses triggered by pathogen recognition by plant cells is the hypersensitive response (HR), which involves the immediate death of cells in the primary site of infection, providing resistance to the pathogen growth. In this regard, it has been well established that mitochondria are involved in cell death. The neem tree (Azadirachta indica) is known due to its medicinal and insecticidal properties; studies on the insecticidal action of this plant had been restricted to the analysis of their action mechanisms on insects and their effects on rural workers who use neem-based products. However, its impact on plant systems has not been addressed. Considering previous results from our laboratory and literature data we assessed the effects of neem as elicitor, particularly the mechanisms leading to the phenomenon of plant resistance. The neem extract (EB) was prepared from the seeds, characterized biochemically by quantification of phenolic compounds, sugars and proteins. The extract showed strong dose-dependent antioxidant activity (IC50 of 14.85 mg/mL). EB concentrations of 0.1-5 mg/mL, alone or in association with 1 mol/L or 1 mmol/L SA (salicylic acid), were used for the biological assays. For cell death assays, EB was employed in concentrations of 0.1 and 5.0 mg/mL, alone or in association with 1 mol/L SA, during 0-8 hours. EB (0.1 mg/mL), alone or in association with 1 mol/L SA, induced Rubus fruticosus cell death more efficiently than EB alone or in association with 5 mg/mL SA. After 8 hours, a 64% of death of cells elicited with 0.1 mg/mL EB and 71% of death of cells elicited with 0.1 mg/mL EB in association with SA, was observed. Decrease in ROS generation and production of endogenous SA, as well as increased production of phenolic compounds, was observed in intact cells elicited with EB alone. However, when cells were elicited with EB in association with SA, a decreased production of phenolic compounds and an increased production of endogenous SA, was observed. In isolated mitochondria, it was measured oxygen consumption, membrane potential and ROS production for EB alone or in association with 1 mmol/L SA. In either conditions, EB decreased oxygen consumption by the respiratory chain, an effect more pronounced in association with SA: ~79 % inhibition for state 3 and ~ 62 % for state 4 respiration. Also, either neem alone or in association with SA decreased mitochondrial membrane potential, as well as ROS generation to an extent of 55-20% in the presence of antimycin A and 39-10% in the presence of rotenone; in association with SA, EB decreased ROS at 5, 1 and 0.5 mg/mL. Together with our previous study, these results suggest that neem seeds extract has a protective effect on Rubus fruticosus cells by scavenging, via phenolic compounds, reactive oxygen species generated by SA, thereby decreasing its action as cell death inducer.

O nim (Azadirachta indica) é conhecido na Ásia devido a várias propriedades biológicas conhecidas desde a antigüidade. Os estudos referentes à ação inseticida dessa planta restringem-se a análise de seus mecanismos de ação sobre insetos e também de seus efeitos sobre trabalhadores rurais que fazem uso de produtos a base de nim; não havendo, na literatura pesquisada, trabalhos relativos aos impactos causados sobre o sistema vegetal. As plantas, assim como outros organismos, possuem a capacidade de se defenderem contra ataque de patógenos. Uma das respostas desencadeadas pelo reconhecimento do patógeno pelas células vegetais é a reação de hipersensibilidade (RH), que envolve a morte imediata das células do sítio primário de infecção, oferecendo resistência ao crescimento do patógeno. A RH é caracterizada pela necrose dos tecidos onde primeiro se manifestou a infecção, e este processo de morte celular programada envolve uma série de sinais que ainda não estão completamente elucidados. Neste trabalho, foram estabelecidas as condições do meio de cultura de células de Rubus fruticosus para os estudos com extrato de sementes de nim, avaliado o efeito elicitor deste sobre a cultura. Foram obtidos extratos hidroalcoólicos E1 e E2 e suas respectivas frações lioflizadas, L1 e L2. Estes extratos apresentaram maior teor de açúcares e lipídeos em sua composição e revelaram potencial antioxidante. Detectou-se a presença de AZA-A em L1 e L2, por meio de CLAE, cujos teores foram de 5,03 e 1,1 mg/mL, respectivamente, com tempo de retenção em torno de 9,5 minutos, confirmado por meio de análises via espectrometria de massas. O extrato L2 foi fracionado nas frações L2 inicial e AZA2. O extrato L2, nas concentrações de 0,1; 0,5; 1 e 5 mg/mL, e destas frações AZA2 e L2 inicial nas proporções do extrato L2 nestas concentrações, elicitaram células de Rubus fruticosus. O extrato L2, nas concentrações de 0,1; 0,5; 1 e 5 mg/mL, e suas frações AZA2 e L2 inicial nas proporções do extrato L2 nestas concentrações, elicitaram células de Rubus fruticosus. As células de Rubus fruticosus (1,8g) foram incubadas em tampão citrato de sódio contendo o extrato L2 e as frações L2 inicial e AZA2, separadamente, até a concentração de 5 mg/mL, por 1h, em temperatura ambiente. Após este período, os compostos fenólicos, proteínas e açúcares redutores foram determinados no meio extracelular e intracelular por métodos colorimétricos. O efeito destas frações e do extrato L2, na produção de EROs em células intactas de Rubus fruticosus, foi analisado usando a sonda diacetato 2,7-diclorofluoresceína (LEE et al., 1999; MURATA et al., 2001). Os resultados obtidos indicam que AZA isolada não teve efeito sobre respostas de defesa. A fração L2 inicial teve aumento de fenólicos intracelulares, de açúcares redutores extracelulares e diminuição de EROs, com o aumento da concentração do elicitor, indicando potencial antioxidante e mecanismo de defesa. O extrato L2 também demonstrou potencial antioxidante e protetor das células com o aumento da concentração do elicitor, além de possuir ação inseticida. / The neem (Azadirachta indica) is known in Asia due to their several biological properties. The studies on the insecticide action of neem extracts have only been restrict to the insect mechanisms and their effects on rural workers; studies on the impact in the vegetable system are not available. The plants, like the other organisms, have the ability to self-defend against attack of patogens. The hypersensitive response (RH), a type of programmed cell death (PCD) in plants, is triggered by plant cells when they recognize the patogen, and is characterized by necrosis of tissues in the local region surrounding the infection; the signals involved are still not completely elucidated. The present study evaluated the effects of neem extracts in Rubus fruticosus cell. The powdered seeds were submitted to two consecutive extractions with ethanol:water (1:1, v/v) at room temperature for 10 minutes, yielding E1 and E2 fractions. The solvent was evaporated and the aqueous extracts were concentrated and lyophilized, resulting in two samples, L1 and L2. They are used for analyses by high performance liquid chromatograph (HPLC) in C-18 column (4.6 x 250 mm), with acetonitrile-water (4:6 v/v) as mobile phase, flow rate 1 mL/min, monitored at 214 nm. The principal compound of this fraction was azadirachtin (5.03 and 1.1 mg/mL, respectively), the retention time was 9.5 min; it was confirmed using mass spectrophotometry. The L2 extract was partially fractionated by high performance liquid chromatograph (HPLC) in semi preparative C-18 column. The main fractions, analyzed by colorimetric methods, ESI-MS, were L2 initial and AZA2. The Rubus fruticosus cells (18-21 days; 1.8 g) were incubated in sodium citrate buffer containing L2, L2 initial ans AZA2 at concentrations up to 5 mg/mL, for 1h, at room temperature. After this period, the phenolic compounds, proteins and reducing sugar were determined in the extracellular and intracellular medium by colorimetric methods. Also, the effects of these fractions over the production of reactive oxygen species (ROS) in intact cell of Rubus fruticosus, was analyzed using 2,7-dichloro-fluorescein diacetate. AZA2 had no effect on the defense response. The initial L2 fraction increased the phenolic compounds in the intracellular medium and the reducing sugars in the extracellular medium. The same fraction showed an inhibitory effect on ROS and also increased the concentration of the elicitor. These results indicate the antioxidant potential and protector effect of the L2 initial. The L2 extract also demonstrated antioxidant and protective potential of cells with the increase of the elicitor concentration. Therefore, in parallel with its insecticide action, the neem extract contributes to the self-defense ability of the plants.

L'objectif de notre travail est de déterminer des algorithmes qui facilitent la résolution de jeux combinatoires par des calculs informatiques. En premier lieu, nous expliquons comment l'implémentation du nimber permet d'accélérer le calcul de jeux impartiaux en version normale. Puis, nous proposons des raffinements ou des généralisations d'algorithmes de parcours des arbres de jeu, en particulier le PN-search, tout en discutant de l'intérêt de l'intervention humaine lors de l'exécution de ces algorithmes. Enfin, nous présentons des algorithmes de vérification, dont le but initial était de s'assurer de la validité de nos calculs, mais qui permettent également d'obtenir des arbres solutions de taille réduite. Ces techniques sont appliquées à l'étude de deux jeux : le Sprouts, où les joueurs relient des points par des lignes, et le Dots-and-boxes, dont le but est de compléter le maximum de boîtes en plaçant des arêtes. Le Sprouts est un jeu combinatoire impartial, dont la nature topologique rend difficile la représentation informatique. Nous explicitons une telle représentation, avant d'étudier une généralisation où le jeu se déroule sur des surfaces compactes. Le Dots-and-boxes est un jeu partisan, et nous détaillons diverses simplifications théoriques qui nous ont permis d'obtenir informatiquement des résultats nouveaux sur ce jeu.

Nous cherchons dans cette thèse à calculer les stratégies gagnantes de jeux combinatoires avec un programme informatique. Nous montrons comment les découpages qui apparaissent au sein de certains jeux impartiaux peuvent être utilisés pour accélérer les calculs. Nous détaillons en particulier l'utilisation du concept d'arbre canonique réduit dans les calculs en version misère. Ces méthodes ont été appliquées avec succès au calcul de deux jeux impartiaux en apparence très différents : le Sprouts, où les joueurs relient des points par des lignes, et le Cram, qui consiste à remplir un plateau avec des dominos. Nous exposons ensuite une méthode originale de suivi des calculs de jeux, avec des interactions en temps réel par l'opérateur humain. Enfin, nous décrivons l'architecture du programme modulaire qui nous a permis de réaliser de nombreux calculs différents au sein d'un cadre commun, et qui pourrait être étendu à l'avenir à d'autres jeux ou algorithmes.