Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2014 / Made available in DSpace on 2015-02-05T21:22:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 330280.pdf: 2597067 bytes, checksum: 9f9337ed7a914078fa1735f7ec654096 (MD5) Previous issue date: 2014 / O objetivo geral deste trabalho foi estudar o ciclo de vida, o polimorfismo de inversão cromossômica e a possível relação dos arranjos com genes de estresse (hsps). O material de estudo foi coletado em três diferentes unidades de conservação (UCs) de Santa Catarina: Parque estadual da Serra do Tabuleiro, Reserva Biológica da Canela Preta e Reserva Biológica do Aguaí. Primeiramente foi feito o estudo do desenvolvimento de D. polymorpha, registrando a duração média do seu ciclo de vida bem como a maturidade sexual dos machos e fêmeas. A determinação dos elementos de Müller em D. polymorpha foi realizada por homologia de bandas com a espécie D. unipunctata. A fim de determinar os arranjos mais frequentes nas regiões de coleta, foi feito o estudo do polimorfismo de inversão cromossômica. Os arranjos 2RA e 2RD, já descritos anteriormente, apresentaram alta frequência nas populações. Estes arranjos provavelmente estão fixados nestas populações e possivelmente estão sendo mantidos pela ação da seleção natural. Com o auxílio de mapa cromossômico de D. polymorpha mais atualizado, a localização de um ponto de quebra de cada uma das inversões 2RA e 2RD foi reanotada. Também descrevemos uma nova inversão no cromossomo X de Drosophila neocardini (Grupo cardini). A expressão de puffs nos cromossomos politênicos de larvas de D. polymorpha, quando submetidas a estresse, permitiu estimar os possíveis genes hsps induzidos, quando comparando sua localização nos elementos de Müller em outras espécies. Esta análise revelou conservação entre D. polymorpha e D. unipunctata, que partilham grande reorganização gênica ao longo dos elementos quando comparadas a D. melanogaster. A análise comparativa dos elementos por homologia de bandas não verificou a ocorrência de puffs em resposta aos estresses testados (choque térmico, anoxia e privação alimentar) muito próximos ou dentro das regiões de inversão. Também não verificamos diferenças marcantes entre a expressão dos mesmos entre os indivíduos com ou sem os arranjos estudados. No entanto, o gene hsp70 não está tão distante das inversões no braço cromossômico 2R, e talvez fosse interessante testar sua expressão com métodos moleculares uma vez que mudanças na expressão de hsps tem sido importantes na adaptação de outras espécies.<br> / Abstract: The general objective of this work was to study the life cycle and chromosomal inversion polymorphisms, and their possible relation with heat shock genes. The object of our study was collected in three different conserved areas in the Santa Catarina: Parque Estadual da Serra do Tabuleiro, Reserva Biológica da Canela Preta e Reserva Biológica do Aguaí. The life cycle of D. polymorpha was described, as was the age at which sexual maturity is reached for both males and females. In order to be able to determine Müller's elements for D. polymorpha, a chromosomal homology between D. polymorpha and D. unipunctata was performed. A chromosomal polymorphism was carried out in order to establish the most frequent chromosomal arrangements in D. polymorpha from the collection sites. The arrangements 2RA and 2RD showed high frequencies in the populations. These arrangements are possibly being maintained due to natural selection. They also may have preserved the new gene configuration since they can provide a suitable combination of environmental conditions in which this species is located. Furthermore, during the study of chromosomal polymorphisms, the breakpoints of inversions 2RA and 2RD were re-evaluated. Also, a new paracentric inversion was described in chromosome X in Drosophila neocardini (cardini group). The expression of puffs in the polytene chromosomes allowed for the comparative analyses of their location and hsp genes location when they are induced in different species. The analysis showed conservation between D. polymorpha and D unipunctata elements. Also, these species have in common the extensive reorganization of their elements when compared to D. melanogaster. The comparative analysis of Müller's elements through banding homology did however not confirm occurrence of puffs in response to stressors (heat shock, hypoxi, starvation) near or inside inversion loops, neither did it produce noticeable differences between their gene expression in individuals with or without the arrangements. The hsp70 gene shows a certain proximity to the inversion loops in the chromosome 2R, and the possible intervention in its expression is not totally discarded. Its expression should be tested by means of molecular tools since changes in hsps expressions have been relevant in the adaptation reported in other species.

La Enzima Convertidora de Angiotensina (ECA) protagoniza un rol importante en la regulación de la presión arterial en dos sistemas fisiológicos: renina-angiotensina y cinina-calicreína. El gen ECA se localiza en el brazo largo del cromosoma 17 (17q23), consta de 26 exones y 25 intrones. Un polimorfismo de inserción/deleción ubicado en el intrón 16, el cual corresponde a una secuencia Alu repetitiva de ~287 pb, da origen a tres genotipos: inserción (II), inserción/deleción (I/D) y deleción (DD). Existen estudios que vinculan al alelo D con el aumento de la expresión de la ECA, y como consecuencia de ello se tendría una predisposición genética a sufrir enfermedades; sin embargo, estos estudios también han revelado que la determinación del polimorfismo I/D depende de la población muestreada, ya sea por el grupo étnico o por el lugar geográfico a donde esta población pertenece. El objetivo de este estudio es determinar la frecuencia del polimorfismo I/D del gen ECA en muestras poblacionales peruanas. Se amplificó un fragmento de ADN perteneciente al intrón 16 de este gen mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se trabajó con poblaciones de Monsefú, Moche, Huacho y Lima, resultando que el genotipo predominante para las tres primeras poblaciones es homicogoto II (84.2%, 66.7% y 56.8% respectivamente), en cambio para la población de Lima el genotipo predominante es el heterocigoto I/D (42.9%). El alelo I es el más frecuente en las 4 poblaciones: Monsefú (92.1%), Moche (80.3%), Huacho (73.0%) y Lima (62.5%). Las cuatro poblaciones se encuentran en equilibrio de Hardy–Weinberg. Los valores de las frecuencias génicas y genotípicas obtenidas son muy semejantes a los reportados en poblaciones latinoamericanas, donde la prevalencia del genotipo DD es muy baja y la frecuencia del alelo I es alta. Palabras clave: presión arterial, sistema fisiológico, polimorfismo (genético), inserción Alu, genotipo, predisposición genética. / --- Angiotensin converting enzyme (ACE) plays an essential role in regulating blood pressure in two physiological systems: renin-angiotensin and kinin-kallikrein. The ACE gene is located on the long arm of the chromosome 17 (17q23), consisting of 26 exons and 25 introns. An insertion/deletion polymorphism located in intron 16, which corresponds to an Alu repetitive sequence of ~ 287 bp, gives rise to three genotypes: Insertion (II), insertion / deletion (I/D) and deletion (DD). There are studies that link the D allele with increased ACE expression, and consequently there might be a genetic predisposition to disease; however, these studies have also revealed that the determination of polymorphism I/D depends on the population sampled, either by ethnicity or the geographical location of this population. The aim of this study is to determine the frequency of the polymorphism I/D of ACE gene in Peruvian population samples. A DNA fragment belonging to intron 16 of this gene was amplified by the technique of polymerase chain reaction (PCR). We worked with populations of Monsefú, Moche, Huacho and Lima, being the predominant genotype for the first three populations is homozygous II (84.2%, 66.7% and 56.8% respectively), while for the population of Lima the predominant genotype is the heterozygous I/D (42.9%). The I allele is the most common in the 4 populations: Monsefú (92.1%), Moche (80.3%), Huacho (73.0%) and Lima (62.5%). The 4 populations are in Hardy-Weinberg equilibrium. The values of gene and genotype frequencies obtained are very similar to those reported in Latin American populations, where the prevalence of DD genotype is very low and I allele frequency is high. Keywords: blood pressure, physiological system, polymorphism (genetic), Alu insertion, genotype, genetic predisposition.

A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo bacilo 288 Mycobacterium tuberculosis, a qual ocupa a segunda posição mundial entre 289 causas de mortes por um único agente infeccioso. O desenvolvimento da 290 imunidade protetora e o controle da infecção por M. tuberculosis são amplamente 291 atribuídos a função desempenhada por citocinas pró e anti-inflamatórias. No 292 entanto, 90-95% dos indivíduos infectados com o bacilo conseguem conter ou 293 eliminar a infecção enquanto o restante desenvolve a TB ativa. As razões pelas 294 quais 5-10% dos indivíduos com competência imunológica completa são 295 suscetíveis `a TB ainda permanecem desconhecidas. Porém, nas últimas 296 décadas, estudos epidemiológicos têm trazido fortes evidências de que 297 componentes genéticos humanos contribuem significativamente para essa 298 interindividual variabilidade na suscetibilidade `a TB. Assim, o objetivo deste 299 trabalho foi avaliar a influência dos polimorfismos IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -300 590 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); 301 IL10 -1082 G>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 302 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) e IFNG +874 303 T>A (rs2430561) localizados em genes de citocinas na suscetibilidade ao 304 desenvolvimento da tuberculose pulmonar (TBP) em uma população de adultos 305 do sul do Brasil.Os resultados obtidos sugerem fortemente um papel protetor para 306 os polimorfismo IL17A -197G>A (rs2275913) e IL6-174 G>C (rs1800795) no 307 desenvolvimento da TBP nessa população. O efeito protetor foi atribuído ao alelo 308 IL17A-197A (OR=0.29; p=0.04), genótipo AA (OR=0.12; p=0.04) e portadores do 309 alelo A (AG/AA) (OR=0.29; p=0.004). Da mesma forma, o polimorfismo IL6-310 174G>C mostrou ter um efeito protetor no desenvolvimento da TBP em 311 portadores do alelo C (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Ambos os polimorfismos 312 mantiveram a significância estatística após a correção usando o teste FDR. Os 313 demais polimorfismos avaliados não mostraram evidências que suportem 314 associação ao desenvolvimento da TBP em adultos nesta população. Os 315 polimorfismos IL17A -692 C>T (rs8193036) e IFNG +874 T>A (rs2430561) foram excluídos das análises porque não estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Em 317 conclusão, este trabalho identificou pela primeira vez na população do sul do 318 Brasil um efeito protetor dos polimorfismo IL17A -197 G>A e IL6 -174 G>C no 319 desenvolvimento da TBP em adultos. Esses resultados indicam o papel 320 importante para as citocinas pro-inflamatórias IL17A e IL6 na imunofisiologia da 321 TB. / Tuberculosis is an infectious disease caused by Mycobacterium 340 tuberculosis bacillus, which ranks second worldwide position among causes of 341 deaths from a single infectious agent. The development of protective immunity and 342 control of infection by M. tuberculosis are largely attributed to the role of pro and 343 anti-inflammatory cytokines. However, 90-95% of individuals infected with bacillus 344 can contain or eliminate the infection while the remainders develop active TB. The 345 reasons why 5-10% of individuals with full immune competence are susceptible to 346 TB remain unknown. However, in recent decades, epidemiological studies have 347 brought strong evidence that human genetic components contribute significantly to 348 this interindividual variability in susceptibility to TB.Thus the aim of this work was 349 to evaluate the influence of polymorphisms IL2 -330 T>G (rs2069762); IL4 -590 350 C>T (rs2243250); IL6 -174 G>C (rs1800795); IL10 -592 A>C (rs1800872); IL10 -351 1082 A>G (rs1800896); IL17A -692 C>T (rs8193036); IL17A -197 G>A 352 (rs2275913); TNF -238 G>A (rs361525); TNF -308 G>A (rs1800629) and IFNG 353 +874 T>A (rs2430561) located in cytokine candidates genes in the susceptibility to 354 development of pulmonary tuberculosis in south Brazil population.The results 355 strongly suggest a protective role for the IL17A -197G > A (rs2275913) and IL6-356 174 G>C polymorphism (rs1800795) in the development of pulmonary 357 tuberculosis in this population. The protective effect was attributed to IL17A -197 358 allele A (OR = 0.29; p = 0:04), AA genotype (OR = 0:12; p = 0:04) and carriers of 359 the A allele (AG / AA) (OR = 0.29; p = 0.004 ). Likewise, the IL6 -174G>C shows 360 an association for C carriers (CC/CG) (OR= 0.46; p=0.04). Both polymorphisms 361 maintained the statistical significance after correction using FDR test. However, no 362 evidence of association was identified for any other polymorphism studied in this 363 population.IL17A polymorphisms -692 C>T (rs8193036) and IFNG +874 T>A 364 (rs2430561) polymorphisms were excluded from the analysis because they were 365 not in Hardy-Weinberg equilibrium. In conclusion, our results identified for the first 366 time in Southern Brazil population a protective role for IL17A -197 G>A and IL6 -367 174 G>C polymorphisms in adult pulmonary tuberculosis development. These results indicate an important role for IL-17A and IL-6 pro-inflammatory cytokines in 369 immunophysiology of tuberculosis.

O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica autoimune que se caracteriza pela perturbação da homeostase imunológica. Envolve a indução e produção de autoanticorpos, bem como formação e deposição de complexos imunes, que conduzem a uma intensa resposta inflamatória e dano tecidual. Fatores imunológicos, ambientais, hormonais e genéticos podem estar implicados na patogênese da doença. A expressão alterada de genes e proteínas reguladores da apoptose em células T pode comprometer a tolerância imunológica e induzir autoantígenos responsáveis pelo desenvolvimento e perpetuação de condições autoimunes. Mas, pouco se sabe a respeito de como a expressão destas proteínas afeta o desenvolvimento e a função das células T. As células T regulatórias (Treg), uma subpopulação celular de importância para prevenir a autoimunidade, apresentam número e capacidade supressora alterados nos pacientes lúpicos. Buscando entender como anormalidades observadas nas vias apoptóticas contribuem para a autoimunidade, o presente estudo avaliou a frequência de apoptose inicial e morte celular de linfócitos nestes pacientes, a frequência de subtipos de células T expressando as proteínas envolvidas nas vias extrínseca e intrínseca da apoptose, como Fas, FasL, Bax, Bcl-2 e p53, além da expressão dos genes que as codificam. Analisou-se ainda a frequência de polimorfismos nos genes FAS, FASL, BCL-2 e BAX em pacientes, comparando estes dados com o de controles, buscando possíveis associações com a predisposição à doença e com os dados clínicos. Foram estudados 427 pacientes com LES do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) e 543 indivíduos saudáveis, como controles. Dados de 50 mulheres lúpicas mostraram maior frequência de células Treg, bem como maior densidade de expressão do fator de transcrição Foxp3 nestas células em relação a controles, embora não tenhamos observado diferenças estatísticas em relação à expressão de proteínas pró- e antiapoptóticas nesta subpopulação celular. Uma proporção aumentada de células T CD4+ expressando Fas e p53, e uma frequência reduzida expressando Bcl-2 foi encontrada nas pacientes, em relação aos controles. Esse último dado foi apoiado pela relação observada entre a menor frequência de T CD4+ expressando Bcl-2 e a atividade da doença, e pela expressão diminuída do gene BCL-2 em células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de mulheres lúpicas. Células T CD8+ expressando Bax e p53 também foram mais frequentes nas pacientes, ressaltando que células T CD8+p53+ foram mais numerosas nas pacientes com positividade para anticorpos anti-DNA. Maior frequência de morte de linfócitos foi observada em mulheres lúpicas. Com relação ao estudo dos polimorfimos, variantes alélicas dos genes FASL e BAX possivelmente se relacionam com o desenvolvimento e proteção da doença, respectivamente. Em conclusão, nossos achados apontam que a expressão modificada de genes e proteínas em células TCD4+ e TCD8+, relacionada a uma maior taxa de apoptose, podem conduzir à desregulação das vias apoptóticas e levar à perda da tolerância periférica, favoráveis ao desenvolvimento do LES. / Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory autoimmune disease that is characterized by disruption of the immune homeostasis. It involves the induction and production of autoantibodies, as well as formation and deposition of immune complexes, leading to a severe inflammatory response and tissue damage. Immunological, environmental, hormonal and genetic factors may be implicated in the pathogenesis of the disease. The altered expression of genes and proteins regulating apoptosis on T cells may lead to breakdown of the immune tolerance and induce autoantigen responsible for the development and perpetuation of autoimmune conditions. Little information is known of how these proteins affect the development and function of T cells. Regulatory T cells (Treg), a cell subpopulation of importance to prevent the autoimmunity, exhibit changed number and suppressive capacity in SLE patients. Trying to understand how abnormalities observed in apoptotic pathways contribute to autoimmunity, the present study evaluated the frequency of initial apoptosis and cell death of lymphocytes in these patients, the frequency of T cell subsets expressing the proteins involved in the extrinsic and intrinsic pathways of apoptosis, such as Fas, FasL, Bax, Bcl-2 and p53, besides the expression of genes that encode them. We also examined the polymorphisms frequencies of Fas, FasL, Bcl-2 and Bax genes in patients, comparing these data with controls, looking for possible associations with the predisposition to disease and the clinical data. 427 SLE patients from Hospital de Clínicas de Porto Alegre (HCPA) and 543 healthy subjects, as controls were studied. Results from 50 SLE women showed a higher frequency of Treg cells as well as a higher density of Foxp3 expression in these cells compared to controls, although we have not observed statistical differences in relation to the expression of pro- and antiapoptotic proteins in this cell subpopulation. An increased proportion of CD4+ T cells expressing Fas and p53, and a reduced frequency expressing Bcl-2 were found in patients. The latter finding was supported by the negative relation found between the frequency of CD4+Bcl-2+ cells and the disease activity index and by the decreased expression of BCL-2 gene in PBMCs of lupus women. CD8+ T cells expressing Bax and p53 were also more frequent in patients, noting that CD8+ T cells expressing p53 were more frequent in patients positive for anti-DNA antibodies. A higher frequency of death of lymphocytes was observed in SLE women. Regarding to polymorphisms analysis, allelic variants of FasL and Bax are possibly relate to the development and protection of the disease, respectively. In conclusion, our findings indicate that the modified expression of genes and proteins in CD4+ and CD8+ T cells, related to an increased apoptosis, may lead to dysregulation of the apoptosis pathways and the loss of peripheral tolerance, favorable for SLE development.

As freqüências de variantes alélicas de diferentes genes envolvidos no desenvolvimento da resposta imune foram analisadas em uma população de origem japonesa do sul do Brasil (n=119). Polimorfismos bialélicos dos genes CCR5, TNFR-II e IL-10, e dos segmentos gênicos TCRBV3S1, TCRBV13S5 e TCRBV18 foram analisados por PCR-RFLP. As freqüências alélicas foram determinadas e comparadas com as freqüências encontradas em outros grupos étnicos (caucasóides e afro-brasileiros). Nós observamos a ausência do alelo CCR5D32 na população testada. Os polimorfismos dos segmentos gênicos TCRBV3S1 e TCRBV13S5, e do gene IL-10 apresentaram freqüências alélicas significativamente diferentes das freqüências observadas em caucasóides e afro-brasileiros. O polimorfismo do segmento gênico TCRBV18 apresentou freqüências alélicas estatisticamente diferentes de caucasóides. Além disso, a comparação de duas sub-populações (definidas em nossa amostra de acordo com a origem geográfica no Japão) indicou diferenças entre as freqüências alélicas dos polimorfismos gênicos de TCRBV18 e IL-10 das mesmas. Esses dados indicam a existência de diferentes padrões imunogenéticos entre diferentes grupos étnicos. Outros polimorfismos SNPs de genes ligados ao sistema imune serão testados e comparados em nosso laboratório, utilizando as mesmas populações.

As Perdas Gestacionais Recorrentes (PGR) são definidas como duas ou mais perdas gestacionais consecutivas antes das 24 semanas de gestação. Essa condição, de etiologia complexa, ocorre em cerca de 5% de todos os casais que tentam ter filhos, podendo ser considerada uma condição reprodutiva que merece ser alvo de investigação, principalmente pelo fato de que, em aproximadamente 50% dos casos, sua etiologia permanece desconhecida. A família de proteínas p53 é composta por fatores de transcrição cujos membros, p53, p63 e p73 compartilham uma estrutura geral e funções primárias no controle do ciclo celular, sendo capazes de induzir parada do ciclo celular e morte celular em respostas a danos no DNA. Na reprodução, atuam: p53, na regulação de diversos genes envolvidos na apoptose e angiogênese, mecanismos fundamentais para uma adequada gestação, além de regular o gene LIF, cujo produto prepara o útero para a implantação do blastocisto; p63, como a maior reguladora do processo que controla a qualidade e sobrevivência da linhagem germinativa feminina através da eliminação por apoptose; e p73, na manutenção da qualidade dos oócitos através do controle do fuso mitótico. Essas proteínas são reguladas, principalmente, por proteínas envolvidas no processo de ubiquitinação, sendo elas: Mdm2, principal reguladora da rota, reduzindo os níveis de p53, p63 e p73; Mdm4, homóloga a Mdm2, atuando da mesma forma sobre a família; e Usp7, que atua apenas sobre Mdm2, Mdm4 e p53, deubiquitinando-as e, assim, estabilizando essa rota. Nesse trabalho foi investigado o efeito das variantes polimórficas nos genes da família p53 e seus principais reguladores, sendo essas c.215G>C - Pro72Arg de TP53 (rs1042522), c.325-4742T>G de TP63 (rs17506395), 4c.-30G>A e 14c.-20C>T de TP73 (rs2273953, rs1801173), c.14+309T>G de MDM2 (rs2279744), c.753+572C>T de MDM4 (rs1563828), c.2719-234G>A de USP7 (rs1529916) e c.1414T>G de LIF (rs929271), como fator de risco para perdas gestacionais recorrentes. Foram avaliadas 153 mulheres com perdas gestacionais recorrentes e 143 mulheres com pelo menos dois filhos vivos e sem histórico de perdas gestacionais ou infertilidade. A distribuição das freqüências alélicas e genotípicas não se mostrou diferente entre os dois grupos, entretanto, análises de interação entre os genótipos de risco de TP53 (Arg/Arg) e MDM2 (TT) e, TP63 (TT) e MDM2 (TT) foram associadas ao aumento do risco para PGR (OR = 2,58; 95% IC: 1,31 – 5,07; p = 0,006; e OR = 2,13; IC: 1,18 – 3,82; p = 0,011, respectivamente). Com base nestas observações e em dados de literatura, sugere-se que a presença concomitante de genótipos Arg/Arg de TP53 e TT de MDM2 levam a um aumento dos níveis de p53, o que propicia indução da apoptose mais eficiente podendo estar correlacionada a uma maior suscetibilidade a PGR. Em relação à interação de MDM2 e TP63, mesmo sem a compreensão do efeito deste polimorfismo sobre a função de p63, sabe-se que o genótipo MDM2 TT resulta em menores níveis da proteína. Como consequência, maiores níveis de p63 nos oócitos, ovário e útero seriam esperados, o que também levaria a maior chance de PGR. Os achados deste trabalho reforçam a hipótese do envolvimento da família p53 no controle da reprodução materna. Através dos mecanismos pró-apoptóticos e de controle de ciclo celular semelhantes, porém independentes, as atividades dessas proteínas na fisiologia da reprodução materna influenciam no desfecho gestacional, incluindo a fisiopatologia das PGR. / Recurrent pregnancy loss (RPL) is defined as two or more consecutives pregnancy losses before 24 weeks of gestation. This condition of complex etiology, occurs in about 5% of all couples trying to conceive and may be considered a reproductive disorder that deserves to be investigated, mainly due the fact that, in approximately 50% of cases, the etiology remains unknown. The p53 family proteins is a family of transcription factors whose members p53, p63 and p73 share a general structure and primary functions in cell cycle control, being able of induce cell cycle arrest and cell death in response to DNA damage. In reproduction, act: p53, in the regulation of several genes involved in apoptosis and angiogenesis, fundamental mechanisms for an appropriate pregnancy, also regulates LIF gene expression, whose product prepares the uterus for implantation of the blastocyst; p63, as the main regulator of process that control the quality and survival of female germ line through elimination by apoptosis; and p73, in maintaining the quality of the oocytes by controlling the mitotic spindle. These proteins are regulated mainly by proteins involved in the ubiquitination process, namely: Mdm2, main regulator of the route, reducing p53, p63 and p73 levels; Mdm4, homologous to Mdm2, acting the similarly on family; and Usp7, which acts only on Mdm2, Mdm4 and p53, deubiquitinating them and thus stabilizing this route. In this study was investigated the effect of polymorphic variants in genes of the p53 family and its main regulators, these being c.215G>C - Pro72Arg of TP53 (rs1042522), c.325-4742T>G of TP63 (rs17506395), 4c.-30G>A e 14c.-20C>T of TP73 (rs2273953, rs1801173), c.14+309T>G of MDM2 (rs2279744), c.753+572C>T of MDM4 (rs1563828), c.2719-234G>A of USP7 (rs1529916) and c.1414T>G of LIF (rs929271), as risk factor to recurrent pregnancy loss. Were evaluated 153 women with recurrent pregnancy loss and 143 women with at least two live births and no history of pregnancy loss or infertility. The distribution of allelic and genotypic frequencies did not differ between the two groups, however, analysis of the interaction between the risk genotypes of TP53 (Arg/Arg) and MDM2 (TT), and TP63 (TT) and MDM2 (TT) were associated to increased risk for PGR (OR = 2.58, 95% CI: 1.31 - 5.07, p = 0.006; and OR = 2.13; OR = 2.13; IC: 1.18 - 3.82; p = 0.011, respectively). Based on these observations and on literature data, suggests that the simultaneous presence of genotypes Arg/Arg of TP53 and TT of MDM2 leads to an increase in p53 levels, which provides more effective induction of apoptosis and can be correlated with an increased susceptibility to RPL. Regarding the interaction of MDM2 and TP63, even without understanding the effect of this polymorphism on the function of p63, it is known that MDM2 TT genotype results in lower levels of the protein. As a consequence, higher levels of p63 in oocytes, ovary and uterus would be expected, which would also lead to a increased risk of RPL. The hypothesis of this study is that the mechanism which p53 and p63 is acting on women with recurrent pregnancy is through an post-implantation event. The findings of this study support the hypothesis of the involvement of p53 family on maternal reproduction control. Through the pro-apoptotic mechanisms and cell cycle control similar nevertheless independents, activities of these proteins in the maternal reproduction physiology influence on the pregnancy outcome, including the pathophysiology of RPL.

A elucidação da base molecular da variação fenotípica adaptativa compreende um dos principais objetivos da biologia evolutiva. Na última década, o gene do receptor de melanocortina-1 (MC1R) regulador da síntese de melanina tem sido foco de diversos estudos sobre a coloração do corpo nos vertebrados. Analisou-se a variação deste gene em duas espécies do gênero Liolaemus que apresentam colorações distintas e crípticas. Os polimorfismos genéticos encontrados nas espécies não foram associados com o padrão de coloração corporal. Em L. arambarensis foram observadas cinco substituições sinônimas, nenhuma delas era estritamente associada com a variação de coloração. Da mesma forma, a análise comparativa mostrou que as sequências de Liolaemus foram monomórficas em posições de aminoácidos funcionalmente importantes na coloração do corpo de outras espécies de répteis. Contrariamente a outros grupos taxonômicos, tais resultados demonstram que não há um padrão único de sítios responsáveis por mudanças na coloração do corpo nesse grupo. Estes resultados permitem inferir que outros genes e/ou processos de regulação devem agir sobre a coloração, bem como ação de fatores não-genéticos. / The molecular basis of adaptive phenotypic variation comprises a major goal of evolutionary biology. In the last decade the melanocortin-1 receptor gene (MC1R), which regulates the synthesis of melanin, has been the focus of various studies on the body coloration in vertebrates. We analyzed the variation of this gene in two species of sand lizards of the genus Liolaemus, both with distinct and cryptic color. The polymorphisms found were not associated with the variation of body color. In L. arambarensis were observed five synonymous substitutions, none of which were strictly associated with colour type. Similarly, comparative analysis showed that the Liolaemus sequences were monomorphic in amino acid sites functionally important in the body coloration of other reptiles. Contrary to others taxa, these results suggest that there is not a unique pattern of sites accounting for changes in body coloration. It is possible that other genes and/or regulation process besides MC1R maybe influencing on the coloration, as well as action the of non-genetic factors.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Introdução: A enzima Citocromo P450 é integrante de uma superfamília de proteínas organizadas em famílias, subfamílias e genes individuais com base na porcentagem de identidade entre as seqüências de aminoácidos. Essas enzimas desempenham o importante papel de metabolisar e detoxificar diversos compostos. A família do gene CYP1 é induzida pelo receptor aril hidrocarboneto hidroxilase (AHH) que acarretará na ativação dos hidrocarbonetos policíclico aromático (PAHs), presente em vários compostos resultando em um aumento da atividade da enzima. Foram descritos na literatura dois polimorfismos associados ao gene CYP1A1, transição T→C na região 3’ não codificadora, e uma outra transição de A → G (Ile462 Val, exon 7). Cada uma das alterações dão origem a sítios de restrição MspI . Somente o polimorfismo T→C recebe o nome da enzima MspI. Entretanto, apenas o polimorfismo. A→G demonstra ter associação com o aumento da inducibilidade do gene CYP1A1demonstrando um maior significância e de interesse para esse estudo. Objetivo: investigar a incidência do polimorfimo A → G (Ile462 Val, exon 7) e sua associação com câncer colorretal, correlacionando com alguns fatores de risco da doença . Casuística e Método: Foram selecionados 114 pacientes portadores de câncer colorretal e 114 indivíduos sem câncer que constituíram o grupo controle. Todos foram submetidos à entrevista e a coleta de sangue periférico para extração do DNA genômico. Investigamos a presença do polimorfismo do gene CYP1A1 utilizando técnica de reação em cadeia de polimerase (PCR) e reação de genotipagem por técnica de RFLP. As amostras foram analisadas por meio de corrida eletroforética em gel de agarose e gel Low melting para a identificação da presença do polimorfismo . Resultados: No grupo caso, 64 eram do sexo masculino, 96 eram da etnia branca, 10 negros e 8 amarelos, 53 eram etilistas , 68 tabagistas, 59 tinham historia de câncer . Em relação ao polimorfismo estudado 14 eram homozigotos selvagem A/A, 97 heterozigoto A/G e 3 homozigotos mutados : No grupo controle, 61 eram do sexo XV XV masculino, 99 eram da etnia branca e 15 eram negros , 67 eram etilistas , 53 tabagistas, 40 tinham história de câncer . Em relação ao polimorfismo estudado 81 eram homozigotos selvagem A/A, 33 heterozigoto A/G. O tabagismo, historia familiar de câncer e a presença do alelo G foram mais freqüentes entre os indivíduos com câncer. Não observamos correlação entre a evolução da doença e freqüência dos alelos. Os pacientes de etnia amarela e estádio III tiveram maior índice de recorrência da doença. Conclusão: Para estudar a associação conjunta dos fatores estudados com a presença ou ausência da doença, verificou-se que a característica mais ligada à doença foi a presença do alelo G. Observou-se um aumento da proporção do alelo A/G e G/G em três vezes, no grupo de pacientes com câncer colorretal em relação ao grupo controle. Sugerindo que a enzima CYP1A1 possa ser um marcador de risco para a doença. O uso do tabaco e história familiar positiva foram mais freqüentes entre os doentes com câncer. Não foi encontrada correlação entre o polimorfismo e sexo, grau de diferenciação, estádio ou evolução da doença. / Introduction The enzyme Citocromo P450 is an integrant of a super family of proteins organized in families, subfamilies and individual genes based on the percentual of the identity of the amino acid sequences. These enzymes play an important role in the metabolization and detoxification of various compounds. The aril hydro-carbon hidroxilase (AHH) receptor induce the family of the gene CYP1 responsible for the activation of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), that are present in high concentration in cigarette smoke, polluted air and foods. Two polymorphisms of the gene CYP1A1 has been described, one on the transition T→C in the 3' noncoding region, and the other one in the A→ G transition (Ile462 Val, exon 7). Both the polymorphisms generate fragments that are digestion sites of MspI, but only the T→C polymorphism receives the name of MspI enzyme. Due to its high inducibility of the CYP1A1 gene polymorphism A→G had a bigger interest. AIM: to investigate the incidence of the polymorphism A→ G (Ile462 Val, éxon 7) in colorectal cancer patients and the correlation of this polymorphism and others risk factors. Patients and Method: 114 patients with colorectal cancer and 114 without cancer matched by age with the case group were included in the control group. All of the patients had been submitted to an interview and peripheral blood was drawn for DNA extraction. The presence of the polymorphism in the CYP1A1 gene was determined by a specific polymerase chain reaction (PCR) and RFLP technique. The samples had been analyzed agarosis electrophoresis gel and gel Low melting for the identification of the presence of the polymorphism. Results: In the case group 64 were male, being 96 white, 10 blacks and 8 yellows, 53 were etilists, 68 smokers, and 59 had family history of cancer. In the relation of the polymorphism studied 14 were wild homozygous A/A, 97 heterozygous A/G and 3 homozygous mutated G/G. In the control group 61 were male, 99 were white race and 15 black, 67 were etilists, 53 smokers, 40 had history of cancer, and 81 were wild homozygous A/A and 33 heterozygous A/G. The percentual of smokers, the familiar XVII XVII history of cancer and the presence of the allele G had been more frequent in the cancer group. The asiatics and stage III patients had higher index of recurrence of the disease. Conclusion: The presence of the G had been the most important aspect observed when the characteristics studied were correlated to the presence of cancer. The colorectal cancer group had a higher proportion of A/G or G/G alleles in 3 times. These results suggest that the CYP1A1 Val allele may be a marker of risk for the disease. The tabagism and positive history of cancer were also more frequent in the patients with cancer. There were not found any correlation among this polymorphism and sex, grade of differentiation, stage or evolution of the disease. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-27T14:43:41Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Paulo José Lima Juiz.pdf: 498443 bytes, checksum: 4968a533851b0a67587c42335765e33a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-27T14:43:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Paulo José Lima Juiz.pdf: 498443 bytes, checksum: 4968a533851b0a67587c42335765e33a (MD5) / A doença periodontal (DP) é representada por um conjunto de processos inflamatórios e infecciosos que acometem os tecidos periodontais, de etiologia multifatorial, localização sítio-depedente, caracterizada pela interação microrganismo-hospedeiro na superfície do periodonto. Tradicionalmente, a periodontite era analisada estritamente segundo o agente etiológico bacteriano resultado de uma infecção subgengival por um biofilme dental onde os principais microrganismos colonizadores são Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans e Tanerella forsythensis. Somente parte da variabilidade da doença periodontal na população pode ser explicada levando em questão a etiologia bacteriana. É sabido que a susceptibilidade a DP esta relacionada também a uma predisposição genética. No presente estudo foi investigada a associação entre o HLA e a Periodontite crônica severa (PCS) em pacientes mestiços, na faixa etária de 30 a 50 anos, sem distúrbios sistêmicos, residentes em Salvador-BA. Um total de 84 indivíduos foi estudado, sendo 43 pacientes com periodontite crônica severa e 41 indivíduos sem periodontite que constituíram o grupo controle. A avaliação dos parâmetros clínicos se fez por meio do índice de placa visível, índice de sangramento gengival, profundidade de sondagem, recessão gengival, nível de inserção clínica, grau de mobilidade dental e grau de envolvimento de furca. Dentes com coroa totalmente destruída por cárie, com aparelho ortodôntico fixo e parcialmente erupcionados foram excluídos do estudo. A determinação dos alelos dos loci DRB e DQB foi feita pelo método PCR-SSP. Não foi observada diferença estatisticamente significante entre as freqüências dos alelos identificados no grupo de pacientes com PCS e no grupo controle.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T18:01:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 264151.pdf: 1074569 bytes, checksum: a39136c47f0285802f4595d73c2cca85 (MD5) / Câncer é um termo genérico utilizado para um grupo de doenças que pode afetar várias partes do corpo e caracteriza-se pela proliferação celular anormal que tende a ser agressiva determinando a formação de tumores. O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais freqüente no mundo e o mais comum entre as mulheres. A cada ano, 22% dos novos casos de câncer em mulheres são de mama, apresentando altas taxas de mortalidade. Alguns processos biológicos, como o controle do ciclo celular, a apoptose, os processos de reparo de DNA lesado, vias metabólicas hormonais e de xenobióticos, estão intimamente ligados ao desenvolvimento de vários tipos de câncer, incluindo o câncer de mama. Genes que codificam proteínas e enzimas importantes para essas rotas podem conter mutações ou polimorfismos que podem contribuir para o desenvolvimento do câncer de mama. Esse trabalho procurou identificar possíveis marcadores genéticos de susceptibilidade ao câncer de mama através da análise de polimorfismos em genes de reparo de DNA e detoxificação em 162 mulheres diagnosticadas com câncer de mama e em 148 mulheres não afetadas pela doença e sem histórico familial da mesma, provenientes do Estado de Santa Catarina, Brasil, em um estudo caso-controle. Os polimorfismos tipo SNP (single nucleotide polymorphism) Arg194Trp e Arg399Gln do gene XRCC1, Val-9Ala do gene MnSOD e Val158Met do gene COMT foram identificados pela técnica de PCR-RFLP com eletroforese em gel de agarose e poliacrilamida. As freqüências alélicas e genotípicas foram calculadas e submetidas ao teste ?2 para verificar se estavam de acordo com o equilíbrio de Hardy-Weinberg (EHW). A associação de determinados alelos, genótipos e dados clínicos e epidemiológicos (idade da menarca, idade da menopausa, nuliparidade, idade da primeira gestação, amamentação, utilização de anticoncepcional, índice de massa corpórea e tabagismo) com a susceptibilidade ao câncer de mama foi verificada através do teste odds ratio (OR), com Intervalo de Confiança (IC) de 95% e p=0,05 como o limite de significância. Através de regressão logística multivariada foram propostas combinações de dados genéticos, epidemiológicos e clínicos além de modelos de interação entre essas variáveis e o câncer de mama. Com exceção da freqüência genotípica de MnSOD Val-9Ala para casos, todas as freqüências genotípicas se encontram em EHW. As freqüências dos alelos polimórficos encontradas em casos e controles respectivamente foram: 0,378 e 0,328 (A) para Arg194Trp; 0,079 e 0,089 (T) para Arg399Gln; 0,521 e 0,463 (A) para Val158Met; 0,474 e 0,451 (C) para Val-9Ala. Não foi constatada qualquer associação estatisticamente significativa entre os SNPs analisados de forma individual e o câncer de mama. Foram encontradas associações positivas (risco) estatisticamente significativa para a combinação dos SNPs XRCC1 Arg399Gln e COMT Val158Met (OR=3,909; IC95% 1,078-14,176; Wald=4,302; p=0,038) e também de MnSOD Val-9Ala e COMT Val158Met (OR=2,129; IC95% 1,049-4,323; Wald=4,375; p=0,036) com o câncer de mama. Foi observada ausência de associação dos fatores epidemiológicos e clínicos analisados isoladamente bem como da combinação destes com os SNPs e o câncer de mama. Apesar de ter-se identificado um modelo de interação que melhor representou a interação entre as características genéticas, clínicas e epidemiológicas e o câncer de mama, não há como afirmar com absoluta segurança que este modelo possa ser associado ao aumento do risco de câncer de mama.