Submitted by Suzana Dias (suzana.dias@famerp.br) on 2018-10-29T17:50:59Z No. of bitstreams: 1 RubensdePaulaJunior_tese.pdf: 3756902 bytes, checksum: 62626523c38921fce4f785793a29be0e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-29T17:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RubensdePaulaJunior_tese.pdf: 3756902 bytes, checksum: 62626523c38921fce4f785793a29be0e (MD5) Previous issue date: 2018-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Breast cancer is the most prevalent neoplasm in women and the subtype Triple Negative (TNBC) is one of the most serious because of its aggressive metabolic phenotype. Hepatocellular carcinoma (HCC) is the most common primary neoplasm in liver tissue and, together with breast neoplasms, leads to the causes of death associated with cancer worldwide. It is known that tumor behavior is influenced by the host local intrinsic inflammation in the tumor microenvironment, as well as, by the metabolism reprogramming. Immunological cells in the tumor microenvironment are modulate by cytokines and transcription factors such as NF-kB. In addition to inflammation, host metabolism is under the diurnal control, which can control circulating levels of amino acids thus making it an important target for cancer analysis. OBJECTIVES: To evaluate the effect of melatonin on the transcript profile, on the modulation of NF-kB in breast and hepatic cancer models as well as on the metabolic profile in plasma during a diurnal variation in breast cancer. MATERIALS AND METHODS: In vitro was used HepG2 and MDA-MB-231. In vivo the tumor was developed by implantation of MDA-MB-231 tumor cells in nude athymic female mice. Plasma samples were collected under strict conditions at eight times during a full day and the tumors were removed for gene expression, RNA sequencing and Mass Spectrometry. RESULTS: It was observed a reduction in tumor volume and the expression of NF-kB in the animals with breast cancer and treated with melatonin. On the other hand, melatonin increased the expression of NF-kB in hepatocarcinoma cells. In the mammary tumor, microenvironment melatonin increased the expression of the Tnfaip8l2 and Il1f6 genes, which are important in the local immune response. In plasma, among the 20 amino acids detected, 10 had similar behavior during the day. At most times of the day, animals with tumor had reduced plasma levels of these amino acids. In addition, there was an inversion in the profile of these amino acids between the groups observed in the first hours of the morning. CONCLUSIONS: The effect of melatonin on NF-kB in breast cancer appears to be better defined, but in liver cancer its role remains controversial. In the same way the anti-tumor action of melatonin was proven by the high expression of the Tnfaip8l2 and Il1f6 genes in the tumor microenvironment. In the plasma samples, the changes in metabolites are a reflex of the altered metabolism, determined by mammary tumor cells in the mice background. While this inversion of the amino acid profile in animals suggests that one cyclic event of host metabolism at these times appears to influence circulating amino acid levels. Thus, our results have pointed out that during carcinogenesis there is a strong association between the immune response and the chronobiology of the host that requires further investigations. / O câncer de mama é a neoplasia mais prevalente em mulheres e o subtipo Triplo Negativo (TNBC) é considerado o mais grave por possuir um fenótipo metabólico agressivo. O Carcinoma Hepatocelular (HCC) é a neoplasia primária mais frequente no tecido hepático e junto com as neoplasias mamárias lidera as causas de óbito associadas ao câncer no mundo. Sabe-se que o comportamento tumoral é influenciado pela inflamação local no microambiente intrínseco do hospedeiro, bem como pela reprogramação do metabolismo. Células imunológicas no microambiente tumoral são moduladas por citocinas e fatores de transcrição como o NF-kB. Além da inflamação, o metabolismo do hospedeiro está sobre o controle cíclico diurno, o qual pode controlar os níveis circulantes de aminoácidos, tornando assim um alvo importante para análises do câncer. OBJETIVOS: Avaliar o efeito da melatonina no perfil de transcritos e na modulação do NF-kB em modelos de câncer de mama e hepático, e também o perfil metabólico no plasma durante uma variação diurna em modelos de câncer de mama. MATERIAL E MÉTODOS: In vitro, foram utilizadas células HepG2 e MDA-MB-231. In vivo, o tumor foi desenvolvido pela implantação de células tumorais MDA-MB-231 em camundongos fêmeas nude atímicos. Amostras de plasma foram coletadas sob rigorosas condições em oito tempos durante um dia completo e os tumores foram retirados para análises de expressão gênica, sequenciamento de RNA e Espectrometria de Massas. RESULTADOS: Foi observada redução do volume tumoral e também da expressão de NF-kB nos animais com câncer de mama e tratados com melatonina; por outro lado em células de hepatocarcinoma, a melatonina aumentou a expressão do NF-kB. No microambiente tumoral mamário, a melatonina aumentou a expressão dos genes Tnfaip8l2 and Il1f6, que são importantes na resposta imune local. No plasma, dentre os 20 aminoácidos detectados, 10 tiveram comportamento similar durante o dia. Na maioria dos horários do dia, os animais com tumor apresentaram níveis plasmáticos reduzidos desses aminoácidos. Além disso, houve uma inversão no perfil desses aminoácidos entre os grupos, observado nos primeiros horários da manhã. CONCLUSÕES: O efeito da melatonina sobre o NF-kB no câncer de mama parece estar melhor definido, porém o seu papel permanece controverso no câncer hepático. Da mesma forma a ação anti-tumoral desse hormônio foi comprovada pela alta expressão dos genes Tnfaip8l2 e Il1f6 no microambiente tumoral. No plasma, as alterações dos metabólitos são um reflexo do metabolismo alterado, determinado pelas células tumorais mamárias na matriz dos camundongos. Enquanto que, essa inversão do perfil dos aminoácidos sugere que um evento cíclico do metabolismo do hospedeiro nesses horários aparece influenciando os níveis de aminoácidos circulantes. Desse modo, os nossos resultados apontam que durante a carcinogênese existe uma forte associação entre a resposta imune e a cronobiologia do hospedeiro que exige futuras investigações.

A adubação nitrogenada e sua implicação no metabolismo do cafeeiro ainda não são bem conhecidas nas condições de campo, em cafeicultura altamente tecnificada, com temperatura média de outono-inverno superior a 22 ºC e maior quantidade de horas-luz. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar a atividade das enzimas redutase do nitrato (RN), glutamina sintetase (GS) e urease em função da dose de nitrogênio (sem N, 200, 400, 600 e 800 kg ha-1). Avaliou-se também a influência das doses de N (uréia) nas concentrações de N-total, nitrato, amônio, clorofila e carotenóides presentes nas folhas; as flutuações de macro e micronutrientes; bem como a correlação entre a produtividade e doses de N. Objetivou-se também identificar a época do pico da atividade da RN. Os experimentos foram realizados no Oeste baiano e em Piracicaba, SP. As avaliações foram realizadas nas fases fenológicas: vegetação, antese, fruto chumbinho, granação e maturação. A maior atividade da RN ocorreu com o fornecimento de 800 kg ha-1 de N, sem variação nas demais doses, bem como não influenciou a atividade da GS e urease. As concentrações de nitrato e amônio não aumentaram com as doses de N, mas a concentração de aminoácidos foi crescente com a dose do nutriente. A maior atividade da RN verificou-se na fase de vegetação e granação dos frutos, a qual foi superior às 12:00 h, enquanto as atividades da GS e urease foram superiores na fase de granação dos frutos. A maior concentração de nitrato se deu entre a fase de fruto chumbinho e início da granação e do amônio no final da granação. O pico da atividade da RN aconteceu aos 25 dias após a adubação nitrogenada. O uso de altas doses de N não prejudicou a concentração de macro e micronutrientes foliar. Finalmente, a máxima produtividade do cafeeiro foi obtida com a aplicação de 400 kg ha-1 de N. / The nitrogen fertilization and its implication in the nitrogen metabolism of coffee plants are not well known in high technology production under field conditions with autumn-winter average temperatures above 22 º C and a larger photoperiod. The objective of this work was to evaluate the nitrate reductase, glutamine synthetase and urease activity due to nitrogen fertilization rates (without N, 200, 400, 600 e 800 kg ha-1). In the present work was evaluated also the influence of nitrogen rates on total nitrogen, nitrate, ammonium, chlorophylls and carotenoids concentration in the leaves, the variation of macro and micronutrients as well as the correlationship between coffee yield and nitrogen fertilization rates. Moreover, the goal of this study was to identify the period of peak activity of nitrate reductase. The experiment was carried out at western of Bahia State and Piracicaba, State of Sao Paulo, Brazil. The periods of evaluations were plant growth, anthesis, pin head fruits, filling and maturation fruits stage development. The highest nitrate reductase activity occurred with 800 kg ha-1 N supply and no changes on this enzyme were observed regarding other rates. Therefore, the nitrogen rates did not affect the glutamine synthetase and urease activity. The nitrate and ammonium concentration did not increase with nitrogen rates; however, the aminoacids concentration increased due to nitrogen fertilization rates. The highest activity of nitrate reductase was observed at 12:00h during plant growth and filling fruits stage development. On the other hand, the higher activity of glutamine synthetase and urease were during filling fruits stage. The highest nitrate concentration was detected during between pin head and beginning of filling fruits stage, and the highest ammonium concentration was during end of filling fruits stage development. The peak activity of nitrate reductase was 25 days after nitrogen fertilization. The high nitrogen rates did not affect the macro and micronutrients concentration in the leaves. The greater coffee yield was provided with 400kg ha-1 of nitrogen supply.

Neste trabalho estudamos as propriedades ópticas não lineares de aminoácidos utilizando pulsos de laser com duração de femtossegundos. O índice de refração não linear (n2) da L-alanina, L-prolina, L-serina, L-treonina e L-arginina em solução aquosa foram determinados. Foi também estudada a influência do pH na magnitude de n2 dos aminoácidos em solução. Paralelamente, determinamos a dispersão de n2 em cristais de L-treonina nos três eixos principais, x, y e z. Os aminoácidos têm despertado grande interesse devido as suas boas propriedades ópticas de segunda ordem. Todavia, suas propriedades ópticas de terceira ordem ainda não haviam sido estabelecidas. Além disso, implementamos a técnica de espalhamento hiper-Rayleigh para determinar a primeira hiperpolarizabilidade (P) de moléculas orgânicas, onde uma mudança foi introduzida para permitir medidas mais rápidas e com melhor precisão. Foram encontrados os valores de P de algumas porfirinas e corantes orgânicos. / In this work we have studied nonlinear optical properties of amino acids using femtosecond laser pulses. The nonlinear index of refraction (nz) of L-alanine, L-proline, L-serine, L-threonine and L-arginine in aqueous solution have been determined. Also, the influence of pH in the magnitude of nz of amino acids in solution has been studied. Besides, we have determined the n;, dispersion in the three main axis, x, y and z, in L-threonine crystals. The amino acids have attracted a great deal of attention due to their good second-order optical properties. However, their third-order optical properties had not been established yet. Furthermore, we have implemented the hyper-Rayleigh scattering technique to determine the first hyperpolarizability (P) of organic molecules, leading to fast and more precise measurements. It was found the P value of some porphyrins and organic dyes.

Foi isolada uma sub-fração de microsomas, constituída por membranas do retículo endoplasmático, através do tratamento do sobrenadante pós-mitocondrial por detergente. Em testes de microscopia eletrônica e ultracentrifugação analítica, esta preparação de membranas apresentou-se livre de contaminação por outras organelas celulares. Quando incubada em condições adequadas, a fração de membranas incorpora vários aminoácidos em um produto insolúvel em TCA a quente. O tratamento do material incorporado com enzimas proteolíticas acarreta a perda de cerca de 60% da radioatividade derivada de aminoácidos marcados. Não há liberação de radioatividade por tratamento com RNase, DNase, lecitinase ou α-amilase. A remoção de aminoácidos terminais não implica em diminuição considerável de radioatividade. As melhores condições de pH e concentração de Mg para o processo são próximas às fisiológicas. O requerimento de ATP e enzima pH 5 no meio de incubação não é absoluto, mas sua adição estimula o processo. Há indicações de que a independência de fornecimento externo de GTP para o processo resulta de um conteúdo endógeno da partícula. o processo de incorporação é inibido em parte por RNase, NaF, puromicina e anisomicina. / Not available

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-22T19:13:45Z No. of bitstreams: 1 SandraGasparini.pdf: 349340 bytes, checksum: 0464691b140faa8019f9a16a1192d667 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-22T19:13:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SandraGasparini.pdf: 349340 bytes, checksum: 0464691b140faa8019f9a16a1192d667 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Two experiments to determine the metabolizable energy in different ages and true digestibility of amino acids of rice bran (RB), broiler slow growth were performed. In the first experiment, 352 birds were distributed in a completely randomized design with three treatments and six replicates of eight or six birds per experimental unit as experimental age. The RB replaced 40% references diets formulated for three age groups (1-30, 31-60 and 61-90 days). The method used was the total collection and 1.0% iron oxide was used as a fecal marker. In the second experiment, 168 birds at 41 days of age fed a diet free of protein (DFP) and formulated with 55% of RB as the sole source of dietary crude protein and amino acids were used. All birds were killed by cervical dislocation and open the abdominal cavity to collect the contents at the terminal ileum portion. The samples were sent for amino acid analysis using HPLC. Was used 0.5% of chromic oxide as a marker for determining the digestibility of amino acids of the RB and the endogenous excretion of amino acids. The mineral content of the RB, with a value of 3.94%, below those content presented in the literature. The apparent metabolizable energy, true and true corrected for nitrogen balance, found for the RB in birds 70-79 days of age (2,801, 3,002 and 2,394 kcal / kg, respectively), statistically different (P <0.05) from values obtained with birds 40-49 days (2,415, 2,566 and 2,427 kcal / kg, respectively) and birds 10-19 days of age (2,131, 2,266 and 2,214 kcal / kg, respectively). The coefficients of apparent metabolism of dry matter (CMADM), with values of 65.80% (70 to 79 days), 59.20% (40 to 49 days) and 53.10% (10 to 19 days of age), statistically different (P <0.05). The coefficient of real gross energy metabolization corrected for nitrogen balance (CMVGEn), found in birds 70-79 days (56.40%), statistically different (P <0.05) of the value found in poultry 10 to 19 days of age (49.10%). Thus, in the formulation of rations, should be considered the differences in energy values of RB for young and adult birds, because the digestibility of dry matter and gross energy, increases with age. The average true digestibility of amino acids of the RB was 79.5%, as fed, where the methionine had the lowest coefficient of true digestibility, with a value of 78.12% and the highest arginine, with a value of 82.10 %. The true digestible values were 0.51% for lysine, 0.18% for methionine, 0.41% for methionine + cystine, 0.39% for threonine and 0.52% for valine. / Foram realizados dois experimentos com o objetivo de determinar a energia metabolizável em diferentes idades e a digestibilidade verdadeira dos aminoácidos do farelo de arroz integral (FAI), para frangos de corte de crescimento lento. No primeiro experimento, 352 aves foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado com três tratamentos e seis repetições de oito ou seis aves por unidade experimental, conforme idade experimental. O FAI substituiu em 40% as dietas referências, formuladas para três idades (1 a 30, 31 a 60 e 61 a 90 dias). O método utilizado foi o de coleta total de excretas e 1,0% de óxido de ferro foi utilizado como marcador fecal. No segundo experimento, foram utilizadas 168 aves com 41 dias de idade, alimentadas com uma dieta isenta de proteína (DIP) e uma dieta formulada com 55% de FAI como única fonte de proteína bruta e aminoácidos. Todas as aves foram abatidas por deslocamento cervical e abertas na cavidade abdominal para coleta do conteúdo na porção íleo terminal. As amostras foram enviadas para análise de aminoácidos utilizando o HPLC. Foi utilizado 0,5% de óxido de cromo como indicador para determinação dos coeficientes de digestibilidade dos aminoácidos do FAI e da excreção endógena de aminoácidos. O conteúdo mineral do FAI, com valor de 3,94%, apresentou teor abaixo daqueles descritos na literatura. Os valores de energia metabolizável aparente, verdadeira e verdadeira corrigida para o balanço de nitrogênio, encontrados para o FAI em aves de 70 a 79 dias de idade (2.801, 3.002 e 2,394 kcal/kg, respectivamente), diferiram estatisticamente (P<0,05) dos valores obtidos com aves de 40 a 49 dias (2.415, 2.566 e 2.427 kcal/kg, respectivamente) e aves de 10 a 19 dias de idade (2.131, 2.266 e 2.214 kcal/kg, respectivamente). Os coeficientes de metabolização aparente da matéria seca (CMAMS), com valores de 65,80% (70 a 79 dias), 59,20% (40 a 49 dias) e 53,10% (10 a 19 dias de idade), diferiram estatisticamente (P<0,05). O valor do coeficiente de metabolização verdadeiro da energia bruta corrigido para o balanço de nitrogênio (CMVEBn), encontrado em aves de 70 a 79 dias (56,40%), diferiu estatisticamente (P<0,05) do valor encontrado em aves de 10 a 19 dias de idade (49,10%). Assim, nas formulações de rações, devem ser consideradas as diferenças nos valores energéticos do FAI para aves jovens e adultas, pois a digestibilidade da matéria seca e da energia bruta, aumenta com a idade. O valor médio de digestibilidade verdadeira dos aminoácidos do FAI foi de 79,5%, na matéria natural, onde a metionina apresentou o menor coeficiente de digestibilidade verdadeira, com valor de 78,12% e a arginina o maior, com valor de 82,10%. Os valores digestíveis verdadeiros foram de 0,51% para lisina, 0,18% para metionina, 0,41% para metionina+cistina, 0,39% para treonina e 0,52% para valina.

As Stanniocalcinas (STC1 e STC2) são hormônios glicoproteicos originalmente encontrados em peixes teleósteos. Em mamíferos, esses hormônios são expressos em uma variedade de tecidos e estão envolvidos em processos como o transporte de cálcio e fosfato pelos rins e intestino, a carcinogênese, a reprodução e o crescimento. Recentemente, foram encontrados efeitos da STC1 e da STC2 no metabolismo intermediário. Sítios de ligação para a STC1 já foram identificados na membrana mitocondrial e resultados preliminares do nosso laboratório demonstraram que a STC1 possui um efeito inibitório sobre a gliconeogênese renal e tanto a STC1 quanto a STC2 diminuem a incorporação de 14C-glicose em 14CO2 no fígado e no músculo gastrocnêmio, respectivamente, de ratos. No entanto, o papel desses hormônios no metabolismo de aminoácidos permanece desconhecido. No presente trabalho, as ações da STC1 e da STC2 foram avaliadas no fígado e no músculo gastrocnêmio excisados de ratos machos (Rattus norvegicus, n=48 animais) de 300±50g, alimentados ad libitum. Os resultados obtidos mostram que a STC1, no fígado, diminuiu a captação do ácido 2-(metilamino)isobutírico, aumentou a atividade da bomba Na+/K+-ATPase, diminuiu a atividade da enzima malato desidrogenase mitocondrial e estimulou a síntese de glicogênio a partir da alanina. A STC2, no fígado, diminuiu a atividade da enzima malato desidrogenase mitocondrial, estimulou a síntese de proteínas a partir de leucina, e estimulou a síntese de glicogênio a partir de alanina. Já, no músculo, a STC2 estimulou a oxidação de leucina e a incorporação desse aminoácido em proteínas. Esses resultados confirmam a existência de ações das STC1 e STC2 no metabolismo de aminoácidos e sugerem, com exceção da ação da STC2 sobre a enzima malato desidrogenase, um papel anabólico para a STC2 em ambos os tecidos. A mesma afirmação não pode ser feita para a STC1, que apresentou efeitos antagônicos no tecido hepático. Por fim, o trabalho mostrou que as ações da STC1 e da STC2 sobre as vias metabólicas dos aminoácidos ocorrem com a utilização de doses muito baixas desses hormônios. / Stanniocalcins (STC) are glycoprotein hormones that were first discovered in teleostean fishes. In mammals, these hormones are expressed in a variety of tissues. Besides its role on the calcium and phosphate transport by the kidneys and intestine, they are involved in processes such as carcinogenesis, reproduction and growth. Recently it has been shown that STC1 and STC2 affect the control of intermediary metabolism. Binding sites for STC1 have been already identified in the mitochondrial membrane. Preliminary results of our laboratory showed that STC1 has an inhibitory effect on renal gluconeogenesis in rats and both STC1 and STC2 decrease the 14C-glicose incorporation into 14CO2 in the liver and the gastrocnemius muscle, respectively. Despite these evidences that STC1 and STC2 have a role in the control of glucose and lipids metabolism, the function of these hormones in amino acids metabolism remains unknown. In the present study, the STC1 and STC2 actions were evaluated in livers and gastrocnemius muscles excised from male rats (Rattus norvegicus, n=48 animals). The rats weighted 300±50g and were fed ad libitum. The results show that STC1 decreased 2-(metilamine)isobutyric acid uptake, increased Na+/K+-ATPase activity, decreased mitochondrial malate dehydrogenase activity and stimulated glycogen synthesis from alanine. All actions of STC1 were shown in the hepatic tissue and this hormone did not affect any parameter in muscular tissue. In the liver, STC2, decreased the mitochondrial malate dehydrogenase activity, stimulated protein synthesis from leucine and stimulated glycogen synthesis from alanine. In muscle, STC2 stimulated leucine incorporation into CO2 and proteins. These results confirm the regulatory role of STC1 and STC2 on amino acid metabolism in muscle and liver of rats. They suggest, with exception to the STC2 action into the hepatic malate dehydrogenase, an anabolic role for STC2 in both tissues. However this cannot be stated for STC1, which show antagonistic effects in the hepatic tissue. Lastly, another important finding of this study is that STC1 and STC2 actions on amino acid metabolism occur with low hormone concentrations.

Submitted by Hellen Luz (hellencrisluz@gmail.com) on 2017-07-19T14:59:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProspeccaoAminoacidosTipo.pdf: 1575316 bytes, checksum: 2121cfc071ab9524757f12dd88cb8efc (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-07-21T14:50:35Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProspeccaoAminoacidosTipo.pdf: 1575316 bytes, checksum: 2121cfc071ab9524757f12dd88cb8efc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T14:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_ProspeccaoAminoacidosTipo.pdf: 1575316 bytes, checksum: 2121cfc071ab9524757f12dd88cb8efc (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aminoácidos tipo micosporinas (MAAs) são compostos de baixa massa molecular solúveis em água, cuja biossíntese, pensava-se ocorrer pela via do ácido chiquímico em bactérias, fitoplâncton e macroalgas. Recentemente, evidências mostram sua biossíntese pela via das pentoses em uma cianobactéria. Devido seu alto coeficiente de extinção molar na região do UV, proporcionam proteção contra os efeitos deletérios da radiação ultravioleta tendo potencial para a utilização em protetores solares. Em trabalhos anteriores foi descrito um cluster biossintético para chinorina que consistia nas enzimas Dehidroquinato sintase, presente na via do chiquimato, O-metiltransferase, uma enzima assimiladora de ATP e um homólogo de NRPS. Foi verificado ainda que a enzima 2-epi-5-epi-valiolona sintase, enzima que interligaria a via das pentoses, poderia formar o intermediário cíclico 4-desoxigadusol, precursor dos MAAs. Neste trabalho foi feita uma abordagem genômica para a busca destes genes, de modo a investigar o potencial de produção de MAAs nas cianobactérias da Coleção Amazônia de Cianobactérias e Microalgas, CACIAM 14, CACIAM 53, CACIAM 54 e CACIAM 57, bem como uma análise por cromatografia líquida capilar acoplada a espectrometria de massas com fonte de ionização de Electrospray dos metabólitos em CACIAM 14. Os genes da Dehidroquinato sintase e da O-metiltransferase foram encontrados em todas as linhagens estudadas. Os genes da via das pentoses Ribulose-fosfato-3-epimerase e Transcetolase foram detectados nas linhagens CACIAM 14, CACIAM 53 e CACIAM 57, o que sugere que nestas linhagens os MAAs podem ser produzidos por ambas as vias enquanto que na linhagem CACIAM 54 que os MAAs podem ser produzidos apenas pela via do chiquimato. Na linhagem CACIAM 14, foram detectados os fragmentos de relação massa/carga 186 e 197 no mesmo tempo de retenção de um íon precursor de m/z 333, valor esse sugestivo da presença de chinorina. Dessa forma, as linhagens CACIAM 53, 54 e 57 são potencialmente produtoras de MAAs por possuírem os genes biossintéticos, e a linhagem CACIAM 14 é produtora de chinorina. / Mycosporine-like amino acids (MAAs) are low molecular weight water soluble compounds wuich biosynthesis was thought to occur via shikimate pathway in bacteria, phytoplankton and macroalgae. Recently evidences show its biosynthesis via the pentose pathway in a cyanobacterium. Due to its high extinction molar coefficient in UV region, they provide protection against the damaging effects of UV radiation and have potential for use in sunscreens. In previous works it was described a biosynthetic cluster for shinorine with the enzymes dehydroquinate synthase, present in the shikimate pathway, O-methyltransferase, and ATP-grasp and NRPS-like enzymes. It was observed that the enzyme 2-epi-5-epi-valiolone synthase, which link the pentose pathway with MAAs production would lead to formation of 4-deoxygadusol, precursor of MAAs. In this work a genomics approach was carried out so find these genes so that MAAs production potential in Amazonian cyanobacteria of the Coleção Amazônica de Cianobactérias e Microalgas, CACIAM 14, CACIAM 53, CACIAM 54 and CACIAM 57 strains was assessed, as well as an analysis through capillary chromatography coupled to electrospray mass spectrometryof the metabolites in CACIAM 14. The genes Dehydroquinate synthase and o-methyltransferase were found in all the strains studied. The genes of pentose pathway Ribulose-phosphate-3-epimerase and transketolase were detected in the strains CACIAM 14, CACIAM 53 and CACIAM 57, what may suggest that in these strains MAAs could be produced by both pathways while in CACIAM 57 MAAs could be produced by shikimate pathway only. In CACIAM 14 strain, fragments of mass to charge relationship 186 and 197 were found in the same retention time of a precursor ion of m/z 333, what could be related to shinorine. Therefore, the strains CACIAM 53, 54 and 57 are potentially producers of MAAs due to possessing biosynthetic genes and CACIAM 14 is shinorine producer.

Nos seres humanos o triptofano é metabolizado por várias vias, produzindo compostos biologicamente importantes chamados quinureninas, serotonina, ácidos indólicos, compostos ácidos nicotínicos (niacina) e ácido quinolínico. Em condições normais, pouquíssimo triptofano aparece convertido em ácido nicotínico. Sabe-se que o acúmulo de triptofano e seus metabólitos está relacionado ao dano cerebral encontrado tanto na hipertriptofanemia quanto em doenças neurodegenerativas. Nesse trabalho, nós investigamos o efeito da administração de triptofano sobre vários parâmetros comportamentais no teste de campo aberto e de estresse oxidativo e o efeito de creatina e piruvato, sobre os efeitos do triptofano. Quarenta ratos Wistar, machos, de 60 dias, foram aleatoriamente divididos em 4 grupos: salina; triptofano; piruvato + creatina; triptofano + piruvato + creatina. Os animais receberam 3 injeções subcutâneas de triptofano (2 μmol/g peso corporal cada um em intervalos de 3 horas) e/ou piruvato (200 μg/g peso corporal 1 hora antes do triptofano) e/ou creatina (400 μg/g peso corporal 2 vezes por dia durante 5 dias antes do treino); os controles receberam solução salina (NaCl 0.85g%) nos mesmos volumes (30 μL/g peso corporal) das outras substâncias Uma vez que, a redução progressiva da atividade exploratória no campo aberto pode ser interpretada como um indicador de que os animais reconheceram e lembraram do ambiente nossos resultados mostram que o triptofano aumentou a atividade dos animais, sugerindo a redução da habilidade de habituação ao ambiente e um déficit de aprendizagem/memória causada por este aminoácido. O triptofano também induziu aumento de TBA-RS e a redução de sulfidrilas totais no hipocampo, indicando indução de estresse oxidativo. Os efeitos do triptofano no campo aberto e no estresse oxidativo, foram totalmente prevenidos pelo pré-tratamento com creatina mais piruvato, dois potentes antioxidantes, reforçando a hipótese de estresse oxidativo. Nossos achados, estão de acordo ao que pode ser observado em pacientes afetados pela hipertriptofanemia e doenças neurodegenerativas, ou em outras doenças em que ocorra o acúmulo de triptofano. É possível que o estresse oxidativo possa estar enolvido nos mecanismos que levar à lesão cerebral, sugerindo que a suplementação de creatina e piruvato poderia beneficiar os pacientes afetados por esses transtornos. Estudos adicionais serão necessários para compreensão de como o triptofano é causador de dano, se é pelo seu acúmulo ou pelo acúmulo de seus metabólitos. Além disso, também será necessária uma maior investigação para avaliar se a suplementação com creatina e piruvato é possível de ser recomendada à pacientes com hipertriptofanemia ou doenças degenerativas. / In human, tryptophan is metabolised by multiple pathways, producing several compounds, namely kynurenines, serotonin, indolic acids, nicotinic acid (niacin) compounds and quinolinic acid. Under normal conditions, very little tryptophan appears converted to nicotinic acid. It is known that the accumulation of tryptophan and its metabolites is related to brain damage associated with both hypertryptophanemia and neurodegenerative diseases. In this work, we investigated the effect of tryptophan administration on various parameters of behavior in the open field task and oxidative stress, and the effects of creatine and pyruvate, on the effect of tryptophan. Forty, sixty-day-old male Wistar rats, were randomly divided into 4 groups: saline; tryptophan; pyruvate + creatine; pyruvate + creatine. Animals received 3 subcutaneous injections of tryptophan (2 μmol/g body weight each one at 3 h of intervals) and/ or pyruvate (200 μg/g body weight 1 h before tryptophan) and/or 400 μg/g body weight twice a day for 5 days before tryptophan twice a day for 5 days before training; controls received saline solution (NaCl 0.85 g%) at the same volumes (30 μL/g body weight) than the other substances Since the progressive reduction of exploratory activity in open field ca be interpreted as an indicator that animals recognize and remember the environment ours results showed that tryptophan increased the activity of the animals, suggesting a reduction in the ability of habituation to the environment and a deficit in learning/memory caused by this amino acid. Tryptophan induced increase of TBA-RS and total sulfhydryls in the hippocampus, indicating induction of oxidative stress. The effects of tryptophan in the open field, and in oxidative stress were fully prevented by the combination of creatine plus pyruvate, two powerful antioxidants, reinforcing the idea of oxidative stress. In case these findings also occur in humans affected by hypertryptophanemia or other neurodegenerative disease in which tryptophan accumulates, it is feasible that oxidative stress may be involved in the mechanisms leading to the brain injury, suggesting that creatine and pyruvate supplementation could benefit patients affected by these disorders. Additional studies are needed to understand how tryptophan is causing damage if it is by is accumulation or accumulation of metabolites. In addition, further research is needed to assess whether supplementation with creatine and pyruvate can be recommended to patients with degenerative diseases or hipertriptophanemia.

O comportamento do óxido nítrico (NO) em sistemas biológicos vem sendo explorado desde a descoberta de sua importância em processos regulatórios, fisiológicos e em patologias. Atualmente há o grande interesse no desenvolvimento de compostos que possam liberar o NO de forma controlada em locais específicos nas células. Neste contexto, os complexos rutênio-nitrosilos têm se mostrado bastante promissores, visto que podem liberar NO no interior celular por processos redutimétricos, viabilizando sua utilização como agentes antitumorais e/ou tripanocida. Este estudo se baseia na premissa de que a liberação de NO pode ser direcionada para o interior celular através da modulação dos ligantes de forma a obter complexos biocompatíveis. Assim, o presente trabalho visou o delineamento de complexos rutênio-nitrosilos inéditos contendo ligantes polipiridínicos e/ou derivados de aminoácidos e, condução de experimentos a nível biológico. Os novos complexos rutênio-nitrosilos contendo os ligantes 3-etinilpiridina (3-etpy), derivado triazol de lisina e derivado imínico de triptofano foram sintetizados e purificados com êxito. Os ligantes foram caracterizados por RMN de 1H e 13C RMN, HSQC e 1H-1H COSY, espectrometria de massas e espectroscopia no infravermelho. Os complexos foram caracterizados por espectroscopia na região do UV-visível e FTIR, análise elementar, voltametria cíclica e espectrometria de massas. Os complexos foram testados frente a linhagens celulares B16-F10, MCF-7, MDA-MB231 e comparados com os testes em células de mama sadia MCF-10A. Além disso, os complexos foram aplicados a formas amastigotas de Trypanosoma cruzi. Os resultados de viabilidade celular mostraram que os complexos contendo derivado triazol de lisina ocasionam citotoxicidade às células MCF-7, MB-231 e B16-F10. O complexo cis-[Ru(NO)(bpy)2(3-etpy)](PF6)3.2H2O (onde bpy = 2,2\'-bipiridina) apresentou excelente resultado nos testes in vitro e in vivo frente a cepa Tulahuén LacZ e modelo murino, quando da sua associação ao benzonidazol. Os resultados obtidos sugerem possíveis relações existentes entre estrutura-atividade, abrindo novos caminhos para a pesquisa na busca pelo entendimento deste sistema, assim como o desenvolvimento de uma nova classe de compostos. / The behavior of nitric oxide (NO) in biological systems has been explored since the discovery of its importance in regulatory, physiological, and pathological processes. Currently, there is a great interest in the development of compounds that can release NO at specific sites inside cells in a controlled manner. In this context, the ruthenium-nitrosyl complexes have shown to be very promising, since they can release NO inside cells by reduction processes, turning possible its aplications as antitumor and/or trypanocides agents. This study is based on the premise that the release of NO can be directed to inside cells by modulating the ligands in order to obtain biocompatible complexes. In this way, the present work aimed at the design of new ruthenium-nitrosyl complexes containing polypyridine ligands and/or amino acid derivatives, and tests of biological activity. The new ruthenium-nitrosyl complexes containing 3-ethynylpyridine, triazole lysine derivative, and tryptophan imino derivative were synthesized and purified successfully. Ligands were characterized by 1H and 13C NMR, HSQC, and COSY, mass spectrometry and infrared spectroscopy. The complexes were characterized by spectroscopy in the UV-visible region and FTIR, elemental analysis, cyclic voltammetry, and mass spectrometry. The complexes were tested against cell lines B16-F10, MCF-7, MDA-MB231 and the normal breast cell model MCF-10A. In addition, the complexes were tested against amastigote forms of Trypanosoma cruzi. Cell viability results showed that triazole derivative-lysine complexes cause cytotoxicity to MCF-7, MB-231, and B16-F10 cells. The cis-[Ru(NO)(bpy)2(3-etpy)](PF6)3.2H2O (where bpy = 2,2\'-bipyridine) complex presented excellent results in vitro and in vivo tests against the Tulahuén LacZ strain and the murine model, respectively, when it was associated with benzonidazole. The results suggest possible relationships between structure and activity, opening new prospectives in the search for understanding this system, as well as the development of a new class of compounds.

Poucos são os trabalhos relacionados com a determinação das exigências nutricionais por aminoácidos de espécies nativas brasileiras, dentre as quais se destaca o dourado, Salminus brasiliensis (Cuvier, 1816), o maior peixe de escamas da Bacia do Prata, espécie reofílica e ictiófaga que chama atenção pelo excelente sabor da carne e pela beleza de seu tegumento. Este trabalho teve por objetivo estudar a exigência em aminoácidos e o uso de fonte de proteína de origem vegetal - farelo de soja (FS) - na nutrição do dourado. A exigência em lisina foi determinada em ensaio dose-resposta e os dados coletados foram analisados por meio de regressão polinomial e segmentada. Foi utilizada a relação A/E=[(aminoácido essencial÷total de aminoácidos essenciais+cistina+tirosina)x1.000], para estimar as exigências nutricionais dos demais aminoácidos essenciais. As unidades experimentais (UE) foram constituídas por lotes de 12 juvenis de dourado (11,4±0,2g; 9,4±0,9cm) condicionados a aceitar ração seca (43%PB e 4.600kcal EB), alojados em caixas de polipropileno com capacidade de 300L, com troca parcial de água num sistema fechado de recirculação e aeração. Os tratamentos correspondiam aos níveis crescentes de lisina: 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0 e 3,5% na dieta num delineamento inteiramente aleatorizado - DIA (n=4). A exigência dietética em lisina para peso final (PF), ganho de peso (GP) e taxa de crescimento específico (TCE) foi de 2,15% da dieta ou 5% da proteína dietética; 2,5% de lisina 5,8% da proteína dietética, resultou no melhor índice de conversão alimentar (CA). A exigência por arginina foi determinada em ensaio dose-resposta utilizando a relação A/E e perfil de aminoácidos corporais de dourado. As UE foram constituídas por lotes de 12 juvenis de dourado (27,0±0,8g; 12,6±0,7cm) e os tratamentos correspondiam aos níveis crescentes de arginina: 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0% na dieta (DIA; n=4). A exigência dietética em arginina para PF, GP, consumo de ração e TCE foi de 1,48% da dieta ou 3,43% da proteína dietética. O valor 1,40% de arginina dietética ou 3,25% de arginina na proteína acarretou a melhor CA. O uso da regressão segmentada foi o mais apropriado para determinação da exigência dietética de lisina e arginina. A relação A/E foi uma ferramenta confiável para estimar níveis de exigência em aminoácidos essenciais. Para determinar efeitos do uso do farelo de soja em dietas para a espécie, grupos de 12 juvenis de dourado (27,0±0,8g; 12,6±0,7cm) foram submetidos a um ensaio de desempenho alimentados com dietas formuladas com base nos seguintes ingredientes: farinha de peixe+aminoácidos sintéticos (FP), farelo de soja+aminoácidos sintéticos (FS) e mistura farinha de peixe+farelo de soja+aminoácidos sintéticos (MIX) (DIA; n=4). A excreção indireta de nitrogênio e fósforo dos animais foi avaliada por meio do monitoramento dos parâmetros de qualidade de água nos aquários utilizando lotes de 20 juvenis (74,3±10,6g; 18,7±0,8cm) nas mesmas condições experimentais e com o uso das dietas da primeira parte do ensaio (n=3). Foram coletadas periodicamente (0, 2, 4 e 6 h pós-alimentação) amostras de água para determinação de amônio (NH4 +), amônia total (NH3) e fósforo total (P). O uso do farelo de soja e a suplementação de aminoácidossintéticos revelaram-se alternativas eficazes para substituir ou minimizar o uso da farinha de peixe na dieta desta espécie. Devido os resultados pouco conclusivos da excreção de metabólitos nitrogenados e de fósforo, maiores esforços precisam ser realizados para esclarecer este tópico de extrema importância para a consolidação de uma aquicultura sustentável. / Only a few research report address dietary amino acids requirement of Brazilian fish; this is true especially in regard to dourado, Salminus brasiliensis (Cuvier, 1816), a migratory, carnivorous Characin, which is not only the largest scale fish of the Prata Basin but also a prized aquaculture and sport fishing species. This study address dietary amino acids requirements and the use of a plant protein source soybean meal in the nutrition and feeding of dourado. Dietary lysine requirements were determined in doseresponse assay and collected data analyzed by polynomial and broken-line regression. The A/E relationship [AE = (essential amino acid÷total essential amino acids+cystine+tyrosine) x 1.000] was used to estimate the nutritional requirements of other essential amino acids. Groups of 12 juvenile dourado (11.4±0.2g; 9.4±0.9cm) were stocked in polypropylene tanks (300L) with partial water exchange in a closed recirculation, aerated system, conditioned to accept dry feed (43%CP and 4,600kcal CE), and then fed experimental diets containing increasing levels of lysine: 1.0; 1.5; 2.0; 2.5; 3.0 and 3.5% in a completely randomized design (n=4). Dietary lysine requirement for optimal final weight (WF), weight gain (WG) and specific growth rate (SGR) was 2.15% of diet or 5% of the dietary protein; 2.5% dietary lysine or 5.8% of lysine in dietary protein yielded optimum feed conversion rate (FCR). Dietary arginine requirements were also determined in dose-response assay, also based on A/E relationship and carcass amino acid profile of dourado. Groups of 12 juvenile dourado (27.0±0.8g; 12.6±0.7cm) were fed with experimental diets containing increasing levels of arginine: 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 and 3.0% completely randomized design (n=4). Dietary arginine requirement for WF, WG, feed consumption and SGR was 1.48% of diet or 3.43% of the dietary protein; 1.40% dietary arginine or 3.25% of arginine in the protein caused the best FCR. The use of the broken-line regression was the most appropriate technique for determination of the dietary lysine and arginine requirement. A/E relationship was a reliable tool to estimate levels of essential amino acids requirements. To study the inclusion of soybean meal in diets for the species, the growth performance of groups of 12 juvenile dourado (27.0±0.8g; 12.6±0.7cm) fed with diets containing fish meal+ synthetic amino acids (FM), soybean meal+synthetic amino acids (SM) and mix of fish meal+soybean meal+synthetic amino acids (MIX) was evaluated. The indirect excretion of nitrogen and phosphorus was also evaluated by monitoring water quality parameters in the tanks stocked with groups of 20 juvenile dourado (74.3±10.6g; 18.7±0.8cm) in the same experimental conditions (n=3). Water samples were collected periodically (0, 2, 4 and 6 h after-feeding) for determination of ammonium (NH4 +), total ammonia (NH3) and total phosphorus (P). The use of soybean meal and synthetic amino acids are an efficient alternative to substitute or to minimize the use of the fish meal in the diets for the species, however, results regarding excretion of nitrogen andphosphorus were inconclusive, so additional efforts are needed to clarify this issue of importance for the consolidation of a sustainable aquiculture.