Submitted by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:17:51Z No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:18:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:18:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2014-12-19T12:19:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-19T12:19:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 neuma_merces_pereira.pdf: 2174500 bytes, checksum: 06da7ad03c07dd80832205dfc4d3dd20 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2013 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (Capes) / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Neste trabalho,foi desenvolvido umbiossensor amperom?trico altamente sens?vel baseado na inibi??o da acetilcolinesterase (AChE).O m?todobaseia-se num eletrodo de pasta de nanotubos modificado com aftalocianina tetrassulfonada decobaltoe o l?quido i?nico tetrafluoroborato de 1-metil-3-octilimidaz?lio.Imagensde Microscopia Eletr?nica de Varredurae Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourierforam utilizadas para caracterizaros materiais.O processo de oxida??o datiocolinafoi investigadopor voltametria c?clica(CV) ecronoamperometria. A enzimaAChfoi imobilizadana superf?cie doeletrodo do comp?sitopor liga??o cruzadacomglutaralde?do equitosana.A a??osin?rgica do biossensorNTCPM/CoTSPc/AchEmostrou excelenteatividade eletrocatal?ticacombaixopotencial aplicadopara a detec??o detiocolina. Par?metrosque afetama resposta dobiossensor, como quantidadede enzima, tempo de incuba??o, pHe a concentra??oda solu??o tamp?oforam otimizadosutilizandocloreto deacetiltiocolina(ATCl) como substrato. Os resultadosmostraram que ofenitrotion, diclorvos e malationpodem levar aoprocesso de inibi??orevers?velda enzima.Estebiossensorapresentou um baixo limite dedetec??o, boa reprodutibilidade, elevada estabilidade sendo usadopara determinarpesticidas emamostras de ?gua. Rela??es linearesforam encontradasparafenitrotion(1,0-1000,0 pmolL-1), diclorvos(2,0-8.000,0 pmolL-1)emalation(16,0-5000,0 pmolL-1).O biossensor foi aplicado com sucesso em amostras de ?gua de rio e os resultados mostraram que o mesmo n?o sofre interfer?ncia da matriz biol?gica. Estudos de adi??o e recupera??o dos analitos foram realizados para avaliar a exatid?o do m?todo obtendo-se uma porcentagem de recupera??o entre 99,12% e 103,05% para o fenitrotion, 94,12% e 102,17% para o diclorvos e 100,03% e 100,96% para o malation. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-Gradua??o em Qu?mica, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2013. / ABSTRACT In this work, a highly sensitive acetylcholinesterase (AChE) inhibition-based amperometric biosensor has been developed. The method is based on a cobalt phthalocyanine tetrasulfonate and 1-methyl-3-octylimidazolium tetrafluoroborate ionic liquidmodified nanotubes paste electrode. Images Scanning Electron Microscopy and Spectroscopy Fourier Transform Infrared were used to characterize the materials. The thiocholine oxidation process was investigated by cyclic voltammetry (CV) and chronoamperometry. The AChE enzyme was immobilized on the composite electrode surface by cross-linking with glutaraldehyde and chitosan. The synergistic action of NTCPM/CoTSPc/AChE showed excellent electrocatalytic activity with low applied potential for the detection of thiocholine. Parameters affecting the biosensor response such as enzyme loading, incubation time, pH and concentration of the buffer solution were optimized utilizing acetylthiocholine chloride (ATChCl) as substrate. The results showed that the fenitrothion, dichlorvos and malathion can lead to a reversible inhibition process of the enzyme. This biosensor showed low detection limit, good reproducibility, high stability and was used to determine pesticides in water samples. Linear relationships were found for fenitrothion (1.0-1000.0 pmol L-1), dichlorvos (2.0-8000.0 pmol L-1) and malathion (16.0-5000.0 pmol L-1. The biosensor has been successfully applied for river water samples and the results showed that there is no interference from the biological matrix. Recovery studies were performed to evaluate the accuracy of the method yielding a percentage of recovery between 99.12% and 103.05% for fenitrothion, 94.12% and 102.17% for dichlorvos and 100 03% and 100.96% for malathion.

Made available in DSpace on 2012-09-06T01:11:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 948.pdf: 2916320 bytes, checksum: 5eadca1c274a8ae35ad5ef499c4fa8de (MD5) Previous issue date: 2007 / A Baia de Guanabara BG é um dos mais importantes sistemas estuarinos do Brasil, com uma grave condição de degradação ambiental. A BG apresenta uma complexa situação de poluição por diversas substâncias entre as quais se destacam os metais e os inseticidas. A simples medida destes poluentes não mostra o efeito real que estes exercem sobre a biota. (...) O objetivo deste trabalho é avaliar o efeito da contaminação na BG utilizando MT e AChE como biomarcadores específicose FC e ISF como índices brutos. (...) A quantificação dos níveis MT se deu por Polaroia de Pulso Diferencial. E a analise da atividade da AChE foi por espectrofotometria, por meio da reação de Ellman. Os resultados mostram que o sexo e a maturação sexual de ambas as espécies não influencia significativamente nos valores dos biomarcadores específicos e nos índices brutos, e desta maneira os sexos puderam ser agrupados. O FC apresentou valores significativamente maiores na região controle para as duas espécies, o que indica que os peixes dessa região apresentaram melhores condições gerais de saúde que dos da BG, mostrando-se como um bom índice bruto de avaliação dos efeitos contaminação. Isso difere do ISF que não se mostrou uma boa ferramenta de avaliação, pois os valores encontrados, em contra do esperado, nas duas espécies, foram maiores na região controle que na BG. Já nas análises dos biomarcadores específicos, os níveis de MT de ambas as espécies foram significativamente maiores na BG quena região controle, mostrando uma indução nos níveis desta proteína ocasionado pelo efeito que a contaminação por metais vem causando na biota da BG. (...) Isso mostra uma inibição por agentes anticolinesterásicos (organofosforados e carbamatos ) na biota marinha desta região. Este trabalho mostrou que o uso dos biomarcadores específicos - Mt e Ache - e do FC nas duas espécies de peixes permitiu avaliar os efeitos diferenciados de uma situação complexa de poluição na BG.

Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde da Universidade do Extremo Sul Catarinense – UNESC, para obtenção do título de Mestre em Ciências da Saúde. / Galactosemia is characterized by a deficiency in one of the three enzymes involved in the galactose metabolism galactosekinase (GALK), galactose-1-phosphate uridyltransferase (GALT) and uridine-diphosphate-galactose 4 epimerase (GALE). The main clinical findings observed in patients affected by galactosemia include neurodevelopmental delay, and learning and memory disabilities, whose pathophysiology is still unclear. Therefore, considering that a disruption in cholinergic neurotransmission has been related to the pathophysiology of brain damage in neurodegenerative diseases and in other inborn errors of the metabolism, in the present work we investigated the in vivo and in vitro effect of galactose on acethylcholinesterase (AchE) activity in different brain structures of developing rats. It was observed that acute galactose administration did not alter AchE activity in cerebral cortex, hippocampus and striatum of suckling rats (15-day-old). On the other hand, when administered to older rats, galactose provoked a significant increase in AchE activity in cerebral cortex. Finally, it was observed that high doses of galactose (5 mM and higher) in vitro also provoked an increase in this enzyme activity in cerebral cortex of 30-day-old rats. Our data demonstrate that acute galactose administration provokes an age-dependent increase in AchE activity in cerebral cortex of rats. It may be therefore concluded that a disruption in cholinergic homeostasis may be involved in the pathophysiology of brain damage observed in patients affected by galactosemia. / Galactosemia é caracterizada pela deficiência em uma das três enzimas envolvidas no metabolismo da galactose, galactosequinase (GALK), galactose-1-fosfato-uridiltransferase (GALT) e galactose- difosfato-uridine 4 epimerase (GALE). Os principais achados clínicos são disfunções do sistema nervoso central com atraso de desenvolvimento, deficiência de aprendizagem e de memória, cuja fisiopatologia ainda não está esclarecida. Dessa forma, considerando que alterações na neurotransmissão colinérgica foram relacionadas á fisiopatologia de outros erros inatos do metabolismo e doenças neurodegenerativas, no presente trabalho avaliamos os efeitos in vitro e in vivo da galactose sobre a atividade da enzima acetilcolinesterase (AchE) em diferentes estruturas de ratos ao longo do seu desenvolvimento. Observamos que a administração aguda de galactose não alterou a atividade da AchE em córtex cerebral, hipocampo ou estriado de ratos de 15 dias de vida. Por outro lado, quando administrada a animais com 30 e 60 dias de vida, a galactose provocou um aumento significativo da atividade da AchE em córtex cerebral. Por último, observamos que altas doses de galactose (5 mM e maiores) in vitro também provocam um aumento na atividade desta enzima em córtex cerebral de ratos de 30 dias de vida. Nossos resultados demonstram que a administração de galactose provoca um aumento na AchE de uma maneira idade-dependente em córtex cerebral de ratos. Dessa forma, podemos presumir que um desequilíbrio na homeostase colinérgica possa estar envolvido na fisiopatologia do dano cerebral observado em pacientes com galactosemia.

No campo da eletroanalítica existe uma intensa atividade de pesquisa sobre eletrodos de pasta de carbono. As principais vantagens da pasta de carbono são a rapidez e a simplicidade do processo de preparação, e a possibilidade de renovação da superfície do eletrodo a cada nova medida. Isso é possível devido à modificação interna do material eletródico, em que o modificador escolhido está diretamente relacionado com o analito de interesse a ser determinado. Os biossensores de pasta de carbono são muito utilizados na determinação de pesticidas da classe dos organofosforados e carbamatos pelo processo de inibição enzimática. Um dos principais problemas na determinação de substâncias utilizando eletrodos de pasta de carbono e biossensores de pasta de carbono é o seu alto limite de detecção, que dificulta a análises traços de substâncias. Uma opção que há décadas vem sendo adotada é a utilização dos eletrodos de nanotubos de carbono, funcionalizados ou não, na elaboração da pasta. Estes sensores, juntamente com os biossensores de pasta de nanotubos de carbono, possuem propriedades catalíticas e estruturais que fornecem um menor limite de detecção e quantificação na determinação de várias substâncias associadas. Estas características são singulares e inerentes à conformação dos nanotubos de carbono, sendo a elevada área ativa e poder eletrocatalítico umas das propriedades destes nanomateriais mais relatadas na literatura. Diante da falta de trabalhos que descrevam, paralelamente, o desempenho destes biossensores na determinação de carbamatos, neste trabalho objetivou-se explorar comparativamente o comportamento eletroquímico de biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase para a determinação dos pesticidas carbaril e metomil. Estes nanotubos foram purificados em meio ácido e caracterizados por microscopia eletrônica de varredura e por voltametria cíclica. Parâmetros cinéticos da enzima acetilcolinesterase como a constante de Michaelis-Menten e velocidade máxima de hidrólise do substrato acetiltiocolina foram obtidos e analisados pelo método espectrofométrico. Os biossensores confeccionados tiveram seus parâmetros eletródicos de operação otimizados e foram utilizados na determinação do pesticida carbaril em amostra fluvial. Os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram uma repetibilidade com desvio padrão relativo de 2,44% e 1,77%, respectivamente. A reprodutibilidade dos biossensores elaborados apresentou um desvio padrão relativo de 6,60% e 4,13%, respectivamente. Na determinação do pesticida carbaril, os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram um limite de detecção de 0,0389 e 0,0163 µmol L-1, respectivamente. Na determinação do pesticida metomil, os biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase apresentaram um limite de detecção de 0,0398 e 0,0083 µmol L-1, respectivamente. Em ambas as determinações, o biossensor elaborado com os nanotubos funcionalizados apresentou maior sensibilidade. Quando comparado com o biossensor de pasta de carbono frente à determinação do carbaril, o biossensor de pasta de nanotubos apresentou um limite de detecção aproximadamente 2,4 vezes menor e, quando comparado com o biossensor de pasta de carbono na determinação do pesticida metomil, o biossensor de pasta de nanotubos apresentou um limite de detecção aproximadamente 5 vezes menor. Os limites de quantificação dos biossensores de pasta de carbono e de pasta de nanotubos de carbono modificados com a enzima acetilcolinesterase, para os pesticidas carbaril e o metomil, foram de 0,1297 e 0,0542 µmol L-1 e de 0,1323 e 0,0277 µmol L-1, respectivamente. O biossensor de pasta de nanotubos de carbono modificado com a enzima acetilcolinesterase foi aplicado na determinação de carbaril em amostra de água de rio e ácido húmico, fornecendo um LD de 0,0722 e 0,0704 µmol L-1, respectivamente. Comparado com a curva original realizada em tampão fosfato, este biossensor apresentou um limite de detecção e quantificação de aproximadamente 4,32 e 4,43 vezes maior no procedimento utilizando ácido húmico e água fluvial, respectivamente. / There in the field of electroanalytical an intense research activity on carbon pastes electrodes. The main advantages of carbon paste are the speed and simplicity of the preparation process, and the possibility of renewing the electrode surface with each new measure. This is possible due to the internal modification of the electrode material, in which the modifier selected is directly related to the analytes to be determined. The carbon paste biosensors are widely used in determining the class of pesticides organophosfates and carbamates by enzyme inhibition process. A major obstacle to the determination of substances with a carbon paste electrode and carbon nanotubes paste biosensors is its high detection limit, which complicates the analysis of trace substances. One option that has for decades been adopted is the use of electrodes of carbon nanotubes, functionalized or otherwise, in elaboration of the paste. These sensors, together with the carbon paste nanotubes biosensors, have structural and catalytic properties that provide a lower limit of detection and quantitation in the determination of several related substances. These characteristics are natural and inherent in the arrangement of carbon nanotubes, the high electrocatalytic active area and catalytic power properties of these nanomaterials are most often reported in the literature. Given the lack of studies that describe, in parallel, the performance of these biosensors in the determination of carbamates, this study aimed, comparatively, to explore the electrochemical behavior of carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase to determine pesticide carbaryl and methomyl in distillated and river water. These nanotubes were purified in acidic medium and characterized by scanning electron microscopy and cyclic voltammetry. The kinetic parameters of acetylcholinesterase as the Michaelis-Menten constant and Maximum Velocity of hydrolysis of acetylthiocholine were obtained and analyzed by spectrophotometric method. Biosensors fabricated electrodes had their parameters optimized operation and were used in the determination of carbaryl pesticide in a sample fluvial. Carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a repeatability wih relative standard deviation of 2.44% and 1.77%, respectively. The reproducibility of the biosensor developed showed a relative standard deviation of 6.60% and 4.13%, respectively. In determining the pesticide carbaryl, the carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a detection limit of 0.0389 and 0.0163 µmol L-1, respectively. In determining the pesticide methomyl, the carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase showed a detection limit of 0.0398 and 0.0083 µmol L-1, respectively. In both determinations, the biosensor prepared with functionalized nanotubes showed higher sensitivity. Compared with the carbon paste biosensor in the determination of carbaryl, the nanotubes paste biosensor showed a detection limit of approximately 2.4 times lower and, when compared with the carbon paste biosensor in the determination of the pesticide methomyl, the biosensor elaborated with nanotubes showed a detection limit of approximately five times lower. The limits of quantification of carbon paste and carbon nanotubes paste biosensors modified with enzyme acetylcholinesterase, in the determination of carbaryl and methomyl pesticides, were 0.1297 and 0.0542 µmol L-1, and 0.1323 and 0.0277 µmol L-1, respectively. The carbon nanotubes biosensor modified with the enzyme acetylcholinesterase was applied to the determination of carbaryl in the sample of river water and humic acid, giving a detection limit of 0.0722 and 0.0704 mol L-1, respectively. Compared with the original curve performed in phosphate buffer, the biosensor showed a detection an quantification limit of approximately 4.32 and 4.43 times higher in the procedure using humic acid and fluvial water, respectively.

Submitted by Helena Bejio (helena.bejio@unioeste.br) on 2018-05-09T11:35:29Z No. of bitstreams: 2 Dissertação Julio Cesar Queiroz.pdf: 2479458 bytes, checksum: 850d67cb918609c58aa963ed68374e58 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-09T11:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação Julio Cesar Queiroz.pdf: 2479458 bytes, checksum: 850d67cb918609c58aa963ed68374e58 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The objective of this study was to verify the efficiency of the agrochemicals/ contaminants Methyl paration, Cypermethrin, Azadirachtin and Pyroligneous extract in the control of dragonfly naiads (P. flavescens) during the larviculture of the catfish (Rhamdia quelen) as well as to investigate the predation and the possible genotoxic, histopathological and neurotoxic damages that can cause in the larvae. Three trials were performed. In the first, different doses of each product were tested to determine lethal and lethargic doses. For this, 270 naiads were used for each product tested and 9 for control, totaling 1089 animals. The naiads were distributed in aquariums with a total volume of 1L in triplicates. To determine the doses, it started with an overdose (1000 μl / L-1) and then observed the time in which the naiads lead to death. The doses were gradually decreased in 100 μl and below that dose the decrease was in 5μl intervals. In the second trial, the doses determined in test I were used. Predation tests on product exposure were performed in aquaria with a total volume of 1L, arranged in triplicates for each test dose plus control. In each aquarium a nymph of dragonfly and 10 catfish larvae were arranged, observing the amount of larvae consumed in the lethal time of exposure to the product, as determined in the previous test. The design was completely randomized with nine treatments and three replicates, totaling 27 experimental units. The treatments were constituted by the doses of each product. In the third trial were carried out for 30 days the catfish larviculture with exposure to the products. 4000 catfish larvae were used with 120 hours post-hatching (HPE), randomly distributed in 20 tanks with a total volume of 70 l. The doses were applied at intervals of 7 days, simulating the egg laying cycle and hatching of the dragonfly nymphs. The water replacement was done daily at 5% along with cleaning the aquariums. The experimental design was completely randomized with five treatments and four replicates, totaling 20 experimental units. Eight lethal and lethargic doses were planned: 5 μl / L for Methyl paration, 10 μl / L for Cypermethrin, 30, 25 and 20 μl / L for Azadirachtin and 20, 15 and 10 μl / L for the Pyroligneous extract. In the predation tests, the treatment containing Azadirachtin at the doses of 30, 25 and 20 μl / L suggests survival of up to 43% of the larvae, Pyroligneous extract 25.6%, Cypermethrin and Methyl paration 87 and 73%, respectively. In the third trial after the larviculture were not evidenced any index of histopathological damage in liver and gills. The comet assay suggests that Cypermethrin and Methyl paration cause damage to DNA. The enzyme acetylcholinesterase was inhibited only by Methyl paration. The use of nim oil may be a natural alternative to use of agrochemicals in cultivation tanks in catfish larviculture (Rhamdia quelen), considering that it does not present toxicity to animals and predation is significantly reduced. / O objetivo deste estudo foi verificar a eficiência dos agroquímicos/contaminantes Paration metílico, Cipermetrina, Azadiractina e Extrato pirolenhoso no controle de náiades de libélula (P. flavescens) durante a larvicultura do jundiá (Rhamdia quelen), assim como, averiguar a predação e os possíveis danos genotóxicos, histopatológicos e neurotóxicos que podem causar nas larvas. Foram realizados três ensaios. No primeiro foram testadas diferentes doses de cada produto para determinar as doses letais e letárgicas. Para isso, foram utilizados 270 náiades para cada produto testado e 9 para o controle, totalizando 1089 animais. As náiades foram distribuídas em aquários com volume total de 1L em triplicatas. Para determinar as doses, iniciou com uma superdose (1000 µl/L-1) e em seguida foi observado o tempo em que as náiades levam até o óbito. As doses foram diminuídas gradativamente em 100 μl e abaixo dessa dose, a diminuição foi em intervalos de 5μl. No segundo ensaio foram utilizadas as doses determinadas no ensaio I. Testes de predação em exposição aos produtos foram realizados em aquários com volume total de 1L, dispostos em triplicatas para cada dose teste acrescido do controle. Em cada aquário foi disposta uma ninfa de libélula e10 larvas de jundiá, observando a quantidade de larvas consumidas no tempo letal de exposição ao produto, conforme determinado no ensaio anterior. O delineamento foi inteiramente casualizado com nove tratamentos e três repetições, totalizando 27 unidades experimentais. Os tratamentos foram constituídos pelas doses de cada produto. No terceiro ensaio foi realizada a larvicultura do jundiá por 30 dias com exposição aos produtos. Foram utilizadas 4000 larvas de jundiá com 120 horas pós-eclosão (HPE), distribuídas aleatoriamente em 20 aquários com volume total de 70L. As doses foram aplicadas em intervalos de 7 dias, simulando o ciclo de postura dos ovos e eclosão das ninfas de libélula. A substituição de água foi feita diariamente em 5%, juntamente com a limpeza dos aquários. O delineamento desse ensaio foi inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições, totalizando 20 unidades experimentais. Foram deliberadas oito doses letais e letárgicas: 5µl/L para o Paration metílico, 10 µl/L para a Cipermetrina, 30, 25 e 20 µl/L para a Azadiractina e 20, 15 e 10 µl/L para o Extrato pirolenhoso. Nos testes de predação, o tratamento contendo Azadiractina nas doses de 30, 25 e 20 µl/L sugere sobrevivência de até 43% das larvas, o Extrato pirolenhoso 25,6%, a Cipermetrina e o Paration metílico 87 e 73%, respectivamente. No terceiro ensaio após a larvicultura, não foram evidenciados qualquer índice de possíveis danos histopatológicos em fígado e brânquias. O ensaio cometa sugere que a Cipermetrina e o Paration metílico causam danos ao DNA. A enzima acetilcolinesterase foi inibida somente pelo Paration metílico. A utilização do óleo de nim pode ser uma alternativa natural a utilização de agroquímicos em tanques de cultivo na larvicultura do jundiá cinza (Rhamdia quelen), tendo em vista que não apresenta toxicidade aos animais e a predação é reduzida significativamente.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6276_1.pdf: 1215242 bytes, checksum: 3ea46dcb59e401036947e744ffa20c15 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A enzima acetilcolinesterase (AChE) desempenha um papel fundamental na transmissão do impulso nervoso colinérgico e é alvo dos inseticidas organofosforados e carbamatos. Dois genes, Ace1 e Ace2, foram caracterizados em diferentes classes de insetos e, em mosquitos, duas mutações pontuais em Ace1 foram associadas com resistência. Apesar da resistência a estes inseticidas não ter sido ainda detectada em flebotomíneos, a seleção deste fenótipo é esperada. Neste trabalho, foi analisada a inibição de AChE de Lutzomyia longipalpis por compostos organofosforados e caracterizada parcialmente a seqüência do cDNA que codifica esta enzima neste inseto. Os resultados revelam a presença de um único gene Ace em L. longipalpis e que a atividade de AChE é inibida por organofosforados na concentração de 5 x 10-5 M. Na análise da seqüência parcial de AChE de L. longipalpis (LLAChE) observou-se que esta é homóloga àquelas de AChE1 de dípteros e que a mutação F331W é menos provável de ocorrer do que a substituição G119S, devido à restrição codante. A comparação da estrutura em 3D de LLAChE e aquelas de A. gambiae e C. tritaeniorhynchus sugerem que modificações estruturais similares, devido a mudanças não sinônimas de aminoácidos no núcleo do sítio ativo, podem ser detectadas nas três espécies

SANTOS, R. P.; PESSOA, O. D. L. Contribuição ao conhecimento químico de plantas do Nordeste do Brasil: Cordia piauhiensis Fresen e Triphsia trifolia (Burm. f.) P. Wils. 2007. 219 f. Tese (Doutorado em Química Orgânica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2007. / Submitted by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2014-10-10T20:13:31Z No. of bitstreams: 1 2007_tese_rpsantos.pdf: 14011053 bytes, checksum: a0dfa9ded77cab167dbde063c003333f (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-10-22T23:10:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_tese_rpsantos.pdf: 14011053 bytes, checksum: a0dfa9ded77cab167dbde063c003333f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-22T23:10:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_tese_rpsantos.pdf: 14011053 bytes, checksum: a0dfa9ded77cab167dbde063c003333f (MD5) Previous issue date: 2007 / The chemical composition of the essential oils from leaves and fruits of Triphasia trifolia were analyzed by GC-FID and GC-MS. The major constituents identified for oils obtained from leaves were sabinene (39.2 and 33.8%) and myrcene (21.9 and 33.6%), while the prevalent compounds detected in fruit oils were sabinene (35.5 and 22.8%), -pinene (21.2 and 29.9) and -terpinene (18.4 and 12.9%). The leaf oils showed moderate antimicrobial activity. The fruit decoction was also investigated leading to the isolation of the coumarins isopimpinelin, (R)-byakangelicin and (S)-mexoticin. From the leaves the coumarins (R)-byakangelicin, aurapten, (S)-mexoticin, isosibiricin, isomerazin and coumurrayin and, the flavonoid vitexina were isolated. All coumarins showed cholinesterase inhibition on TLC test. From Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), five triterpenoid saponins were isolated. Their structures were characterized as 3-O--L-rhamnopyranosyl-(1_2)--Dglucopyranosyl pomolic acid, 3-O-[-L-rhamnopyranosyl-(12)--D-glucopyranosyl] pomolic acid 28-O-[-D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O-[-Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl] ursolic acid 28-O-[-D-xilopyranosyl- (1_2)--D-glucopyanosyl-(16)--D-glucopyranosyl] ester, 3-O--L-rhamnopyranosyl- (12)--D-glucopyranosyl pomolic acid 28-O--D-glucopyranosyl ester and 3-O--Lrhamnopyranosyl-( 12)--D-glucopyranosyl oleanolic acid 28-O--D-glucopyranosyl- (16)--D-glucopyranosyl ester. The structures were established using a combination of 1D and 2D (1H-1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY and NOESY) NMR techniques, ESIMS and chemical evidences. / A composição química do óleo essencial das folhas e frutos de Triphasia trifolia (Rutaceae) foi analisada por CG- DIC e CG-MS. Os constituintes majoritários identificados para os óleos obtidos das folhas foram sabineno (39,2 e 33,8%) e mirceno (21,9 e 33,6%), enquanto os compostos majoritários para o óleo dos frutos foram sabineno (35,5 e 22,8%), -pineno (21,2 e 29,9%) e -terpineno (18,4 e 12,9%). Os óleos das folhas apresentaram moderada atividade antimicrobiana. O decocto dos frutos também foi investigado levando ao isolamento das cumarinas isopimpinelina, (R)-biakangelicina e (S)-mexoticina. Das folhas foram isoladas as cumarinas (R)-biakangelicina, aurapteno, (S)-mexoticina, isosibiricina, isomerazina e coumurraina e, o flavonóide vitexina. Todas cumarinas em CCD, mostraram atividade frente à enzima acetilcolinesterase. De Cordia piauhiensis Fresen (Boraginaceae), cinco saponinas triterpênicas foram isoladas. Suas estruturas foram caracterizadas como ácido 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] pomólico, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)--Dglicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila, ursolato de 3-O-[- L-ramnopiranosil-(12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-xilopiranosil-(12)- -Dglicopiranosil-( 16)--D-glicopiranosila, pomolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil-(12)- -D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosila e oleanolato de 3-O-[-L-ramnopiranosil- (12)--D-glicopiranosil] 28-O--D-glicopiranosil-(16)--D-glicopiranosila. As estruturas foram estabelecidas usando uma combinação das técnicas de RMN 1D e 2D (1H- 1H-COSY, HMQC, HMBC, TOCSY e NOESY), ESIMS, além de evidências químicas.

Made available in DSpace on 2011-05-04T12:36:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010 / Os agrotóxicos são substâncias usadas para exterminar pragas ou doenças que causam danos às plantações. Os organofosforados são agrotóxicos responsáveis por 70 por cento das intoxicações ocupacionais e atuam inibindo a enzima acetilcolinesterase por meio da fosforilação do aminoácido serina do sítio ativo. Existem diversos métodos de diagnóstico para monitorar a exposição a estes compostos, tais como: identificação e análise quantitativa de compostos livres noplasma; identificação e análise quantitativa de metabólitos na urina; determinação da atividade de colinesterases no plasma ou no sangue total. Entretanto, estas metodologias possuem algumas limitações, como por exemplo, a falta de especificidade, tecnologias de análise caras e variações interindividuais (sexo, idade, etc.). Uma tentativa de contornar estas limitações na quantificação da atividade de colinesterases é o desenvolvimento de metodologias baseadas na detecção da enzima fosforilada através de técnicas imunoquímicas. Este estudo teve como objetivo desenvolver um método de imunoensaio para o diagnóstico rápido da exposição humana aos organofosforados pela detecção deacetilcolinesterase inibida no sangue humano por anticorpos aviários produzidos contra uma sequência de aminoácidos ao redor da serina fosforilada do centro catalítico da enzima. Para isto, foram adquiridos dois decapeptídeos sintéticos correspondentes ao sítio catalítico "não fosforilado" (SOH) e outro com o resíduode serina fosforilado (SOP). Estes peptídeos foram conjugados com albumina bovina de soro (BSA), injetados em galinhas poedeiras da raça Isa-Brown e anticorpos IgY foram obtidas das gemas dos ovos das galinhas imunizadas. A especificidade dos anticorpos IgY anti-SOH e anti-SOP foi testada por meio de métodos ELISA constatando-se que estes anticorpos reconhecem os peptídeos livres, os peptídeos conjugados com BSA e a própria BSA. Além disso, ocorreu uma significativa reação cruzada, ou seja, os anticorpos IgY anti-SOH e anti-SOP não conseguiram diferenciar os peptídeo SOH e SOP. Estes resultados não permitem a indicação destes anticorpos para o desenvolvimento de métodos para diagnóstico de intoxicação. / Pesticides are chemical substances used to control plagues and diseases in plantations. Organophosphates are the pesticides involved in 70% of the occupational intoxications and act inhibiting the enzyme acetylcholinesterase by phosphorylation of the serine residue of catalytic centre. There are several methods for monitoring the exposition to these compounds, as so: identification and assay the free compounds into plasma; identification and assay metabolites into urine; cholinesterases assay into plasma or blood. However, these methods have some limitations, as for example lack of specificity, expensive analytical technologies and inter-individual variety (sex, age, etc.). One way to outline these limitations on cholinesterase assay is the development of methods based on phospho-enzyme detection by imunochemical techniques. This study have had the objective to developing an imuno-assay method for rapid diagnosis of human exposition to organophosphorus compounds by imuno-detection of inhibited acetylcholinesterase using aviary antibodies produced against a peptide sequence of the catalytic centre around phospho-serine residue. Two synthetic decapeptides were bought: one with the sequence of "not-phosphorylated" catalytic centre (SOH) and another with a serine-phosphorylated residue. These peptides were conjugated with bovine serum albumin (BSA), injected into Isa-Brown hens and antibodies IgY were isolated from egg yolk of immunized hens. The specificity of IgY anti-SOH and anti-SOP was tested using ELISA methods showing that these antibodies recognize free peptides, conjugated peptides and BSA. In addition, there was a significant cross reaction, or in other words, the antibodies IgY anti- SOH and anti-SOP failed on differentiate the peptide SOH and SOP. These results do not allow the indication of these antibodies for developing methods for intoxication diagnosis.

A doença de Alzheimer é uma afecção crônica degenerativa que não possui tratamento até o momento. O uso de alimentos funcionais como a romã na prevenção e/ou tratamento de doenças neurodegenerativas têm sido amplamente pesquisados. Diante disto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a quantidade de compostos bioativos (antocianinas, compostos fenólicos e flavonoides), atividade anticolinesterásica e a capacidade antioxidante in vitro e on line dos extratos de polpa e casca de romã e posteriormente estudar o possível efeito neuroprotetor de micropartículas obtidas a partir do extrato da casca de romã em um animal submetido a infusão crônica de peptídeo β-amilóide. O extrato de casca de romã apresentou maior teor de antocianinas, compostos fenólicos, flavonoides e atividade antioxidante in vitro e on line do que o extrato da polpa. Na análise de compostos não voláteis pela técnica de GC-MS foram identificados 38 compostos no extrato da casca e 37 da polpa de romã, sendo o ácido gálico a principal substância detectada. Foram encontrados no total 13 compostos no extrato de casca e 8 no extrato de polpa de romã que apresentaram atividade antioxidante pelo método HPLC-ABTS on line. A punicalagina, epicatequina e ácido gálico foram os compostos determinantes para a atividade antioxidante em ambos os extratos. O extrato da casca de romã apresentou atividade anticolinesterásica superior ao da polpa. Estes resultados, em conjunto, indicaram um possível potencial da casca de romã como um agente neuroprotetor na doença de Alzheimer. Para estudar o possível efeito neuroprotetor do extrato da casca de romã foram utilizados camundongos C57BL/6 cronicamente infundidos com peptídeo βA1-42 e/ou veículo através de mini-bombas osmóticas durante 35 dias e foram avaliados biomarcadores e alterações comportamentais. Micropartículas de extrato de casca de romã, produzidas em spray dryer, foram diluídas em água e administradas na dose de 800 mg de casca de romã/kg de animal/dia. A memória espacial foi avaliada em labirinto de Barnes e uma redução no número de erros para encontrar a caixa de escape foi verificada nos animais tratados com micropartículas de casca de romã e nos animais do grupo controle, mas não nos animais do grupo βA. A atividade da acetilcolinesterase, neurotrofina BDNF, TNF-α e a enzima SOD foram avaliadas no hipocampo, córtex e soro dos animais. A peroxidação lipídica foi avaliada no fígado dos animais. Como a casca de romã não é comumente consumida foram dosados marcadores de dano isquêmico hepático. O consumo de micropartículas de casca de romã promoveu uma redução do acumulo de placas amiloides, aumento da expressão de neurotrofinas, redução da atividade da enzima acetilcolinesterase, redução da peroxidação lipídica e da citocina pró-inflamatória TNF-α em animais infundidos com peptídeo β-amilóide. O consumo das microcáspulas de casca de romã não acarretou nenhum tipo de lesão hepática. No geral, verificou-se que os compostos presentes na casca de romã podem apresentar um efeito neuroprotetor em animais submetidos a infusão crônica de peptídeo β-amilóide. / Alzheimer\'s disease is a chronic and degenerative condition that have no treatment until now. The research of functional foods such as pomegranate for the prevention and/or treatment of many conditions, including neurodegenerative diseases, is increasing year after year. The amount of bioactive compounds (anthocyanins, phenolic compounds and flavonoids), acetylcholinesterase activity and antioxidant capacity in vitro and on line of pomegranate peel and pulp extracts were evaluated. Pomegranate peel extract has higher content of anthocyanins, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity in vitro and on line than pulp. The analyses of the profile of non-volatile compounds identified 38 compounds in the peel and 37 in the pulp. The gallic acid was main compound detected. Pomegranate peel showed 13 compounds with antioxidant activity by the HPLC-ABTS method online and pulp showed eight compounds. Punicalagin, Gallic acid and epicatechin were determinants for the antioxidant capacity of the aqueous-alcoholic extract of pomegranate. Pomegranate peel extract had greater anticholinesterase activity than pulp. These results together indicated a possible potential of pomegranate peel as a neuroprotective agent in Alzheimer\'s disease. This research had as objective to study the possible neuroprotective effect of pomegranate peel on an animal model of the Alzheimer\'s disease. For that purpose, mice model of Alzheimer\'s disease were used and biomarkers and behavioral changes were evaluated. C57BL/6 mice were chronically infused with βA1-42 peptide and/or vehicle by mini - osmotic pumps during 35 days. Microparticles of pomegranate peel extract, produced by spray drying, were diluted in water and administered at a dose of 800 mg of pomegranate peel/ kg animal/day. The spatial memory was evaluated in the Barnes maze and a reduction of the errors to find the scape box was verified in animals treated with the PPE, as observed in the Control group, but not in th Aβ group. The activity of acetylcholinesterase, neurotrophin BDNF, TNF-α and SOD were measured in the hippocampus, cortex and serum. Lipid peroxidation was evaluated in the liver. As the pomegranate peel is not commonly consumed, biomarkers of liver ischemic damage were measured. Pomegranate peel consumption promoted a reduction of amyloid plaques, increasing neurotrophin expression, reduction in a AChE activity, reduced lipid peroxidation and reduced TNF-α in animal models of Alzheimer\'s disease. The consumption of pomegranate peel did not cause liver injury. In general, pomegranate peel showed a neuroprotective effect on animal models of the Alzheimer\'s disease.

O desenvolvimento na área agroquímica associado as novas técnicas de plantio, asseguram ao país recordes anuais na produção agrícola. Entretanto, os defensivos agrícolas e fertilizantes utilizados para aumentar a produção das lavouras não são inertes a saúde humana. Exposições contínuas e inadequadas a esses compostos químicos podem causar sua absorção e resultar em intoxicações agudas ou crônicas. Com o objetivo de avaliar essas exposições, dosamos a atividade da enzima acetilcolinesterase, assim como, avaliamos os hemogramas e dosamos os níveis sanguíneos dos metais arsênio (As), cádmio (Cd), chumbo (Pb), manganês (Mn), zinco (Zn), cobre (Cu) e o não metal selênio (Se) em trabalhadores rurais e moradores da área urbana da região de Rio Verde-GO e comparamos esses resultados. A atividade média da enzima colinesterase eritrocitária nos trabalhadores rurais apresentou uma depressão significativa indicando uma exposição inadequada aos inseticidas inibidores das colinesterases. As concentrações sanguíneas médias dos metais As, Cd, Mn, e Zn nos trabalhadores rurais são maiores do que na população urbana, indicando que as exposições inadequadas aos fertilizantes e defensivos agrícolas podem causar absorção desses metais. A concentração sanguínea média de Se na população urbana é maior do que nos trabalhadores agrícolas. Esse fato pode estar ligado a alimentação, sendo que, uma provável causa seria o baixo consumo de alimentos ricos em selênio (castanha-do-pará, salmão, farelo de trigo, ostras e fígado bovino). Os hemogramas não apresentaram alterações, indicando que, sua utilização isolada na monitorização das exposições ocupacionais aos defensivos agrícolas e fertilizantes é inadequada. / Advancements in the agrochemical industry associated with new seeding techniques make it possible for the country to reach annual crop records in production. However, the chemicals and fertilizers used for increasing productions are by no means harmless to human health. Repeated and inadequate exposures to such chemicals may result in their absorption and cause acute and chronic poisoning. In order to assess these exposures, we measured the activity of the acetylcholinesterase enzyme and evaluated hemograms. In addition, we measured blood levels of metals such as arsine (As), cadmium (Cd), lead (Pb), manganese (Mn), zinc (Zn), copper (Cu), and the non metallic selenium in farm workers and urban residents in a region of Rio Verde- GO- Brazil and compared the results. Mean activity of the erythrocyte cholinesterase enzyme in the rural workers presented a significant decrease, indicative of inadequate exposure to cholinesterase inhibiting insecticides. Mean concentrations of the metals As, Cd, Mn, and Zn were higher in rural workers compared to urban residents, which suggests that inadequate exposure to fertilizers and agricultural chemicals may result in their absorption. Mean blood concentration of Se in urban residents was higher compared to rural workers. That can be associated with diet and a possible cause may be a low consumption of high Se foods (Brazils nuts, salmon, oysters, wheat bran, and bovine liver). The hemograms did not present any changes, indicating that its use for monitoring occupational exposures to fertilizers and agricultural chemicals is inadequate.