Orientador: Silvio Roberto Andrietta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-29T02:43:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Steckelberg_Claudia_D.pdf: 4836930 bytes, checksum: 7c6daf30b9b5d3ad064233e438e76664 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Nos últimos anos, houve um aumento significativo de trabalhos que buscam entender a dinâmica de população de leveduras habitante das domas de fermentação alcoólica. Os trabalhos gerados elucidaram questões importantes. Entre elas quais seriam as características básicas para que uma levedura permanecesse em um dado processo. Seguindo este contexto este trabalho teve como finalidade contribuir para o conhecimento das características das cepas de leveduras dominantes dos processos fermentativos industriais das destilarias brasileiras. Buscou-se neste trabalho, descrever os atributos de desempenho fermentativo e composição celular de 19 cepas isoladas de vários processos instalados em diferentes regiões do Brasil e com características particulares. Os atributos estudados foram: capacidade fermentativa; taxonomia numérica; tolerância ao etanol; teores de: trealose, proteínalaminoácido, e ácidos graxos. Com objetivo de comparação dos atributos estudados, avaliou-se uma cepa destinada a indústria de panificação assim como uma isolada de um processo de produção de álcool instalado em território Indiano. Os resultados mostraram que em relação às características fermentativas as cepas embora estejam colocadas em 17 grupos diferentes todas se apresentam como boas fermentativas. Em relação à taxonomia numérica foram classificadas 20 das 22 analisadas. Sendo 8 classificadas como Saccharomyces chevalieri, 5 como Saccharomyces coreanus e 7 como Saccharomyces cerevisiae. Se for considerado a classificação segundo BARNET (1992) todas elas são representantes de S. cerevisiae. Em relação à tolerância ao etanol existe uma faixa que varia entre 0,166 e 0,653 11M. A faixa da concentração de trealose na massa celular abrange concentrações que variam 0,47 a 6,3%. No que diz respeito a quantidade de proteína, essa mostra uma variação de 10% da cepa que apresenta uma maior quantidade para que apresenta a menor. As leveduras que apresentaram maior valor de produção específica de massa celular foram também as que apresentaram uma menor quantidade de material protéico. Em relação à distribuição de aminoácidos nesta proteína, os resultados mostram que todas se apresentam dentro do perfil esperando para linhagens de S. cerevisae. Todas cepas testadas apresentaram os ácidos graxos C-12:0 (ac.láurico), C-14:0 (ac.mirístico), C-16:0 (ac.palmítico) , C-16:1 (ác.palmitoleíco), C-18:0 (ac.esteárico) e C-18:1 (ac.oleíco) em sua composição. Alguma cepas apresentaram ainda o ácido graxo insaturado C14:1 (ac.miristoleíco). Os ácidos graxos insaturados (C-16:1 e C-18:1) são os de maior abundância no material graxo que compõe as cepas testadas, que segundo alguns autores estão vinculados com a tolerância das cepas ao etanol. Alguns indícios de relação entre o teor de ácidos graxos C-16:1 e C-18:1 e a tolerância ao etanol pode ser observado, mas uma correlação exata não pôde ser determinada. A partir da compilação dos dados obtidos neste trabalho é possível afirmar que as cepas isoladas dos diversos processos fermentativos apresentaram variações comportamentais e de composição celular. Entretanto quando se avalia o parâmetro de capacidade fermentativa, todas as cepas são classificadas como adequadas para o processo de fermentação alcoólica. Isto confirma a hipótese que, embora as leveduras apresentem características fermentativas semelhantes, pois do contrário não poderiam estar presentes em um ambiente hostil, como é o das domas de fermentação, cada processo seleciona sua própria linhagem, e que a mesma é provavelmente habitante natural da matéria-prima que a unidade processa / Abstract: In the past years, there has been a significant increase in studies seeking to understand the dynamics of the yeast population inhabiting alcoholic fermentation vats. The studies generated have elucidated important issues. Among them, which would be the basic characteristics for a strain to remain in a processo Following this context, this study has had the purpose of enhancing the knowledge on the characteristics of the dominant strains of industrial fermentation processes of Brazilian distilleries. This study has sought to describe the fermentative performance attributes and the cellular makeup of 19 strains, with particular characteristics, isolated from several processes installed in different regions of Brazil. The attributes studied were: fermentative capacity; Numerical Taxonomy; tolerance to ethanol, and contents of trehalose, protein/amino acids, and fatty acids. In order to compare the attributes studied, one strain assigned to the baking industry as well as one isolated from an alcohol production process installed in the Indian territory were evaluated. The results have shown that ali strains have presented good fermentative characteristics in spite of being divided in 17 different groups. As for the numerical taxonomy, 20 out of the 22 strains analyzed have been classified, of which 8 have been classified as Saccharomyces chevalieri, 5 as Saccharomyces coreanus and 7 as Saccharomyces cerevisiae. If the classification according to BARNET (1992) is considered, ali of them are representative of S. cerevisiae. As for ethanol tolerance, there is a variable range between 0.166 and 0.653 11M. The trehalose concentration level in the cellular mass encompasses concentrations varying from 0.47 to 6.3%. With regard to the amount of protein, this sample has shown a 10% variation of the strain presenting the highest amount to the one presenting the lowest. The strains presenting the highest value of specific cellular mass production were also the ones showing the lowest amount of proteinie material. As for the amino-aeid distribution in this protein, the results have shown that ali of them were within the expeeted profile for S. cerevisae strains. Ali strains tested presented the following fatty aeids in their makeup: C-12:0 (laurie acid), C-14:0 (myristie aeid), C-16:0 (palmitie acid), C-16:1 (palmitoleie aCid), C-18:0 (stearic acid), and C-18:1 (oleie aeid). Some strains have also presented the C14:1 (myristoleic aeid) unsaturated fatty acid. The C-16: 1 and C-18: 1 unsaturated fatty aeids are the most plentiful in the fatty material composing the strains tested and, according to some authors, they are linked to the tolerance of the strains to ethanol. Some indications as for relationship between the content of C-16:1 and C­18: 1 fatty acids and the tolerance to ethanol may be notieed, even though an exaet correlation has not been able to be determined. From the compilation of the data obtained in this study, it is possible to state that the strains isolated from several fermentation processes have shown behavioral and cellular makeup variations. However, when the fermentative capacity parameter is evaluated, ali strains are classified as suitable for the alcoholic fermentation processo This fact confirms the hypothesis that, although some strains have similar fermentative eharacteristics, since, otherwise, they could not inhabit a hostile environment such as the one in the fermentation vats, each process selects its own strain, and such strain is probably a natural inhabitant of the raw-material of the unit processing it / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

O presente trabalho estudou o efeito de seguidos episódios de emagrecimento e recuperação do peso corporal (efeito sanfona) ou da restrição alimentar crônica (seis semanas consumindo metade da ração habitual), com ou sem suplementação na ração com os aminoácidos L-leucina e L-fenilalanina (dosagem de 50 ou 100%), na composição corporal e em alguns parâmetros metabólicos, em ratos adultos. Observou-se que os animais submetidos ao efeito sanfona apresentaram tendência de aumento de peso, maior acúmulo de gordura na carcaça e aumento da eficiência metabólica. A suplementação com os aminoácidos causou acréscimo no ganho de peso, devido ao acúmulo de massa magra e de proteína corporal, e tendência de redução da gordura corporal. Na restrição alimentar crônica, a suplementação apenas com L-leucina (dosagem de 50%) foi capaz de reduzir significantemente a gordura corporal, além de melhorar alguns parâmetros relacionados ao estado nutricional protéico hepático e muscular dos animais.

Objetivo. Amaranto é considerado um alimento funcional devido às suas propriedades de redução de colesterol plasmático. Um possível componente do amaranto responsável por este efeito é a proteína.Métodos. Neste estudo, foi produzido isolado protéico de amaranto através da solubilização da proteína em pH 11 e precipitação em pH 5,7, obtendo-se o isolado com pureza de 96% de proteína. Este isolado protéico foi utilizado como fonte de proteínas em dietas experimentais para hamsters que tiveram hipercolesterolemia induzida, previamente, por dieta contendo 30% de caseína e 0,05% de colesterol, durante 3 semanas. Os animais foram, então, distribuídos em três grupos (n=11 animais/grupo) e foram alimentados com dietas contendo: (A) 20% caseína (controle), (B) 20% proteína de amaranto purificada (grupo substituição) e (C) 20% caseína + 10% proteína de amaranto purificada (grupo suplementação). Resultados. Comparando-se com a dieta controle, o grupo da suplementação e o da substituição tiveram dramáticas reduções do nível de colesterol plasmático, 30% (p<0,05) e 51% (p<0,05) respectivamente, enquanto o controle apresentou redução de apenas 7% após os 28 dias de dieta. Já na primeira semana este comportamento de redução para as duas dietas contendo amaranto foi percebido, e a redução foi mais marcante na fração LDL. Os mecanismos envolvidos na redução do colesterol plasmático foram investigados. A digestibilidade verdadeira da proteína do amaranto foi igual à da caseína. A excreção de ácidos biliares foi inversamente proporcional à redução do colesterol plasmático nas diferentes dietas, enquanto que o colesterol excretado foi proporcional à redução do colesterol. Quando aminoácidos livres simulando o perfil da proteína de amaranto foram utilizados como única fonte de nitrogênio da dieta, a redução dos níveis de colesterol foi de 11%. A dieta contendo caseína e suplementada com arginina de forma a resultar numa relação lisina/arginina de 0,5 (a mesma observada na proteína de amaranto), mostrou-se deletéria aos parâmetros plasmáticos. Conclusões. Comprovou-se que a proteína de amaranto reduz o colesterol plasmático. A digestibilidade e excreção de ácidos biliares não estão relacionados com a redução do colesterol provocada pela proteína do amaranto. A relação dos aminoácidos lisina/arginina explica apenas parcialmente o mecanismo e apenas a proteína íntegra tem efeito sobre a excreção de colesterol nas fezes. O mecanismo envolvido na redução do colesterol nestes experimentos ainda não está totalmente elucidado, sugerindo a necessidade de futuros estudos da ação direta de peptídeos formados pela digestão incompleta da proteína do amaranto no metabolismo lipídico. / Objective. Amaranth has been considered a functional food because its consumption can lower blood cholesterol levels. In the present work the effect of amaranth protein on this property was investigated in hamsters. A possible component in amaranth grain that would respond for this effect is the protein fraction. Methods. In this study the amaranth protein was isolated by its alkaline solubilization at pH 11 and acid precipitation at pH 5.7. The isolate thus produced was defatted and resulted in a protein content of about 96%. This product was introduced in experimental diets to fed hamsters that previously had their blood cholesterol increased by a diet containing 30% casein and 0.05% cholesterol during 3 weeks Animals were then, divided in 3 groups (n = 11/group) were fed diets containing (g/100 g diet): (A) 20 casein (control), (B) 20 purified amaranth’s protein (group replacement), (C) 20 casein + 10 purified amaranth’s protein (group supplementation) for 4 wks. Results. The results showed that when amaranth was the sole protein source (at 20% level) or it was admixed with casein (20% casein +10% of amaranth protein), the hypercholesterolemized hamsters had a significant (P < 0.05) reduction in cholesterol levels (51 and 30%, respectively) as compared 7% reduction of the control group (20% casein). In the first week of diet the decrease was already observed. The lowering was mainly in LDL fraction. The mecanisms involved in lowering plasma cholesterol were investigated. Digestibility of amaranth protein was as high. The bile acids excretion was inversely proportional to plasma cholesterol lowering, while cholesterol excretion in feces was directly proportional. When free amino acids simulating the amaranth protein were used as the only nitrogen source of diet the cholesterol reduction was about 11%. Casein supplemented with arginine to bring the lysine/arginine ratio to 0.5, as observed in amaranth protein, was had deleterious effects to hamsters’ cholesterol levels. The bile acid and cholesterol excretion of this trial were equal to all groups. Conclusions. Amaranth´s protein reduces plasma cholesterol. Digestibility and bile acid excretion are not related to hypocholesterolemic effect of amaranth’s protein. The proportion between lysine/argine is a partial explanation for this effect, but the presence of whole protein is necessary for the higher cholesterol excretion in feces. The full understanding of mechanisms involved in cholesterol reduction in these experiments is not fully elucidated, suggesting further research on the direct action in lipid metabolism by peptides originated from the incomplete digestion of amaranth protein.

Orientador: Antonio Jose de Almeida Meirelles / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:50:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ninni_Luciana_D.pdf: 1651054 bytes, checksum: a02c4b214cfc69dac3f1eb376a13a6b7 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Métodos de contribuição de grupos têm sido ferramenta útil no cálculo de coeficientes de atividade nos mais variados sistemas. Em sistemas aquosos, e mais especificamente naqueles que possuem compostos biológicos como açúcares, arninoácidos, sais orgânicos, polímeros, etc., o uso de métodos de contribuição de grupos para a correlação e predição do equilíbrio de fases tem crescido nos últimos anos. Em alimentos e em biotecnologia, os sistemas são geralmente multicomponentes e por essa razão, a aplicação de métodos de contribuição de grupos torna-se atraente partindo-se do princípio que, de posse dos parâmetros de interação entre grupos, é possível calcular propriedades de sistemas mais complexos a partir de parâmetros obtidos da correlação a dados experimentais de sistemas mais simples. Neste trabalho, os métodos de contribuição de grupos ASOG, UNIF AC, VERS e UNIMOD foram empregados em diferentes sistemas para a correlação e predição de propriedades fisico-químicas. Os compostos estudados foram: polióis, aminoácidos, maltodextrinas e polietileno glicóis (pEG)s, sendo os três primeiros compostos geralmente encontrados em sistemas alimentícios, e o PEG é bastante utilizado em sistemas aquosos bifásicos para o estudo do equilíbrio e separação de biomoléculas. Propriedades fisico-químicas como atividade de água, solubilidade, depressão do ponto de congelamento, pH, espalhamento de luz, entalpia de diluição e viscosidade, são algumas das propriedades determinadas e/ou retiradas da literatura usadas para a correlação e predição empregando os modelos acima citados. A intenção deste trabalho foi então, testar os métodos de contribuição de grupos para o cálculo de propriedades fisico-químicas tratando também das particularidades de cada sistema estudado, como a dissociação parcial dos aminoácidos, o efeito de proximidade dos grupamentos hidroxilas nos polióis e a polidispersão das maltodextrinas. Também são apresentados resultados da correlação e predição de viscosidades de sistemas aquosos contendo PEGs por um modelo semi-empírico que não trata da contribuição de grupos mas considera a hidratação das moléculas desses polímeros em meio aquoso / Abstract: Group contribution methods have been used as a useful tool for calculating activity coefficients in different types of systems. In aqueous systems, specifically those containing biological compounds such as sugars, amino acids, organic salts, polymers, etc., the use of group contribution models for correlating and predicting phase equilibrium has increased in the last years. In the food and in the biotechnology areas, the systems are generally multicomponent, and for this reason, the use of group-contribution methods becomes an attractive tool considering the possibility of calculation of properties in complex systems with parameters adjusted for simple ones. In this work, the group-contribution models ASOG, UNIF AC, VERS and UNIMOD were utilized in different types of systems for the correlation and prediction of physical chemical properties. The studied compounds were: polyols, amino acids, maltodextrins and polyethylene (glycols) (pEG)s, which the first three compounds are found in food systems, and PEGs are wide used in aqueous-two-phase systems to study equilibrium and separation of biomolecules. Physical-chemical properties such as water activity, solubility, fteezing point depression, pH, light scattering, enthalpy of dilution and viscosity are some of the properties experimentally determined and/or found in literature used in this work for the correlation and prediction using the above cited models. Thus, the objective of this work was to test the group-contribution models for calculating physical-chemical properties considering the particularities of each system such as partial dissociation phenomena in aqueous amino acid systems, proximity effect of hydroxyl groups in polyols, and polydispersity of maltodextrins. It is also presented in this work, the results of viscosity correlation and prediction in aqueous PEG solutions by a semi-empirical equation that does not consider group contributions but take into account the hydration of the polymer molecules in aqueous media / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_raquel_pillon-della_flora.pdf: 1108522 bytes, checksum: fe40661b1843d277467507a344cc4ed8 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / This study aimed to evaluate performance and egg quality in two successive generations of female broiler quails genetically improved, fed diets with increasing levels of lysine and aged between 42 and 126 days. Treatments were established in six levels with increasing percentage doses of lysine inclusion: 0,98% (T1); 1,03% (T2); 1,08% (T3); 1,13% (T4); 1,18% (T5) e 1,23% (T6). These values were distributed in a split plot design (split-plot), equivalent to the design of repeated measures in time, where each treatment showed 19 and 25 repetitions in the first and second generation. In the productive performance, egg production, feed intake, egg mass, feed per dozen eggs and per kg and body weight were evaluated. Egg quality was individually determined by weight, width and length thereof, specific gravity, height of the albumen and yolk weight, egg white and egg shell. Concerning lysine levels, no effect was statistically significant for any variables. However, there was interaction treatment*generation for bird weight, feed intake, feed conversion per dozen, egg production, egg white weight, egg length and weight, being that in two generations the lowest minimum point presented was 1.05% and the highest point of maximum 1.18%. It was observed that any of the diets used in the experiment was efficient for this line of quails, therefore the lowest lysine-level diet can be used in order to reduce feed costs. / Esta pesquisa teve por objetivo avaliar o desempenho produtivo e a qualidade dos ovos em duas gerações sucessivas de matrizes de codornas de corte geneticamente melhoradas, arraçoadas com dietas contendo níveis crescentes de lisina, nas idades entre o 42º a 126º dias. Os tratamentos foram estabelecidos em seis níveis, com doses percentuais crescentes de inclusão de lisina: 0,98% (T1); 1,03% (T2); 1,08% (T3); 1,13% (T4); 1,18% (T5) e 1,23% (T6). Estes valores foram distribuídos em delineamento de parcelas subdivididas (split-plot), equivalentes ao delineamento de medidas repetidas no tempo, onde cada tratamento apresentou 19 e 25 repetições na primeira e segunda geração. No desempenho produtivo foram avaliadas a produção de ovos, consumo de ração, massa de ovos, conversão alimentar por dúzia de ovos e por quilograma e peso corporal. A qualidade dos ovos foi determinada através do peso, largura e comprimento dos mesmos, gravidade específica, altura do albúmen e pesos da gema, clara e casca individualmente. Para todas as variáveis nenhum efeito foi estatisticamente significativo em relação aos níveis de lisina. Porém, para o peso da ave, consumo de ração, conversão alimentar por dúzia, produção de ovos, peso da clara, comprimento e peso do ovo houve interação tratamento*geração, sendo que nas duas gerações o menor ponto de mínimo apresentado foi 1,05% e o maior ponto de máximo 1,18%. Neste estudo foi possível observar que qualquer uma das dietas utilizadas no experimento foi eficiente para essa linhagem, podendo ser utilizada a dieta com nível mais baixo de inclusão da lisina, diminuindo os custos da alimentação.

Orientador: Ricardo Antunes de Azevedo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T07:27:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cardoso_PatriciaFelippe_D.pdf: 8529922 bytes, checksum: 7d11b42d059e4ce26267792f15c476f6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A presença de metais pesados no ambiente é atualmente, um dos principais problemas de contaminação ambiental, uma vez que, os metais liberados no ambiente contaminam o solo e entram na cadeia alimentar através das plantas, causando efeitos tóxicos a curto e a longo prazo aos animais e seres humanos. No caso do metal pesado Níquel (Ni), foi constatado que a sua presença nas plantas pode diminuir o crescimento, reduzir a taxa de fotossíntese e provocar alterações, tanto nas atividades enzimáticas quanto metabólicas.Pouca informação está disponível na literatura, com referência a resposta antioxidante das plantas à expressão a esse metal. Neste sentido, os objetivos deste trabalho foram realizar diferentes ensaios para avaliar o efeito fitotóxico do Ni em plântulas de C. juncea. Neste estudo foram analisados parâmetros bioquímicos relativos à atividade das enzimas antioxidantes, Catalase (CAT), Superóxido Dismutase (SOD) e Glutationa Redutase (GR). Constatou-se que, não houve alteração da atividade GR e CAT nas raízes. Entretanto, atividades destas enzimas apresentaram aumento significativo na parte aérea. O aumento na atividade da GR, na parte aérea, pode ser explicado pelo fato de ser o ciclo Halliwell-Asada o principal mecanismo que age na desintoxicação de Espécies Ativas de Oxigênio. Quanto à atividade da SOD, quando comparados ambos tecidos, foi constatado que na parte aérea foi pouco alterada, entretanto, a atividade da SOD foi estimulada nas raízes na presença do Ni. Para aumentar a precisão dos resultados, quantificou-se pela técnica de Fluorescência de Raios X, a concentração de NiCl2 e o seu efeito na absorção de nutrientes nas plântulas de crotalaria. Nesta análise, observou-se o acúmulo do metal nas raízes e baixa translocação para a parte aérea. Também foi analisada a concentração de Malonaldeído (MDA) na parte aérea de plântulas de C. juncea, sendo constatada, a ocorrência de peroxidação lipídica na presença do Ni. Finalmente, determinou-se o efeito do Ni sobre as concentrações de aminoácidos solúveis em raízes e na parte aérea, como estratégia desta planta para superar o efeito do Ni , não tendo sido observadas variações significativas nas concentrações dos mesmos com os diferentes tratamentos com Ni. Palavra¿Chave: Aminoácidos, Atividade Enzimática, Crotalária, Fitotoxicidade, Níquel, Poluição Ambiental / Abstract: The contamination of the environment with heavy metals has become a world-wide problem. Heavy metals can have direct effects on human health and decreases agricultural yields. In the presence of Nickel (Ni), plant growth and the net photosynthetic rate have been shown to be significantly reduced, even at low concentrations. Moreover, Ni can also inhibit the activity of several groups of enzymes and metabolism. The effects of the Ni on the activies of the antioxidant enzymes and metabolism were investigated in C.juncea seedlings. Enzymatic assays for Catalase (CAT) Glutathione Reductase (GR) and Superoxide Dismutase (SOD) were carried out. Response patterns for CAT and GR were similar with low values in the roots and increased activity in the shoots. A significant increase in CAT and GR activity in the shoots suggests that these enzymes play a role in the detoxification process, of reactive oxygen species (ROS) produced by the induced Ni stress, possibly by subquesent dismutase. On the other hand, the activity of SOD was stimulated in the roots, and decreased in the shoots. To gain insight into the response of C. juncea seedlings to the oxidative damage induced by excess Ni, were conducted studies of Malondialdehyde (MDA). It was evident that Ni induced an increase an lipid peroxidation in the shoots during the studied period. The Ni concentration in shoots and roots was determined for C. juncea and demonstrated an increase in the concentration of Ni in the roots, however the shoots did not present an accumulation. Further experiments were carried out on total free amino acids. It was observed that Ni treatment did not cause any change in the accumulation of total free amino acids in the roots. The results suggest that in C. juncea seedlings did not exhibit any major variation following Ni treatment. Key words: Antioxidant enzymes, Amino acids, C. juncea, Nickel, Environmental Pollution / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-11T18:48:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 240883 bytes, checksum: 4a35a5863a1287ab9fd8b3bf0db069ac (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-11T18:48:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 240883 bytes, checksum: 4a35a5863a1287ab9fd8b3bf0db069ac (MD5) Previous issue date: 2003-01-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Foram utilizadas 170 leitoas em quatro experimentos para avaliar os níveis de proteína bruta (PB) com suplementação de aminoácidos em rações para leitoas mestiças, mantidas em diferentes temperaturas ambientais. No primeiro experimento, foram utilizados 50 animais mantidos em termoneutralidade (20,3oC), dos 30,1 aos 60,3 kg, em delineamento experimental inteiramente ao acaso, com cinco tratamentos (19, 18, 17, 16 e 15% de PB, com suplementação de aminoácidos para manter a mesma qualidade protéica), cinco repetições e dois animais por unidade experimental. Observou-se efeito da redução do nível de PB sobre o ganho de peso diário (GPD) e conversão alimentar (CA), porém os tratamentos não influenciaram os consumos de ração (CRD), de lisina (CLD) e de energia digestível (CED) diários. A deposição de proteína na carcaça (DP) foi influenciada pelos tratamentos. O consumo de nitrogênio (CN) reduziu e a eficiência de utilização de nitrogênio para ganho (EUNG) aumentou, conforme se reduziu o nível de PB. Os tratamentos não influenciaram os pesos absoluto e relativo dos órgãos avaliados. No segundo experimento, 50 leitoas foram mantidas em ambiente com alta temperatura (30,4oC), dos 30,2 aos 60,1 kg, recebendo tratamentos e distribuídos em delineamento experimental iguais aos do primeiro experimento. Não se observou efeito dos tratamentos sobre o GPD, o CRD, a CA, o CLD e o CED. O nível de PB da ração influenciou o CN e a EUNG, bem como a DP. Os tratamentos não influenciaram os pesos absoluto e relativo dos órgãos avaliados. No terceiro experimento, 35 fêmeas suínas foram mantidas em ambiente de termoneutralidade (20,2oC), dos 60,5 aos 100,6 kg, distribuídas em delineamento experimental inteiramente ao acaso, com cinco tratamentos (17,3; 16,0; 14,7; 13,4 e 12,1% de PB, com suplementação de aminoácidos para manter a mesma qualidade protéica), sete repetições e um animal por unidade experimental. O nível de PB não influenciou o GPD, o CRD, a CA, o CLD e o CED. Observou-se efeito dos tratamentos sobre o CN e a EUNG, sem alteração dos comprimentos da carcaça, da área de olho de lombo (AOL); das espessuras de toucinho (ETUL), e da espessura de toucinho a 6,5 cm da linha dorso-lombar (ETP 2 ); dos rendimentos da carcaça (RC), de carne magra (RCM), de gordura (RG) e de pernil (RP). Os animais que receberam o nível de 16,0% de PB apresentaram maiores pesos (absoluto e relativo) de fígado. No quarto experimento, foram utilizadas 35 leitoas mantidas em ambiente de alta temperatura (30,4oC), dos 60,3 aos 100,3 kg, distribuídas em tratamentos e delineamento experimentais iguais aos do terceiro experimento. O nível de PB da ração não influenciou o GPD, o CRD, a CA, o CLD e o CED. Entretanto, observou-se efeito dos tratamentos sobre o CN e na EUNG, sem alteração dos comprimentos da carcaça, da AOL, da ETUL, da ETP 2 , do RC, do RCM, do RG e do RP. Os animais que receberam ração com maior nível de PB apresentaram maiores pesos (absoluto e relativo) de intestino. Conclui-se que os níveis de PB das rações à base de milho e farelo de soja, para leitoas mestiças dos 30 aos 60 kg e dos 60 aos 100 kg, podem ser reduzidos, respectivamente, em quatro (19 para 15%) e cinco (17,3 para 12,1%) unidades percentuais, sem comprometimento do desempenho, independentemente do ambiente térmico, desde que as rações sejam suplementadas com os aminoácidos limitantes para atender ao padrão destes na relação da proteína ideal. / 170 gilts were used in four trials to evaluate the crude protein levels (CP) with amino acids supplementation in diets for cross breed gilts maintained in different environmental temperatures. In the first experiment were used 50 animals maintained in a thermal comfort (20.3oC) from 30.1 to 60.3 kg in a randomized experimental design with five treatments (19; 18; 17; 16 and 15 of CP with amino acids supplementation to maintain the same proteic quality), five replicates and two animals per experimental unity. The reduction of the crude protein level influenced the daily weight gain (DWG) and feed:gain ratio (F/G) but the treatments did not influence the daily feed intakes of lysine (LDI) and digestible energy (DEI). The carcass protein deposition (PD) was influenced by treatments. The nitrogen intake (NI) and the efficiency of nitrogen utilization for gain (ENUG) increased as the crude protein level reduced. Treatments had no influence on absolute and relative weights of evaluated organs. In the second trial 50 gilts were maintained in a high environmental temperature (30.4oC) from 30.2 to 60.1kg receiving treatments with the same experimental design of the xfirst trial. It was not observed effect of treatments on DWG, the DFI, the F/G, the LDI and the DEI. The crude protein (CP) of the diet influenced the NI and the ENUG as well as the PD. The treatments did not influence the absolute and relative weights of the evaluated organs. In the third trial 35 gilts were maintained in a thermoneutral environment (20.2oC) from 60.5 to 100.6kg distributed in a randomized experimental design with five treatments (17.3; 16.0; 14.7; 13.4 and 12.1 of CP with amino acid supplementation to maintain the same proteic quality seven replicates and one animal per experimental unity. The CP level had no influence on DWG, the DFI, the F/G, the LDI and the DEI. It was observed effect of the treatments on the NI and the ENUG without modification in the carcass length, the back eye area (BEA), the thickness of bacon and thickness of bacon at 6.5 cm of the back dorsal lumbar line (ETP 2 ), as well the carcass yield, and the yields of lean meat and of ham. The animals that received the CP level of 16% showed the highest liver weights (absolute and relative). In the fourth trial were used 35 gilts maintained in a high environmental temperature (30.4oC) from 60.3 to 100.3kg distributed in treatments in an experimental design the same as the third trial. The CP level in the diet did not influence the DWG, the DFI, the F/G, the LDI and the DEI. However, it was observed effect of the treatments on the NI and the ENUG, without modification in the carcass lengths of back eye area, thickness of bacon, thickness of bacon at 6.5 cm of the back dorsal lumbar line, the carcass, lean meat, fat and ham yield. The animals that received diet with the highest level of CP showed highest intestine weights (absolute and relative). It was concluded that the levels of CP of the diets base on corn and soybean meal for crossbreed gilts from 30 to 60 kg and from 60 to 100 kg can be reduced respectively in four (19 for 15%) and five (17.3 for 12.1%) percentages unities without damage on performance, independently of the thermal environment as well as the diets are supplemented with limiting amino acids to attend the standard of ideal protein.

Orientadores: Nelci Fenalti Hoehr, Marcos N. Eberlin / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:28:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vellasco_AdrianaPaula_M.pdf: 26494237 bytes, checksum: e3ca52142658174c0e80e93ec61ac27d (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Dentre os aminotiois encontrados no plasma a cisteína, homocisteína e a glutationa constituem um sistema de defesa antioxidante extracelular. Em concentrações elevadas a homocisteína exerce ação oxidante, o que induz a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) sendo que a cisteína participa da autoxidação da homocisteína. Aumento dos níveis de cisteína pode ser um fator de risco cardiovascular bem como de lesões ateroscleróticas, indicando sua associação independente à doenças cardiovasculares. Contudo a associação de altos níveis de cisteína, homocisteína e LDL colesterol podem agir sinergicamente. Níveis alterados de cisteína também estão relacionados a inúmeras condições patológicas como mutações gênicas, doenças neurodegenerativas tais como as doenças de Alzheimer, Parkinson e Neuromotoras; AIDS e câncer. Assim, o desenvolvimento de novas metodologias com a finalidade de quantificar cisteína em sangue ou urina são úteis no diagnóstico de diversas doenças. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um método moderno e viável para quantificação de cisteína sérica. Para isso empregamos uma nova técnica: espectrometria de massas por introdução via membrana (MIMS), utilizando-se uma sonda de membrana DIMP (Direct Introduction Mass Spectrometry) operando no método T&R-MIMS (Trap and Release Membrane Introduction Mass Spectrometry). Analisando os espectros de massas obtidos durante as análises, a escolha do íon para o monitoramento da quantificação de cisterna foi o de m/z 220 que corresponde ao fragmento molecular por perda de um hidrogênio formando o íon '[M -H] POT +'. O íon de m/z 220 é o de maior intensidade (pico base) e presente em uma região do espectro menos suscetível a interferentes. Seu monitoramento por T&R-MIMS operando no modo SIM (monitoramento seletivo de íons) permite determinar a concentração de cisteína. Os resultados obtidos se mostraram satisfatórios: linearidade (r=0,998), repetibilidade com um desvio de 3% entre três medidas realizadas; limite de detecção de 2'mu'M e recuperação acima de 95%. Foram também realizados ensaios com amostras sanguíneas de quarenta doadores voluntários onde a concentração total de Cis em soro ficou entre 87 e 266 'mu' M/L com uma média '+ ou -' de 143, '+ ou -' 52,2 'mu'M/L / Abstract: The amino acid cysteine (Cys) and homocysteine (Hcy) takes part of a group of biological aminothiols in blood and others physiological fluids. These three thiols are involved in cellular homeostasis however altered levels of Cys and Hcy have been implicated in cardiovascular risk factor, and in a number of pathological conditions. A Mass Spectrometry method (DIMP/T&R-MIMS) for determination of cysteine (tCys) and homocysteine (tHcy) concentration directly from human blood after derivatization with ethyl chloroformate based on analyte preconcentration in a capillary silicone membrane and thermal desorbed to the gas phase using the heat radiation from the ionization filament using a new strategy for a trap & release and removable direct introduction membrane probe (DIMP), resulting in an technique with good sensitivity and stability. Cysteine and homocysteine determination was carried sample pumped continuously through the probe of the T&R-MIMS system for quantitation, during fifteen minutes (trapping step). After that occurs thermal desorption step needed for SVOC analysis in contact with the membrane, the volatile compounds permeates the membrane, and is ionized by electron impact (EI) and analyzed in the mass spectrometer. The method uses no chromatographic separation, is linear, reproducible, and displays limit of quantitation (2 'mu¿M) sufficiently below the threshold concentration of tCys and tHcy in plasma. Recovery experiments showed recoveries of 95% by Cys and 97% by Hcy. It also combines chemical, membrane, and mass spectrometric discrimination, and can be used to determine selected amino acids in human plasma simultaneously. After derivatization with ethyl chloroformate, many amino acids in aqueous solution are observed to be efficiently detected; hence T&R-MIMS is promising as a simple and sensitive technique for simultaneous quantitation of selected amino acids in plasma and urine, and in other aqueous matrices. Blood samples was analyzed by direct SIM monitoring and results showed with DIMP/T&R-MIMS potentiality in complex matrices / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes, Miguel Arcanjo Areas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:26:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Coelho_MariaCarolinaMeiraVillani_M.pdf: 5430027 bytes, checksum: 9ea3c2e6c856804dd54d8f541d538b2e (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O crescimento contínuo tumoral promove profundas alterações metabólicas no hospedeiro, levando-o a caquexia e ao balanço nitrogenado negativo. Vários estudos mostram que, tanto em pacientes como em animais experimentais, aminoácidos musculares podem ser muito solicitados e importantes para o metabolismo tumoral. A leucina é um importante combustível metabólico da musculatura esquelética. A metionina, aminoácido essencial, é utilizada no processo inicial de síntese protéica; e a proliferação de várias células malignas é dependente deste aminoácido. Nosso objetivo é verificar o efeito da deficiência de metionina na dieta sobre o crescimento tumoral, o efeito protetor para o hospedeiro alimentado com dieta suplementada com leucina e a somatória desses procedimentos e seus benefícios. De acordo com o tipo de dieta oferecida que correspondem normoprotéica (18% de proteína - C); hipoprotéica (6% de proteína - D); isenta de metionina (18% de proteína e 0% de L-metionina - M); alto teor de leucina (15% de proteína e 3% de L-leucina - L); alto teor de leucina e isenta de metionina (15% de proteína, 3% de L-leucina e 0% de L-metionina - LM) e implante ou não do carcinossarcoma de Walker 256, os ratos foram distribuídos em grupos (número mínimo de 10 animais), a seguir: C-controle; CW-controle com tumor; D-desnutrido; DW-desnutrido com tumor; L excesso de leucina; LW-excesso de leucina com tumor; M-deficiência de metionina; MW-deficiência de metionina com tumor; LM-excesso de leucina e deficiência de metionina; LMW- excesso de leucina e deficiência de metionina com tumor. Após 22 dias, foram avaliadas as alterações bioquímicas, ponderais e alimentares, em animais portadores do carcinossarcoma de Walker 256. Observamos, no grupo CW, todas as alterações características do hospedeiro, como redução do ganho de peso, redução da eficiência alimentar, e balanço nitrogenado negativo. Nos dados da composição corpórea química, apresentaram redução: do peso carcaça, da gordura corporal e da proteína de carcaça; diminuição do teor de proteína sérica e do peso do fígado. No grupo restrição protéica com tumor (DW), observou-se balanço nitrogenado negativo, redução da porcentagem de gordura corpórea e do nitrogênio colágeno e aumento da absorção intestinal de metionina e glicose. Outras variações ocorreram decorrentes da restrição protéica, e o peso tumoral foi reduzido significativamente. A suplementação de leucina (3%) parece melhorar alguns parâmetros corporais dos ratos portadores de tumor (L W) em relação aos grupos controle (CW), como tendência ao aumento de massa corpórea magra, da proteína de carcaça, do peso relativo muscular e do teor de proteína sérica, porém o crescimento tumoral mostrou-se semelhante ao grupo do CW. A deficiência de metionina interferiu em alguns parâmetros corporais de ratos sem tumor (M), reduzindo o ganho de peso corpóreo por dia, porcentagem de ganho de peso, balanço nitrogenado, porcentagem de gordura e proteína sérica; nos grupos portadores de tumor (MW), a deficiência de metionina parece intensificar os prejuízos causados pela presença do tumor, relacionados ao peso da carcaça, porcentagem de gordura e demonstrando tendência à redução da proteína de carcaça, da massa corpórea magra e do teor de proteína sérica; contudo, demonstrou tendência à redução do peso tumoral. A associação entre o excesso de leucina e deficiência de metionina causou, nos animais do grupo LM, redução do ganho de peso corpóreo, do peso de carcaça, da massa corpórea magra e da proteína de carcaça e, nos ratos com tumor LMW, além dos prejuízos citados anteriormente, houve redução significativa do peso relativo do músculo. Por outro lado, em ambos os grupos LM e LMW, observou-se aumento do nitrogênio colágeno, e o peso tumoral reduziu significativamente neste grupo. Deste modo, verificamos que a deficiência de metionina não se mostrou eficiente na redução efetiva do crescimento tumoral e a somatória dessas manipulações não correspondeu às expectativas, sendo eficaz somente na redução do peso tumoral, porém não oferecendo a esperada proteção à carcaça do hospedeiro. Assim, concluímos que apenas a suplementação de leucina apresentou discreta proteção sobre a carcaça do hospedeiro / Abstract: The tumor growth promotes great host metabolic changes, which induces cachexia, anorexia, and negative nitrogen balance. Studies have been shown that in cancer patients and animals the muscle amino acids can be wasted to the tumor metabolism. Leucine is the most important oxidative amino acid of skeletal muscle. Methionine, an essential amino acid, is utilized in protein synthesis, and the neoplastic cells proliferation depends on this amino acids. Our aim is to investigate the effects of methionine deficiency on tumor growth, the protector effect on the host using leucine supplemented diet and the added effect of these two proceeding and its benefits. Wistar rats were distributed in groups (n=10), according the diet offered which corresponded to normoprotein (18% protein - C), hypoprotein (6% protein - D), without methionine (18% protein + 0% L-methionine - M), leucine excess level (15% protein + 3% L-leucine - L), leucine excess without methionine (15% protein + 3% L-leucine + 0% L methionine - LM); implanted or not with Walker 256 carcinoma. The groups were: C - control rats; CW tumor bearing rats; O - undemourished rats; OW tumor bearing undemourished rats; M - rats feeding methionine deficient diet; MW - tumor bearing rats feeding methionine deficient diet; L - rats feeding leucine supplemented diet; L W - tumor bearing rats feeding leucine supplemented diet; LM - rats feeding leucine supplemented and methionine deficient diet; LMW - tumor bearing rats feeding leucine supplemented and methionine deficient diet. After 22 days of experiment, all the animals were sacrificed and biochemical, body and nutritional analysis were made. We observed body changes in CW group such as reduction in body weight gain, food efficiency, and negative nitrogen balance. Body composition analysis showed reduction in carcass weight, body tat and protein; in CW group serum protein and liver weight were reduced. DW group showed negative nitrogen balance, reduction on body fat and collagen nitrogen and high methionine and glucose intestinal absorption rate; tumor weight was reduced in DW group. The leucine supplemented diet tended to improve some body parameters in LW group compared to CW group, such as slight raise of lean body mass, carcass protein, muscle weight and serum proteins, in spite of having similar tumor weight as CW group. The methionine deficiency induced body changes in rats, reducing body weight gain, percentage of body weight, negative nitrogen balance, reduction on body tat percentage and serum protein; in the tumor bearing groups MW, the methionine deficiency seamed to intensity the changes induced by the tumor, decrease in carcass weight, body tat percentage and slightly reduction on carcass protein, lean body mass and serum protein, therefore this group MW showed a decrease tendency in tumor weight. The association between leucine excess and methionine deficient induced a reduction on body weight gain, and carcass weight, decrease in lean body mass and carcass protein, and in tumor bearing groups there was also high decrease on muscle weight. On the other hand, both LM and LMW groups presented an increase on collagen nitrogen and a significant tumor weight reduction. On the bases of the results obtained, we verified that the methionine deficiency could not be efficient to reduce the tumor growth, and the association between the two diets manipulation (leucine excess plus methionine deficiency) did not correspond to our proposes although this association induced tumor weight reduction but did not protect the host wasting. In conclusion, only the leucine supplemented diet showed tendency to protect the host carcass / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

La cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) es sin dudas, una técnica madura, ampliamente usada en laboratorios analíticos, especialmente en el modo de fase inversa. Existe, no obstante, una demanda creciente de métodos rápidos de separación y cuantificación de analitos mediante HPLC, especialmente en laboratorios que deben implementar rutinas de análisis. La disminución en los tiempos de análisis puede lograrse usando columnas más cortas y trabajando a altos caudales, a expensas de la capacidad resolutiva del sistema. Para mantener una capacidad de resolución dada se reduce el tamaño de las partículas de relleno, lo cual limita la longitud de la columna y la velocidad lineal que es posible usar para mantener una caída de presión soportable por un sistema de bomba típico de un equipo HPLC. Estas limitaciones han dado lugar a numerosas investigaciones que permitieron mejoras instrumentales y el desarrollo de nuevos materiales. Entre las mejoras instrumentales se destaca la aparición de una nueva generación de equipos que poseen bombas capaces de proveer fase móvil a caudales razonables y a presiones de más de 1000 atm. Estos instrumentos, que se conocen como U-HPLC o UPLC por “ultra-high pressure liquid chromatography” poseen un costo sumamente elevado, convirtiéndose en poco accesibles en muchos laboratorios. Los estudios y desarrollos de diferentes materiales han dado lugar a las columnas monolíticas en las que una sola pieza altamente porosa (monolito) de material silíceo o polimérico constituye la matriz de la fase estacionaria en reemplazo de las típicas partículas porosas empleadas para desarrollar fases estacionarias. La estructura de este monolito posee una porosidad superior al 80% (en comparación al 60-65% de porosidad total de las columnas basadas en partículas porosas), lo que implica mayores permeabilidades del lecho y, en consecuencia, que se pueda aumentar la velocidad de fase móvil sin que se produzcan grandes caídas de presión. Por otra parte, su estructura macroporosa permite el flujo convectivo de solvente, por lo que el transporte de material hasta la superficie estacionaria resulta más eficiente que el mecanismo difusivo, produciendo menores resistencias a la transferencia de material, esto es, la pérdida de eficiencia a altos caudales no es tan significativa. Otro tipo de material particulado recientemente desarrollado consiste en esferas de sílice compacta (no porosa) de menos de 2 micras cubiertas de una superficie porosa de un espesor de aproximadamente 0,5 micras. Las partículas poseen un diámetro total de algo más de 2,5 micrones. Este material constituye el relleno de la columna cromatográfica, teniendo la ventaja de que la resistencia que ejerce a la aplicación de caudales normales es mucho menor que la de partículas menores a 2 micras. Por otra parte, el hecho de que el intercambio entre las fases ocurra sólo en la “cáscara” porosa, disminuye sensiblemente la resistencia a la transferencia de materia, por lo que las eficiencias serían similares a las de partículas de tamaños inferiores a 2 micrones. Una estrategia diferente en relación con la posibilidad de reducir tiempos de análisis empleando instrumentos convencionales consiste en emplear partículas de sílice de diámetro reducido y simultáneamente aumentar la temperatura de la columna. La consecuencia hidrodinámica es una disminución en la viscosidad del eluyente, con la consecuente disminución en la caída de presión desarrollada, y el aumento en los coeficientes de difusión de los analitos, lo que implica mejoras en la transferencia de materia en fase móvil. Esta estrategia ha sido estudiada en relación con columnas rellenas con material particulado y también con columnas monolíticas a base de sílice. Un objetivo de este trabajo ha sido el de avanzar hacia el desarrollo de metodologías cromatográficas que tiendan a la miniaturización, esto es, métodos de cromatografía de líquidos en los que se reduzcan significativamente los volúmenes de solventes y de muestra a inyectar, y al aumento de la velocidad de análisis, esto es, a reducir tiempos de análisis por muestra, pero empleando instrumentos de cromatografía convencionales con mínimas modificaciones. Entendemos que la disponibilidad de instrumentos de UPLC para lograr estos objetivos no es frecuente en la mayoría de los laboratorios, por lo que es nuestro interés la búsqueda de alternativas más accesibles al desarrollo de métodos rápidos y en escala de micro-LC. En relación con la aplicación de estas metodologías a muestras reales se estudió la separación y análisis de aminoácidos derivatizados con cloruro de FMOC (cloroformiato de 9-fluorenilmetilo), con el fin de tener un método robusto y de bajo costo de análisis de los aminoácidos citrulina, arginina, prolina, glutamina, ácido glutámico y ornitina en fluido plasmático. La posible transferencia del método a laboratorios de rutina implica que los métodos a desarrollar sean robustos y generales, esto es, que el derivado pueda detectarse por uv-visible y por fluorescencia, que el proceso pueda automatizarse, y que se empleen reactivos fácilmente manipulables. Importancia de medir la concentración de citrulina en plasma. En el intestino delgado se produce la absorción de nutrientes y las transformaciones metabólicas en las que el epitelio intestinal cumple un papel fundamental. Entre ellas ocurre la transformación de glutamina en citrulina, la cual es adsorbida hacia el plasma. Los niveles de citrulina circulantes dependen principalmente de la capacidad del intestino en producirla a partir de sus precursores, por lo que se ha propuesto emplear a esta sustancia como un indicador de la funcionalidad enterocitaria. Distintas condiciones que alteren la fisiología de la mucosa intestinal serían potencialmente reflejadas en alteraciones en los niveles de citrulina plasmática. Se ha propuesto en la literatura evaluar los niveles de citrulina plasmática como marcador específico de disfunción intestinal (al igual que se usa creatinina como marcador de disfunción renal o las enzimas TGO/TGP para anomalías a nivel hepático). Sin embargo, hasta el momento no existe acuerdo al respecto dado los resultados informados del dosaje de citrulina en distintas patologías en las que se compromete el tejido intestinal. La determinación de citrulina en plasma desproteinizado se puede realizar por CEC, CE, mediante HPLC, empleando columnas de fase inversa y derivatización pre- o post-columna del grupo amino para su detección. Muchos de estos métodos, poseen procedimientos experimentales complejos. Como reactivos derivatizantes se pueden emplear diversos compuestos, siendo el o-ftaldehído en combinación con 2-mercaptoetanol el descripto con mayor frecuencia. Si bien esta reacción de derivatización es rápida, los derivados formados no son estables, lo que convierte al método en poco robusto. En este trabajo se propuso estudiar la derivatización con FMOC-Cl. El uso de este agente derivatizante permite llevar a cabo reacciones rápidas de condensación con el grupo amino para dar el correspondiente carbamato, a temperatura ambiente; y los derivados obtenidos son estables. Por fluorescencia pueden detectarse niveles de analito de fmol y también, aunque con mayores límites de detección, pueden cuantificarse por absorción UV.