Made available in DSpace on 2018-08-01T22:56:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9260_Andressa Ribeiro Vicentini.pdf: 2996270 bytes, checksum: a9add3790214d8d6f3937ef72e6e7c75 (MD5) Previous issue date: 2017-07-25 / O neurotransmissor acetilcolina e a enzima acetilcolinesterase são mediadores de fundamental importância na regulação de inúmeras funções fisiológicas relacionadas ao Sistema Nervoso Central e Periférico. Determinadas patologias animais estão estritamente relacionadas ao comprometimento da via colinesterásica, como: miastenia gravis, botulismo e paralisia do carrapato. Dessa maneira, apesar de ainda não terem cura, a estratégia farmacológica mais eficaz empregada consiste no uso de fármacos anticolinesterásicos para evitar a degradação da acetilcolina. Assim, esta pesquisa objetivou realizar um estudo integrado de caracterização química e avaliação farmacológica de espécies da família Rubiaceae coletadas, potencialmente úteis como fonte de fármacos anticolinesterásicos, por apresentarem em sua constituição compostos quimicamente ativos, segundo dados da literatura. Para isso, foram realizados dois protocolos de avaliação da atividade anticolinesterásica, pelo método de cromatografia em camada delgada e avaliação espectrofotométrica, além dos ensaios de prospecção fitoquímica dos extratos. Foram estudadas 25 espécies da família Rubiaceae, pertencentes a 8 gêneros distintos, que resultaram em 28 amostras. Para cada uma das espécies foram obtidos dois extratos de naturezas polares diferentes. Acerca da atividade anticolinesterásica, das amostras testadas, 5 apresentaram atividade considerada promissora segundo padrões de classificação da literatura para ambos os métodos testados, destas destacam-se: Faramea campanella, Faramea martiana, Psychotria carthagenensis, Psycotria 1 e Rudgea coronata Saint-hilaire. Cada um dos gêneros ativos apresentou uma constituição química especifica segundo resultados da avaliação fitoquímica.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-04T14:11:34Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Valéria Ferreira da Costa Borba.pdf: 1000198 bytes, checksum: 721486b0c30692e560f0d0742f18de20 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T14:11:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Valéria Ferreira da Costa Borba.pdf: 1000198 bytes, checksum: 721486b0c30692e560f0d0742f18de20 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-08-06 / CAPES / A Doença de Alzheimer acomete a região do córtex cerebral e é caracterizada por transtornos de memória, atenção, julgamento, linguagem, tomada de decisões e desorientação têmporo-espacial. A hipótese colinérgica associa os efeitos dos distúrbios cognitivos encontrados nesta doença a um déficit colinérgico e o tratamento farmacológico atual consiste em aumentar os níveis de acetilcolina no cérebro utilizando substâncias inibidoras da acetilcolinesterase. Neste contexto, a busca por alternativas mais eficazes e que tragam menos efeitos colaterais dos que os produtos existentes no mercado, têm impulsionado pesquisadores em diversas partes do mundo. O objetivo deste trabalho visou encontrar novos agentes inibidores da enzima acetilcolinesterase em extratos metanólicos de espécies de plantas medicinais nativas da Caatinga. O material vegetal foi coletado na comunidade do Caarão, município de Altinho/ PE e os ensaios anticolinesterásicos em cromatografia de camada delgada e em microplaca foram baseadas no método de Ellman. Dos 25 extratos testados, apenas 4% mostraram uma potente inibição da AChE (>50% inibição), 60% moderada (30–50% inibição) e 36% foram inativas (<30% inibição). Em relação ao porte das espécies estudadas, os resultados obtidos com as ervas foi observado baixa atividade inibitória em todas as espécies analisadas. Nas espécies arbustivas apresentaram uma moderada inibição em 80% das espécies testadas. Nas arbóreas apenas uma espécie apresentou alta inibição e as demais apresentaram uma atividade inibitória variando entre 31,25 a 46,72%. Dentre as amostras com potente e moderada inibição destacara-se os extratos metanólicos das cascas do caule de Mimosa tenuiflora (Willd.) Poir., Schinopsis brasiliensis Engl., Tephrosia purpurea (L.) Pers e Cedrela odorata L.Portanto se faz necessário a continuação de investimentos em pesquisas neste bioma devido ao potencial farmacológico que suas plantas apresentam.

MESQUITA, Bruna Marques de. Obtenção, caracterização e avaliação farmacológica de derivados dos monoterpenos carvacrol e timol. 2017. 166 f. Dissertação (Mestrado em Química)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Celia Sena (celiasena@dqoi.ufc.br) on 2017-11-16T14:32:12Z No. of bitstreams: 1 2017_dis_bmmesquita.pdf: 9405315 bytes, checksum: a0fc8cf0d9d7ef33ed6b0a4c0c62b1b2 (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-11-20T16:22:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_dis_bmmesquita.pdf: 9405315 bytes, checksum: a0fc8cf0d9d7ef33ed6b0a4c0c62b1b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-20T16:22:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_dis_bmmesquita.pdf: 9405315 bytes, checksum: a0fc8cf0d9d7ef33ed6b0a4c0c62b1b2 (MD5) Previous issue date: 2017 / Based on the vast literature on the therapeutic properties of the monoterpenes carvacrol and thymol, these compounds were used to obtain derivatives and the pharmacological activities of them were evaluated. Modifications were made to the hydroxyl group of C-1, obtaining eighteen derivatives of carvacrol (1a-1i) and thymol (2a-2i), with satisfactory yields. The structures were confirmed by spectroscopic methods, such as GC/MS, IR, 1H and 13C NMR. The compounds obtained and their precursors were submitted to an inhibition test of the acetylcholinesterase enzyme using the colorimetric method in which derivatives 1b and 2b showed positive results against the enzyme. Their cytotoxic activity in vitro were evaluated against SF295 (glioblastoma), HCT116 (colon - human) and PC3 (prostate) cells by the MTT method. Results showed weak cytoxiticy activity and also larvicidal activity to larvae of Aedes aegypti in the third stage, presenting significant results for derivatives 1a, 1b, 1c, 1h, 2a, 2b, 2c and 2h. / : Baseado na vasta literatura sobre as propriedades terapêuticas dos monoterpenos carvacrol e timol, utilizou-se desses compostos para a obtenção de derivados, bem como a avaliação farmacológica dos mesmos. Foram realizadas modificações no grupo hidroxila do C-1, com a obtenção de dezoito derivados, do carvacrol (1a-1i) e do timol (2a-2i), com rendimentos satisfatórios. A confirmação das estruturas foi feita utilizando métodos espectroscópicos, tais como CG/EM, IV, RMN de 1H e 13C. As substâncias obtidas e seus precursores foram submetidas a ensaio de inibição da enzima acetilcolinesterase, pelo método colorimétrico em que os derivados 1b e 2b apresentaram resultados positivos frente à enzima. Foram submetidas à avaliação da atividade citotóxica in vitro, pelo método do MTT, frente às linhagens de células SF295 (glioblastoma), HCT116 (cólon – humano) e PC3 (próstata), apresentando atividade fraca, e também, atividade larvicida que foi realizada frente às larvas de Aedes aegypti no terceiro estágio, tendo apresentado resultados significativos para os derivados 1a, 1b, 1c, 1h, 2a, 2b, 2c e 2h.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T18:11:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326538.pdf: 4538140 bytes, checksum: 51445ebd21d2b42d26bb8d9c29dd7053 (MD5) Previous issue date: 2014 / O objetivo deste trabalho foi efetuar uma investigação fitoquímica do caule da espécie Salacia impressifolia e avaliar a potencial atividade biológica do extrato bruto, frações e compostos isolados. O caule seco em pó foi extraído com etanol para obtenção do extrato bruto. Esse extrato foi submetido à extração sólido-líquido a fim de obter as frações clorofórmio e acetato de etila e o resíduo insolúvel. O extrato bruto e as frações foram submetidos à quantificação de fenólicos totais e flavonoides e avaliação da atividade antioxidante utilizando os ensaios de poder redutor e captura do radical DPPH. O extrato bruto e as frações mais polares apresentaram a maior atividade antioxidante. O ensaio in vitro demonstrou que o extrato bruto, a fração clorofórmio e a fração acetato de etila apresentaram atividade inibitória moderada frente à enzima acetilcolinesterase. O extrato bruto também apresentou atividade anti-hiperglicêmica nos testes de tolerância oral à glicose e atividade das dissacaridases. Uma mistura de compostos graxos, uma mistura de a e ß-amirina e um hidrocarboneto de cadeia longa foram obtidos a partir da fração clorofórmio. O fracionamento cromatográfico em coluna da fração acetato de etila rendeu o hidrocarboneto de cadeia longa, os triterpenos a-amirina, ß-amirina e ácido melaléucico e a (-)-epicatequina. Os compostos isolados foram caracterizados através de cromatografia em camada delgada, ponto de fusão, análises espectrométricas (massa, RMN de ¹H, RMN de ¹³C, DEPT, COSY, HMQC e HMBC) e espectrofotometria de infravermelho.<br> / Abstract : The objective of this study was to perform a phytochemical investigation of the stems of Salacia impressifolia and evaluate potential biological activity of the crude extract, fractions and isolated compounds. The dried and powdered stems were extracted with ethanol to yield the crude extract. This extract was subjected to solid-liquid extraction to obtain the chloroform and ethyl acetate fractions and the insoluble residue. The crude extract and the fractions were submitted to quantification of their total phenolic and flavonoids contents and evaluation of antioxidant activity using reducing power and DPPH radical scavenging assays. The crude extract and polar fractions showed the highest antioxidant activity. In vitro assay demonstrated that the crude extract, chloroform fraction and ethyl acetate fraction showed moderate inhibitory activity against acetylcholinesterase. The crude extract also showed antihyperglycemic activity in oral glucose tolerance test and disaccharidases activity. A mixture of fatty compounds, a mixture of a and ß-amyrin and a long chain hydrocarbon were obtained from the chloroform fraction. Column chromatographic fractionation of the ethyl acetate fraction yielded the long chain hydrocarbon, the triterpenes a-amyrin, ß-amyrin and melaleucic acid and (-)-epicatechin. The isolated compounds were characterized by thin layer chromatography, melting point, spectrometric analysis (mass, ¹H-NMR, ¹³C-NMR, DEPT, COSY, HMQC and HMBC) and infrared spectrophotometry.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T12:17:59Z No. of bitstreams: 2 Kaline Catiely Campos Silva.pdf: 1297818 bytes, checksum: 91b2b6186f6fff1365681ee92858b720 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T12:17:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Kaline Catiely Campos Silva.pdf: 1297818 bytes, checksum: 91b2b6186f6fff1365681ee92858b720 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES / A acetilcolinesterase (AChE) é uma enzima que vem sendo testada como biomarcador da presença de pesticidas. Trata-se de uma hidrolase, do grupo das colinesterases, que atua nos processos de transmissão de impulsos nervosos em vertebrados e invertebrados. A AChE hidrolisa rapidamente o neurotransmissor acetilcolina, na fenda sináptica, encerrando sua ação e garantindo a intermitência dos impulsos nervosos. A inibição desse mecanismo resulta no acúmulo de acetilcolina nas fendas sinápticas levando a uma hiperestimulação colinérgica. Tal inibição é o modo de ação de organofosforados e carbamatos, os inseticidas mais utilizados mundialmente. Diferentes compartimentos do ecossistema estão expostos aos agrotóxicos e uma vez presentes no ambiente aquático, eles podem ser absorvidos pelos organismos onde sofrerão bioacumulação, podendo ser utilizados como bioindicadores no monitoramento de pesticidas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar físico-química e cineticamente a enzima acetilcolinesterase cerebral do tucunaré (Cichla ocellaris), bem como avaliar o efeito de pesticidas organofosforados e carbamatos, e íons sobre sua atividade com a finalidade de fornecer subsídios para o uso da referida enzima como ferramenta bioindicadora de contaminação ambiental. As amostras analisadas foram preparadas a partir de extratos de cérebro de tucunaré. Foram determinados parâmetros cinéticos como Km e Vmax. A atividade enzimática foi analisada após exposição aos inibidores selectivos BW284c51, Iso-OMPA, neostigmina e eserina que confirmaram AChE como responsável pela atividade analisada. A AChE foi submetida também a 05 pesticidas organofosforados (diclorvós, clorpirifós, diazinon, temefós e TEPP) e 02 carbamatos (carbofuran e carbaril), em diferentes concentrações. A atividade colinesterásica foi observada na presença de 14 íons catiônicos: Mn2+; Cu2+; Zn2+; Al3+; Ca2+; Pb2+; Cd2+; Hg2+; Fe2+; Ba2+; Mg2+; K+; As3+; Li+ e 1 íon complexo aniônico quelante: EDTA2-. Os resultados demonstraram que o pesticida diclorvós provocou forte inibição na atividade da enzima estudada. O organofosforado tetraetil-pirofosfato (TEPP) também a inibiu fortemente e os dois carbamatos utilizados, sobretudo o carbofuran, apresentaram valores baixos de CI50. Os íons que causaram maior inibição foram Cu2+, Zn2+, Hg2+, Cd2+, As3+ e Pb2+, enquanto que o íon complexo EDTA2- só inibiu a enzima estudada a partir de 10 mM. Desta forma, a inibição in vitro da acetilcolinesterase de tucunaré demonstra ser uma ferramenta promissora para o monitoramento ambiental de recursos hídricos A facilidade de obtenção e a sensibilidade da enzima aos inseticidas utilizados, apontam para a possibilidade de um monitoramento rotineiro e eficiente.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T12:40:08Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Amanda Guedes Linhares.pdf: 6914929 bytes, checksum: e47bb91b70aceba932b0339a3e0c2b20 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T12:40:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Amanda Guedes Linhares.pdf: 6914929 bytes, checksum: e47bb91b70aceba932b0339a3e0c2b20 (MD5) Previous issue date: 2013 / Apesar do aumento na produtividade agrícola proporcionado pelos pesticidas, o uso inadequado dessas substâncias traz impactos negativos à saúde humana e ambiental. Estimativas de eficiência de aplicação relatam que apenas cerca de 0,1% dos pesticidas aplicados atingem as pragas-alvo, enquanto o restante se espalha pelo ambiente. Além disso, os recursos financeiros economizados ao se evitar o ataque de pragas terminam sendo gastos na recuperação dos danos à saúde pública e ao meio ambiente causados pelos próprios pesticidas. Diversas metodologias vêm sendo desenvolvidas utilizando as enzimas colinesterases como biomarcadores de pesticidas organofosforados e carbamatos, tendo em vista sua alta especificidade em relação a esses compostos. Para utilização dessas biomoléculas como biomarcadores de pesticidas, estudos preliminares são realizados analisando-se as alterações provenientes de sua interação. O presente trabalho teve como objetivo desenvolver um método para extração e determinação da atividade da AChE eritrocitária humana e avaliar a precisão do método na detecção de pesticidas, comparando os resultados de inibição com a legislação nacional e internacional vigente. Dessa forma, membranas de eritrócitos livres de hemoglobina foram extraídas e utilizadas na análise da atividade da acetilcolinesterase (AChE) ancorada nessas células. A evidência da atividade da enzima foi comprovada através da inibição seletiva utilizando dibrometo de 1,5-bis (4-alil-dimetilamônio-fenil) pentan-3-ona (BW284c51), tetraisopropil pirofosforamidato (Iso-OMPA) e brometo de neostigmina. As amostras de sangue foram expostas a treze concentrações de três pesticidas organofosforados (diclorvós, clorpirifós e diazinon) e dois carbamatos (carbaril e carbofuran). As concentrações dos pesticidas capazes de inibir a atividade da enzima em 50% (CI50) foram 10,66 μM (diclorvós), 21,42 μM (clorpirifós), 109,98 μM (carbaril) e 5,44 μM (carbofuran). O diazinon não atingiu 50% de inibição da atividade enzimática na faixa de concentração utilizada. Os resultados relativos a 20% de inibição da atividade enzimática (CI20 - nível utilizado na estimativa dos limites mínimos de resíduos de compostos anticolinesterásicos) foram inferiores aos valores de ingestão diária aceitável (IDA) para cada pesticida recomendados pela ANVISA, OMS, FAO, ATSDR, EFSA e USEPA com exceção do organofosforado diazinon. Sendo assim, o cut-off de 20% de inibição da atividade da AChE eritrocitária foi escolhido para avaliar a sensibilidade e a especificidade, parâmetros de confiabilidade do método, capazes de minimizar a influência de falsos positivos e falsos negativos na análise. Os valores de sensibilidade para os pesticidas investigados situaram-se acima de 80%, exceto para o diazinon, enquanto que os valores de especificidade para todos os pesticidas estiveram acima de 60%. Estes resultados sugerem que os métodos de extração da AChE eritrocitária e de determinação de sua atividade propostos podem ser ferramentas adequadas para o monitoramento da exposição ocupacional aos agrotóxicos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3028_1.pdf: 795723 bytes, checksum: 967acdf74d9ca3c0f9e918275cec6e27 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Larvas de tilápia nilótica (Oreochromis niloticus) com nove dias pós-eclosão foram expostas em experimentos semi-estáticos a concentrações crescentes de carbofuran, um inseticida carbamato utilizado mundialmente na agricultura. Após 96 h de exposição de grupos de larvas ao carbofuran, os efeitos das concentrações 10, 50, 100, 200, 300 e 400 &#956;g/L de carbofuran foram avaliados sobre a taxa de mortalidade. Além disso, foram quantificados em larvas individuais após a exposição o biomarcador fisiológico representado pela atividade da acetilcolinesterase, biomarcadores comportamentais relacionados à atividade natatória, visão, captura de presas e fuga de predadores, além da taxa de incremento em peso. Para quantificação dos parâmetros comportamentais em cada larva individualmente, a acuidade visual foi avaliada diretamente, e o comportamento das larvas em diferentes arenas experimentais foi gravado em vídeos digitais com posterior quantificação dos parâmetros comportamentais. A atividade da enzima acetilcolinesterase diminuiu após exposição ao carbofuran. A velocidade de natação e o deslocamento linear diminuíram com a exposição ao carbofuran. A acuidade visual foi progressivamente piorando de forma dose-dependente, e foram detectadas diferenças estatísticas entre as larvas do controle e as que foram expostas a concentrações a partir da concentração de 50 &#956;g/L (p < 0,001). O número de ataques efetuados pelas larvas de tilápia para capturar presas (náuplios de Daphnia magna) diminuiu em larvas que foram expostas ao carbofuran com diferença estatística entre o controle e as larvas que foram expostas à concentração de 400 &#956;g/L. O incremento em peso foi significativamente reduzido de forma dose-dependente, sendo que o incremento em peso do controle foi estatisticamente diferente de todos os outros tratamentos (p < 0,05). O número total de evasões das larvas de tilápia aos ataques do predador também foi reduzido com o aumento das concentrações de carbofuran com diferenças estatísticas entre as larvas do controle e as que foram expostas às concentrações de 100, 200 e 300&#956;g/L (p < 0,05). Estes resultados demonstram que a exposição de estágios sensíveis de peixes a concentrações subletais ambientalmente relevantes do carbofuran podem afetar aspectos fundamentais da ecologia larval dos mesmos que são relevantes para o seu recrutamento e consequente manutenção das populações

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:48:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8996_1.pdf: 8721607 bytes, checksum: a9d8c98e91d8c01c8d88a83f7375e09b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Organofosforados e carbamatos são as principais classes de inseticidas no mercado mundial. Sua rápida degradação e baixa estabilidade no meio ambiente fizeram com que substituíssem rapidamente outras classes importantes. Todavia, sua alta toxicidade em relação aos organismos não-alvo aliada às grandes quantidades utilizadas constituem uma ameaça à saúde humana e ambiental. O modo de ação de ambas as classes baseia-se na inibição de enzimas colinesterases. No presente trabalho, a acetilcolinesterase presente no cérebro de cinco espécies de peixes, Colossoma macropomum (tambaqui), Arapaima gigas (pirarucu), Rachycentron canadum (beijupirá), Oreochromis niloticus (tilápia do Nilo) e Cichla ocellaris (tucunaré) foi caracterizada fisico-quimica e cineticamente e foi exposta a pesticidas organofosforados, carbamatos e a íons. A acetilcolinesterase eritrocitária humana também foi exposta a esses pesticidas a fim de verificar a viabilidade de seu uso na detecção de pesticidas em agricultores residentes em localidades distantes dos laboratórios de análises. Os resultados demonstraram a possibilidade de estimação de parâmetros de eficiência catalítica (Kcat, Kcat/km, Energia de ativação e acréscimo na velocidade de reação) a partir do extrato bruto. Além disso, foi observada alta sensibilidade dos extratos enzimáticos de peixes aos pesticidas, principalmente ao diclorvós, carbofuran e tetraetil pirofosfato (TEPP). Também foi verificada a influência causada por alguns íons sobre a atividade dessas enzimas uma vez que eles são frequentemente encontrados em amostras ambientais. Nos ensaios com a enzima eritrocitária humana, constatou-se que a mesma, nas condições de ensaio propostas, foi sensível a concentrações dos pesticidas abaixo dos limites recomendados pela legislação nacional e internacional. Tais resultados contribuem para a determinação de condições ótimas experimentais e sugerem a utilização da acetilcolinesterase dessas fontes como biomarcador in vitro no monitoramento ambiental e da exposição ocupacional de alguns desses pesticidas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9505_1.pdf: 1271591 bytes, checksum: 74c43ff0c75dd4964f90bbb71d49aa41 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / A acetilcolinesterase (AChE) é uma enzima que vem sendo testada como biomarcador da presença de pesticidas. Trata-se de uma hidrolase, do grupo das colinesterases, que atua nos processos de transmissão de impulsos nervosos em vertebrados e invertebrados. A AChE hidrolisa rapidamente o neurotransmissor acetilcolina, na fenda sináptica, encerrando sua ação e garantindo a intermitência dos impulsos nervosos. A inibição desse mecanismo resulta no acúmulo de acetilcolina nas fendas sinápticas levando a uma hiperestimulação colinérgica. Tal inibição é o modo de ação de organofosforados e carbamatos, os inseticidas mais utilizados mundialmente. Diferentes compartimentos do ecossistema estão expostos aos agrotóxicos e uma vez presentes no ambiente aquático, eles podem ser absorvidos pelos organismos onde sofrerão bioacumulação, podendo ser utilizados como bioindicadores no monitoramento de pesticidas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar físico-química e cineticamente a enzima acetilcolinesterase cerebral do tucunaré (Cichla ocellaris), bem como avaliar o efeito de pesticidas organofosforados e carbamatos, e íons sobre sua atividade com a finalidade de fornecer subsídios para o uso da referida enzima como ferramenta bioindicadora de contaminação ambiental. As amostras analisadas foram preparadas a partir de extratos de cérebro de tucunaré. Foram determinados parâmetros cinéticos como Km e Vmax. A atividade enzimática foi analisada após exposição aos inibidores selectivos BW284c51, Iso-OMPA, neostigmina e eserina que confirmaram AChE como responsável pela atividade analisada. A AChE foi submetida também a 05 pesticidas organofosforados (diclorvós, clorpirifós, diazinon, temefós e TEPP) e 02 carbamatos (carbofuran e carbaril), em diferentes concentrações. A atividade colinesterásica foi observada na presença de 14 íons catiônicos: Mn2+; Cu2+; Zn2+; Al3+; Ca2+; Pb2+; Cd2+; Hg2+; Fe2+; Ba2+; Mg2+; K+; As3+; Li+ e 1 íon complexo aniônico quelante: EDTA2-. Os resultados demonstraram que o pesticida diclorvós provocou forte inibição na atividade da enzima estudada. O organofosforado tetraetil-pirofosfato (TEPP) também a inibiu fortemente e os dois carbamatos utilizados, sobretudo o carbofuran, apresentaram valores baixos de CI50. Os íons que causaram maior inibição foram Cu2+, Zn2+, Hg2+, Cd2+, As3+ e Pb2+, enquanto que o íon complexo EDTA2- só inibiu a enzima estudada a partir de 10 mM. Desta forma, a inibição in vitro da acetilcolinesterase de tucunaré demonstra ser uma ferramenta promissora para o monitoramento ambiental de recursos hídricos A facilidade de obtenção e a sensibilidade da enzima aos inseticidas utilizados, apontam para a possibilidade de um monitoramento rotineiro e eficiente

No campo da eletroanalítica existe uma intensa atividade de pesquisa sobre eletrodos de pasta de carbono. As principais vantagens da pasta de carbono são a rapidez e a simplicidade do processo de preparação, e a possibilidade de renovação da superfície do eletrodo a cada nova medida. Isso é possível devido à modificação interna do material eletródico, em que o modificador escolhido está diretamente relacionado com o analito de interesse a ser determinado. Os biossensores de pasta de carbono são muito utilizados na determinação de pesticidas da classe dos organofosforados e carbamatos pelo processo de inibição enzimática. Um dos principais problemas na determinação de substâncias utilizando eletrodos de pasta de carbono e biossensores de pasta de carbono é o seu alto limite de detecção, que dificulta a análises traços de substâncias. Uma opção que há décadas vem sendo adotada é a utilização dos eletrodos de nanotubos de carbono, funcionalizados ou não, na elaboração da pasta. Estes sensores, juntamente com os biossensores de pasta de nanotubos de carbono, possuem propriedades catalíticas e estruturais que fornecem um menor limite de detecção e quantificação na determinação de várias substâncias associadas. Estas características são singulares e inerentes à conformação dos nanotubos de carbono, sendo a elevada área ativa e poder eletrocatalítico umas das propriedades destes nanomateriais mais relatadas na literatura. Diante da falta de trabalhos que descrevam, paralelamente, o desempenho destes biossensores na determinação de carbamatos, neste trabalho objetivou-se explorar comparativamente o comportamento eletroquímico de biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase para a determinação dos pesticidas carbaril e metomil. Estes nanotubos foram purificados em meio ácido e caracterizados por microscopia eletrônica de varredura e por voltametria cíclica. Parâmetros cinéticos da enzima acetilcolinesterase como a constante de Michaelis-Menten e velocidade máxima de hidrólise do substrato acetiltiocolina foram obtidos e analisados pelo método espectrofométrico. Os biossensores confeccionados tiveram seus parâmetros eletródicos de operação otimizados e foram utilizados na determinação do pesticida carbaril em amostra fluvial. Os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram uma repetibilidade com desvio padrão relativo de 2,44% e 1,77%, respectivamente. A reprodutibilidade dos biossensores elaborados apresentou um desvio padrão relativo de 6,60% e 4,13%, respectivamente. Na determinação do pesticida carbaril, os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram um limite de detecção de 0,0389 e 0,0163 &micro;mol L-1, respectivamente. Na determinação do pesticida metomil, os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram um limite de detecção de 0,0398 e 0,0083 &micro;mol L-1, respectivamente. Em ambas as determinações, o biossensor elaborado com os nanotubos funcionalizados apresentou maior sensibilidade. Quando comparado com o biossensor de pasta de carbono frente à determinação do carbaril, o biossensor de pasta de nanotubos apresentou um limite de detecção aproximadamente 2,4 vezes menor e, quando comparado com o biossensor de pasta de carbono na determinação do pesticida metomil, o biossensor de pasta de nanotubos apresentou um limite de detecção aproximadamente 5 vezes menor. Os limites de quantificação dos biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase, para os pesticidas carbaril e o metomil, foram de 0,1297 e 0,0542 &micro;mol L-1 e de 0,1323 e 0,0277 &micro;mol L-1, respectivamente. O biossensor de pasta de nanotubos de carbono modificado com a enzima acetilcolinesterase foi aplicado na determinação de carbaril em amostra de água de rio e ácido húmico, fornecendo um LD de 0,0722 e 0,0704 &micro;mol L-1, respectivamente. Comparado com a curva original realizada em tampão fosfato, este biossensor apresentou um limite de detecção e quantificação de aproximadamente 4,32 e 4,43 vezes maior no procedimento utilizando ácido húmico e água fluvial, respectivamente. / There in the field of electroanalytical an intense research activity on carbon pastes electrodes. The main advantages of carbon paste are the speed and simplicity of the preparation process, and the possibility of renewing the electrode surface with each new measure. This is possible due to the internal modification of the electrode material, in which the modifier selected is directly related to the analytes to be determined. The carbon paste biosensors are widely used in determining the class of pesticides organophosfates and carbamates by enzyme inhibition process. A major obstacle to the determination of substances with a carbon paste electrode and carbon nanotubes paste biosensors is its high detection limit, which complicates the analysis of trace substances. One option that has for decades been adopted is the use of electrodes of carbon nanotubes, functionalized or otherwise, in elaboration of the paste. These sensors, together with the carbon paste nanotubes biosensors, have structural and catalytic properties that provide a lower limit of detection and quantitation in the determination of several related substances. These characteristics are natural and inherent in the arrangement of carbon nanotubes, the high electrocatalytic active area and catalytic power properties of these nanomaterials are most often reported in the literature. Given the lack of studies that describe, in parallel, the performance of these biosensors in the determination of carbamates, this study aimed, comparatively, to explore the electrochemical behavior of carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase to determine pesticide carbaryl and methomyl in distillated and river water. These nanotubes were purified in acidic medium and characterized by scanning electron microscopy and cyclic voltammetry. The kinetic parameters of acetylcholinesterase as the Michaelis-Menten constant and Maximum Velocity of hydrolysis of acetylthiocholine were obtained and analyzed by spectrophotometric method. Biosensors fabricated electrodes had their parameters optimized operation and were used in the determination of carbaryl pesticide in a sample fluvial. Carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a repeatability wih relative standard deviation of 2.44% and 1.77%, respectively. The reproducibility of the biosensor developed showed a relative standard deviation of 6.60% and 4.13%, respectively. In determining the pesticide carbaryl, the carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a detection limit of 0.0389 and 0.0163 &micro;mol L-1, respectively. In determining the pesticide methomyl, the carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a detection limit of 0.0398 and 0.0083 &micro;mol L-1, respectively. In both determinations, the biosensor prepared with functionalized nanotubes showed higher sensitivity. Compared with the carbon paste biosensor in the determination of carbaryl, the nanotubes paste biosensor showed a detection limit of approximately 2.4 times lower and, when compared with the carbon paste biosensor in the determination of the pesticide methomyl, the biosensor elaborated with nanotubes showed a detection limit of approximately five times lower. The limits of quantification of carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase, in the determination of carbaryl and methomyl pesticides, were 0.1297 and 0.0542 &micro;mol L-1, and 0.1323 and 0.0277 &micro;mol L-1, respectively. The carbon nanotubes biosensor modified with the enzyme acetylcholinesterase was applied to the determination of carbaryl in the sample of river water and humic acid, giving a detection limit of 0.0722 and 0.0704 mol L-1, respectively. Compared with the original curve performed in phosphate buffer, the biosensor showed a detection an quantification limit of approximately 4.32 and 4.43 times higher in the procedure using humic acid and fluvial water, respectively.