Ainda que os fatores genéticos relacionados à gemelaridade na espécie humana tenham sido bastante investigados, há um grande desconhecimento sobre genes específicos influenciando este processo. Neste estudo foram analisados dois genes, IGF-I e IGFBP-3, que sintetizam proteínas que formam um complexo, onde o gene IGFBP-3 codifica a proteína 3 de ligação ao fator de crescimento semelhante à insulina, que é responsável por carregar 90% da proteína sintetizada pelo gene IGF-I (fator de crescimento semelhante à insulina). A proteína sintetizada pelo gene IGF-I atua nas células da granulosa promovendo o aumento no número de receptores de FSH e LH, retardando o processo de atresia folicular, promovendo assim a foliculogênese, ovulação, fertilização, implantação e subsequente desenvolvimento do embrião. O gene IGF-I apresenta o polimorfismo de (CA)n, onde o número de repetições de citosina e adenina é variável. O gene IGFBP-3 possui um SNP na posição – 202 em sua região promotora, no qual pode ocorrer troca de adenina para citosina (A/C). Há evidências de que estes loci influenciem os níveis IGF-I e de IGFBP-3 em mulheres jovens. A amostra foi obtida na cidade de Candido Godoi (CG) no Rio Grande do Sul, Brasil, conhecida por ter uma alta prevalencia de nascimentos gemelares independente de praticas de fertilização assistida. Foi desenvolvido um estudo do tipo caso – controle. Foram estudadas um total de 39 casos (mães de gêmeos naturais de CG) e 214 controles, sendo destes 97 mulheres residentes em CG e 117 em Porto Alegre, que tiveram apenas gestações únicas. Foi realizada extração de DNA a partir de sangue e genotipagem através da metodologia TaqMan SNP Genotyping Assay (Applied Biosystems, USA). As análises indicaram que o alelo 198 (CA22) do gene IGF-1 está em maior frequência no grupo de mães de gêmeos, tanto quando comparado com controles de CG (p= 0,01), odds ratio de 95% de confiança, quando com controles de PA (p= 0,001). Os três grupos estudados não possuem diferenças significativas nas frequências dos alelos do polimorfismo do gene IGFBP-3-202-A/C. Este estudo aponta o polimorfismo 198 do gene IGF-I como um fator envolvido na gemelaridade. Isto está de acordo com observações anteriores, que quanto maior o número de repetições e CA, maior os níveis de IGF-I circulantes, que por sua vez induzem maior número de receptores FSH e LH, promovendo a foliculogênese, ovulação, fertilização e também desenvolvimento do embrião. / Although genetic factors related to twin births in humans have been largely investigated, there is great unknowledge about specific genes influencing this process. On this study two genes were analyzed, IGF-I and IGFBP-3, which synthesize proteins that form a complex, where the gene IGFBP-3 codify the connecting protein 3 to the growth factor similar to insulin, which is responsible for carrying 90% of the protein synthesized by the IGF-I gene (insulin-like growth factor). The protein synthesized by the IGF-I gene acts in granulosa cells promoting an increase in the number of receptors for FSH and LH, delaying the process of follicular atresia, promoting folliculogenesis, ovulation, fertilization, implantation and subsequent development of the embryo. IGF-I (CA)n polymorphism, where the number of repetitions of cytosine and adenine is variable. The IGFBP-3 gene has a SNP at position - 202 in its promoter region, in which can occur an exchange of cytosine to adenine (A/C). There are evidences that this lociis significantly a genetic factor of influence in the levels of IGFBP-3 and IGF-I in young women. A study type case - control was developed. It was studied a total of 39 cases (mothers of twins from CG) and 214 controls, being 97 women who reside in CG (controls (CG)) and 117 in Porto Alegre, who had only single pregnancies (controls (PA)). DNA extraction was performed from blood and genotyping through the methodology TaqMan SNP Genotyping Assay (Applied Biosystems, USA). The analysis indicated that allele 198 (CA22) of gene IGF-1 is more frequently in the group of mothers of twins, when compared with controls CG (p = 0.01) and with controls PA (p = 0.001 ). The three studied groups do not have significant differences in the alleles' frequencies of the polymorphism of gene IGFBP-3-202-A / C. This study indicates polymorphism 198 of gene IGF-I as a factor involved in twinning. This is in agreement with previous observations that, the greater the number of repetitions and CA, the higher the levels of circulating IGF-I. These are directly involved with the larger number of FSH and LH receptors, promoting folliculogenesis, ovulation, fertilization and also embryo development.

Um abortamento é a perda de uma gestação clínica intrauterina antes que o feto tenha atingido viabilidade até a 24a semana de gestação. A incidência de abortamentos clínicos espontâneos é cerca de 15 a 25% das gestações detectadas, e em 50% das concepções humanas. Os abortamentos são recorrentes em 3 a 5% dos casais em idade reprodutiva. As perdas gestacionais recorrentes ou abortamentos recorrentes (AR) são definidos como duas ou mais interrupções de gestações clínicas. A etiologia dos AR é extremamente diversa, incluindo anormalidades genéticas, imunológicas, anatômicas, endócrinas e uterinas. Em aproximadamente 50% dos AR, a etiologia não é encontrada, podendo ser chamada de idiopática. Alterações na implantação e placentação podem causar perdas gestacionais. Genes relacionados à inflamação, implantação, stress oxidativo e angiogênese poderiam estar envolvidos na etiologia dos AR. Variantes genéticas que alterem a expressão, função ou localização desses fatores poderiam afetar o risco de abortamentos recorrentes. Nesse trabalho foi investigado o efeito de variantes polimórficas nos genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 e LIF como fator de risco para AR. Foram avaliadas 149 mulheres com AR e 208 mulheres férteis e sem perdas gestacionais como controles. A distribuição de frequências alélicas não foi diferente entre os grupos em nenhum dos polimorfismos avaliados. No entanto, portadoras do alelo polimórfico -1026A em iNOS apresentaram maior risco para AR (OR = 1,92; 95% IC: 1,18-3,11; p= 0,008). Além disso, pacientes que relataram histórico de consumo de álcool também mostram maior risco para AR (OR 2,075; IC 1,32-3,27; p = 0,002). O polimorfismo funcional -1026C/A na região promotora de iNOS provoca um aumento de 4,7 a 5,9 vezes em sua atividade promotora. O aumento da expressão de iNOS pode levar à produção excessiva de óxido nítrico (NO), estimulando a produção de peroxinitrito, um potente pró-oxidante. O stress oxidativo pode prejudicar a invasão embrionária e a proliferação placentária, e já foi associado a AR. Os achados deste trabalho reforçam a hipótese de que o NO e o stress oxidativo estão envolvidos na fisiopatologia dos AR. / A miscarriage is the unintentional termination of an intrauterine clinical pregnancy before viability is reached, before the gestational age of 24 weeks. Spontaneous clinical miscarriages occur in about 15 to 25% of clinically recognized pregnancies, and in approximately 50% of human conceptions. Miscarriages are recurrent in 3 to 5% of couples in reproductive age. Recurrent miscarriage (RM), or recurrent pregnancy loss (RPL), is defined as the loss of two or more clinical pregnancies. The etiology of RPL is diverse, including genetic, immunologic, anatomic, endocrine and uterine abnormalities. No underlying cause for RPL can be identified in approximately 50% of cases, and thus, these cases are considered unexplained RPL. Derangements in embryo implantation and placentation can cause pregnancy losses. Genes linked to inflammation, embryo implantation, oxidative stress and angiogenesis may be involved in the etiology of RPL. Genetic variants that can modify gene expression, function or location might alter the risk for RPL. In this study, the effect of genetic variants in the genes VEGFA, PTGS2, NOS2, NOS3, TP53, TP63, TP73 and LIF were investigated as a risk factor for RPL. We evaluated 149 RPL cases and 208 fertile women with no history of pregnancy loss as controls. Allele frequencies were not different between groups for the variants assessed, nonetheless, women carrying the iNOS -1026A variant presented a higher risk for RPL (OR = 1.92, 95% CI: 1.18-3.11; p= 0.008). Additionally, patients who reported a history of alcohol consumption also presented a higher risk for RPL (OR 2.075, CI 1.32-3.27; p = 0.002). The functional polymorphism -1026C/A in the iNOS promoter region is responsible for an increase of 4.7 to 5.9-fold in iNOS promoter activity. The rise in iNOS expression may lead to excessive nitric oxide (NO) production and, in turn, increase the production of peroxynitrite, a potent pro-oxidant. Oxidative stress can impair embryo implantation and placental proliferation, and it has been associated with RPL. The findings of this study support the hypothesis that NO and oxidative stress play a role in the pathophysiology of RPL.

A prevenção das doenças cardiovasculares é, atualmente, uma das principais metas para o cuidado com a saúde nos países ocidentais. Os inibidores da HMG CoA redutase (estatinas) são os fármacos mais utilizados para a prevenção das doenças cardiovasculares devido a sua eficácia em reduzir os níveis de colesterol e por serem bem tolerados durante o tratamento. Apesar de serem eficazes, existe uma grande variabilidade interindividual à resposta ao tratamento com estatinas. Parte dessa variação pode ser explicada por fatores genéticos, que podem afetar tanto a farmacocinética quanto a farmacodinâmica desses fármacos. Na presente dissertação foram avaliados polimorfismos funcionais nos genes SLCO1B1 e SLCO1B3, que codificam os polipeptídeos transportadores de ânions orgânicos (OATPs) 1B1 e 1B3 respectivamente, e sua possível influência sobre a eficácia e segurança do tratamento com 20 mg diárias de sinvastatina em uma amostra de 161 indivíduos de ancestralidade européia da região metropolitana de Porto Alegre. Os genótipos dos polimorfismos 388A>G, 521T>C e 463C>A do gene SLCO1B1 e 334T>G e 699G>A do gene SLCO1B3 foram determinados por discriminação alélica com ensaios Taqman 5 -nuclease em PCR em tempo real. Polimorfismos do gene SLCO1B1 foram associados significativamente com a resposta ao tratamento com sinvastatina. A variante 388A>G foi significativamente associada com uma maior redução nos níveis de colesterol total e LDL colesterol nos pacientes tratados com sinvastatina (P = 0,011 e P = 0,013 respectivamente). Os haplótipos SLCO1B1*1b e SLCO1B1*14 foram associados significativamente com a redução dos níveis de LDL colesterol após 6 meses de tratamento (P = 0,016 e P = 0,019 respectivamente). As variantes do gene SLCO1B3 estudadas não parecem influenciar a resposta ao tratamento com sinvastatina. Os polimorfismos dos genes SLCO1B1 e SLCO1B3 não estão relacionados com o aparecimento de efeitos adversos devido ao uso de sinvastatina na amostra estudada. Os resultados relatados na presente dissertação demonstram a importância das variantes dos genes que codificam os OATPs para a farmacogenética dos inibidores de HMG CoA redutase. Entretanto, estudos em diferentes populações com as diferentes estatinas devem ser realizados futuramente para avaliar a influência dos polimorfismos dos OATPs na resposta às diferentes estatinas. / At present, cardiovascular disease prevention is the major goal of health care in western countries. HMG-CoA reductase inhibitors (statins) were the most utilized drugs in cardiovascular disease prevention due the high lipid-lowering efficacy and tolerance of treatment. Although a large interindividual variation in statin treatment response is frequently observed. Part of this variability could be explained by genetic factors that affect drug pharmacokinetics and pharmacodynamics. In the present study, we evaluated the influence of functional polymorphisms in SLCO1B1 and SLCO1B3 genes, those codifying organic anions transporters polypeptides (OATPs) 1B1 and 1B3 respectively, on simvastatin 20 mg per day treatment efficacy and tolerance in 161 subjects of European ancestry from Porto Alegre metropolitan region. The 388A>G, 521T>C and 463C>A SLCO1B1 gene polymorphisms and 334T>G and 699G>A SLCO1B3 gene polymorphisms were determined by allele discrimination with Taqman 5 -nuclease assays in real time PCR. SLCO1B1 gene polymorphisms were significantly associated with simvastatin treatment response. The 388A>G SNP was significantly associated with total cholesterol and LDL cholesterol reduction in patients treated with simvastatin (P = 0.011 e P = 0.013 respectively). SLCO1B1*1b and SLCO1B1*14 haplotypes were significantly associated with LDL cholesterol reduction 6 month treatment (P = 0.016 e P = 0.019 respectively). SLCO1B3 gene variants did not seem to influence the simvastatin treatment response. SLCO1B1 and SLCO1B3 gene polymorphisms were not related to the occurrence of adverse effects due to the use of simvastatin in the sample studied. The reported results in the present study demonstrated the OATPs variants are important to the HMG-CoA reductase inhibitor pharmacogenetics. However, future studies in populations and with different statins should be made to assess the OATP polymorphisms influence in response to statins.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-11-12T12:36:38Z No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-12T12:53:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-12T12:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FrancieleMoraesAmaral.pdf: 2972295 bytes, checksum: 3e384e3b049cdffc1ac92f675bc2ad40 (MD5) / Trombofilias são definidas como uma predisposição à trombose devido a alterações hematológicas que induzem hipercoagulabilidade sanguínea; podem ser herdadas ou adquiridas. Elas são individualmente caracterizadas por uma grande variabilidade fenotípica, até quando ocorrem dentro da me sma família. Embora as trombofilias hereditárias ocorram, na maioria dos casos, devido a mudanças relacionadas com inibidores fisiológicos da coagulação ou mutações nos genes de fatores de coagulação, os níveis elevados de homocisteína no plasma também podem ser responsáveis por episódios vaso-oclusivos podendo ser adquiridos (deficiências nutricionais de folato e vitaminas B6 e B12) e / ou causados por fatores genéticos (mutações nos genes responsáveis pela expressão de enzimas envolvidas no metabolismo intracelular de homocisteína). Nosso objetivo foi investigar a frequência de polimorfismos Cistationina β-sintetase (CBS) 844ins68 e Metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) C677T e A1298C em 85 pacientes ambulatoriais do Hospital de Base do Distrito Federal com o diagnóstico de trombose, de ambos os sexos (65 mulheres e 20 homens) com idades entre 14-56 anos, além de tentar compreender a possível associação de polimorfismos como fatores de risco para eventos trombóticos. Para isso, amostras de sangue foram submetidas à genotipagem por método baseado em PCR e dosagens séricas de ácido fólico, vitamina B12 e homocisteína. Todos os marcadores genéticos estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Houve diferença significativa entre os sexos nos valores séricos de homocisteína, sendo que os homens apresentaram dosagem mais elevada. Uma correlação positiva e significativa também foi evidenciada entre trombose recorrente e níveis de homocisteína (p= 0,006). Associação significativa com o risco de recorrência foi encontrada para homens (odds ratio (OR) = 4,214, intervalo de confiança de 95% (IC) = 1,1ββ80-15,048, p = 0,020), enquanto decréscimo desse risco foi verificado para as mulheres (odds ratio (OR) = 0,237, intervalo de confiança de 95% (IC) = 0,066-0,847, p = 0,020). A atividade física também foi significativamente associada com a redução do risco de trombose venosa cerebral (TVC) (odds ratio (OR) = 0,531, intervalo de confiança de 95% (IC) = 1,056-8,292, p = 0,035). Analisados separadamente, cada um dos polimorfismos estudados não teve influência sobre a variabilidade da dosagem sérica, porém quando a interação dos três polimorfismos foi realizada por MANOVA, os resultados foram significativos para homocisteína (p = 0,000). 677 MTHFR CC e genótipos CT (p = 0,000) e MTHFR 1298 entre AA e AC (p = 0,11), sendo que todos os heterozigotos apresentaram maior valor. Tromboses são eventos de etiopatogenia multigênica e multifatorial, em que o risco de manifestação da doença associado a cada alteração genética isolada é relativamente baixo, contudo a presença de mutações em vários genes aumenta significativamente este risco. Desta forma, nossos resultados indicam que as interações entre esses polimorfismos podem afetar os níveis séricos de homocisteína, onde a heterozigose pode ser um indicador de fator de risco para episódios vaso-oclusivos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Thrombophilias are defined as a predisposition to thrombosis due to hematological changes inducing blood hypercoagulability; they can be inherited or acquired. They are individually characterized by a large phenotypic variability, even when they occur within the same family. Although hereditary thrombophilias are, in most cases, due to changes related to physiological coagulation inhibitors or mutations in the genes of coagulation factors, high levels of plasma homocysteine may also be responsible for vaso-occlusive episodes and may have acquired (nutritional deficiencies of folate and vitamins B6 and B12) and/or genetic causes (mutations in the genes responsible for expression of enzymes involved in the intracellular metabolism of homocysteine). We aimed to investigate the frequency of the polymorphisms Cystathionine β-synthase (CBS) 844ins68 and Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) C677T and A1298C in 85 outpatients of the Hospital de Base do Distrito Federal with a diagnosis of thrombosis, of both genders (65 women and 20 men) aged 14-56 years old, and to try to understand the possible association of such polymorphisms as risk factors for thrombotic events. For this, blood samples were submitted to genotyping by PCR-based methods and serum dosages of folic acid, vitamin B12 and homocysteine. All genetic markers were in Hardy-Weinberg equilibrium. There was significant difference between the genders in the serum homocysteine values, where the males had a higher dosage. A positive significant correlation was also evidenced between recurrent thrombosis and homocysteine levels (p=0.006). A significant association with risk of recurrence was found for man (odds ratio (OR) = 4.214; 95% confidence interval (CI) = 1.180-15.048, p=0.020), while decrease in this risk was found for women (odds ratio (OR) = 0.237; 95% confidence interval (CI) = 0.066- 0.847, p=0.020). Physical activity was also significantly associated with reduced risk of cerebral venous thrombosis (CVT) (odds ratio (OR) = 0.531; 95% confidence interval (CI) = 1.056-8.292, p=0.035). Analyzed separately, each one of the studied polymorphisms had no influence on serum dosage variability, but when the interaction of the three polymorphisms was performed by MANOVA, results were significant for homocysteine (p=0.000). In these interaction analyses, there were differences between CBS DD and ID genotypes (p=0.002); MTHFR 677 CC and CT genotypes (p=0.000); and MTHFR 1298 AA and AC genotypes (p=0.11), where all heterozygous had higher values. Thromboses are events of multigenic and multifactorial etiopathogenesis, where the risk of disease manifestation associated with each single genetic alteration is relatively low, but the presence of mutations in several genes significantly increases this risk. Thus, our results indicate that interactions among these polymorphisms can affect serum levels of homocysteine, where heterozygosis could be an indicator of risk factor for vaso-occlusive episodes.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-04-30T14:41:02Z No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-05-02T13:04:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-02T13:04:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_IelerFerreiraRibeiro.pdf: 1216592 bytes, checksum: d00140db9fb6953ef58299c495cacd72 (MD5) / O exercício físico, por aumentar o consumo de oxigênio, pode produzir um desequilíbrio entre a geração de espécies reativas de oxigênio (ERO) e a capacidade de defesa antioxidante do organismo, levando ao estresse oxidativo. Esta sobrecarga oxidativa pode acarretar dano celular e graves lesões musculares com consequente processo inflamatório. Neste contexto, muitos atletas consomem suplementos antioxidantes para evitar os danos oxidativos, a inflamação e o consequente comprometimento do desempenho. O pequi (Caryocar brasiliense Camb.), um fruto típico do cerrado brasileiro, contém diversos componentes antioxidantes, importantes para reduzir ERO produzidas durante a atividade física. Visto que nutrientes presentes na alimentação podem interagir com o genoma humano para influenciar a saúde e a doença, e variabilidade genética também pode influenciar a resposta à dieta, estudos que avaliem esta interação podem contribuir para futuras intervenções dietéticas baseadas no conhecimento do requerimento nutricional, do estado nutricional e do genótipo. Alguns polimorfismos já foram descritos na literatura como agentes interferentes do desempenho atlético em determinadas categorias de esportes. Entre eles, várias variantes sob a forma de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) já foram identificadas, incluindo os SNPs R577X no gene da α-actinina-3 (ACTN-3), T→ G na região promotora do gene da eritropoetina (EPO) e G6002A no receptor de eritropoetina (EPOR). O gene da ACTN-3 codifica a proteína α-actinina-3, componente altamente conservado da maquinaria contrátil das fibras rápidas da musculatura esquelética, e é expresso apenas em miofibras tipo II, que são fibras glicolíticas do músculo esquelético. O polimorfismo da ACTN-3 resulta na substituição de uma arginina (R) por um códon prematuro de parada (X) na posição 577 e cria uma proteína não funcional. A eritropoetina (EPO) é o principal hormônio endógeno regulador da eritropoiese, que permite a sobrevivência, proliferação, diferenciação das células progenitoras e, consequentemente, aumento da oxigenação dos tecidos. Assim, polimorfismos no gene da EPO ou de seu receptor (EPOR) podem afetar o desempenho atlético, por influenciarem a expressão de EPO. O objetivo deste trabalho foi investigar a influência dos SNPs rs1815739 no gene da ACTN-3, rs1617640 na região promotora do gene da EPO, e rs121918116 no gene da EPOR na peroxidação lipídica (Teste Tbars), hemograma completo e dosagens bioquímicas de creatina quinase (CK), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e proteína Creativa (PCR e PCR-us), em uma amostra de corredores de rua do Distrito Federal (N=123), antes e depois da suplementação com 400mg de óleo de pequi em cápsulas ingeridas diariamente por 14 dias consecutivos. As amostras de sangue foram coletadas imediatamente após cada uma das corridas para realizar os testes. O DNA foi obtido por extração da fração leucocitária, e a genotipagem foi realizada por PCR seguida por corte com enzimas de restrição. Os dados estatísticos para as frequências alélicas e genotípicas foram gerados pelo programa Genepopweb®, e os demais dados pelo programa Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Os resultados demonstraram que todos os genótipos estudados encontraram-se em equilíbrio de Hardy- Weinberg (EHW). Apesar dos muitos parâmetros analisados apresentarem diferença significativa entre os sexos, faixas etárias e distâncias percorridas, nenhuma correlação entre esses parâmetros e os polimorfismos analisados foi encontrada. O polimorfismo da EPO influenciou os resultados do eritrograma e do plaquetograma, sugerindo uma vantagem aeróbica para o genótipo TG, e uma desvantagem para o genótipo GG sobre possíveis eventos de complicações microvasculares, enquanto não foi encontrada associação do polimorfismo da ACTN-3 com o desempenho de resistência. Ambos os polimorfismos influenciaram as respostas dos corredores ao óleo de pequi, onde respostas significativas foram observadas para o genótipo selvagem da EPO (TT) nos valores de eritrócitos (p=0,000), hematócrito (HCT, p=0,001), hemoglobina corpuscular média (HCM, p=0,000) e concentração hemoglobínica corpuscular média (CHCM, p=0,001); e para os genótipos TT e TG (p=0,000 para ambos) nos valores da amplitude ou variação da distribuição do tamanho dos eritrócitos (RDW). Diferenças significativas também foram observadas no plaquetograma só para os genótipos TT e TG. O polimorfismo da ACTN-3 influenciou principalmente os valores de AST e CK, onde os heterozigotos RX tiveram uma redução significativa nos valores de AST (p=0,037), e os homozigotos XX, nos valores de CK (p=0,010) após a suplementação o óleo de pequi. Esses resultados de resposta diferenciada de cada polimorfismo à suplementação com cápsulas de pequi demonstram a importância dos efeitos da nutrigenômica no desempenho do atleta. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Physical exercise, by increasing oxygen consumption, can produce an imbalance between the generation of reactive oxygen species (ROS) and antioxidant defense capacity of the organism, leading to oxidative stress. This oxidative overload can cause cell damage and severe muscle damage with consequent inflammation. In this context, many athletes consume antioxidant supplements to prevent oxidative damage, inflammation and consequent impairment of performance. Pequi (Caryocar brasiliense Camb.), a typical fruit of the Brazilian Cerrado, contains several antioxidant components that are important to reduce ROS produced during physical activity. Since nutrients present in food can interact with the human genome to influence health and disease, and genetic variability may also influence the response to diet, studies evaluating this interaction may contribute to future dietary interventions based on knowledge of nutritional requirement, nutritional status and genotype. Some polymorphisms have been described in the literature as agents interfering in athletic performance in certain categories of sports. Among them, several variants in the form of single nucleotide polymorphisms (SNPs) have been identified, including the SNPs R577X in the α-actinin-3 gene (ACTN-3), T→G in the promoter region of the erythropoietin (EPO) gene, and G6002A in the erythropoietin receptor (EPOR). The ACTN-3 gene encodes protein α-actinin-3, a highly conserved component of the contractile machinery of the fast skeletal muscle fibers, and is expressed only in type II myofibers, which are glycolytic fibers of skeletal muscle. The ACTN-3 polymorphism results in substitution of an arginine (R) by a premature stop codon (X) at position 577 and creates a non-functional protein. Erythropoietin (EPO) is the main endogenous hormone regulator of erythropoiesis, which allows the survival, proliferation, and differentiation of progenitor cells and, hence, increased oxygenation of the tissues. Thus, polymorphisms in the EPO gene or in its receptor can affect athletic performance by influencing the expression of EPO. The aim of this study was to investigate the influence of the SNPs rs1815739 in the ACTN-3 gene, rs1617640 in the promoter region of the EPO gene, and rs121918116 EPOR gene in the lipid peroxidation (TBARS assay), taking a complete hemogram and biochemical dosages of creatine kinase (CK), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and C-reactive protein (CRP and hs-CRP), in a sample of street runners from the Federal District (N=123), before and after supplementation of 400mg of pequi oil capsules taken daily for 14 consecutive days. Blood samples were taken immediately after racing to perform the tests. DNA was obtained by extraction of leukocyte fraction, and genotyping was performed by PCR followed by cut with restriction enzymes. Statistical data for the allele and genotype frequencies were generated by the program Genepopweb®, and other data by the program Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Results showed that all genotypes were found in Hardy-Weinberg Equilibrium (HWE). Although many examined parameters showed significant differences between sexes, age group and distance covered, no correlation between these parameters and the analyzed polymorphisms was found. EPO polymorphism influenced results of erythrogram and plateletgram, suggesting an aerobic advantage for TG genotype and a disadvantage for GG genotype concerning possible microvascular complication events, while no association was found for ACTN-3 polymorphism with endurance performance. Both polymorphisms influenced runner’s response to pequi oil, where the significant responses were observed for EPO wild type genotype (TT) in the red blood cells, hematocrit, mean corpuscular hemoglobin and mean corpuscular hemoglobin concentration values; and for TT and TG genotypes in the red cell distribution width values. Significant differences were also observed in the plateletgram only for TT and TG genotypes. ACTN-3 mainly influenced AST and CK values, where heterozygous RX had significant decrease in AST values (p=0.037), and homozygous XX in CK values (p=0.010) after pequi oil supplementation. These results of differential response of each polymorphism to the supplementation with pequi capsules demonstrate the importance of the effects of nutrigenomics on athletic performance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2007. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2009-11-28T18:13:59Z No. of bitstreams: 1 2007_FelipeMalheirosGawryszewski.pdf: 4809127 bytes, checksum: 9f7f0d3cbbc67d31690690b66bb65252 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-11-30T12:25:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_FelipeMalheirosGawryszewski.pdf: 4809127 bytes, checksum: 9f7f0d3cbbc67d31690690b66bb65252 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-30T12:25:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_FelipeMalheirosGawryszewski.pdf: 4809127 bytes, checksum: 9f7f0d3cbbc67d31690690b66bb65252 (MD5) Previous issue date: 2007 / Entre as hipóteses mais discutidas para explicar padrões conspícuos no corpo das aranhas ou decorações em suas teias estão a atração de presas e a proteção da teia. Gasteracantha cancriformis é uma espécie de aranha de teia orbicular, comum no cerrado, que apresenta polimorfismo de cor. Suas cores, bem como o stabilimentum em forma de tufos de seda que são aderidos a sua teia, as tornam aparente na vegetação para os seres humanos. Dessa forma, os objetivos desta dissertação foram: (1) identificar e descrever os morfos de G. cancriformis; (2) analisar o espectro de reflectância desses morfos e dos tufos das teias; (3) testar a hipótese da atração de presas para as cores de G. cancriformis; (4) testar a hipótese da atração de presas para os tufos das teias e (5) testar a hipótese da proteção da teia para os tufos das teias. Foram identificados pelo menos oito fenótipos. Os mais comuns foram o amarelo com espinhos pretos, seguido pelo branco com espinhos pretos e o preto e branco com espinhos pretos. Contrariamente à hipótese da atração de presas, o número de presas presentes na teia, o número de buracos na teia causado por presas e os restos de presas presentes na teia não foram diferentes entre os morfos, nem diferentes em indivíduos que tiveram a coloração manipulada com tinta preta ou amarela. Em laboratório, Drosophila melanogaster não mostrou nenhuma preferência pelos morfos ou por indivíduos pintados. A hipótese da atração de presas também não foi corroborada para os tufos nas teias, pois o número de presas capturadas pelas teias, o número de buracos na teia e o tipo de presas capturadas não diferiram entre teias com tufos pintados de preto e teias com o intervalo entre os tufos pintado de preto, muito embora tenha sido encontrada uma correlação positiva entre número de tufos e número de restos de presa na teia. Em laboratório, D. melanogaster não mostrou nenhuma preferência por fios de seda com ou sem tufos. A hipótese da proteção da teia também não foi corroborada, pois a taxa de destruição das teias foi a mesma independentemente da manipulação experimental. Outras hipóteses são propostas para explicar os padrões de cores e tufos em G. cancriformis. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Prey attraction and web protection are among the most discussed hypotheses to explain conspicuous patterns in spiders’ body and their webs. Gasteracantha cancriformis is an orb weaver spider, common in cerrado, which body shows colour polymorphism. Its colours, together with its silk tufts (stabilimentum) added in webs, make this species conspicuous to human eyes. Hence, the purposes of this dissertation were: (1) identify and describe G. cancriformis colour morphs; (2) analyze the reflectance spectrum of colour morphs and tufts; (3) test the prey attraction hypothesis for the colour morphs; (4) test the prey attraction hypothesis for web tufts; and (5) test the web protection hypothesis for web tufts. At least eight different colour morphs were identified. The most common were: yellow with black spines, white with black spines, and black and white with black spines. Contrary to the prey attraction hypothesis, the number of prey captured by webs, number of holes caused by preys and number of remains of captured preys did not differ between colour morphs and individuals that had been painted black or yellow. In laboratory, Drosophila melanogaster did not show any preference for colour morphs or painted individuals. The prey attraction hypothesis was not confirmed for web tufts. Number of prey captured by webs, number of web holes and type of prey captured did not differ between webs with painted tufts and sham-manipulated webs, Nonetheless it had been found a positive correlation between number of tufts and number of remains of captured prey. In laboratory, D. melanogaster did not show any preference for tufted silk lines or non-tufted silk lines. The web protection hypothesis was not corroborated as well. Rate of web destruction was the same regardless experimental manipulation. Other hypotheses to explain colour pattern and tufts in G. cancriformis are proposed.

Dissertação (mestrado)-Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-11-09T17:16:21Z No. of bitstreams: 1 2011_GracianaSouzaLordelodeCarvalho.pdf: 1196473 bytes, checksum: d8518b130278d039d040202e0b50596d (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2011-11-23T14:25:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_GracianaSouzaLordelodeCarvalho.pdf: 1196473 bytes, checksum: d8518b130278d039d040202e0b50596d (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-23T14:25:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_GracianaSouzaLordelodeCarvalho.pdf: 1196473 bytes, checksum: d8518b130278d039d040202e0b50596d (MD5) / A leucemia mielóide crônica é uma doença de células hematopoiéticas na qual ocorre a proliferação celular descontrolada dos leucócitos. Embora os aspectos clínicos e biológicos estejam bem documentados, pouco se sabe sobre a susceptibilidade individual à doença. Neste trabalho foi realizado um estudo caso-controle analisando a prevalência dos polimorfismos MTHFR C6777T e A1298C, GSTM1, GSTT1 e haptoglobina em 105 pacientes com leucemia mielóide crônica (LMC) e em 273 controles saudáveis, por meio das técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida ou não por digestão com enzimas de restrição (RFLP). Uma associação com risco de desenvolver LMC foi encontrada para os genótipos MTHFR 1298AA (OR = 1,794 IC 95% = 1,14-2,83) e GSTM1 não nulo (OR = 1,649; IC 95% = 1,05-2,6; p = 0,031), enquanto os genótipos MTHFR 1298AC (OR = 0,630; IC 95% = 0,40-0,99, p=0,047) e GSTM1 nulo (OR = 0,606; IC 95% = 0,21-0,77, p = 0,031) diminuiram este risco. Verificou-se para o genótipo MTHFR 1298AA, um aumento do risco para o sexo feminino (OR=2,052; 95% CI=1,08-3,92; p=0,028), como também para faixa etária de 20-40 anos (OR=1,980; 95% CI=1,06-4,65; p=0,047) e para indivíduos de pele branca (OR=2,218; 95% CI=1,09-4,51; p=0,026). Em relação a GSTM1, o aumento do risco foi também associado ao sexo feminino (OR=2,505; 95% CI=0,21-0,77; p=0,031) e para indivíduos >60 anos (OR=6,222; 95% CI=1,63-23,76; p=0,006). Indivíduos Hp1F-1S de pele negra também apresentaram aumento do risco (OR=7,200; 95% CI=0,94-54,94; p=0,037).A diminuição do risco anteriormente apresentada para MTHFR 1298AC e GSTM1 nulo foram também relacionados ao sexo feminino, para MTHFR (OR=0,520; 95% CI=0,27-0,99; p=0,046) e para GSTM1 (OR=0,399; 95% CI=0,21-0,77; p=0,005). Também se observou para GSTM1 nulo, a diminuição do risco para >60 anos (OR=0,161; 95% CI=0,04-0,61; p=0,006). Uma diminuição do risco para indivíduos de pele negra foi observada para o genótipo Hp1S-2 da haptoglobina (OR=0,619; 95% CI=0,44-0,87; p=0,011). Uma diminuição do risco no sexo masculino ocorreu apenas para o genótipo MTHFR 677CC (OR=0,495; 95% CI=0,26-0,95; p=0,032).Os resultados indicaram também a seleção a favor dos heterozigotos para o loco MTHFR 1298. A variabilidade em populações humanas pode refletir, em parte, processos distintos de seleção natural e adaptação às condições ambientais variáveis. A população brasileira é muito heterogênea e miscigenada, e nossos resultados indicaram que, pelo menos para esta população, esses dois polimorfismos são importantes no contexto da LMC, necessitando de maiores investigações em associação com dosagens de folato e dados clínicos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chronic myeloid leukaemia is a haematopoietic stem cell disorder causing uncontrolled cell proliferation of white blood cells. Although these clinical and biological aspects are well documented, little is known about individual susceptibility to the disease. We conducted a case-control study analysing the prevalence of the polymorphisms MTHFR C6777T, MTHFR A1298C,GSTM1, GSTT1 and Haptoglobin in 105 patients with chronic myeloid leukaemia (CML) and 273 healthy controls, using polymerase chain reaction (PCR)-based methods. An association with risk of developing CML was found for MTHFR 1298AA (OR= 1.794; 95% CI= 1.14−2.83) and GSTM1 non-null (OR= 1.649; 95% CI= 1.05−2.6; p=0.031) genotypes, while MTHFR 1298AC (OR= 0.630; 95% CI= 0.40−0.99; p=0.047) and GSTM1 null (OR= 0.606; 95% CI= 0.21−0.77; p=0.031) genotypes decreased this risk. For MTHFR 1298AA, this risk was particularly related to females (OR= 2.052; 95% CI= 1.08-3.92; p=0.028), age group of 20-40 years (OR= 1.980; 95% CI= 1.06-4.65; p=0.047) and white skin colour (OR= 2.218; 95% CI= 1.094.51; p=0.026); for GSTM1, it was related to females (OR=2.505; 95% CI= 0.210.77; p=0.031) and the age group >60 years (OR= 6.222; 95%CI= 1.63-23.76; p=0.006). Results also showed an increased risk for individuals of black skin colour carrying Hp1F-1S genotype, despite the small sample size and the large confidence interval (OR= 7.200; 95% CI= 0.94-54.94; p=0.037). A decreased CML risk was observed for the genotypes MTHFR 1298AC (OR= 0.630; 95% CI= 0.40-0.99; p=0.047) and GSTM1 null (OR= 0.606; 95% CI= 0.21-0.77; p=0.031), and both were also related to females (OR= 0.520; 95% CI= 0.27-0.99; p=0.046 for MTHFR; and OR= 0.399; 95% CI= 0.21-0.77; p=0.005 for GSTM1). For GSTM1 null genotype, it was also related to the age group >60 years (OR= 0.161; 95% CI=0.04-0.61; p=0.006). For males, a decreased risk was observed only for MTHFR 677CC genotype (OR= 0.495; 95% CI= 0.26-0.95; p=0.032). A decreased risk was also observed for individuals of black skin colour carrying Hp1S-2 genotype (OR= 0.619; 95% CI= 0.44-0.87; p=0.011). For males, a decreased risk was observed only for MTHFR 677CC genotype (OR= 0.495; 95% CI= 0.26-0.95; p=0.032).Results also indicated selection in favour of heterozygous for MTHFR 1298 loco. The considerable range of variation in human populations may reflect, in part, distinctive processes of natural selection and adaptation to variable environmental conditions. The Brazilian population is very mixed and heterogeneous, and our results indicated that, at least for this population, these two locus are important in the context of CML, needing further investigation in association with folate dosages and clinical data.

Orientador: Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T01:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_EricaFurquimSoledadeNeves_M.pdf: 1247474 bytes, checksum: fb164930ca8036640d7d8a9b9f56bca8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: As glutationa S-transferases (GSTs) são enzimas detoxificantes que atuam no mecanismo de proteção contra a carcinogênese. Os genes GSTM1 e o GSTT1 são polimórficos em humanos e estão deletados de forma homozigótica em 40-50% e 15-25% dos indivíduos de diferentes populações étnicas, respectivamente. Os polimorfismos T6235C e A4889G do gene CYP1A1 estão também associados ao metabolismo de carcinógenos e as formas variantes CC e GG são identificadas em 5-20% e 5% dos indivíduos de diferentes populações étnicas. O objetivo deste estudo é avaliar se os polimorfismos destes genes influenciam o risco de ocorrência do carcinoma epidermóide (CEC) de cabeça e pescoço ou se estão associados com os aspectos clínicos dos pacientes com a doença. Para tanto, foram avaliados 142 pacientes com CEC de cabeça e pescoço e 142 controles. A genotipagem foi realizada por meio da reação em cadeia da polimerase (multiplex-PCR) e PCR e digestão enzimática, respectivamente. O significado estatístico das diferenças entre grupos foi calculado por meio do teste da probabilidade exata de Fisher. As determinações dos riscos de ocorrência do CEC, foram obtidas por meio das razões das chances (ORs) considerando um intervalo de confiança de 95% (IC 95%). Não foram observadas diferenças entre as freqüências da deleção homozigótica dos genes GSTM1 (40,8% versus 46,5%; P= 0,16) e GSTT1 (25,3% versus 20,4%; P= 0,94) em pacientes e controles. Entretanto a freqüência da deleção homozigótica do gene GSTM1 em pacientes com tumor dos estádios I a III foi menor do que a observada em pacientes com tumores do estádio IV (20,4% versus 51,8%; P= 0,002). A freqüência da deleção homozigótica do gene GSTM1 em pacientes com os estádios I a III do tumor foi também menor do que a observada em controles (20,4% versus 46,5%; P= 0,0008). As freqüências combinadas dos genótipos TC + CC do polimorfismo T6235C do gene CYP1A1 foram similares em pacientes e controles (36,6% versus 33,8%; P= 0,85). Em contraste, a freqüência combinada dos genótipos TC + CC em pacientes com tumor de laringe foi menor do que a observada em pacientes com tumores de outras localizações (21,6% versus 41,9%; P= 0,03). Já as freqüências combinadas dos genótipos AG + GG do polimorfismo A4889G do gene CYP1A1 foram similares em pacientes e controles (33,8% versus 28,2%; P= 0,71) e em pacientes estratificados por aspectos clínicos, anátomo-patológicos e biológicos do tumor. Os resultados deste estudo, em seu conjunto, sugerem que a presença dos genes GSTM1 parecem proteger indivíduos da ocorrência do CEC mais localizado de cabeça e pescoço, enquanto que a deleção homozigótica do gene GSTM1 parece atuar na agressividade do tumor em nossos casos. Os genótipos variantes TC + CC do polimorfismo T6235C do gene CYP1A1 parecem proteger indivíduos de nossa região do câncer de laringe. Já os genótipos do polimorfismo A4889G do gene CYP1A1 parecem não influenciar o risco de corrência da doença ou de suas manifstações clínicas, bem como as carcterísticas anátomo-patológicas e biológicas do tumor em nossos casos / Abstract: The glutathione S-transferases (GSTs) are metabolic enzymes involved in carcinogenic detoxification. GSTM1 and GSTT1 polymorphic genes are deleted in humans and null genotypes frequencies are different in several ethnic groups; 40-50% and 15-25% of different population, respectively. Genetic CYP1A1 polymorphisms T6235C and A4889G are also associated to carcinogenic metabolism and variant genotypes CC and GG are identified in 5-20% and 5% of individuals at several ethnic groups. It¿s unclear if these genetic polymorphisms influence head and neck epidermoide carcinoma (CEC) risk, or its association with patients stratified by clinical features. Therefore, 142 patients diagnosed with head and neck cancer and 142 control subjects were evaluated. Genotyping was performed by using polymerase chain reaction (multiplex-PCR) and PCR and subsequent restriction enzyme digestion, respectively. The different statistical significances between groups, was calculated by using the Fisher exact test or Chi ² test. Crude odds ratios (ORs) were calculated and are given with the 95% confidence intervals (IC). There were no difference frequencies statistically significant of GSTM1 null genotype (40,8% versus 46,5%; P= 0,16) neither GSTT1 null genotype (25,3% versus 20,4%; P= 0,94) between patients and controls. However, the homozygous deletion of the GSTM1 gene in patients with tumors of stages I to III was lower than that seem in patients with advanced (stage IV) tumors (20,4% versus 51,8%; P= 0,002). The homozygous deletion of the GSTM1 gene was also less common in stage I to III patients than in controls (20,4% versus 46,5%; P= 0,0008). The frequencies of the combined variant genotypes TC + CC of the CYP1A1 T6235C polymorphism were similar in patients and controls (36,6% versus 33,8%; P= 0,85). In contrast, the combined genotype TC + CC in patients with tumor of larynx was lower than that observed in patients with other tumors (21,6% versus 41,9%; P= 0,03). The frequencies of the combined variant genotypes AG + GG of the CYP1A1 A4889G polymorphism were similar in patients and controls (33,8% versus 28,2%; P= 0,71) and in patients stratified by clinical features, and anatomo-pathological and biological aspects of the tumor. In sumary, the results of this study sugest that the presence of the GSTM1 genes seems to protect individuals against localized tumors, while the homozygous deletion of the GSTM1 gene seems to be associated to the agressiveness of the tumor; the variant genotypes TC + CC of the CYP1A1 T6235C polymorphism seem to protect individuals against larynx cancer; and the genotypes of the CYP1A1 A4889G polymorphism seem do not influence the risk for head and neck tumor, as well as the clinical features of the disease, and anatomo-pathological and biological aspects of the tumor in our cases / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

A doença de Machado-Joseph (DMJ/SCA3) é uma doença neurodegenerativa causada pela expansão de poliglutaminas na proteína ataxina-3. O número de repetições CAG presentes no gene ATXN3 é inversamente correlacionado com a idade de início da doença, mas é responsável por somente 45-60% desta variação. O objetivo deste trabalho foi testar o efeito da metilação no promotor do gene ATXN3, de polimorfismos em genes candidatos e do alelo normal ATXN3 como modificadores do fenótipo da doença. A análise do padrão de metilação em seis sítios CpG através de um ensaio de amplificação multiplex dependente de sondas – específico para metilação foi realizada em amostras de 123 pacientes de 62 famílias. Os polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos genes BAX, CRYAB, GRIK2, IL1B, ITPR1, NEDD8, NEDD9 e CHIP foram analisados em 273 pacientes de 119 famílias. Os volumes cerebrais foram medidos através de ressonância magnética em 30 pacientes não relacionados. A gravidade foi medida pela Escala de Exame Neurológico para Ataxia Espinocerebelar (NESSCA) dividida pelo tempo de duração da doença. Uma correlação inversa significativa foi encontrada entre a idade de início e tamanho da repetição (r=-0,76, r2=0,58, p<0,001). Houve uma tendência de correlação direta entre o grau de metilação e a idade de início para um sítio CpG (p=0,055). Uma correlação significativa foi encontrada entre a gravidade e o tamanho da repetição CAG (r=0,48, r2=0,23, p=0,001). O SNP no gene IL1B (rs16944) apresentou um efeito significativo na idade de início de pacientes com SCA3 (p=0,042). Associação significativa foi observada entre o SNP no gene NEDD9 (rs760678) e a gravidade (p=0,003). SNPs nos genes GRIK2 (rs2227281) e NEDD8 (rs2144487) se relacionaram à medida do volume do cerebelo (p=0,006) e à medida do volume da ponte (p=0,023), respectivamente. Estes resultados sugerem que o controle epigenético no sítio CpG no promotor ATXN3 e que os SNPs nos genes GRIK2, IL1B, NEDD8 e NEDD9 podem contribuir para a variação fenotípica na SCA3. Ademais, os genótipos protetores dos genes GRIK2, IL1B e NEDD8 mostraram ter um efeito aditivo no adiamento do início da doença. O mecanismo exato pelo qual a mutação no gene ATXN3 causa a SCA3 ainda não foi determinado. A expansão da repetição CAG pode conferir uma função tóxica para a proteína, como acontece em outras doenças neurodegenerativas causadas por expansões de poliglutaminas. Considerando esta hipótese, uma maior metilação do promotor do gene ATXN3 pode se relacionar a sua menor expressão e a um menor acúmulo de poliglutaminas no neurônio. Ainda considerando esta hipótese, GRIK2, IL1B, NEDD8 e NEDD9 podem desempenhar um papel protetor, possivelmente por promover a sobrevivência de células neuronais em pacientes com SCA3. SNPs nestes genes poderiam modificar a expressão das proteínas, afetando a agregação de poliglutaminas no cérebro de tal forma que os indivíduos portadores de um genótipo de risco teriam significativamente maior perda gradual de neurônios e um início mais precoce dos sintomas. / Machado-Joseph disease (MJD/SCA3) is a neurodegenerative disease caused by expansion of a polyglutamine tract in ataxin-3. The CAG repeat number of ATXN3 gene is inversely correlated with disease age at onset (AO) but is responsible for only 45-60% of this variation in SCA3. In this study, we investigate if DNA methylation status of the ATXN3 promoter, if polymorphisms in candidate genes, and if normal ATXN3 allele are related to disease phenotype. We designed a methylation-specific multiplex ligation-dependent probe amplification (MS-MLPA) assay for quantitative analysis of methylation status at 6 CpG sites, located within the promoter region of the ATXN3 gene. We have applied this MSMLPA to 123 SCA3 Brazilian patients from 62 families. We investigated single-nucleotide polymorphisms (SNPs) in genes BAX, CRYAB, GRIK2, IL1B, ITPR1, NEDD8, NEDD9, and CHIP in 273 Brazilian SCA3 patients from 119 families. The brain volumetries were obtained from magnetic resonance imaging’s from 30 unrelated patients. The SCA3 severity degree was measured by Neurological Examination Score for Spinocerebellar Ataxia (NESSCA) divided by duration of disease. A significant inverse correlation was found between AO and repeat length (r=-0.76, r2=0.58, p<0.001). There was a trend toward direct correlation between methylation degree and AO for one CpG site in the SCA3 sample (p=0.055). A significant correlation was found between severity and CAG repeat length (r=0.483, r2=0.233, p=0.001). We have found significant associations between a GRIK2 SNP (rs2227281) and cerebellum volume (p=0.006), an IL1B SNP (rs16944) and AO (p=0.042), a NEDD8 SNP (rs2144487) and pons volume (p=0.023), and a NEDD9 SNP (rs760678) and disease severity (p=0.003). These results suggest that epigenetic control at ATXN3 CpG-site and that the SNPs in GRIK2, IL1B, NEDD8, and NEDD9 genes may contribute to the phenotypic expression of SCA3. Moreover, protective genotypes of GRIK2, IL1B, and NEDD8 genes shown to have an additive effect in delaying the onset of disease.The exact mechanism by which the mutation in the ATXN3 gene causes SCA3 has not been determined. The CAG repeat expansion may confer a novel toxic function onto the protein, as it does in other polyglutamine neurodegenerative disorders. Considering this hypothesis, increased methylation of ATXN3 gene promoter can relate to its lower expression and a smaller accumulation of polyglutamine in the neuron. Still considering this hypothesis, GRIK2, IL1B, NEDD8, and NEDD9 might play a protective role, possibly a survival promoting effect, for neuronal cells in SCA3 patients. These four SNPs could affect the protein expression and polyglutamine aggregation in the brain such that risk genotype carriers have a significantly higher gradual loss of neurons and an earlier onset of symptoms.

Um grande número de pacientes em tratamento para tuberculose desenvolve algum tipo de reação adversa. A mais grave destas, hepatotoxicidade, é, muitas vezes, atribuída aos metabólitos tóxicos gerados durante a metabolização da isoniazida (INH), principal fármaco do tratamento. A INH é metabolizada pelas enzimas N-acetiltransferase 2 (NAT2), citocromo P450 2E1 (CYP2E1) e glutationa S-transferase (GSTM1 e GSTT1). Polimorfismos nos genes que codificam estas enzimas parecem influenciar na sua atividade e toxicidade, além de estarem distribuídos de forma variável entre as populações. Este estudo foi elaborado com o objetivo de estimar a frequência dos polimorfismos nos genes CYP2E1, GSTM1 e GSTT1, e avaliar a relação destes genes e de fatores de risco com o desenvolvimento de hepatotoxicidade. Foram incluídos no estudo 245 pacientes que fizeram tratamento para tuberculose no ambulatório do Hospital Sanatório Partenon (Porto Alegre, RS) com rifampicina, isoniazida e pirazinamida (esquema RHZ). Esses pacientes forneceram termo de consentimento livre e esclarecido, entrevista para coleta de dados clínicos e epidemiológicos e amostra de sangue para exames de provas de função hepática e perfil genético. A identificação dos genótipos foi realizada através das técnicas de PCR para os genes GSTM1 e GSTT (presença ou ausência) e PCR-RFLP para CYP2E1 (SNPs nas posições -1053C>T,-1293G>C e 7632T>A). Através da montagem de um banco de dados com as informações epidemiológicas e genéticas foram testadas possíveis relações entre as características. As frequências dos alelos variantes no gene CYP2E1 foram 8% (-1053), 8,5% (-1293) e 12% (7632). Os genes GSTM1 e GSTT1 estavam ausentes em 42.9% e 12.4% da população, respectivamente. Quinze (6,1%) pacientes desenvolveram hepatotoxicidade. Pacientes com genótipo selvagem em CYP2E1, sendo acetiladores lentos para NAT2, estão sob maior risco de desenvolver hepatotoxicidade. O genótipo nulo para GSTM1 e GSTT1 não teve influência na resposta ao tratamento para essa população. Os fatores de risco associados à hepatite induzida por tuberculostáticos foram: HIV positivo, tuberculose extrapumonar e níveis elevados de transaminases basais. / Patients under treatment for tuberculosis (TB) frequently suffer adverse drug reactions. The most severe, hepatotoxicity is often related to toxic metabolites produced during the main drug metabolism, isoniazid (INH). INH is metabolized by N-acetyltransferase 2 (NAT2), cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) and glutathione S-transferase (GSTM1 and GSTT1) enzymes. Polymorphisms in coding genes can modulate enzyme activity and toxicity, and are distributed in a variable way among populations. This study was designed to determine the frequency of CYP2E1, GSTM1 e GSTT polymorphisms, and to evaluate whether clinical risk factors and polymorphism are related to drug-induced hepatotoxicity. A total of 245 TB outpatients from Hospital Sanatorio Partenon (Porto Alegre, RS) using INH, RMP and PZA were included in the study. Patients provided a written informed consent, clinical records through an interview and blood sample for liver enzymes tests and genotyping. Individuals were genotyped using polymerase chain reaction (GSTM1 and GSTT) and restriction fragment length polymorphism (CYP2E1) methods. Using a database containing genetic and clinical information, possible relations were tested. The frequencies for the CYP2E1 polymorphic alelles RsaI, PstI and DraI are 8%, 8,5% and 12%, respectively. GSTM1 and GSTT1 genes are deleted in 42.9% and 12.4% of the population. Fifteen patients (6.1%) developed hepatotoxicity. Patients without polymorphisms in CYP2E1, having NAT2 slow acetylator profile, are at higher risk for drug-induced hepatotoxicity. Null genotype for GSTM1 and GSTT1 showed no influence in drug response. HIV, extrapulmonary TB and high baseline levels of transaminases are independent risk factors for hepatotoxicity in this population.