Um grande número de pacientes em tratamento para tuberculose desenvolve algum tipo de reação adversa. A mais grave destas, hepatotoxicidade, é, muitas vezes, atribuída aos metabólitos tóxicos gerados durante a metabolização da isoniazida (INH), principal fármaco do tratamento. A INH é metabolizada pelas enzimas N-acetiltransferase 2 (NAT2), citocromo P450 2E1 (CYP2E1) e glutationa S-transferase (GSTM1 e GSTT1). Polimorfismos nos genes que codificam estas enzimas parecem influenciar na sua atividade e toxicidade, além de estarem distribuídos de forma variável entre as populações. Este estudo foi elaborado com o objetivo de estimar a frequência dos polimorfismos nos genes CYP2E1, GSTM1 e GSTT1, e avaliar a relação destes genes e de fatores de risco com o desenvolvimento de hepatotoxicidade. Foram incluídos no estudo 245 pacientes que fizeram tratamento para tuberculose no ambulatório do Hospital Sanatório Partenon (Porto Alegre, RS) com rifampicina, isoniazida e pirazinamida (esquema RHZ). Esses pacientes forneceram termo de consentimento livre e esclarecido, entrevista para coleta de dados clínicos e epidemiológicos e amostra de sangue para exames de provas de função hepática e perfil genético. A identificação dos genótipos foi realizada através das técnicas de PCR para os genes GSTM1 e GSTT (presença ou ausência) e PCR-RFLP para CYP2E1 (SNPs nas posições -1053C>T,-1293G>C e 7632T>A). Através da montagem de um banco de dados com as informações epidemiológicas e genéticas foram testadas possíveis relações entre as características. As frequências dos alelos variantes no gene CYP2E1 foram 8% (-1053), 8,5% (-1293) e 12% (7632). Os genes GSTM1 e GSTT1 estavam ausentes em 42.9% e 12.4% da população, respectivamente. Quinze (6,1%) pacientes desenvolveram hepatotoxicidade. Pacientes com genótipo selvagem em CYP2E1, sendo acetiladores lentos para NAT2, estão sob maior risco de desenvolver hepatotoxicidade. O genótipo nulo para GSTM1 e GSTT1 não teve influência na resposta ao tratamento para essa população. Os fatores de risco associados à hepatite induzida por tuberculostáticos foram: HIV positivo, tuberculose extrapumonar e níveis elevados de transaminases basais. / Patients under treatment for tuberculosis (TB) frequently suffer adverse drug reactions. The most severe, hepatotoxicity is often related to toxic metabolites produced during the main drug metabolism, isoniazid (INH). INH is metabolized by N-acetyltransferase 2 (NAT2), cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) and glutathione S-transferase (GSTM1 and GSTT1) enzymes. Polymorphisms in coding genes can modulate enzyme activity and toxicity, and are distributed in a variable way among populations. This study was designed to determine the frequency of CYP2E1, GSTM1 e GSTT polymorphisms, and to evaluate whether clinical risk factors and polymorphism are related to drug-induced hepatotoxicity. A total of 245 TB outpatients from Hospital Sanatorio Partenon (Porto Alegre, RS) using INH, RMP and PZA were included in the study. Patients provided a written informed consent, clinical records through an interview and blood sample for liver enzymes tests and genotyping. Individuals were genotyped using polymerase chain reaction (GSTM1 and GSTT) and restriction fragment length polymorphism (CYP2E1) methods. Using a database containing genetic and clinical information, possible relations were tested. The frequencies for the CYP2E1 polymorphic alelles RsaI, PstI and DraI are 8%, 8,5% and 12%, respectively. GSTM1 and GSTT1 genes are deleted in 42.9% and 12.4% of the population. Fifteen patients (6.1%) developed hepatotoxicity. Patients without polymorphisms in CYP2E1, having NAT2 slow acetylator profile, are at higher risk for drug-induced hepatotoxicity. Null genotype for GSTM1 and GSTT1 showed no influence in drug response. HIV, extrapulmonary TB and high baseline levels of transaminases are independent risk factors for hepatotoxicity in this population.

Um grande número de pacientes em tratamento para tuberculose desenvolve algum tipo de reação adversa. A mais grave destas, hepatotoxicidade, é, muitas vezes, atribuída aos metabólitos tóxicos gerados durante a metabolização da isoniazida (INH), principal fármaco do tratamento. A INH é metabolizada pelas enzimas N-acetiltransferase 2 (NAT2), citocromo P450 2E1 (CYP2E1) e glutationa S-transferase (GSTM1 e GSTT1). Polimorfismos nos genes que codificam estas enzimas parecem influenciar na sua atividade e toxicidade, além de estarem distribuídos de forma variável entre as populações. Este estudo foi elaborado com o objetivo de estimar a frequência dos polimorfismos nos genes CYP2E1, GSTM1 e GSTT1, e avaliar a relação destes genes e de fatores de risco com o desenvolvimento de hepatotoxicidade. Foram incluídos no estudo 245 pacientes que fizeram tratamento para tuberculose no ambulatório do Hospital Sanatório Partenon (Porto Alegre, RS) com rifampicina, isoniazida e pirazinamida (esquema RHZ). Esses pacientes forneceram termo de consentimento livre e esclarecido, entrevista para coleta de dados clínicos e epidemiológicos e amostra de sangue para exames de provas de função hepática e perfil genético. A identificação dos genótipos foi realizada através das técnicas de PCR para os genes GSTM1 e GSTT (presença ou ausência) e PCR-RFLP para CYP2E1 (SNPs nas posições -1053C>T,-1293G>C e 7632T>A). Através da montagem de um banco de dados com as informações epidemiológicas e genéticas foram testadas possíveis relações entre as características. As frequências dos alelos variantes no gene CYP2E1 foram 8% (-1053), 8,5% (-1293) e 12% (7632). Os genes GSTM1 e GSTT1 estavam ausentes em 42.9% e 12.4% da população, respectivamente. Quinze (6,1%) pacientes desenvolveram hepatotoxicidade. Pacientes com genótipo selvagem em CYP2E1, sendo acetiladores lentos para NAT2, estão sob maior risco de desenvolver hepatotoxicidade. O genótipo nulo para GSTM1 e GSTT1 não teve influência na resposta ao tratamento para essa população. Os fatores de risco associados à hepatite induzida por tuberculostáticos foram: HIV positivo, tuberculose extrapumonar e níveis elevados de transaminases basais. / Patients under treatment for tuberculosis (TB) frequently suffer adverse drug reactions. The most severe, hepatotoxicity is often related to toxic metabolites produced during the main drug metabolism, isoniazid (INH). INH is metabolized by N-acetyltransferase 2 (NAT2), cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) and glutathione S-transferase (GSTM1 and GSTT1) enzymes. Polymorphisms in coding genes can modulate enzyme activity and toxicity, and are distributed in a variable way among populations. This study was designed to determine the frequency of CYP2E1, GSTM1 e GSTT polymorphisms, and to evaluate whether clinical risk factors and polymorphism are related to drug-induced hepatotoxicity. A total of 245 TB outpatients from Hospital Sanatorio Partenon (Porto Alegre, RS) using INH, RMP and PZA were included in the study. Patients provided a written informed consent, clinical records through an interview and blood sample for liver enzymes tests and genotyping. Individuals were genotyped using polymerase chain reaction (GSTM1 and GSTT) and restriction fragment length polymorphism (CYP2E1) methods. Using a database containing genetic and clinical information, possible relations were tested. The frequencies for the CYP2E1 polymorphic alelles RsaI, PstI and DraI are 8%, 8,5% and 12%, respectively. GSTM1 and GSTT1 genes are deleted in 42.9% and 12.4% of the population. Fifteen patients (6.1%) developed hepatotoxicity. Patients without polymorphisms in CYP2E1, having NAT2 slow acetylator profile, are at higher risk for drug-induced hepatotoxicity. Null genotype for GSTM1 and GSTT1 showed no influence in drug response. HIV, extrapulmonary TB and high baseline levels of transaminases are independent risk factors for hepatotoxicity in this population.

Um grande número de pacientes em tratamento para tuberculose desenvolve algum tipo de reação adversa. A mais grave destas, hepatotoxicidade, é, muitas vezes, atribuída aos metabólitos tóxicos gerados durante a metabolização da isoniazida (INH), principal fármaco do tratamento. A INH é metabolizada pelas enzimas N-acetiltransferase 2 (NAT2), citocromo P450 2E1 (CYP2E1) e glutationa S-transferase (GSTM1 e GSTT1). Polimorfismos nos genes que codificam estas enzimas parecem influenciar na sua atividade e toxicidade, além de estarem distribuídos de forma variável entre as populações. Este estudo foi elaborado com o objetivo de estimar a frequência dos polimorfismos nos genes CYP2E1, GSTM1 e GSTT1, e avaliar a relação destes genes e de fatores de risco com o desenvolvimento de hepatotoxicidade. Foram incluídos no estudo 245 pacientes que fizeram tratamento para tuberculose no ambulatório do Hospital Sanatório Partenon (Porto Alegre, RS) com rifampicina, isoniazida e pirazinamida (esquema RHZ). Esses pacientes forneceram termo de consentimento livre e esclarecido, entrevista para coleta de dados clínicos e epidemiológicos e amostra de sangue para exames de provas de função hepática e perfil genético. A identificação dos genótipos foi realizada através das técnicas de PCR para os genes GSTM1 e GSTT (presença ou ausência) e PCR-RFLP para CYP2E1 (SNPs nas posições -1053C>T,-1293G>C e 7632T>A). Através da montagem de um banco de dados com as informações epidemiológicas e genéticas foram testadas possíveis relações entre as características. As frequências dos alelos variantes no gene CYP2E1 foram 8% (-1053), 8,5% (-1293) e 12% (7632). Os genes GSTM1 e GSTT1 estavam ausentes em 42.9% e 12.4% da população, respectivamente. Quinze (6,1%) pacientes desenvolveram hepatotoxicidade. Pacientes com genótipo selvagem em CYP2E1, sendo acetiladores lentos para NAT2, estão sob maior risco de desenvolver hepatotoxicidade. O genótipo nulo para GSTM1 e GSTT1 não teve influência na resposta ao tratamento para essa população. Os fatores de risco associados à hepatite induzida por tuberculostáticos foram: HIV positivo, tuberculose extrapumonar e níveis elevados de transaminases basais. / Patients under treatment for tuberculosis (TB) frequently suffer adverse drug reactions. The most severe, hepatotoxicity is often related to toxic metabolites produced during the main drug metabolism, isoniazid (INH). INH is metabolized by N-acetyltransferase 2 (NAT2), cytochrome P450 2E1 (CYP2E1) and glutathione S-transferase (GSTM1 and GSTT1) enzymes. Polymorphisms in coding genes can modulate enzyme activity and toxicity, and are distributed in a variable way among populations. This study was designed to determine the frequency of CYP2E1, GSTM1 e GSTT polymorphisms, and to evaluate whether clinical risk factors and polymorphism are related to drug-induced hepatotoxicity. A total of 245 TB outpatients from Hospital Sanatorio Partenon (Porto Alegre, RS) using INH, RMP and PZA were included in the study. Patients provided a written informed consent, clinical records through an interview and blood sample for liver enzymes tests and genotyping. Individuals were genotyped using polymerase chain reaction (GSTM1 and GSTT) and restriction fragment length polymorphism (CYP2E1) methods. Using a database containing genetic and clinical information, possible relations were tested. The frequencies for the CYP2E1 polymorphic alelles RsaI, PstI and DraI are 8%, 8,5% and 12%, respectively. GSTM1 and GSTT1 genes are deleted in 42.9% and 12.4% of the population. Fifteen patients (6.1%) developed hepatotoxicity. Patients without polymorphisms in CYP2E1, having NAT2 slow acetylator profile, are at higher risk for drug-induced hepatotoxicity. Null genotype for GSTM1 and GSTT1 showed no influence in drug response. HIV, extrapulmonary TB and high baseline levels of transaminases are independent risk factors for hepatotoxicity in this population.

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Orientador: Antonio Francisco Godinho / Resumo: O Benzoato de emamectina é um inseticida da classe das avermectinas, os quais apresentam seu mecanismo de ação através de interações com o receptor ácido gama aminobutírico (GABA), e também por alterações do estresse oxidativo em tecidos o qual tem sido associado a diversas doenças crônicas. O objetivo deste projeto foi o de avaliar as alterações geradas pela exposição subcrônica (28 dias) a baixas doses do benzoato de emamectina, sobre os parâmetros neurocomportamentais, do estresse oxidativo em cérebro e fígado e biomarcadores séricos da função hepática e renal. Foram utilizados 64 ratos Wistar adultos machos, os quais receberam oralmente (gavage), diariamente, por 28 dias um dos seguintes tratamentos: Água destilada (controle); benzoato de emamectina 0.5 mg/Kg (BE0.5); benzoato de emamectina 1 mg/Kg (BE1); benzoato de emamectina 2 mg/Kg (BE2). No dia após a última exposição aos tratamentos os animais foram avaliados para atividade neurocomportamental, com o auxilio dos seguintes equipamentos: labirinto em cruz elevada (LCE) teste da arena de campo aberto (ACA) e o hole-board. No dia seguinte os animais foram eutanasiados e coletadas amostras de fígado e cérebro para a avaliação do estresse oxidativo, via mensuração do hidroperóxido de lipídeo e da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GSHPx) e sangue para a obtenção do plasma para análise dos biomarcadores da função hepática e renal. Os animais expostos ao B... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

A cisplatina ainda é um dos agentes quimioterápicos mais efetivos. No entanto, em elevadas doses pode ocorrer hepatotoxicidade. Alguns antioxidantes têm sido mostrado amenizar a hepatotoxicidade induzida pela cisplatina mas o mecanismo molecular envolvido não está bem esclarecido.No presente estudo nós investigamos moleculares subjacente ao efeito protetor da dimetiltiuouréia (DMTU), um conhecido eqüestrador de radical hidroxil, contra a lesão oxidativamitocondrial hepática induzida pela cisplatina em ratos. Ratos Wistar machos adultos ( 200 a 220g) foram divididos entre 4 grupos de 8 animais cada. O grupo controle foi tratado apenas com uma injeção intraperitoneal (i.p.) de solução salina (1 ml/ 100g de peso). Ao grupo DMTU foi administrado apenas DMTU (500 mg/kg de peso, i.p., seguido de 125 mg/kg, i.p., duas vezes ao dia até o sacrifício). Ao grupo cisplatina foi administrado uma injeção única de cisplatina (10 mg/kg de peso, i.p.). Ao grupo DMTU + cisplatina foi administrado DMTU (500mg/kg de peso, i.p.), pouco antes da injeção da cisplatina (10 mg/kg de peso, i.p.), seguido por injeções de DMTU (125 mg/kg de peso, i.p.) duas vezes ao dia até o sacrifício ( 72 horas após o tratamento). A hepatotoxicidade foi evidenciada no grupo cisplatina pelo aumento dos níveis séricos de alanina (ALT) e aspartato (AST)aminotransferases. O mecanismo de hepatotoxicidade induzido pela cisplatina mostrou-se envolvido na rigidez de membrana; na redução da razão glutationa reduzida em relação a glutationa oxidada (GSH/GSSG); na redução dos níveis de ATP, GSH e NADPH; na lipoperoxidação; na lesão oxidativa da cardiolipina e de proteínas com grupos fidrílicos. Mais ainda, a morte celular por apoptose foi também demonstrada e os achados fortemente sugerem a participação do xi mecanismo sinalizador mitocondrial neste processo; o DMTU não apresentou nenhum efeito direto sobre a mitocôndria e inibiu substancialmente a lesão mitocondrial induzida pela cisplatina, prevenindo a hepatotoxicidade. Todos os seguintes efeitos induzidos pela cisplatina foram previnidos pelo DMTU: (a) elevação dos níveis séricos de AST e ALT; (b) redução dos níveis de ATP hepático;(c)peroxidação lipídica;(d)oxidação da cardiolipina; (e)oxidação de proteínas sulfidrílicas; (f) rigidez da membrana mitocondrial; (g) oxidação de GSH; (h)oxidação de NADPH e (i) morte celular por apoptose. Os resultados mostraram o papel principal da mitocôndria e dos radicais hidroxilas na proteção do fígado saudável contra a lesão hepática induzida pela cisplatina, delineando um número de etapas que podem ser consideradas no desenvolvimento de futuros agentes citoprotetores / Cisplatin is still one of the most effective chemotherapeutic agents. However, at higher doses hepatotoxicity may occur. Some antioxidants have been shown to ameliorate cisplatin-induced hepatotoxicity but the involved molecular mechanism has not been clarified. In the present study we investigated the molecular mechanism underlying the protective effect of dimethylthiourea (DMTU), a known hydroxyl radical scavenger, against liver mitochondrial oxidative damage induced by cisplatin in rats.Adult male Wistar rats (200 to 220g) were divided into 4 groups of 8 animals each. The control group was treated only with an intraperitoneal (i.p.) injection of saline solution (1ml/100g body weight). The DMTU group was given only DMTU (500 mg/kg body weight, i.p, followed by 125 mg/Kg, i.p., twice a day until sacrifice). The cisplatin group was given a single injection of cisplatin (10 mg/kg body weight, i.p.). The DMTU+cisplatin group was given DMTU (500 mg/kg body weight, i.p.), just before the cisplatin injection (10 mg/kg body weight, i.p.), followed by injections of DMTU (125 mg/kg body weight, i.p.) twice a day until sacrifice (72 hours after the treatment). epatotoxicity was evidenced in the cisplatin group by the increased serum levels of alanine (ALT) and aspartate (AST) aminotransferases. The mechanism of cisplatininduced hepatotoxicity was found to involve membrane rigidification; decreased GSH/GSSG ratio, ATP, GSH and NADPH levels; lipid peroxidation; oxidative damage of cardiolipin and protein sulfhydryl groups. Moreover, cell death by apoptosis was also demonstrated and the findings strongly suggest the participation of the mitochondrial signaling pathway in this process; DMTU did not present any direct effect on mitochondria and substantially inhibited cisplatin-induced mitochondrial injury, therefore preventing the hepatotoxicity. All the following cisplatin-induced xiv effects were prevented by DMTU: (a) elevation of AST and ALT serum levels; (b) decreased hepatic ATP levels; (c) lipid peroxidation; (d)cardiolipin oxidation; (e) sulfhydryl protein oxidation; (f) mitochondrial membrane rigidification; (g) GSH oxidation; (h) NADPH oxidation and (h) apoptotic cell death. Results show the central role of mitochondria and hydroxyl radicals in the protection of healthy liver against cisplatin-induced injury, highlighting a number of steps that might be considered in the development of novel cytoprotective agents.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T03:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 296088.pdf: 3601267 bytes, checksum: 85679946a64eeabc61a23b0597f9bb50 (MD5) / A fruticultura brasileira tem grande potencial de expansão pela diversidade de espécies nativas e exóticas insuficientemente estudadas quanto às suas propriedades nutricionais e funcionais, dentre elas, a Gaylussacia brasiliensis (Spreng) Meissner var. brasiliensis, pertencente à família Ericaceae, popularmente conhecida como camarinha. No presente estudo objetivou-se caracterizar a composição química, identificar compostos bioativos, avaliar a estabilidade do fruto e produtos derivados em armazenamento a baixas temperaturas (50C e -150C) e o efeito do suco do fruto da G. brasiliensis (camarinha) sobre a peroxidação lipídica e atividade antioxidante das enzimas contra o dano hepático em ratos. As amostras do fruto da G. brasiliensis foram coletadas na Praia do Sonho, município de Palhoça, litoral sul de Santa Catarina, Brasil. Determinou-se a composição centesimal, o perfil de minerais e ácidos graxos, o conteúdo de polifenóis totais e a atividade antioxidante utilizando diferentes métodos (DPPH#, ABTS, FRAP) e diferentes solventes extratores (acetona, metanol, álcool, água). Na avaliação in vivo 36 ratos machos wistar foram divididos em seis grupos: três controles (padrão, agente estressor e suplementação com camarinha); e três grupos de exposição suplementados com suco de camarinha antes e/ou após administração do agente estressor (metil metano sulfonato-MMS). Após 30 dias de tratamento todos os animais foram sacrificados e amostras do sangue e do fígado foram coletadas para avaliar a atividade das enzimas aminotransferases (ALT, AST), catalase (CAT), superoxido dismutase (SOD), peroxidação lipídica e o perfil histológico do fígado. O fruto apresentou a seguinte composição: umidade (81,30%), lipídios (0,62%), proteínas (0,56%), carboidratos (10,74%), fibras alimentares (6,53%), cinzas (0,25%). Em sua composição mineral, K, Mg, Ca e Fe foram os que apresentaram as maiores concentrações. A fração lipídica caracterizou-se pelo alto conteúdo de ácidos graxos insaturados (78,70%), com predominância dos ácidos graxos polinsaturados (62,2%). O fruto da G. brasiliensis apresentou conteúdos elevados de compostos fenólicos (492,87 mg EAG/100g) e de antocianinas (240,43 mg cy-3-glu/100g) que contribuíram para a sua alta atividade antioxidante. Observou-se correlação positiva entre o conteúdo de compostos fenólicos e atividade antioxidante, tendo sido a acetona e o metanol os solventes mais eficientes para extração de seus polifenóis. O congelamento (-150C) quando comparado a refrigeração (50C) mostrou-se como o método mais eficiente para a estabilidade dos compostos fenólicos e antocianinas do fruto da G. brasiliensis e produtos derivados. A administração MMS aumentou os níveis séricos de AST ALT, SOD, CAT (p <0.05) em ratos alimentados com dieta basal. Quando administrado o suco de camarinha a atividade destas enzimas foram praticamente restauradas e alcançaram valores próximos ao grupo controle. A avaliação histopatológica mostrou que os grupos expostos ao agente estressor (MMS) e suplementados com o suco do fruto da G. brasiliensis apresentaram arquitetura normal indicando efeito protetor deste fruto. Os resultados indicam que o suco do fruto da G. brasiliensis poderia minimizar o estresse hepático pela inibição hepática do acúmulo lipídico e redução do dano oxidativo. Este estudo aponta o potencial deste fruto como importante fonte de compostos nutricionais e bioativos. / Fruit production in Brazil has a high potential for expansion given the diversity of native and exotic species which have not been sufficiently studied with regard to their nutritional and functional properties. One such example is Gaylussacia brasiliensis (Spreng) Meissner var. brasiliensis, belonging to the Ericaceae family, commonly known as camarinha. The aims of this study were to characterize the chemical composition, identify bioactive compounds, evaluate the stability of the fruit and derived products under storage at low temperatures (5°C and -15°C) and investigate the effect of G. brasiliensis fruit juice on the lipid peroxidation and antioxidant activity of enzymes against hepatic damage in rats. The samples of G. brasiliensis fruit were collected at Praia do Sonho, in the municipality of Palhoça, on the coast of Santa Catarina state, southern Brazil. The centesimal composition, mineral and fatty acids profile, total polyphenol content and antioxidant activity were determined using different methods (DPPH#, ABTS, and FRAP) and different extractor solvents (acetone, methanol, alcohol, and water). In the in vivo evaluation, 36 male Wistar rats were divided into six groups: three controls (standard, stressor agent and supplementation with camarinha); and three exposure groups supplemented with camarinha juice before and/or after the administration of the stressor agent (methyl methanesulfonate - MMS). After 30 days of treatment all of the animals were sacrificed and blood and liver samples were collected in order to evaluate the activity of the enzymes aminotransferase (ALT, AST), catalase (CAT), and superoxide dismutase (SOD), as well as the lipid seroxidation and the histological profile of the liver. The fruit had the following composition: moisture (81.30%), carbohydrates (10.74%), dietary fiber (6.53%), lipids (0.62%), proteins (0.56%), and ash content (0.25%). In its mineral composition K, Mg, Ca and Fe showed the highest concentrations. The lipid fraction was characterized by a high content of unsaturated fatty acids (78.70%), with a predominance of polyunsaturated (62.2%). The fruit of G. brasiliensis had high contents of phenolic compounds (492.87 mg GAE/100g) and of anthocyanins (240.43 mg cy-3-glu/100g), which contributed to the high antioxidant activity. A positive correlation between the phenolic compounds content and antioxidant activity was observed, with acetone and methanol being the most efficient solvents for the extraction of polyphenols. Freezing (-15°C) when compared with refrigeration (5°C) was found to be more efficient in terms of the stability of the phenolic compounds and anthocyanins of the G. brasiliensis fruit and derived products. The administration of MMS increased the serum levels of AST/ALT, SOD, and CAT (p <0.05) in rats fed on a basal diet. When the camarinha juice was administered, the activity of these enzymes were almost restored and reached values close to the group control. The histopathological evaluation showed that the groups exposed to the stressor agent (MMS) and supplemented with the G. brasiliensis fruit juice had normal architecture, indicating a protector effect of this fruit. The results demonstrate that G. brasiliensis fruit juice can minimize hepatic stress through the hepatic inhibition of lipid accumulation and a reduction in oxidative damage. This study highlights the potential of this fruit as an important source of nutritional and bioactive compounds.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-08-01T13:42:41Z No. of bitstreams: 1 RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf: 1600372 bytes, checksum: 4d58eee589d9f02fdfaf2ffcdc800d96 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-08-07T12:11:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf: 1600372 bytes, checksum: 4d58eee589d9f02fdfaf2ffcdc800d96 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T12:11:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RenataCarolineCostaDeFreitas_DISSERT.pdf: 1600372 bytes, checksum: 4d58eee589d9f02fdfaf2ffcdc800d96 (MD5) Previous issue date: 2017-06-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico (CNPq) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O clopidogrel ? um f?rmaco utilizado na terapia para preven??o de trombose e aterosclerose. Contudo, a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel ? um potencial efeito adverso relacionado com les?es hep?ticas e resposta antiplaquet?ria. Considerando a falta de diagn?stico precoce para esse efeito adverso, miRNAs derivados de exossomos podem ser ?teis para contribuir para o monitoramento da resposta antiplaquet?ria e na predi??o do risco de hepatotoxicidade. Portanto, primeiramente objetivamos investigar as intera??es miRNA-mRNA com a toxicidade do f?rmaco in silico utilizando dados de microarrays dispon?veis e software Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA). Em seguida, o perfil de express?o exossomal dos miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p e miR-4701-3p, bem como os mRNAs alvos (PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB e TLK1) derivados de c?lulas foram avaliadas in vitro, uma vez que estes foram os alvos moleculares principalmente associados ao efeito adverso. Assim, c?lulas HepG2 foram incubadas com clopidogrel a 6,25, 12,5, 25, 50 e 100 ?M durante 24 e 48 h. A citotoxicidade foi avaliada por citometria de fluxo pela an?lise da fragmenta??o do DNA e do ciclo celular. A express?o de miRNA derivados de exossomos e de mRNA derivados de c?lulas foi avaliado pela RT-qPCR. As c?lulas tratadas com concentra??es mais elevadas de 50 e 100 ?M causaram maior fragmenta??o do DNA ap?s 24 e 48 h sugerindo ser uma concentra??o t?xica. A express?o do miR-26a-5p foi elevada e a express?o do miR-15b-5p foi diminu?da na concentra??o t?xica 100 ?M em rela??o ao controle em 24 e 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB e SENP5 alvos do miR-26a-5p foram pouco expressos nas concentra??es t?xicas em 24 h e o HMGA2 se manteve pouco expresso depois de 48 h de tratamento, em rela??o ao controle. TLK1, alvo do miR-15b-5p, teve express?o diminu?da em 24 h na concentra??o t?xica. Os resultados sugerem que concentra??es t?xicas de clopidogrel podem modular a express?o de miR-26a-5p e miR-15b-5p e seus alvos de mRNA. Al?m disso, o miR-26a pode representar um marcador importante para prever a hepatotoxicidade induzida por clopidogrel / Clopidogrel is an essential therapy for prevention of thrombosis and atherosclerosis. However, clopidogrel-induced hepatotoxicity is a potential adverse effect related to liver damage and antiplatelet response. Considering the lack of diagnostic for this adverse effect, new exosomes-derived miRNAs may be useful for improve the monitoring of response and hepatotoxicity risk. Therefore, we first aimed to investigate the miRNA-mRNA interactions with drug toxicity by in silico using available microarray data and Ingenuity Pathways Analysis 6 (IPA) software. After, the exosomal-expression profile of miR-26a-5p, miR-145-5p, miR-15b-5p and miR-4701-3p, as well as the cell-derived mRNAs target PLOD2, SENP5, EIF4G2, HMGA2, STRADB and TLK1 were evaluated in vitro, once they were the molecular targets mainly associated with the adverse effect. Thus, HepG2 cells were incubated with clopidogrel at 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 ?M for 24 and 48 h. The cytotoxicity was evaluated by flow cytometry to analyze DNA fragmentation and cell cycle. Profile expression of exosomes-derived miRNAs obtained by column methods and cell-derived mRNAs was evaluated by RT-qPCR. Cells treated with higher concentrations of 50 and 100 ?M caused an increased DNA fragmentation after 24 and 48 h suggesting a toxic concentration for the cells. The miR-26a-5p upregulation in toxic concentration of 100 ?M of clopidogrel and a downregulation of miR-15b-5p in comparison to control were observed in both period of 24 and 48 h. HMGA2, EIF4G2, STRADB and SNP5 targets of miR-26a-5p were downregulated in toxic concentrations at 24 h and HMGA2 remains downregulated after 48 h of clopidogrel treatment. TLK1, a target of miR-15b-5p, was downregulated at 24 h in toxic concentration. The results are suggestive that toxic concentrations of clopidogrel may modulate the miR-26a-5p and miR-15b-5p expression and their mRNA targets. Moreover, miR-26a may represent an important marker to predict clopidogrel-induced hepatotoxicity.

A cisplatina ainda é um dos agentes quimioterápicos mais efetivos. No entanto, em elevadas doses pode ocorrer hepatotoxicidade. Alguns antioxidantes têm sido mostrado amenizar a hepatotoxicidade induzida pela cisplatina mas o mecanismo molecular envolvido não está bem esclarecido.No presente estudo nós investigamos moleculares subjacente ao efeito protetor da dimetiltiuouréia (DMTU), um conhecido eqüestrador de radical hidroxil, contra a lesão oxidativamitocondrial hepática induzida pela cisplatina em ratos. Ratos Wistar machos adultos ( 200 a 220g) foram divididos entre 4 grupos de 8 animais cada. O grupo controle foi tratado apenas com uma injeção intraperitoneal (i.p.) de solução salina (1 ml/ 100g de peso). Ao grupo DMTU foi administrado apenas DMTU (500 mg/kg de peso, i.p., seguido de 125 mg/kg, i.p., duas vezes ao dia até o sacrifício). Ao grupo cisplatina foi administrado uma injeção única de cisplatina (10 mg/kg de peso, i.p.). Ao grupo DMTU + cisplatina foi administrado DMTU (500mg/kg de peso, i.p.), pouco antes da injeção da cisplatina (10 mg/kg de peso, i.p.), seguido por injeções de DMTU (125 mg/kg de peso, i.p.) duas vezes ao dia até o sacrifício ( 72 horas após o tratamento). A hepatotoxicidade foi evidenciada no grupo cisplatina pelo aumento dos níveis séricos de alanina (ALT) e aspartato (AST)aminotransferases. O mecanismo de hepatotoxicidade induzido pela cisplatina mostrou-se envolvido na rigidez de membrana; na redução da razão glutationa reduzida em relação a glutationa oxidada (GSH/GSSG); na redução dos níveis de ATP, GSH e NADPH; na lipoperoxidação; na lesão oxidativa da cardiolipina e de proteínas com grupos fidrílicos. Mais ainda, a morte celular por apoptose foi também demonstrada e os achados fortemente sugerem a participação do xi mecanismo sinalizador mitocondrial neste processo; o DMTU não apresentou nenhum efeito direto sobre a mitocôndria e inibiu substancialmente a lesão mitocondrial induzida pela cisplatina, prevenindo a hepatotoxicidade. Todos os seguintes efeitos induzidos pela cisplatina foram previnidos pelo DMTU: (a) elevação dos níveis séricos de AST e ALT; (b) redução dos níveis de ATP hepático;(c)peroxidação lipídica;(d)oxidação da cardiolipina; (e)oxidação de proteínas sulfidrílicas; (f) rigidez da membrana mitocondrial; (g) oxidação de GSH; (h)oxidação de NADPH e (i) morte celular por apoptose. Os resultados mostraram o papel principal da mitocôndria e dos radicais hidroxilas na proteção do fígado saudável contra a lesão hepática induzida pela cisplatina, delineando um número de etapas que podem ser consideradas no desenvolvimento de futuros agentes citoprotetores / Cisplatin is still one of the most effective chemotherapeutic agents. However, at higher doses hepatotoxicity may occur. Some antioxidants have been shown to ameliorate cisplatin-induced hepatotoxicity but the involved molecular mechanism has not been clarified. In the present study we investigated the molecular mechanism underlying the protective effect of dimethylthiourea (DMTU), a known hydroxyl radical scavenger, against liver mitochondrial oxidative damage induced by cisplatin in rats.Adult male Wistar rats (200 to 220g) were divided into 4 groups of 8 animals each. The control group was treated only with an intraperitoneal (i.p.) injection of saline solution (1ml/100g body weight). The DMTU group was given only DMTU (500 mg/kg body weight, i.p, followed by 125 mg/Kg, i.p., twice a day until sacrifice). The cisplatin group was given a single injection of cisplatin (10 mg/kg body weight, i.p.). The DMTU+cisplatin group was given DMTU (500 mg/kg body weight, i.p.), just before the cisplatin injection (10 mg/kg body weight, i.p.), followed by injections of DMTU (125 mg/kg body weight, i.p.) twice a day until sacrifice (72 hours after the treatment). epatotoxicity was evidenced in the cisplatin group by the increased serum levels of alanine (ALT) and aspartate (AST) aminotransferases. The mechanism of cisplatininduced hepatotoxicity was found to involve membrane rigidification; decreased GSH/GSSG ratio, ATP, GSH and NADPH levels; lipid peroxidation; oxidative damage of cardiolipin and protein sulfhydryl groups. Moreover, cell death by apoptosis was also demonstrated and the findings strongly suggest the participation of the mitochondrial signaling pathway in this process; DMTU did not present any direct effect on mitochondria and substantially inhibited cisplatin-induced mitochondrial injury, therefore preventing the hepatotoxicity. All the following cisplatin-induced xiv effects were prevented by DMTU: (a) elevation of AST and ALT serum levels; (b) decreased hepatic ATP levels; (c) lipid peroxidation; (d)cardiolipin oxidation; (e) sulfhydryl protein oxidation; (f) mitochondrial membrane rigidification; (g) GSH oxidation; (h) NADPH oxidation and (h) apoptotic cell death. Results show the central role of mitochondria and hydroxyl radicals in the protection of healthy liver against cisplatin-induced injury, highlighting a number of steps that might be considered in the development of novel cytoprotective agents.

A distrofia muscular dos cães Golden Retriever (GRMD), uma miopatia degenerativa causada pela ausência da distrofina é geneticamente homóloga a distrofia muscular de Duchenne que acomete humanos, portanto, estes cães são considerados modelos experimentais para estudos em terapia celular. Seu sucesso depende da imunossupressão adequada. A ciclosporina A (CsA) é indicada para tal, a monitorização de suas concentrações sangüíneas e efeitos adversos são essenciais para viabilizar a terapia. Foram estudados cães GRMD, e normais da mesma raça, submetidos a terapia com CsA, associada, nos GRMD, ao transplante. Foram avaliados as concentrações sangüíneas do fármaco e seus possíveis efeitos sobre as funções renal e hepática sendo consideradas as manifestações clínicas relacionadas, urinálise, hemograma, testes de função glomerular, e concentrações séricas de uréia, creatinina, alanina amino transferase (ALT), fosfatase alcalina (FA), cálcio, fósforo, sódio e potássio. Como resultados houve aumento discreto na uréia sérica de ambos os grupos; reações adversas como vômito, diarréia, tricose, periodontite e gengivite; diminuição dos níveis de ALT, cilindrúria e proteinúria e aumento da densidade urinária no grupo dos GRMD. As concentrações séricas de CsA oscilaram muito, em seis dos oito animais. Concluímos que maiores estudos devem ser realizados quanto à função renal dos GRMD e que as doses variam individualmente sendo de maior importância avaliar a concentração do fármaco no sangue e sua viabilização no uso da terapia celular. / The muscular dystrophy of Golden Retriever (GRMD) is a degenerative miopaty caused by the absence of dystrophy and it is genetically homologue of the Duchenne muscular dystrophy in humans, so, these dogs are considerably experimental models for studies on cellular therapy. Their successful depends of the adequate immunosuppression. Cyclosporin A (CsA) is indicated for that, the monitoring of the blood concentration and adverse effects are essential to viabilise the therapy. It was studied GRMD dogs, and normal dogs from the same breed, submitted for therapy with CsA, associated, on GRMD, of cell transplantation. It was evaluated blood concentration of the drug, and their possible effects on renal and hepatic functions has been considerate the clinic manifestations, urinalisis, blood counts, testis of glomerular function and blood concentrations of urea, cretinine, alanine aminotransferase, alkaline fosfatase, calcium, phosphorus, sodium and potassium. In our results we found a discrete increase of blood urea on booth groups; adverse reactions like vomits, diarrhea, tricose, periodontitis and gingivitis; decrease of blood alanine aminotransferase, increased levels of urine?s cylinders and protein and also increase of urinary density on GRMD group. The CsA blood concentrations oscillated too much on six than eight of our animals. We concluded that more researches wants to be done to evaluated renal functions of GRMD dogs and also that the doses varieties individually and the correct dosage as to important as the evaluation of the blood concentration of the drug and became viable for cell therapy.