CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Estudos mostraram que os complexos de rutÃnio apresentaram menos toxicidade que os fÃrmacos utilizados atualmente. Com isso esses complexos estÃo sendo utilizados como agentes antitumorais, sendo que alguns podem ser fotoativados, podendo ser utilizados em terapia fotodinÃmica. Baseando-se nesses estudos foram utilizados dois complexos de rutÃnio, cis-[Ru(bpy)2(SO3)(NO)](PF6)](A) e cis-[Ru(bpy)2(SO3)(H2O)](B), onde serà comparada a sua aÃÃo devido a diferenÃa do ligante, sabe-se que complexos nitrosilados de rutÃnio estÃo sendo alvo de estudos, devido a aÃÃo do ligante NO em sistemas biolÃgicos. Os experimentos empregando a tÃcnica de eletroforese mostraram a atividade de interaÃÃo/clivagem do complexo com o DNA, somente quando irradiado e dependente da concentraÃÃo dos complexos. Os testes de reatividade com perÃxido de hidrogÃnio, tambÃm mostraram efeitos de clivagem de DNA, na ausÃncia e presenÃa luz. A utilizaÃÃo de inibidores de radicais sugeriu que o mecanismo de interaÃÃo entre os complexos A e B e o DNA à oxidativo, devido a identificaÃÃo de espÃcies oxidativas. A adiÃÃo de NaCl para verificar o mecanismo de interaÃÃo do complexo, permitiu constatar que os dois complexos em estudo fazem interaÃÃes eletrostÃticas com o DNA. Foram utilizados dois ligantes de sulco, que sugeriu a interaÃÃo por sulco maior do complexo A, no entanto nÃo ficou claro se ocorre interaÃÃo tambÃm por sulco menor, e para o complexo B verificou-se que o complexo nÃo apresenta seletividade, podendo se ligar pelos dois sulcos. Os testes de UV mostram mudanÃa nas bandas dos complexos, que pode ser indÃcio de interaÃÃo dos complexos A e B. As anÃlises em coluna de exclusÃo mostram as bandas que indicam interaÃÃo entre os complexos e o DNA. A determinaÃÃo de Kb 1,31 x 105 M-1 (A) e 3,77 x 104 M-1(B) mostraram que os complexos se ligam ao DNA, e estÃo dentro da ordem encontrada para os complexos que apresentam interaÃÃo. O experimento de viscosimetria indicou a ocorrÃncia de interaÃÃo eletrostÃtica entre os complexos. O teste de AFM mostrou que os complexos A e B alteraram a conformaÃÃo do DNA, indicando interaÃÃo. A tÃcnica de EPR mostrou o surgimento de radicais livres, na presenÃa do complexo A e H2O2 mesmo sem irradiaÃÃo. / Studies have shown that the ruthenium complexes have less toxicity than the presently used drugs. Then that complexes are being as antitumor agents, some of which can be photoactivated and can be used in photodynamic therapy. Based on these studies we used two ruthenium complexes, cis- [Ru (bpy)2 (SO3) (NO)] (PF6)] (A) and cis- [Ru (bpy)2 (SO3) (H2O)] (B), where its action will be compared due to the difference in the binder, it is known that ruthenium complex nitrosylated are being studied because of the action of the binder NO in biological systems. The experiments employing electrophoresis showed the activity of interaction / cleavage of the complex with ADN, only when irradiated and dependent on the concentration of the complexes. The reactivity tests with hydrogen peroxide have also shown effects of ADN cleavage in the absence and presence of light. The use of radical inhibitors suggested that the mechanism of interaction between A and B complex and the ADN is oxidative, because oxidative species identification. The addition of NaCl to verify the complex interaction mechanism, allowed to state the two complex under study are electrostatic interactions with the ADN. They used two groove binders, which suggests interaction through the major groove of the complex, however it is unclear whether occurring interaction also a minor groove, and the B complex found that the complex shows no selectivity, may bind by two grooves. UV tests show changes in the bands of the complex, which may indicate complex interaction of A and B. The tests exclusion column show the bands indicating interaction between the complex and ADN. The determination Kb 1.31 x 105 M-1 (A) and 3.77 x 104 M-1 (B) showed that the complexes bind to ADN and are within the range found for the complex to exhibit interaction. The viscosimetry experiment indicated the occurrence of electrostatic interaction between the complexes. The AFM test showed that the complexes A and B changed the conformation of ADN, indicating interaction. The EPR technique showed the appearance of free radicals in the presence of the complex and H2O2 even without irradiation.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / INTRODUÃÃO: Recentemente nÃs demonstramos que o sildenafil tem efeito protetor contra a lesÃo gÃstrica induzida por AINEs em ratos, atravÃs de uma diminuiÃÃo na aderÃncia de leucÃcitos e aumento do fluxo sanguÃneo gÃstrico (Santos CL et al, BJP, 2005). O etanol induz lesÃo hemorrÃgica gÃstrica em ratos atravÃs de um aumento na produÃÃo de radicais livres e diminuiÃÃo da concentraÃÃo de glutationa na mucosa. OBJETIVOS: O objetivo deste trabalho foi investigar se o sildenafil possui efeito protetor contra a lesÃo induzida por Ãlcool, e avaliar o papel da via NO/GMPc/KATP no efeito gastroprotetor do sildenafil. MÃTODOS: O sildenafil (0.1, 0.3, 1, ou 3 mg/Kg, v.o) foi administrado 30 min antes do etanol 100% (4 ml/Kg, v.o). Depois de 1 h, os ratos foram sacrificados e os estÃmagos abertos para determinaÃÃo da Ãrea da lesÃo usando planimetria computadorizada. AlÃm disso, fragmentos de tecidos foram removidos para anÃlise microscÃpica e dosagem de glutationa e hemoglobina (teste colorimÃtrico - Bioclin). Os outros grupos foram tratados com L-NAME (1 ou 3 mg/kg, i.p), L-NAME (3 mg/kg, i.p) + L- Arg (200mg/kg, ip), ODQ (10 mg/Kg, v.o), glibenclamida (0.1, 0.3, 1 ou 3 mg/Kg, v.o), glibenclamida (1 mg/Kg) + diazÃxido (3mg/Kg, i.p) ou salina. ApÃs 30 min os ratos receberam sildenafil (1mg/kg) e depois de mais 30 min etanol 100% (4ml/kg, v.o), com o sacrifÃcio ocorrendo 1 h depois. RESULTADOS: O etanol 100% causou lesÃo gÃstrica (158.9 Â 9.3 mm2), hemorragia na mucosa (3787.0 Â 512.9 Âg/100mg) e reduÃÃo da concentraÃÃo de glutationa (78.7 Â 9.5 Âg/g). O Sildenafil protegeu, de forma dose-dependente, a mucosa gÃstrica do efeito do Ãlcool, com o efeito mÃximo na dose de 1 mg/Kg (44.5 Â 7.7 mm2). O sildenafil tambÃm reverteu a diminuiÃÃo da glutationa (143.6 Â 15.7 Âg/g) induzida por etanol. O L-NAME sozinho (151.1 Â 20.9 mm2), o ODQ (137.9 Â 41.6 mm2) e a glibenclamida sozinha (137.1 Â 16,7 mm2) reverteram a proteÃÃo do sildenafil. Mas, nos animais tratados com L-NAME + L-arginina (30.9 Â 10.5 mm2) ou glibenclamida + diazÃxido (60.3 Â 2.0 mm2) nÃo houve mudanÃas no efeito do sildenafil. CONCLUSÃES: O sildenafil protege a mucosa gÃstrica contra a lesÃo induzida por Ãlcool, atravÃs da ativaÃÃo da via NO/GMPc/KATP e por um aumento dos nÃveis de GSH no estÃmago / INTRODUCTION: Recently, we demonstrated that sildenafil has protective effects against NSAID- induced gastric damage in rats, by a decrease in leukocytes adherence and increase in gastric blood flow (Santos CL et al, BJP, 2005). Ethanol induced gastric hemorrhagic damage in rats, by an increase in free radical production and decrease in mucosal glutathione concentration. AIMS: Aim of was work is to investigate if sildenafil has a protective effect against ethanol- induced gastric damage and the role of the way NO/cGMP/KATP in this event. METHODS: Sildenafil (0.1, 0.3, 1, or 3 mg/Kg, p.o) was administrated 30 min before ethanol 100% (4 ml/Kg, p.o). After 1 hour, rats were sacrificed and the stomachs opened along the greater curvature and the mucosal lesion area was measured by computer planimetry program. Furthermore, pieces of gastric mucosal were removed for microscopic analysis and glutathione measure, and hemoglobin concentrations (colorimetric test Bioclin). Other groups had been dealt with L-NAME (1 or 3 mg/kg, i.p), L-NAME (3 mg/kg, i.p) + L- Arg (200mg/kg, i.p), ODQ (10 mg/Kg, p.o), glibenclamide (0.1, 0.3, 1 ou 3 mg/Kg, p.o), glibenclamide (1 mg/Kg) + diazÃxide (3mg/Kg, i.p) ou saline. After 30 min the rats had received sildenafil (1mg/kg), and after more 30 min ethanol 100% (4ml/kg, p.o), with the sacrifice occurring 1 h later. RESULTS: Absolute ethanol induced gastric damage (158.9 Â 9.3 mm2), and gastric mucosal hemorrhage (3787.0 Â 512.9 Âg/100mg) and reduced gastric glutathione concentration (78.7 Â 9.5 Âg/g). Sildenafil protected, in a dose dependent manner, the ethanol- induced gastric damage , with the maximum effect in the dose of 1 mg/Kg (44.5 Â 7.7 mm2). Sildenafil also reversed the decreased in gastric glutathione (143.6 Â 15.7 Âg/g) induced by ethanol. Alone L-NAME (151.1 Â 20.9 mm2), ODQ (137.9 Â 41.6 mm2) and glibenclamide alone (137.1 Â 16,7 mm2) reverted the protection of the sildenafil. But, in the animals trated with L-NAME + L-arginine (30.9 Â 10.5 mm2), or glibenclamide + diazÃxido (60.3 Â 2.0 mm2) did not have changes in the effect of the sildenafil. CONCLUSION: Sildenafil had a gastric protective effect against ethanol- induced gastric damage through the activation of the NO/cGMP/KATP pathway, at least in part through a increase in stomach GSH

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The endothelium plays a crucial role in the vascular tone, releasing relaxing and contracting factors â among the first ones the gas nitric oxide, produced from the amino acid L-arginine and a group of enzimes called nitric oxide synthases (NOS). This study evaluated the effects of L-arginine as well as NOS inibitors on vascular escape and tachyphylaxis of rabbit kidneys. Furthermore the effects of diabetes and hypothermia were studied also. Normal and alloxan treated diabetic rabbit kidneys were perfused with Krebs-Henseleit solution in a non-recirculating system and norepinephrine (NO) 1 microM was infused for three subsequent periods of 20 min each, with an inteval of 10 min for drug wash-out. In the control group L-arginine and D-arginine were added to the solution (both 1 microM) as well as the NOS inibitors L-NMA (10 microM) and LNOARG (10 microM). This group was also submitted to hypothermia (25o C). The kidneys from diabetic animals were separated in non treated and treated with GSH (1 microM) and rutin (1 microM). The treatment with the NOS inibitor LNOARG increased the basal (steady state) pressure (p<0.001). The L-arginine treatment decreased both basal (p<0.05) and maximal (p<0.01) pressures (after NOR infusion). The nitro-methyL-L-arginine treatment increased the maximal pressures (p<0.05). Diabetes increased both basal (p<0.001) and maximal (p<0.001) pressures. In the control kidneys the infusion of NOR promoted an intense vasoconstriction, which was less intense during the second and the third periods of infusion- what is called tachyphylaxis. The kidneys under hypothermia showed tachyphylaxis only in the second period. But the group treated with L-arginine didnât show tachyphylaxis â instead the values became higher and higher at each period of infusion of NOR. However we should be cautious about these results since they didnât reach a p<0.05 value. The diabetic group showed a substantially decreased escape when compared to control (p<0.05), but this effect was partially reversed by the treatment with GSH and rutin. In the kidneys from euglycemic rabbits those treated with L-arginine â but not D-arginine â showed an increased escape when compared to control. But this result wasnât significant. Hypothermia showed a decreased escape too that wasnât significant, either. / O endotÃlio exerce relevante papel no controle do tÃnus vascular, produzindo substÃncias vasoativas relaxantes e constritoras â entre as primeiras, o gÃs Ãxido nÃtrico, produzido a partir do aminoÃcido L-arginina e um conjunto de enzimas chamadas Ãxido nÃtrico sintetases (NOS). Esse estudo avaliou os efeitos da L-arginina, bem como de inibidores de NOS sobre o escape vascular e a taquifilaxia de rins de coelhos. AlÃm disso, os efeitos do diabetes e da hipotermia tambÃm foram estudados. Rins de coelhos normais e com diabetes aloxÃnico foram perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Henseleit em um sistema aberto e a norepinefrina (NOR) 1 microM foi infundida por trÃs perÃodos consecutivos de 20 min cada, com intervalos de 10 min para lavagem. No grupo controle, L-arginina e D-arginina foram adicionadas (ambas a 1 microM), bem como os inibidores de NOS, nitro-metiL-L-arginina (10 microM) e n(omega)-nitro-L-arginina (10 microM). Esse grupo foi tambÃm submetido a hipotermia (25o C). Os rins de animais diabÃticos foram agrupados em nÃo tratados e tratados com glutationa reduzida (1 microM) e rutina (1 microM). O tratamento com LNOARG elevou a pressÃo basal (p<0.001). O tratamento com L-arginina reduziu tanto a pressÃo basal (p<0.05) como a mÃxima (p<0.01). O tratamento com nitro-metiL-L-arginina elevou a pressÃo mÃxima (p<0.05). O diabetes elevou tanto a pressÃo basal (p<0.001) como a mÃxima (p<0.01). Nos rins do grupo controle, a infusÃo de NOR promoveu uma intensa vasoconstriÃÃo, a qual foi menos intensa durante o segundo e o terceiro perÃodo de infusÃo â caracterizando o fenÃmeno de taquifilaxia. Os rins sob hipotermia exibiram taquifilaxia apenas no segundo perÃodo. Mas, o grupo tratado com L-arginina nÃo mostrou taquifilaxia â ao contrÃrio, os valores tornaram-se mais altos a cada perÃodo de infusÃo de NOR. Todavia, precisamos encarar esses resultados com reserva, pois nÃo atingiram significÃncia estatÃstica ao nÃvel desejado, ou seja, p<0.05. O grupo diabÃtico mostrou um escape bastante reduzido se comparado ao grupo controle (p<0.05), mas esse efeito foi parcialmente revertido pelo tratamento com glutationa reduzida e rutina. Dentre os rins do grupo de animais euglicÃmicos, aqueles tratados com L-arginina â mas nÃo com D-arginina â exibiram um escape elevado se comparados aos do grupo controle. Contudo, esse resultado tambÃm nÃo alcanÃou significÃncia estatÃstica, isto Ã, p<0.05. A hipotermia, por sua vez, mostrou uma reduÃÃo no escape, novamente sem o nÃvel de significÃncia almejado (p<0.05).

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As serpentes do gÃnero Bothrops sÃo responsÃveis pela maior parte dos acidentes ofÃdicos ocorridos no Brasil, representando um sÃrio problema de saÃde pÃblica pela freqÃÃncia com que ocorrem e pela morbidade e mortalidade que ocasionam. Envenenamento por serpente Bothrops atrox conduz à alteraÃÃo sistÃmica que à responsÃvel pela causa preliminar de morte apÃs acidente ofÃdico. Esse trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos farmacolÃgicos do veneno bruto da serpente Bothrops atrox (VBA) na perspectiva de elucidaÃÃo dos mecanismos fisiopatolÃgicos causados aos tecidos. Primeiramente, avaliou-se as aÃÃes do VBA no sistema de perfusÃo renal, no qual o ÃrgÃo era exposto à peÃonha de B. atrox para se avaliar as possÃveis alteraÃÃes dos parÃmetros renais. ApÃs a perfusÃo renal, os rins foram submetidos à anÃlise histolÃgica. Os parÃmetros foram analisados pelo ANOVA e Student t-test, com p<0,005. Os resultados encontrados demonstraram que VBA promoveu diminuiÃÃo significativa na pressÃo de perfusÃo (PP) e na resistÃncia vascular renal (RVR). O fluxo urinÃrio (FU) e o ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG) aumentaram significativamente. Foi observado aumento e diminuiÃÃo do percentual de transporte de cloreto e sÃdio, respectivamente. As alteraÃÃes histolÃgicas dos rins perfundidos foram discretas, indicando presenÃa de material proteinÃceo nos glomÃrulos e tÃbulos. Realizou-se uma investigaÃÃo da participaÃÃo do Ãxido nÃtrico (NO) nos efeitos sistÃmicos causados por VBA, em um experimento in vivo. Houve um aumento na produÃÃo de nitrito no sangue dos animais tratados com VBA. Efetuou-se o bloqueio farmacolÃgico com L-NAME e o aumento na produÃÃo de nitrito foi abolida. AtravÃs desses resultados conclui-se que o VBA causa alteraÃÃo nos parÃmetros renais e induz aumento na produÃÃo de Ãxido. / Snakes of the genera Bothrops are the most responsible for ophidian accidents occurred in Brazil, representing a serious public health problem due to their frequency, morbity and mortality rates. Envenomation caused by the species Bothrops atrox leads to systemic complication, which is responsible for the preliminary cause of death after ophidian accident. The aim of this work was to evaluate the pharmacological effects of the crude venom of Bothrops atrox (VBA), in perspective of elucidating the physiopathological mechanisms occurred in the tissues. First of all, the actions of VBA were evaluated in the renal perfusion system, in which the organ was exposed to the venom of B. atrox to evaluate possible renal parameters alterations. After the renal perfusion, the kidneys were submitted to histological analysis. The parameters were analyzed by ANOVA and Student t-test, with p<0,005. The results showed that VBA decreased the perfusion pressure (PP) and renal vascular resistance (RVR) significantly as in contrast with the urinary flow (UF) and glomerular filtration rate (GFR) which had a significant increase. It was observed both increase and reduction of the percentage of chloride and sodium transport, respectively. The histological alterations of the perfused kidneys were discrete, indicating the presence of proteinaceous substance in the glomeruli and tubules. An investigation was made - in an in vivo experiment - into the participation of nitric oxide (NO) in the systemic effects induced by VBA. There was an increase of the nitrite production in the blood of animals that received the VBA treatment. Pharmacological blockade with L-NAME was carried out and the increase of the nitrite production was nullified. Due to these results, we conclude that VBA causes alterations on renal parameters and it induces increase of the oxide production.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Lectinas sÃo (glico)proteÃnas que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substÃncias derivadas de aÃÃcares. SÃo encontradas nos reinos vegetal e animal. Hypnea cervicornis à uma espÃcie de alga marinha vermelha encontrada no nordeste do Brasil da qual foi isolada a lectina H. cervicornis aglutinina (HCA), um polipeptideo que contÃm 90 resÃduos de aminoÃcidos (9193 Da) que se ligam especificamente a glicoproteÃnas do tipo mucina. O objetivo do presente trabalho foi estudar as atividades antiinflamatÃria e antinociceptiva, ainda nÃo exploradas, da HCA. Foram utilizados camundongos Swiss albinos (20-35g) ou ratos Wistar (150-250g). Para o estudo da atividade antiinflamatÃria da HCA, os ratos foram injetados e.v. somente com a lectina nas doses de 10-2; 10-1; 1 e 10 mg/Kg (peritonite) ou a dose de 1 mg/Kg em associaÃÃo com 5 mg/mL de mucina (1 mg/Kg). ApÃs esse procedimento, os animais foram avaliados nos modelo de peritonite induzida Cg (quimiotÃtico direto) ou por fMLP (quimiotÃtico indireto). HCA (10-1; 1 e 10 mg/Kg) inibiu a peritonite induzida por Cg e por fMLP. Observamos que na peritonite induzida por Cg: A administraÃÃo conjunta de HCA (1 mg/Kg) com mucina inibiu sua atividade antiinflamatÃria (p<0,05), sugerindo participaÃÃo do sÃtio lectÃnico nesta atividade; o aquecimento de HCA a 100oC, por 10 minutos, inibiu seu efeito antiinflamatÃrio, indicando a importÃncia de sua estrutura; a microscopia intravital mostrou que a HCA (10 mg/Kg) reduziu o rolamento e adesÃo de leucÃcitos; a lectina induziu a produÃÃo de Ãxido nÃtrico (NO, reaÃÃo de Griess) no soro; Aminoguanidina e L-Nitro-Arginina inibiram a atividade da HCA; HCA nÃo reduziu as concentraÃÃes de citocinas TNF-&#945; e IL-1 no peritÃnio. A pressÃo arterial e o leucograma dos animais nÃo foram alterados pela administraÃÃo de HCA. A lectina nÃo age diretamente sobre neutrÃfilos, pois nÃo inibiu a quimiotaxia in vitro induzida por agente quimiotÃtico (MIP-2). No edema de pata induzido por Dextrana ou Cg, HCA (1 mg/Kg) inibiu significativamente (p<0,05) apenas o edema de pata induzido por Cg. O efeito antiedematogÃnico da HCA foi prevenido pela administraÃÃo conjunta com mucina. HCA reduziu as contorÃÃes induzidas por Ãcido acÃtico e seu efeito antinociceptivo foi prevenido pela administraÃÃo conjunta com mucina. HCA diminuiu somente a segunda fase do teste da formalina. No teste da placa quente, HCA nÃo apresentou efeito. A lectina tambÃm nÃo alterou a atividade locomotora. A toxicidade sub-crÃnica foi avaliada pelo tratamento de ratos com HCA (1mg/kg), durante sete dias consecutivos, atravÃs de vÃrios parÃmetros: funÃÃes do rim (peso Ãmido, dosagem de creatinina e urÃia) e do fÃgado (peso Ãmido, avaliaÃÃo da cinÃtica da aspartato amino transaminase e alanina amino transaminase), coraÃÃo (peso Ãmido), estÃmago (peso Ãmido e avaliaÃÃo visual de possÃveis lesÃes), variaÃÃo de massa corporal dos animais tratados e leucograma. Os resultados obtidos nÃo mostraram qualquer alteraÃÃo dos parÃmetros avaliados, demonstrando que a HCA nÃo apresenta nenhuma toxicidade nos animais. Em conjunto, esses dados revelam que a HCA apresenta atividade antiinflamatÃria e antinociceptiva que supostamente podem ser explicadas por bloqueio direto competitivo com carboidratos ligantes de selectinas e/ou indireto, via produÃÃo de NO, que diminuem o rolamento e adesÃo de leucÃcitos sobre o endotÃlio. / Lectins are (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. They are found throughout animal and vegetal kingdoms. Hypnea cervicornis is a species of marine red algae found in Northeast of Brazil from which was isolated the lectin Hypnea cervicornis aglutinin (HCA), a polypeptide containing 90 amino acid residues (9193 Da) that binds especifically to mucin-type glycoprotein. The objective of this work was to study the anti-inflammatory and anti-nociceptive activities of HCA not yet known. Albine Swiss mice (20-35g) and Wistar rats (150-250g) were used. For the study of HCA anti-inflammatory activity, the rats were injected (i.v.) with lectin alone in the doses of 10-2; 10-1; 1 e 10 mg/Kg (peritonitis) or a dose of 1 mg/Kg associated to 5 mg/mL of mucin (1 mg/Kg). Following this procedure, the animals were evaluated in the peritonitis model induced by Cg (direct neutrophil chemoatractant) or by fMLP (indirect neutrophil chemoatractant). HCA (10-1; 1 and 10 mg/Kg) inhibited Cg- and fMLP-induced peritonitis. In Cg-induced peritonitis it was observed that: the administration of HCA (1mg/Kg) in association with mucin inhibited its anti-inflammatory activity (p<0.05), suggesting the participation of the lectin site on this mechanism; heating HCA at 100oC, for 10 minutes, inhibited its anti-inflammatory effect, indicating the importance of its structure for that mechanism; the intravital microscopy showed that HCA reduced the rolling and adhesion of the leucocytes; the lectin induced the production of nitric oxide (NO Griess reaction) in serum; aminoguanidine and L-Nitro-arginin inhibited the HCA activity; HCA did not reduce the concentrations of TNF-&#945; and IL-1 in the peritoneum. The arterial pressure and the leukogram of the animals were not altered by the administration of HCA. The lectin does not act directly on neutrophils because it did not inhibit the in vitro chemotaxis induced by MIP-2, a chemotactic agent. In the carragenan (Cg)- or dextran-induced paw edema, HCA (1 mg/Kg) inhibited significantly (p<0.05) only the Cg-induced paw edema. The antiedematogenic effect of HCA was prevented when it was administered in association with mucin. HCA reduced the writhes induced by acetic acid and its antinociceptive effect was prevented by the association with mucin. HCA only decreased the second phase of formalin test. In the hot plate, HCA did not show any effects. The lectin did not alter the motor coordination. The HCA subcronic toxicity was evaluated treating rats with a dose of 1mg/Kg during seven days and analys of several parameters: kidney functions (wet weight, creatinin and urea serum concentrations), liver functions (wet weight, kinetic of serum aspartate aminotransferase and alanine aminotransferase), heart (wet weight) stomach (wet weight and visual evaluation of possible lesions), variation of body weight of treated animals and leukogram. The results showed no alterations of the evaluated parameters suggesting that HCA seems to be well tolerated by animals. The results taken together reveal that HCA presents anti-inflammatory and nociceptive activities which could be explained by direct competitive blockage with a common selectin carbohydrate ligand and/or indirectly, via NO production, which decrease of rolling and adhesion of leukocytes to endothelium.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Periodontitis, a relevant cause of teeth loss in adults, is a chronic inflammatory disease characterized by alveolar bone resorption and collagen fibers and cementum destruction. S-nitrosogluthathione (GSNO) is considered to be an NO donor and to act as a reservoir of NO in vivo. The objective of this study was to investigate the effect of GSNO in experimental periodontal disease (EPD). EPD was induced by a nylon thread ligature surgically placed around the cervix of the second left maxillary molars of female Wistar rats. Animals were treated with 50&#956;L GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1), PVP or saline subgingivally 30 minutes before periodontits induction and daily until sacrifice on 11th day. The parameters analysed were alveolar bone loss (ABL), bone alkaline phosphatase, myeloperoxidase (MPO), cytokines levels (IL-1&#946; and TNF-&#945;), malondialdeyhyde (MDA), reduced glutathione (GSH) content, nitrite/nitrate levels, and immunohistochemistry for metalloproteinase (MMP-1/8), inducible nitric oxide syntase (iNOS) and nuclear factor-&#954;B (NF&#954;B). In order to confirm the anti-inflammatory and antioxidant effect of GSNO was used the peritonitis and paw edema models. Peritonitis was induced by injection of 1 mL carrageenan (500 &#956;L/cavity) or saline ip in naÃve rats or in rats that received saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) 1 hour prior to the carrageenan. After 4 hours, the animals were sacrificed for collection of the fluid peritoneal. Paw edema was induced by subplantar injection of carrageenan (500 &#61549;g/paw). Saline, PVP or GSNO (0,5, 2 or 10 mmol L-1, ip) were administered 1 hour before the inflammatory stimuli into the left hind paw. The animals were sacrificed 4 hours after the ip injection of carrageenan. The parameters analysed were volume of paw edema, migration of leukocytes for cavity peritoneal, MPO, cytokines (IL-1&#946; and TNF-&#945;), GSH and MDA. The GSNO in the concentrations of 0,5 and 2 mmol L-1 reduced ABL, MPO, inflammatory cytokines (IL-1&#946; and TNF â&#945;), nitrite/nitrate, and it increased GSH. GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 also decreased the demarcation to MMP-1/-8, NOSi and NF -&#954;B. However, just GSNO 2 mmol L-1 reduced MDA. Results similar were found in the peritonitis and in the paw edema, added to the fact that GSNO 0,5 and 2 mmol L-1 decreased the volume of the paw edema and the migration of leukocytes and neutrophils to the cavity peritoneal. These results show that GSNO has a protective effect on the experimental periodontal disease, peritonitis and paw edema by reducing inflammation and oxidative stress. / A periodontite, importante causa de perda dentÃria em adultos, à uma doenÃa inflamatÃria crÃnica caracterizada pela reabsorÃÃo do osso alveolar e das fibras colÃgenas, bem como destruiÃÃo do cemento. O S-nitrosoglutationa (GSNO) à considerado um doador de NO e atua como reservatÃrio de NO in vivo. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito do GSNO na doenÃa periodontal experimental (DPE). A DPE foi induzida passando-se um fio de nÃilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar fÃmeas. Os animais foram tratados com 50 &#956;l GSNO (0,5, 2 e 10 mmol L-1), PVP (polivinil pirrolidona, diluente do GSNO) ou salina subgengivalmente 30 minutos antes da induÃÃo da periodontite e diariamente atà o dia do sacrifÃcio no 11 dia. Foram analisados os seguintes parÃmetros: Ãndice de perda Ãssea (IPO), fosfatase alcalina Ãssea (FAO), mieloperoxidase (MPO), dosagem de citocinas (IL-1&#946; e TNF-&#945;), malondialdeÃdo (MDA), glutationa reduzida (GSH), conteÃdo de nitrito/nitrato (NOx) e imunohistoquÃmica para metaloproteinase-1/-8 (MMP-1/-8), Ãxido nÃtrico sintase induzida (NOSi) e fator de transcriÃÃo nuclear-&#954;B (NF-&#954;B). A fim de confirmar o efeito antiinflamatÃrio e antioxidante do GSNO foram utilizados os modelos de peritonite e edema de pata. A peritonite foi induzida atravÃs da injeÃÃo de 1mL de carragenina ou salina (500 &#956;L) na cavidade peritoneal 1 hora apÃs a administraÃÃo intraperitoneal (i.p.) de salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1). ApÃs 4 horas, os animais foram sacrificados para coleta do fluido peritoneal. Para o edema de pata, salina, PVP ou GSNO (0,5, 2 ou 10 mmol L-1, i.p.) foram administrados uma hora antes da injeÃÃo de 0,1 mL de carragenina (500&#956;g/pata) ou salina por via subplantar (sp) na pata traseira esquerda de cada rata. O sacrifÃcio dos animais ocorreu 4 horas apÃs a injeÃÃo do estÃmulo inflamatÃrio. Os seguintes parÃmetros foram analisados: volume do edema da pata, migraÃÃo de leucÃcitos para cavidade peritoneal, MPO, IL-1&#946;, TNF-&#945;, GSH e MDA. O GSNO nas concentraÃÃes de 0,5 e 2 mmol L-1 reduziu o IPO, MPO, citocinas prÃ-inflamatÃrias IL-1&#946; and TNF-&#945;, nitrito/nitrato, e aumentou GSH. O GSNO nas concentraÃÃes de 0,5 e 2 mmol L-1 tambÃm diminuÃram a imunomarcaÃÃo para MMP-1/-8, NOSi e NF-&#954;B. Contudo, apenas GSNO 2 mmol L-1 diminuiu MDA. Resultados semelhantes foram encontrados na peritonite e no edema de pata, acrescido de que o GSNO 0,5 e 2 mmol L-1 diminuiu tanto o volume do edema de pata como a migraÃÃo de leucÃcitos e neutrÃfilos para a cavidade peritoneal. Esses resultados mostram que o GSNO possui efeito protetor na doenÃa periodontal experimental, no edema de pata e na peritonite atravÃs da reduÃÃo da inflamaÃÃo e do estresse oxidativo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Lectinas podem ser definidas como proteÃnas de origem nÃo imune que possuem pelo menos um domÃnio nÃo catalÃtico que se liga reversivelmente de maneira especÃfica a mono ou oligossacarÃdeos. Dentre as lectinas de origem vegetal, as lectinas de leguminosas sÃo as mais estudas, em especial as lectinas pertencentes subtribo Diocleinae. As lectinas da subtribo Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade em sua seqÃÃncia primÃria e estrutura tridimensional, mas apresentam diferentes intensidades em suas atividades biolÃgicas em que sÃo aplicadas, como a induÃÃo da produÃÃo de Ãxido nÃtrico. A estrutura da recÃm cristalizada lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) objetiva esclarecer como essas variaÃÃes ocorrem baseado na geometria dos resÃduos que compÃe o domÃnio de reconhecimento à carboidrato (DRC). A lectina de Canavalia brasiliensis foi purificada e cristalizada pelo mÃtodo de difusÃo de vapor a 293 K. Cristais adequados foram obtidos na condiÃÃo contendo 200 mM de cloreto de sÃdio, 100 mM de hepes pH 8.5 e 1.8 M e sulfato de amÃnio. O cristais apresentam um grupo espacial ortorrÃmbico I222, a cela unitÃria tem dimensÃes de a=68.3 Ã, b=73.0 Ã, c=99.5 à e Ãngulos de &#945; = &#946; = &#947; = 90Â, sendo observado um monÃmero na unidade assimÃtrica e um conteÃdo de 49.5 % de solvente. O refinamento satisfatÃrio apresentou um âRfactorâ e âRfreeâ de respectivamente 20.4% e 25.3%. Foram determinados parÃmetros no potencial de atividade biolÃgica registrada na literatura, onde a lectina de Canavalia maritima (ConM) tem alto potencial de induÃÃo a produÃÃo de Ãxido nÃtrico comparado com a lectina de Canavalia ensiformis (ConA) que tem um baixo potencial de induÃÃo. DiferenÃas significativas foram encontradas entre coordenadas dos resÃduos que compÃe o DRC de lectinas da subtribo Diocleinae, e comparando esses dados com os potenciais de atividade biolÃgica foi estipulado um padrÃo distinto de distancias para lectinas com alto e baixo potencial de induÃÃo. A lectina de Canavalia brasiliensis (ConBr) apresenta um padrÃo de distancias de uma Ãtima indutora de Ãxido nÃtrico como ConM, porÃm apresenta uma atividade inferior que ConA. As distancias da DRC explicam a diferenÃa na atividade, mas a ConBr se mostra um caso excepcional, onde uma avaliaÃÃo do volume do sÃtio mostra um sÃtio extremamente reduzido, o que explica sua discrepÃncia na atividade biolÃgica. / Lectins may be defined as proteins of nonimmune origin that have at least one non-catalytic domain that reversibly binds specifically to mono or oligosaccharides. Among plant lectins, legume lectins are the most studied, in particular those lectins belonging to subtribe Diocleinae. The lectins from subtribe Diocleinae show a high degree of similarity in their primary sequence and three-dimensional structure but have different intensities in their biological activities in which they are applied, such as induction of nitric oxide production. The structure of the newly crystallized lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) aims to clarify how these variations are based on the geometry of the residues that comprise the carbohydrate recognition domain (CRD). The lectin from Canavalia brasiliensis was purified and crystallized by vapor diffusion method at 293 K. Suitable crystals were obtained under the condition containing 200 mM sodium chloride, 100 mM HEPES pH 8.5 and 1.8 M ammonium sulfate. The crystals have a space group orthorhombic I222, the unit cell has dimensions a = 68.3 Ã, b = 73.0 Ã, c = 99.5 à and angles &#945; = &#946; = &#947; = 90  been observed a monomer in the asymmetric unit with a content of 49.5% solvent. The refinement showed a satisfactory "Rfactor" and "Rfree" of respectively 20.4% and 25.3%. Parameters were determined in the potential of biological activity reported in literature, where the lectin from Canavalia maritima (ConM) has high potential for inducing nitric oxide production compared with the lectin from Canavalia ensiformis (ConA), which has a low potential for induction. Significant differences were found between coordinates of the residues that comprise the CRD of lectins from the subtribe Diocleinae, and comparing these data with potential biological activity was provided a distinct pattern of distances to lectins with high and low potential for induction. The lectin from Canavalia brasiliensis (ConBr) shows a pattern of distances for a great inducer of nitric oxide as ConM, but shows a lower activity than ConA. The distances of CRD explain the difference in activity, but ConBr shown an exceptional case where an assessment of the volume of the site shows a very small site, which explains their discrepancy in biological activity.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Este trabalho apresenta o estudo da sÃntese de nanopartÃculas de ferritas de nÃquel e de cobalto usando o mÃtodo sol-gel proteico. Inicialmente, Ã resgatado o mÃtodo do grÃfico de Williamson-Hall na anÃlise dos dados de difraÃÃo de raios X. Este mÃtodo permite calcular o tamanho mÃdio de partÃcula e a microdeformaÃÃo. Ferritas de nÃquel apresentaram tamanhos de partÃculas que crescem com o aumento da temperatura de calcinaÃÃo. NanopartÃculas de ferrita de nÃquel foram caracterizadas por espectroscopia MÃssbauer. As amostras calcinadas a 400 ÂC apresentaram comportamento superparamagnÃtico ao passo que aquelas calcinadas em temperaturas superiores apresentaram comportamento magnÃtico. As ferritas de cobalto foram caracterizadas usando difraÃÃo de raios X, espalhamento de raios X a baixo Ãngulo e medidas de magnetizaÃÃo. As ferritas de cobalto nÃo apresentaram comportamento superparamagnÃtico. Na sÃntese das ferritas de cobalto, alguns parÃmetros associados com o controle do processo foram estudados: temperatura de calcinaÃÃo, tempo de calcinaÃÃo, taxa de aquecimento/resfriamento. Deduziu-se a relaÃÃo de cada parÃmetro com o controle do tamanho de partÃcula e das propriedades das ferritas de cobalto. / In this work we present the study of the synthesis of nanosized nickel and cobalt ferrites by sol-gel proteic method. This work revisited the method of X-ray powder diffraction analysis known as Williamson-Hall plotting. This method provides size-strain studies in nanoparticles samples. Nickel ferrites has presented particle sizes that increase when the calcination temperature increases. Nickel ferrites nanoparticles were characterized by MÃssbauer spectroscopy. Sample calcined at 400ÂC has presented superparamagnetic properties and those calcined at higher temperatures behavior as magnetic materials. Cobalt ferrites nanoparticles were charcterized by X-ray powder diffraction, small angle X-ray scattering e magnetization. Cobalt ferrites has not presented superparamagnetic behavior. For the synthesis of cobalt ferrites some parameters that are important to the process control were studied: calcination temperature, calcination time, heat rate. We have shown the relation among those parameters and the particle size and properties control to the cobalt ferrite nanoparticles.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O glicerol à o principal subproduto obtido no processo de produÃÃo do biodiesel a partir da transesterificaÃÃo de Ãleos vegetais. A sua crescente produÃÃo tem provocado queda do preÃo do glicerol, visto que seu mercado nÃo cresce no mesmo ritmo, porÃm, isso tem despertado muito interesse no desenvolvimento de pesquisas relacionadas a transformaÃÃo do glicerol atravÃs de processos catalÃticos. Diante disso, os mÃtodos dos precursores polimÃricos e de impregnaÃÃo Ãmida foram utilizados na preparaÃÃo de amostras compostas dos Ãxidos de cobre e alumÃnio, visando aplicÃ-los como catalisadores na conversÃo do glicerol em acetol. A tese foi divida em quatro partes, sendo a primeira dedicada ao estudo da influÃncia do teor de cobre e o efeito do componente usado como suporte no desempenho catalÃtico. Na segunda, foi observado o efeito do mÃtodo de preparaÃÃo nas propriedades estruturais, texturais e morfolÃgicas e como consequÃncia no desempenho catalÃtico. Na terceira e quarta partes do trabalho foi visto como as propriedades Ãcido-base afetam a performance dos catalisadores durante a transformaÃÃo do glicerol. As amostras foram caracterizadas por diferentes tÃcnicas: ICP-OES, TGA, DTA, DRX, MEV, MET, microcalorimetria de adsorÃÃo de amÃnia e CO2 e isotermas de adsorÃÃo de N2. Nota-se que a conversÃo do glicerol e a seletividade para acetol aumentam com o acrÃscimo da quantidade de cobre e com a elevaÃÃo da Ãrea superficial. Os resultados confirmam que o modo que as amostras sÃo preparadas propicia mudanÃas nas suas propriedades estruturais, texturais e morfolÃgicas, que consequentemente afetam o desempenho catalÃtico. Observa-se tambÃm que os sÃtios Ãcidos ou bÃsicos isolados possuem um papel secundÃrio na reaÃÃo, entretanto, os catalisadores com cobre mostram que esse metal à o principal sÃtio ativo no processo de transformaÃÃo do glicerol. PorÃm, os sÃtios de cobre combinados com um sÃtio Ãcido ou bÃsico podem ter um papel primordial na atividade, seletividade e estabilidade das amostras. AlÃm disso, foi visto a partir do DRX dos catalisadores utilizados na reaÃÃo que a formaÃÃo de uma estrutura de cobre modificada na alumina conduz a um decrÃscimo na sinterizaÃÃo e correspondentemente melhores propriedades catalÃticas. / Glycerol is a waste by-product obtained throughout the production of biodiesel by transesterification of vegetable oils. The glycerine prices are falling due to its lack of market. This change in market has attracted much interest in development of research related to the transformation of glycerol by catalytic processes. Thus, polymeric precursor method and wet impregnation route were applied to synthesize copper and aluminum-based catalyst in order to convert glycerol into acetol. The thesis is divided into 4 parts.The first part was studied the influence of copper content and the effect of component used as support in the catalytic performance. In the second part, it was observed the effect of the preparation method in structural, textural and morphological properties and consequently in the catalytic activity. In the third and fourth part, it was investigated how the acid-base properties affect in the catalytic performance during the transformation of glycerol. The samples were characterized by different techniques ICP-OES, TGA, DTA, XRD, SEM, TEM, N2 adsorption/desorption isotherms and microcalorimetry of NH3 and CO2 adsorption. It was note that the glycerol conversion and the acetol selectivity increased with the Cu loading and with the improvement of the specific surface area. The results confirmed that the way of catalyst preparation influences its structure, texture, morphology and subsequently the catalytic performance. It was also observed that acidic or basic sites alone play a secondary role in the reaction; however, copper-based catalysts showed that copper metal provides an active site for the transformation of glycerol. Nevertheless, copper metal sites combined with an acid or base site can play a major role in the activity, selectivity and stability of samples. Furthermore, it is observed by XRD of the spent catalysts that the presence of the copper-modified alumina decreases catalyst sintering and consequently improve the catalytic proprieties.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O desenvolvimento de semicondutores magnÃticos tÃm despertado crescente interesse dos pesquisadores devido suas promissoras aplicaÃÃo na spintrÃnica. Estes semicondutores podem ser produzidos a partir da dopagem de semicondutor nÃo magnÃtico com Ãons de metais de transiÃÃo. Neste trabalho, difraÃÃo de raios-x e espectroscopia no infravermelho foram utilizados para estudar as caracterÃsticas estruturais de Ãxidos semicondutores magnÃticos diluÃdos nanoestruturados do tipo SnO2 dopados com Fe, Co ou Mn, produzidos pelo mÃtodo sol-gel proteico. PadrÃes nanoestruturados de SnO2 sem dopagem foram produzidos com temperaturas de calcinaÃÃo de 300, 350 e 400ÂC para servir de base de comparaÃÃo. Foram sintetizadas sÃries de amostras com fÃrmula geral Sn1&#8722;x Mx O2&#8722;&#948; , onde M Ã o elemento magnÃtico (Fe, Co ou Mn) e x a concentraÃÃo de dopante, com as mesmas temperaturas de calcinaÃÃo e com trÃs concentraÃÃes de dopante (5, 10 e 20%). A difraÃÃo de raios-x foi utilizada para identificar as fases do composto assim como calcular os parÃmetros estruturais, tamanhos de cristalito e microdeformaÃÃes residuais. A anÃlise indicou que a sÃntese resultou na obtenÃÃo de compostos com estrutura SnO2 com dimensÃes nanomÃtricas. Amostras calcinadas a 400ÂC apresentaram a presenÃa de fases espÃrias. A dopagem foi confirmada pela variaÃÃo dos parÃmetros de rede dos compostos em funÃÃo do tipo e concentraÃÃo dos dopantes. Os modos vibracionais das ligaÃÃes quÃmicas nos compostos foram identificados por espectroscopia infravermelho. Com base nesta anÃlise, foi possÃvel estudar o comportamento energÃtico das ligaÃÃes iÃnicas quando os elementos dopantes estÃo incorporados em sÃtios de Ãons Sn4+ na matriz hospedeira. / The development of magnetic semiconductors has arisen growing attention due to their promising applications in spintronics. These materials can be produced by doping of a non-magnetic semiconductor with magnetic ions of transition metals. In this work, x-ray diffraction and infrared spectroscopy were used to study the structural characteristics of nanostructured Fe, Co or Mn-doped SnO2 oxide diluted magnetic semiconductors. The material was produced by a protein based sol-gel method called proteic sol-gel. To provide a basis for comparison, nanostructured standards of undoped SnO2 were produced with calcination temperatures of 300, 350 and 400&#9702; C. Samples of Sn1&#8722;x Mx O2&#8722;&#948; , where M is the magnetic dopant (Fe, Co or Mn) and x the dopant concentration, were prepared with the same calcination temperatures and x = 5, 10 and 20%. X-ray diffraction was used to identify the crystalline phases in the samples as well as to calculate structural parameters, particle sizes and residual microstrain. The analysis indicated that the synthesis resulted in nanosized compounds with the SnO2 structure. Samples calcined at 400&#9702; C presented the presence od spurious phases. Doping was confirmed by the variation of lattice parameters of compounds as a function of type and concentration of dopants. Vibrational modes of chemical bonds were identified by infrared spectroscopy. Based on this analysis, it was possible to study the energetic behavior of ionic bonds when doping elements are incorporated in Sn4+ sites in the host matrix.