A quimioterapia é uma das principais estratégias no tratamento do câncer. No entanto, muitos tumores apresentam resistência, tornando o tratamento parcial ou totalmente ineficaz. Existem alguns mecanismos que podem estar relacionados ao desenvolvimento desse perfil de resistência, sendo o mais estudado o aumento do efluxo das drogas através de proteínas de membrana celular. Por outro lado, uma alteração nas vias de reparo de DNA também contribui para a resistência tumoral, uma vez que as lesões são removidas antes mesmo de se tornarem citotóxicas para as células, reduzindo assim a efetividade do quimioterápico. Dentre as vias de reparo de DNA, a via do Reparo por Excisão de Nucleotídeos (NER) é uma das mais versáteis, e há estudos que demonstram seu envolvimento em resposta às lesões geradas por antraciclinas. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a contribuição dos mecanismos de resposta à dano no DNA, bem como da via NER, na resistência à Mitoxantrona (MXT), um análogo de antraciclinas, na linhagem celular de leucemia HL-60/MX2. Para isso, analisou-se a sobrevivência celular, pelo método de exclusão por azul de tripan, o perfil de ciclo celular e a fosforilação da histona H2AX (γH2AX), por citometria de fluxo, além da análise de expressão gênica da via NER e proteínas de efluxo por qPCR. Os resultados indicam um perfil de resposta diferente entre a linhagem resistente e a linhagem sensível, observado pelo teste de sobrevivência e pelos diferentes perfis de ciclo celular e fosforilação de H2AX. Além disso, a análise de expressão gênica demonstra um aumento na expressão de genes da via NER, como ERCC1 já antes do tratamento e XPA após os tratamentos, na linhagem resistente. Estes resultados demonstram portanto envolvimento desta via de reparo de DNA na resistência tumoral da linhagem HL- 60/MX2. / Chemotherapy is one of the main cancer treatment strategies; however, tumors can show resistance, which makes the treatment partial or totally inefficient. Among the mechanisms that may be related to the resistant profile, the most studied is increased drug efflux through ABC transporter permeases. On the other hand, altered DNA repair pathways may contribute to cancer resistance, since the lesions are removed before they become toxic to cells, which reduces chemotherapy effectiveness. Among DNA repair pathways, Nucleotide Excision Repair (NER) is one of the most versatile, and there are studies showing its involvement in removal of anthracyclines-induced lesions. Thus, our aim was to evaluate the contribution of DNA damage response mechanisms, focusing on NER, to the resistance to Mitoxantrone (MXT), an anthracycline analog, using the mitoxantrone-resistant leukemia cell line HL-60/MX2 as a model. After treatment with MXT and Etoposide (ETO), a topoisomerase II inhibitor, cell survival was assessed by trypan blue exclusion method; cell cycle profile and H2AX histone phosphorylation (γH2AX) were evaluated by flow cytometry; and gene expression levels of NER and efflux proteins were determined by RT-qPCR. Results indicate a different response between the resistant HL-60/MX2 and the sensitive HL-60 cells, as observed in the survival assay, cell cycle, and H2AX phosphorylation profile. Furthermore, in the resistant cells, RTqPCR analysis showed an increase in the expression of NER genes, with ERCC1 expression increased before treatments, and XPA after the treatments. Therefore, our results indicate the contribution of NER machinery in the resistance of leukemia cells to Mitoxantrone.

Com o intuito de compreender a natureza da variação conformacional em polieletrólitos, que leva ao importante fenômeno da desnaturação do DNA, propomos um conjunto de modelos complementares para a descrição das principais interações entre as espécies envolvidas. Investigamos, primeiramente, a ocorrência de desnaturação como função da densidade de sal em solução, aumento da temperatura e da constituição específica da cadeia de DNA em termos da concentração de pares de base Guanina e Citosina (GC). O modelo é construído a partir das teorias de Debye-Hückel, Bjerrum, Manning e Flory, com a interação atrativa entre as fitas que formam a dupla hélice descrita como função da densidade de pares de base GC. Um modelo semelhante foi empregado para o estudo das interações entre cadeias de DNA e moléculas de Ciclodextrina, que vem, ultimamente, sendo investigada para transporte de fármacos no interior das células. Ainda com interesse em propriedades físicas de polieletrólitos, propomos uma análise do efeito de associação de moléculas intercalantes em poliíons. / In this work, we propose a model to describe some relevant physical transitions observed experimentally in solutions containing polyelectrolytes and others molecules. Our focus is the DNA denaturation phenomena, that is studied using an analytic model based on Debye-H¨uckel, Bjerrum, Manning and Flory theories. The atractive interaction between the double strands that form the double helix structure is written as a function of salt density, temperature changes and the Guanine-Cytosine concentration. A similar model was employed to study the interaction between DNA chains and Cyclodextrin molecules, that has been investigated to drug delivery to into the cells. Concerned about polyelectrolytes physical properties, we propose an analysis of intercalating molecules association to DNA that causes interesting conformational effects including the denaturation.

Os roedores sigmodontíneos formam grupo diverso tanto em relação ao número de espécies quanto aos aspectos ecológicos e adaptativos, apresentando taxonomia complexa com muitos aspectos filogenéticos não resolvidos. O DNA barcoding é uma abordagem padronizada que visa à identificação de amostras em nível específico. Neste estudo sequências de dois marcadores moleculares mitocondriais, citocromo b (CYTB) e citocromo c oxidase subunidade 1 (COI), e do nuclear Interphotoreceptor Retinoid Binding Protein (IRBP) foram obtidos para 322 amostras de tecido e analisadas com sequências do Genbank por métodos probabilísticos e de distância genética para avaliar as relações filogenéticas entre os táxons e a utilidade do COI para discriminar espécies. Os diferentes métodos empregados para analisar os genes separadamente e concatenados foram congruentes de modo geral, recuperando os mesmos clados com altos valores de suporte. Utilizando-se o COI foi possível determinar em nível de espécie 12 amostras com identificações errôneas, 30 indeterminadas, 21 que estavam identificadas apenas em nível genérico e um novo táxon. As tribos descritas em estudos anteriores (Abrothrichini, Akodontini, Ichthyomyini, Oryzomyini, Phyllotini, Reithrodontini, Sigmodontini, Thomasomyini, Wiedomyini) foram recuperadas utilizando-se os três marcadores, todavia apresentaram baixo suporte na maioria das análises. As análises de distancia intra-específica indica que a maior parte das espécies possui o barcoding-gap, isto é, uma distancia intra-específica menor do que a inter-especifica. Portanto, este estudo demonstra que a abordagem do DNA barcoding é útil para delimitar a grande maioria das espécies de roedores sigmodontíneos, mas sugere-se usar tal abordagem juntamente com procedimentos adicionais de sistemática e taxonomia em uma abordagem integrativa. / Sigmodontine rodents comprise a speciose and diverse group in ecological and adaptive aspects presenting complex taxonomy with many aspects unresolved. DNA barcoding is standardized approach which aims to identify samples in specific level. In this study sequences of two mitocondrial markers, cytochrome b (CYTB) and cytochrome c oxidase subunit I (COI), and nuclear Interphotoreceptor Retinoid Binding Protein (IRBP) were obtained for 322 tissue samples and analyzed with Genbank sequences by probabilistic and genetic distance methods to assess phylogenetic relationships between taxa and COI utility to discriminate species. The different methods used to analyze gene separately and concatenated agree in general, recovering the same species with high support values. Species were identified to 12 samples misidentified, 30 which species were undetermined, 21 which were identified only in genus level and one new species. Tribes described in preview studies were recovered, however showed low support in most analyses. DNA barcoding approach is useful to distinguish between species, but should be used cautiously with additional procedures in a systematic and taxonomic in an integrative approach.

Tese (Doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Botânica, 2012. / Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-06-22T13:33:05Z No. of bitstreams: 1 2012_LucianoCoelhoMilhomensCemin.pdf: 8570536 bytes, checksum: 4b4edb3b81a616dacb859d177664b5e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-08-09T13:29:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_LucianoCoelhoMilhomensCemin.pdf: 8570536 bytes, checksum: 4b4edb3b81a616dacb859d177664b5e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-09T13:29:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_LucianoCoelhoMilhomensCemin.pdf: 8570536 bytes, checksum: 4b4edb3b81a616dacb859d177664b5e8 (MD5) / O uso de código de barras de DNA ou DNA barcodes pode, teoricamente, permitir aidentificação de qualquer material biológico portador de DNA intacto. As dificuldadesde identificação e circunscrição taxonômica, o número insuficiente de especialistas eo crescente interesse no uso e na comercialização de suas espécies fazem dasAraceae um grupo ideal para o estabelecimento de uma ferramenta de identificaçãomolecular como esta. Assim, o principal objetivo deste estudo foi avaliar aaplicabilidade e o funcionamento de um fragmento do marcador matK como códigode barras de DNA, utilizando como modelo a família Araceae. Pela primeira vezdentro de Araceae, o uso de um marcador como sequência barcode foi avaliado emgrande escala. O fragmento-alvo de matK, de aproximadamente 725pb, mostrou-sesuficientemente variável para tal tarefa, sendo capaz de recuperar, na maioria doscasos, identificações inequívocas para os diferentes gêneros e espéciesamostrados. A busca BLAST® mostrou-se mais eficiente que o método de distânciaem recuperar identificações ao nível específico (68% e 81,5%, respectivamente). Ofragmento-alvo apresentou ainda forte sinal filogenético, refletindo grande parte dasrelações entre os diferentes táxons de Araceae. Embora o fragmento-alvo apresentelimitações no reconhecimento de espécies proximamente relacionadas, osresultados obtidos apontam para uma nova circunscrição taxonômica emXanthosoma Schott, na qual as principais espécies cultivadas de taioba seriam, naverdade, uma única espécie, com marcada amplitude de variação fenotípica,alcançada tanto por processos naturais quanto pela intervenção do homem. Ofragmento-alvo de matK mostrou-se ainda como uma ferramenta capaz de procedera identificação de um táxon desconhecido, servindo como base para a descrição deum novo gênero em Araceae: Lorenzia E.G. Gonç. gen. nov. inéd., instituído pelacriação da espécie Lorenzia umbrosa E.G. Gonç. sp. nov. inéd. Finalmente, autilização de uma abordagem DNA barcoding pode, futuramente, auxiliar naconservação e o uso sustentável das espécies de Araceae. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The use of DNA barcodes can, theoretically, allow the identification of any biologicalmaterial carrier of DNA intact. The difficulties of identification and taxonomiccircumscription, the insufficient number of specialists and the growing interest in theuse and marketing of species make Araceae an ideal group for the establishment ofa molecular identification tool. Thus, the main objective of this study was to evaluatethe applicability and operation of a marker fragment of matK as a barcode DNA,using the family Araceae as a model. For the first time in the Araceae, the use of amarker as barcode sequence was evaluated on a large scale. The target fragment ofmatK, approximately 725pb, was sufficiently variable for the task, which was able torecover in most cases, unambiguous identification of different genera as well asspecies level. The BLAST® search was more efficient than the method of retrievingdistance identification specific level (68% and 81.5%, respectively). The targetfragment presented a strong phylogenetical signal, largely reflecting the relationshipsbetween different taxa of Araceae. Although the target fragment showed limitations inthe recognition of closely related species, the results suggested a new taxonomiccircumscription of Xanthosoma Schott, in which the most cultivated species of tarowere, in fact, a single species, with large phenotypical variation as a result of bothnatural processes and human intervention. The target fragment of matK was capableof identifying an unknown taxon, which was as the basis for the description of a newgenus of Araceae: Lorenzia E.G. Gonç. gen. nov. ined., established by the creationof Lorenzia umbrosa E.G. Gonç. sp. nov. ined. Finally, the use of a DNA barcodingapproach may further assist in the conservation and sustainable use of Araceaespecies.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-04-14T20:22:26Z No. of bitstreams: 1 2009_PenhaCristinaZaidanAlves.pdf: 890016 bytes, checksum: 7ca157433c8395959f0765b44a782f73 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-18T04:47:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_PenhaCristinaZaidanAlves.pdf: 890016 bytes, checksum: 7ca157433c8395959f0765b44a782f73 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-18T04:47:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_PenhaCristinaZaidanAlves.pdf: 890016 bytes, checksum: 7ca157433c8395959f0765b44a782f73 (MD5) Previous issue date: 2009 / Organismos aeróbicos estão sujeitos aos intermediários reativos gerados durante a respiração celular. Esses são caracterizados como EROS (Espécies Reativas ao Oxigênio) responsável pelo aumento do estresse oxidativo e conseqüentes danos ao DNA. O organismo desenvolveu um mecanismo de detoxificação no qual as enzimas antioxidantes endógenas, catalase, superóxido dismutase, glutationa peroxidase, e haptoglobina agem sobre os EROS reduzindo possíveis danos no DNA. Diversos estudos associam o polimorfismo dessas enzimas ao risco do desenvolvimento de patologias. O presente estudo observou se a variabilidade genética da região promotora da catalase (21A/T), hGPX1 (Pro198Leu), SOD2(Val-9Ala) e haptoglobina confere diferença na proteção ao estresse oxidativo promovido pelo peróxido de hidrogênio nas concentrações de 250μM e 1mM em indivíduos jovens e saudáveis de Brasília. A variação das enzimas antioxidantes endógenas avaliadas, sugere conferir diferentes graus de proteção ao DNA contra o estresse oxidativo, induzido in vitro pelo peróxido de hidrogênio em indivíduos jovens e saudáveis da população de Brasília. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Aerobic organisms are subjected to reactive intermediaries that are generated during cell breathing. They are characterized as ROS (Reactive Oxygen Species), which are responsible for oxidative stress increase and damages to DNA. T h e organism developed a detoxification mechanism in which the endogenous anti-oxidant enzymes catalase, superoxide dismutase, glutathione peroxidase and haptoglobin act on ROS reducing possible damages to DNA. Many studies have associated these enzyme polymorphisms and the development of pathologies. T he present study observed if the genetic variability of the promoting catalase region (21A/T), hGPX1 (Pro/Leu), SOD2 ( Val/9Ala) and haptoglobin concede difference in the protection of oxidative stress, by H2O2 within concentrations of 250μM and 1mM in healthy, young subjects from Brasilia. T he variation by endogenous anti-oxidants enzymes avaliated in this study, suggest confer levels differents the DNA protection to oxidative stress, in vitro, by H2O2.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Química, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-06-03T16:23:15Z No. of bitstreams: 1 2010_FelipeFeitosaOliveira.pdf: 1843561 bytes, checksum: c6c6d374ac69e9591a81a33ec3a3d3b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-06-10T18:49:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_FelipeFeitosaOliveira.pdf: 1843561 bytes, checksum: c6c6d374ac69e9591a81a33ec3a3d3b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-06-10T18:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_FelipeFeitosaOliveira.pdf: 1843561 bytes, checksum: c6c6d374ac69e9591a81a33ec3a3d3b5 (MD5) / Este trabalho descreve a síntese, caracterização e aplicação de novos sistemas fluorescentes utilizando compostos do tipo 2-(2’-hidroxifenil) benzazóis acoplados com o núcleo 2,1,3-benzotiadiazola. Os novos sistemas fluorescentes foram sintetizados utilizando um acoplamento do tipo Buchwald-Hartwig e foram plenamente caracterizados. Suas características físico-físicas, com ênfase na foto-física, foram investigadas e suas propriedades como sondas fluorescentes foram determinadas. Para isso foram realizadas titulações espectrofotométricas e espectrofluorimétricas utilizando dsDNA e a proteína BSA. Além disso, estudos de variação de pH e de voltametria cíclica foram realizados para testar sua estabilidade em diferentes condições. Por fim, os sistemas foram aplicados em estudos de live-cell imaging, comprovando sua eficácia como marcadores seletivos de dsDNA nuclear em sistemas biológicos utilizando células-tronco humanas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The present work describes the synthesis, characterization and application of new systems using fluorescent compounds such as 2 - (2'-hydroxyphenyl) benzazoles coupled with 2,1,3-benzothiadiazole core. The new fluorescent systems were synthesized using Buchwald-Hartwig cross coupling reaction and were fully characterized. Physical chemical properties, especially photophysical properties, were investigated and the applications as fluorescent probes were investigated. To achieve this goal, it was performed spectrophotometric and spectrofluorimetric titrations using dsDNA and BSA protein. Moreover, studies of pH-dependence and cyclic voltammetry were conducted to test the stability under different conditions. Finally, the systems were applied in live-cell imaging experiments, proving the effectiveness and selectivity as nuclear dsDNA staining dyes for biological systems using human stem-cells.

The last decade has seen widespread application of recombinant DNA technology to the study of picornaviruses. Comparative sequence analysis has revealed that the most highly conserved region amongst many members of this family of viruses is the 5' non-coding region. Using recombinant type 3 polioviruses it has been shown that a single point mutation located in this region dramatically reduces neurovirulence and inhibits the intracellular life-cycle of the virus. Mutation at this nucleotide contributes to the observed reversion to neurovirulence of the Sabin attenuated poliovirus type 3 vaccine strain currently used in vaccination programmes throughout the world. Knowledge concerning the function of the 5' non-coding region remains scant, and as a result, the mechanism whereby a single point mutation within this region results in alteration of the expressed phenotype of the virus remains unknown. Clearly, an understanding of the molecular mechanism(s) involved requires greater knowledge of the function of the 5' non-coding region. This thesis describes the design and construction of vectors that allow analysis of the role of the 5' non-coding region in the control of viral translation, replication, and encapsidation of viral RNA. In the plasmid pRSV-5'polio-CATm2 (N+), the 5' non-coding region of poliovirus was fused to the coding region of the bacterial chloramphenicol acetyltransferase reporter gene. The presence of the 5' non-coding region resulted in the inhibition of CAT expression when this plasmid was introduced into eukaryotic cells in culture. Deletion analysis of the 5' non-coding region in this vector identified two regions that were responsible for the marked inhibition of expression of the reporter gene. It would appear from the results of these experiments that the poliovirus/CAT chimaeric message is translatsed as a normal eukaryotic mRNA and is subject to the rules of the "scanning model". This observation suggests that the 5' non-coding region of poliovirus on its own does not possess features which enable a message containing it to be translated efficiently. It is concluded that a second factor, present in infected cells, is required for the efficient translation of poliovirus. A second plasmid was designed and constructed to investigate the role of the 5' non-coding region in replication and encapsidation of viral RNA. Preliminary data suggest that the product of this vector does undergo replication while its ability to be encapsidated has still to be tested.

Tandem-repetitive hypervariable minisatellites detected in a DNA fingerprint provide highly informative genetic markers. To identify and localize specific loci represented in a DNA fingerprint, it is necessary to clone individual minisatellites. This thesis is concerned with the characterization of single locus minisatellite probes cloned from DNA fingerprints. Seven single locus human minisatellite probes have been cloned by screening ? libraries with DNA fingerprint probes 33.6 and 33.15. Each locus consists of a minisatellite, with repeat units ranging in length from 9 to 47 base pairs depending on the locus. These autosomal loci are amongst the most variable loci characterized to date. The heterozygosity values of D1S7, D1S8, D5S43, D7S21, D7S22 and D12S11 range from 85% to >99%. Clustering of minisatellites was initially detected at the D12S11 locus. This observation led to the subsequent discovery of minisatellites showing close physical linkage as well as a tendency for minisatellites to be localized in proterminal chromosomal regions. An association of a minisatellite with a dispersed repetitive element was identified when studying the organization of cloned D7S22. This phenomenon was later found to be common amongst minisatellites. Pedigree analysis revealed a high level of instability of the locus detected by D1S7. This manifestation of detectable mutant alleles demonstrated the feasibility of direct estimation of mutation rates at minisatellite loci. The hypervariability of loci detected by minisatellites and their sensitivity in blot hybridizations make minisatellites a powerful tool in genetic analysis. These probes have already proved instrumental in many genetic and clinical studies. The high degree of individual specificity and the relatively simple banding pattern generated make these probes invaluable in forensic medicine. D1S7 and D7S21 were used in the first example of DNA-based identification in a rape and murder enquiry. One minisatellite probe was found to detect two loci, DNF21S1 and DNF21S2, on chromosomes 6 and 16 respectively. The 39 base pair repeat unit of this minisatellite is itself repetitive. The heterozygosity values of DNF21S1 and DNF21S2 are 61% and 16% respectively. Genomic mapping and sequence analyses revealed close similarity between these loci. Human population and pedigree studies showed that some individuals carry two alleles at DNF21S2, some carry one allele, some carry a duplicated allele while some are devoid of this locus. A model of duplication of a large proterminal segment of chromosome 6 DNA containing a minisatellite and transposition into an interstitial region of chromosome 16 in some human individuals is suggested. This is, to my knowledge, the first report of a human DNA polymorphism arising via transposition of DNA. The duplication unit on chromosome 16 is large (>15 kb) and has inserted into a member of a target site family present in 5-10 copies per genome. This sequence family represents a novel class of human repetitive DNA.

Currently, the most common strategy employed to detect DNA sequences is PCR (Polymerase Chain Reaction). Nevertheless, in the last few years research on DNA biosensors has increased significantly. Such sensors represent an alternative to PCR in the detection of specific DNA sequences, once they exhibit fast response, low limits of detection, and require simpler sample preparation. The development of a biosensor for detection of DNA from Human Papillomavirus type 18 is reported. To immobilise DNA probe onto indium-tin oxide (ITO) electrodes, a silanisation was carried out using 3-Aminopropyltryethoxysilane (APTES). Silanisation was studied and optimised using ultra-violet absorption spectroscopy, atomic force microscopy, fluorescence microscopy, and cyclic voltammetry. After immobilisation, the hybridisation with target sequence is detected by changes in surface properties of ITO electrode by Cyclic Voltammetry and Electrochemical Impedance Spectroscopy, using the Ferri-Ferrocyante redox couple. The detection of synthetic target sequence was performed in the range of 12.5 to 100 nM, and 300nM for PCR products. The sensor did not show significative response for non-complementary sequence at 50 nM. This sensor can be applied for fast and low cost detection of HPV genetic material at nanomolar levels. / A estratégia mais empregada atualmente na detecção de sequência de DNA é a PCR (Reação em Cadeira da Polimerase). Contudo, nos últimos anos, a pesquisa em biossensores de DNA tem aumentado significativamente. Estes sensores representam uma alternativa a PCR na detecção de sequências específicas de DNA, uma vez que exibem resposta rápida, baixos limites de detecção e requerem preparação simples da amostra. Nesta dissertação descrito o desenvolvimento de um biossensor para a detecção do DNA do Papilomavirus Humano tipo 18. A fim de imobilizar a sequência de captura de DNA em eletrodos de óxido de estanho e índio (ITO), realizou-se uma silanização usando 3-Aminopropiltrietoxisilano (APTES). A reação de silanização foi estudada e otimizada através das técnicas de Espectroscopia de Absorção Ultravioleta, Microscopia de Força Atômica, Microscopia de Fluorescência e Voltametria Cíclica. Após a imobilização, a hibridização com a sequência alvo é detectada através de alterações nas propriedades de superfície do eletrodo através de Voltametria Cíclica e Espectroscopia de Impedância Eletroquímica, usando o par redox Ferri-ferrocianeto. A detecção da sequência alvo sintética foi realizada no intervalo de 12.5 a 100 nM, e para o produto de PCR, 300 nM. O sensor não demonstrou resposta significativa para sequência não complementar a 50 nM. Este sensor pode ser aplicado na detecção rápida e de baixo custo de material genético do HPV a níveis nanomolares.

nÃo hà / Auxemma oncocalyx Taub pertence a famÃlia das Boraginaceae, à conhecida como âpau brancoâ e frequentemente encontrada no estado do CearÃ. A casca da Ãrvore à um adstringente e popularmente utilizado no tratamento de feridas. Oncocalixona A (Onco-A), uma quinona isolada do extrato etÃlico da A. oncocalyx, possui uma sÃrie de propriedades farmacolÃgicas, tais como: analgÃsica, anti-inflamatÃria, antioxidante, citotÃxica e antitumoral. O presente estudo foi realizado para avaliar os efeitos citotÃxicos da Onco-A na linhagem tumoral promielocÃtica, HL-60. O potencial citotÃxico foi avaliado pelo teste colorimÃtrico de anÃlise indireta, MTT, depois de 24 horas de exposiÃÃo das cÃlulas HL-60 Ãs concentraÃÃes crescentes (8, 16,5 e 33 ÂM) da Onco-A. ApÃs o tratamento, os procedimentos experimentais realizados para identificar os mecanismos de aÃÃo in vitro (no citÃmetro de fluxo) foram de viabilidade celular, externalizaÃÃo da fosfatildiserina, fragmentaÃÃo do DNA intercucleossomal, identificaÃÃo da via apoptÃtica, geraÃÃo de espÃcie reativa de oxigÃnio; os experimentos de anÃlise morfolÃgica foram com azul de tripan, May-Grunwald-Giemsa, e laranja de acridina/ brometo de etÃdio; a integridade do DNA pelo teste cometa e tambÃm avaliado a interaÃÃo da Onco-A com enzima topoisomerase. Resultados: de acordo com o teste do MTT, Onco-A apresentou significante citotoxicidade nas linhagem HL-60 (IC50 11 ÂM). As anÃlises dos experimentos demonstraram que as cÃlulas tratadas com a menor concentraÃÃo de Onco-A tiveram reduÃÃo no volume celular, formaÃÃo de corpos apoptÃticos, condensaÃÃo da cromatina, externalizaÃÃo de fosfatildiserina, reduÃÃo da viabilidade celular e fragmentaÃÃo do DNA. Onco-A causou despolarizaÃÃo mitocondrial, ativou caspase iniciadoras -9 e -8, e as efetoras -3 e -7, clivou a proteÃna Poli ADP-Ribose polimerase â via intrÃnseca e extrÃnseca. Apesar de nossos resultados demonstrem que nenhuma das doses foi capaz de gerar espÃcies reativas de oxigÃnio, depois de prÃ-tratadas por 1 hora com N-AcetilcisteÃna, a citotoxicidade da Onco-A foi alterada, apresentando aumento na integridade da membrana, diminuiÃÃo na fragmentaÃÃo do DNA, parada na fase do ciclo celular G2/M e baixo nÃvel de dano no DNA. Embora a Onco-A nÃo interaja com as enzimas topoisomerases, os dados apresentados sugerem que seu alvo, como aceptor de Michael, pode ser a molÃcula de DNA. Esses resultados sugerem que a apoptose à uma importante forma de morte celular causada pela Onco-A, e reforÃa que o composto pode ser um protÃtipo para o tratamento do cÃncer. / Auxemma oncocalyx Taub. belongs to the Boraginaceae family. It is known as âpau brancoâ and is frequently found in the State of CearÃ. The skin of that tree is an astringent and is commonly used as a medicine for wounds. Oncocalyxone A (Onco-A) is a quinone isolated from the ethanolic extract of A. oncocalyx, it has exhibited a series of pharmacological properties, such as analgesic, anti-inflammatory, antioxidant, cytotoxic and antitumor properties. The present study tried to provide a basic set of data on the cytotoxic effects of Onco-A against human promyelocytic leukemia cell line HL-60. The cytotoxic potential of Onco-A was evaluated by the MTT assay, colorimetric analysis, after 24 hours exposure in HL-60 cells with increasing concentrations (8, 16,5 e 33 ÂM). After the cells were exposure, there were performed experiments to identify the mecanisms of action in vitro (flow cytometry) by the cellular viability, phosphatidyl externalization, internucleosomal DNA fragmentation, identifying apoptotic pathway; the experiments to morphological analysis were made with tripan blue, May-Grunwald-Giemsa, and acridine orange/ethidium bromide; DNA integrityâs test by cometa assay; and the avaliation of interection of enzyme topoisomerase with Onco-A. Results: according to MTT test results, Onco-A showed a significant cytotoxic activity against HL-60 cells (IC50 11 ÂM). In addition, morphological analysis of cells treated with lower concentration of Onco â A demonstrated that there were reduction in cellâs volume, formation of apoptotic bodies, chromatin condensation, phosphatidylserine externalization, also reduction of cell viability and DNA fragmentation. The Onco-A caused mitochondrial depolarization, activated caspase starters -9 and -8, and the effectors -3 and -7, cleaved Poly ADP-Ribose polymerase â intrinsic and extrinsic pathways. Although our results had shown that none of the doses was able to generate Reactive Oxigen Species, after pre-treated for 1 hour with N-acetylcysteine, the cytotoxicity of Onco-A was changed, an increase in membrane integrity, decreased DNA fragmentation, drag on the G2/M cell cycle phase and low levels of DNA damage. Besides the Onco-A does not interact with the enzyme topoisomerase, the data suggest that their target as Michael acceptor, can be the DNA. These results suggest that apoptosis is one of the major forms of cellâs death caused by Onco-A, and reinforces the compound may be a prototype for cancer therapy.