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Caracterização e brotação do orgão subterraneo de Kohleria sp

Almeida, Julieta Andrea Silva de 09 May 1997 (has links)
Orientador: Maria de Fatima Domingos Aleixo Pereira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T07:11:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_JulietaAndreaSilvade_D.pdf: 6676452 bytes, checksum: 31a4706b9dac251302340bac67cc7a6f (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Plantas de Kohleria sp pertencem à família Gesneriaceae e estão distribuídas desde o sul do México ao Peru e leste do Suriname. O seu centro de diversidade são as montanhas d, Colômbia. Algumas espécies de Kohleria possuem órgão subterrâneo, que está associado à sua sobrevivência em estação de seca. O objetivo deste estudo foi o de caracterizar o órgão subterrâneo de Kohleria sp em relação à sua anatomia e ao seu processo de brotação. Tentou-se ainda identificar alguns aspectos do controle ambiental e hormonal da brotação destes órgõas subterrâneos. O órgão subterrâneo de Kohleria sp possui natureza caulinar, cujos tecidos do caule apresentam esclerênquima, que lhe conferem rigidez. O caule está envolto por folhas modificadas, que protegem suas gemas. As folhas modificadas possuem epiderme com abundância de tricomas, são vascularizadas e ainda apresentam grande quantidade de reserva, principalmente de amido. O órgão subterrâneo também possui substâncias fenólicas que podem estar associadas à sua defesa contra microorganismos da terra. A formação do rizoma nas plantas de Kohleria sp foi indiferente ao fotoperíodo. No entanto, as plantas que ficaram em condição de dia curto tiveram promoção do crescimento da altura e área foliar em relação àquelas que ficaram em dia longo. Devido à abundância de gemas, o rizoma de Kohleria sp possui alto grau de regeneração o que é realizado através da sua brotação. Secções do rizoma brotaram tanto na luz quanto no escuro. Por outro lado, o fator temperatura teve influência destacada na brotação das secções. Quando as secções estavam nas temperaturas mais altas o processo foi mais rápido e aquelas nas mais baixas brotaram lentamente. Secções do rizoma foram capazes de brotar em substrato com disponibilidade reduzida de água ou em sua ausência e ainda desenvolveram plenamente suas brotações nestas condições. Entretanto, quando estavam em excesso de água as secções apodreceram, mostrando-se intolerantes ao teor alto de umidade. Nas secções do rizoma, utilizadas neste estudo, em geral, apenas uma gema brotou as demais permaneciam dormentes. Esta resposta mostrou que o rizoma de Kohleria sp possui forte relação de dominância apical. No entanto, quando foram tratadas com 6-benziladenina ou etrel tiveram número maior de brotação por secção. As gemas das secções do rizoma de Kohleria sp apresentaram alto grau de plasticidade, já que poderiam se desenvolver em brotação do padrão rizoma ou o tipo parte aérea. O desenvolvimento de um dos tipos de brotação foi influenciada pelos fatores do ambiente e substâncias reguladoras de crescimento. Brotações do padrão parte aérea se desenvolveram em secções que ficaram em substrato com disponibilidade alta de água e em temperatura de 30°C. As brotações do padrão rizoma ocorreram nas secções que ficaram com disponibilidade reduzida de água ou em sua ausência, tanto em 2°C quanto em 3°C. Brotações do padrão rizoma também se desenvolveram em secções que ficaram em substratos com soluções de PEG, que geraram os potenciais de -3, -6 e -12 MPa. Isto demostrou que a ocorrência de brotações do padrão rizoma nas secções do rizoma, em substrato com disponibilidade reduzida de água, poderia estar associada à condição de potencial hídrico baixo. As secções do rizoma de Kohleria sp foram bastante resistentes à redução de água, mostrando que possuem mecanismos internos que facilitam a sua sobrevivência nestas condições. Verificou-se que etileno estava envolvido com o controle do desenvolvimento de brotações do padrão rizoma quando as secções do rizoma ficaram com disponibilidade reduzida de água no substrato. Isto foi obtido indiretamente através do tratamento das secções com ETREL, AgNO3 e A VG, e diretamente pela dosagem de etileno liberado por estas quando estavam em disponibilidade reduzida de água no substrato. Foi verificado também o envolvimento de ABA com o controle do desenvolvimento de brotações do padrão rizoma. Esta evidência foi obtida indiretamente pelo tratamento das secções com ABA e diretamente pela identificação de atividade inibidora através do bioensaio da germinação de sementes de alface. E finalmente pela análise de trações ácidas de extratos das secções do rizoma por espectrometria de massas. Dos resultados obtidos, deste estudo, de que as brotações do padrão rizoma se desenvolveram em secções do rizoma com disponibilidade reduzida de água no substrato, e que etileno e ABA participam do controle do desenvolvimento deste tipo de brotação / Abstract: Plants of Kohleria sp belong to the Gesneriaceae family and distributed trom southem Mexico to Peru and east of Suriname. The center of diversity is in the Colombian highlands. Some species of Kohleria produce subterranean organs which allow the plants to survive under unfavorable dry seasons. The objective of this study was to characterize the subterranean organ of Kohleria sp about its anatomy and sprouting. The identification of some aspects of hormonal and environrnental control of sprouting of these subterranean organs was studied. The anatomy of the subterranean organ of Kohleria sp evidence that it is a typical stem, whose tissue shows sclerenchyma. The stem is enclosed by modified leaves which protect their buds. The modified leaves have trichomes, are vascularized and present great amount of starch. The phenolic substances were present in the subterranean organ and they can have a role of protection against soil microorganisms. Rhizome initiation in the plants of Kohleria sp was not dependent of photoperiod. Nevertheless, under short days stem elongation and leaf area were promoted. The rhizome of Kohleria sp shows a very high degree of regeneration because it presents abundance of buds. This regeneration is expressed by the sprouting of buds. The sprouting of rhizome sections was not atfected by the presence of light, but it was atfected by temperature. High temperatures promoted the sprouting of rhizome sections. In a substract with reduction of water content the rhizome sections sprouted resulting in the development of a new organismo However, in a substract with excess of water the rhizome sections did not survive, showing to be intolerant to highly moistened substracts. Generally, only a bud sprouted by each rhizome section. The others remainned dormant. This shows that the rhizome of Kohleria sp presents a strong apical dominance. Nevertheless, when 6-benzyladenin or ETHREL were applied to the rhizome sections most of the buds sprouted in the same section. The buds of rhizome sections of Kohleria sp presented high degree of plasticity, they could develop a rhizome pattem or an aerial part parttem. The environrnental factors and rowth regulators can influence the occurrence of one of these pattems. In the presence of substract with high water leveI and temperature of 30° C the rhizome sections developed an aerial part pattem. But in the presence of reduced water leveI, under the temperatures of 20 or 3 aoe the rhizome sections developed a rhizome pattern. The bud of the rhizome sections developed a rhizome pattern when they were in the presence ofPEG soIutions (-3, -6, -12MPa). This suggests that the occurrence of the rhizome pattern when the substract was with reduced water leveI could be related to the Iow water potentiaI. The rhizome sections presented very high resistance to drought. Because of this characteristic it is possible to presume the existence of internal mechanisms which allow its survival under very dry conditions. Ethylene was verified to be envolved in the controI of the development of the rhizome pattern when the rhizome sections were in substract with reduced water leveI. This was indirectly obtained by ETHREL, AgNO3 and A VG treatments and directly by the determination of ethylene concentration in the rhizome sections when they were in substract with reduced water level. ABA was also verified to be envolved with the control of development of the rhizome pattern. This evidence was obtained indirectly by the ABA application to the rhizome sections. Also, ABA was detected by the lettuce seeds bioassay in extracts of rhizome sections hept under reduced water conditions. ABA was aIso detected in those extracts by combined gas chromatography-mass spectrometry. The obtained results present evidence that the occurrence of the rhizome pattern, which is developed when the substract presents low water content, is controled by ethylene and ABA / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas
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Determinação de ácido abscísico e respostas metabólicas em espécies congenéricas de savana e mata do cerrado paulista

Silva, Carolina de Marchi Santiago da [UNESP] 26 March 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-26Bitstream added on 2014-06-13T18:50:14Z : No. of bitstreams: 1 silva_cms_me_rcla.pdf: 443732 bytes, checksum: 09449aa6eb3034aee0345fedddfe7b13 (MD5) / O ácido abscísico (ABA) é conhecido como hormônio do estresse hídrico, induzindo o fechamento estomático em episódios de seca. Visto que a concentração deste hormônio é muito baixa, primeiramente foi desenvolvido um método para quantificação foliar de ABA e outros cinco compostos de sua rota metabólica por cromatografia líquida em ionização ‘electrospray’ com espectrometria de massas em tandem (LC-ESI-MS/MS). Espécies de Styrax (S. Ferrugineus, uma espécie de Cerrado sensu stricto e S. pohlii, uma espécie de mata ripária) foram analisadas quanto ao teor de ABA e seus metabólitos na estação seca e na estação chuvosa. Além disso, também medimos, na estação seca, a expressão do gene da enzima 9-cis-epóxi-carotenóide dioxigenase (NCED), chave na biossíntese de ABA. Medidas de trocas gasosas (assimilação de CO2 e transpiração) e potencial da água na folha foram também realizadas nas estações chuvosa e seca. O método analítico desenvolvido mostrou-se eficiente para as quantificações de ABA, evidenciando como evitar o efeito da matriz nas análises. Em conjunto, os dados que obtivemos mostram que a espécie de mata, embora ocorra em hábitat com maior disponibilidade hídrica no solo, não se encontra tão bem adaptada à evento de seca prolongada quanto a espécie de Cerrado, o que pode explicar a distribuição espacial destas espécies / Abscisic acid (ABA) is a plant hormone biosynthesized under water deficiency stress conditions, reducing the stomatal conductance (gs) and transpiration rates (E). Considering that it is detected at very low concentrations in the metabolism, we first developed an adapted method to quantify ABA and other five metabolites from its metabolic pathway, using liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Styrax species (S. ferrugineus, a savana species occurring in the Cerrado sensu stricto, and S. pohlii, a forest species from the riparian forest) had leaf concentrations of ABA and its metabolites analized in the wet (February) and dry (September) seasons. In addition, we have also measured the gene expression of the 9-cis epoxycarotenoid dioxygenase..(NCED) enzyme, which plays a key role on ABA biosynthesis. Leaf gas exchange and leaf water potential were also performed in both seasons. The analytical method proved to be highly efficient for ABA quantification, and it demonstrated how to avoid matrix effects when measuring ABA on leaves. Taken together, our data showed that although occurring in a habitat with great soil water availability, the forest species may not be considered as adapted to long seasonal droughts as compared to the savana species. These results may help explain their distinct distribution patterns in the Cerrado biome
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Determinação de ácido abscísico e respostas metabólicas em espécies congenéricas de savana e mata do cerrado paulista /

Silva, Carolina de Marchi Santiago da. January 2013 (has links)
Capítulos 1 e 2 da dissertação estão em inglês / Orientador: Gustavo Habermann / Coorientador: Guilherme Julião Zocolo / Banca: Rafael Vasconcelos Ribeiro / Banca: Alberto Jose Cavalheiro / Resumo: O ácido abscísico (ABA) é conhecido como hormônio do estresse hídrico, induzindo o fechamento estomático em episódios de seca. Visto que a concentração deste hormônio é muito baixa, primeiramente foi desenvolvido um método para quantificação foliar de ABA e outros cinco compostos de sua rota metabólica por cromatografia líquida em ionização 'electrospray' com espectrometria de massas em tandem (LC-ESI-MS/MS). Espécies de Styrax (S. Ferrugineus, uma espécie de Cerrado sensu stricto e S. pohlii, uma espécie de mata ripária) foram analisadas quanto ao teor de ABA e seus metabólitos na estação seca e na estação chuvosa. Além disso, também medimos, na estação seca, a expressão do gene da enzima 9-cis-epóxi-carotenóide dioxigenase (NCED), chave na biossíntese de ABA. Medidas de trocas gasosas (assimilação de CO2 e transpiração) e potencial da água na folha foram também realizadas nas estações chuvosa e seca. O método analítico desenvolvido mostrou-se eficiente para as quantificações de ABA, evidenciando como evitar o efeito da matriz nas análises. Em conjunto, os dados que obtivemos mostram que a espécie de mata, embora ocorra em hábitat com maior disponibilidade hídrica no solo, não se encontra tão bem adaptada à evento de seca prolongada quanto a espécie de Cerrado, o que pode explicar a distribuição espacial destas espécies / Abstract: Abscisic acid (ABA) is a plant hormone biosynthesized under water deficiency stress conditions, reducing the stomatal conductance (gs) and transpiration rates (E). Considering that it is detected at very low concentrations in the metabolism, we first developed an adapted method to quantify ABA and other five metabolites from its metabolic pathway, using liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). Styrax species (S. ferrugineus, a savana species occurring in the Cerrado sensu stricto, and S. pohlii, a forest species from the riparian forest) had leaf concentrations of ABA and its metabolites analized in the wet (February) and dry (September) seasons. In addition, we have also measured the gene expression of the 9-cis epoxycarotenoid dioxygenase..(NCED) enzyme, which plays a key role on ABA biosynthesis. Leaf gas exchange and leaf water potential were also performed in both seasons. The analytical method proved to be highly efficient for ABA quantification, and it demonstrated how to avoid matrix effects when measuring ABA on leaves. Taken together, our data showed that although occurring in a habitat with great soil water availability, the forest species may not be considered as adapted to long seasonal droughts as compared to the savana species. These results may help explain their distinct distribution patterns in the Cerrado biome / Mestre
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Conexão entre os processos de degradação das resservas de proteinas e carboidratos e o edfeito dos hormonios e açucares em sementes de Sesbania virgata (Cav.) Pers. / Connection between storage proteins and carbohydrates degradation and the effects of hormones and sugars in seeds of Sesbania virgata (Cav.) Pers.

Tonini, Patricia Pinho 12 August 2018 (has links)
Orientador: Marcos Silveira Buckeridge / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T17:19:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tonini_PatriciaPinho_D.pdf: 2946398 bytes, checksum: 0c45bddc87c835268cd2cfd05f89d364 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Sementes de Sesbania virgata (Cav.) Pers. acumulam suas reservas de carbono no endosperma na forma de um polissacarídeo de parede celular, o galactomanano. A mobilização deste ocorre após a germinação e envolve três enzimas hidrolíticas, dentre elas a a-galactosidase. Além da reserva de carbono, há uma grande quantidade de corpos protéicos, no citoplasma das células endospérmicas, que constituem a principal reserva de nitrogênio nestas sementes. Para que ocorra a correta distribuição dos produtos de degradação das reservas deve haver sincronização entre os processos de degradação das reservas de carbono e nitrogênio, porém para compreender tais mecanismos, é necessário estudar aspectos do controle da produção e ação das enzimas responsáveis pela hidrólise das reservas. Buscando determinar em que ponto do metabolismo a semente de S. virgata se encontra em relação à produção destas enzimas hidrolíticas, durante e após a germinação, e supostamente os tecidos envolvidos nesta produção, sementes desta espécie foram embebidas em actinomicina-D (inibidor de transcrição) e cicloheximida (inibidor de tradução) e os efeitos destes inibidores verificados através da atividade e detecção da a-galactosidase no tegumento e endosperma destas sementes. Além disso, buscando verificar e relacionar o efeito do ácido abscísico, do etileno e dos açúcares na degradação das reservas após a germinação de S. virgata, sementes desta espécie foram embebidas em ABA, etileno, glucose e sacarose, e os efeitos destes foram verificados através dos teores protéicos, da atividade da a-galactosidase e da produção endógena de ABA e etileno nestas sementes. Como a presença de actinomicina-D e cicloheximida não inibiram a produção e a atividade da a-galactosidase no endosperma durante e após a germinação, sugere-se que a produção desta enzima ocorra principalmente durante a maturação da semente. Aparentemente, a partir do período pós-germinativo, a enzima pré-formada seria processada e ativada, para conseqüente degradação dos galactomananos, através de um processo proteolítico. Em contrapartida, como a presença deactinomicina-D e cicloheximida inibiram a degradação das proteínas de reserva no tegumento e endosperma e, inclusive, induziram a atividade da a-galactosidase nestes tecidos no final do processo de degradação dos galactomananos, sugerese a síntese de novo de proteases durante e após a germinação e a relação íntima destas enzimas com a degradação das proteínas de reserva e da a-galactosidase no final do processo de degradação dos galactomananos. Quanto aos hormônios, a presença de ABA exógeno retardou o início da degradação das proteínas de reserva no endosperma, assim como diminuiu a atividade da a-galactosidase no mesmo tecido no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito modulador deste hormônio durante a degradação das reservas, reprimindo a ação das enzimas hidrolíticas. A presença de etileno exógeno, entretanto, aumentou a atividade da a-galactosidase no endosperma e, inclusive, no tegumento no final do processo de degradação do galactomanano, sugerindo um efeito indutor deste hormônio na ativação e ação das enzimas hidrolíticas. De fato, analisando a produção endógena de ABA e etileno, observou-se um aumento brusco dos hormônios no período de mobilização das reservas, que pode estar relacionado à influência destes hormônios na atividade das enzimas hidrolíticas em sementes de S. virgata. Ainda, como ocorreram mudanças na produção de ABA e etileno endógeno na presença de glucose e sacarose, sugere-se uma relação íntima entre a via de sinalização destes hormônios e a dos açúcares, a fim de controlar o processo de degradação das reservas. Desta forma, estas evidências sugerem que o ABA e o etileno controlariam antagonicamente a mobilização de reservas em sementes de S. virgata, juntamente com os açúcares, através da ativação e ação das enzimas hidrolíticas, a fim de controlar o processo de degradação das proteínas e dos galactomananos, evitando a produção dos açúcares redutores e de sacarose em excesso durante o período pós-germinativo e garantindo o afluxo eficiente de carbono e nitrogênio para o desenvolvimento da plântula. / Abstract: Seeds of Sesbania virgata (Cav.) Pers. have an endosperm which accumulates galactomannan as a storage polysaccharide in the cell walls that is hydrolysed after germination by three enzymes (a-galactosidase, endo-ß-mannanase and exo-ß-mannosidase). Besides the storage of carbon, there is a great amount of protein bodies in the cytoplasm of endospermic cells, which play the major role as a nitrogen reserve in this seed. It is likely that a synchronization between the process of galactomannan and protein degradation occurs for a more efficient distribution and use of the storage degradation products. However, to understand these mechanisms, it is necessary to study aspects of the production and action control of the hydrolytic enzymes responsible for the mobilisation of these reserves. Aiming to determine in which point of the metabolism the seed of S. virgata is in relation to the production of the hydrolytic enzymes, during and after germination, and the supposed tissues involved in this production, seeds of this specie were imbibed in actinomycin-D (transcription inhibitor) and cycloheximide (translation inhibitor), and the effects of these inhibitors verified thought the a-galactosidase activity and detection in the testa and endosperm of these seeds. Besides of this, for to verify and relate the effects of abscisic acid, ethylene and sugars on the reserves degradation after germination of the S. virgata, seeds of this specie were imbibed in ABA, ethylene, glucose and sucrose, and the effects of these were verified through the protein content, a-galactosidase activity and endogenous production of ABA and ethylene in this seeds. In the presence of actinomycin-D and cycloheximide, the production and activity of the a- galactosidase were not inhibited during and after germination, suggesting that the production of this enzyme occurs principally during the maturation of the seed. Apparently, after the germination, this enzyme is processed by proteolysis, so that it becomes activated to perform galactomannan degradation. On the other hand, the presence of actinomycin-D and cycloheximide inhibited the protein degradation in the testa and endosperm and at the same time induced the a-galactosidaseactivity in the same tissues at the final steps of the galactomannan degradation process. This suggests the existence of synthesis de novo of the proteases during and after germination and a possible relationship between the storage protein and galactomannan mobilisation. Regarding the hormones, the presence of exogenous ABA retarded the beginning of the storage protein degradation in the endosperm and also decreased a-galactosidase activity in the same tissue at the end of galactomannan degradation. This suggests that there is a regulator effect of this hormone during the storage degradation, repressing the enzymes action. In the presence of exogenous ethylene an increase in the a-galactosidase activity in the endosperm and in the testa were observed at the end of galactomannan degradation, suggesting an inducing effect of this hormone on the hydrolytic enzymes. The finding of endogenous ABA and ethylene production, observed during the period of the storage mobilisation, give support to the above raised hypothesis that the two hormones participate in the control of the hydrolytic enzyme activities in seeds of S. virgata. Furthermore, the changes observed in the endogenous ABA and ethylene production in the presence of glucose and sucrose, suggested a relation between the signaling pathway of these hormones and the sugars signaling, controlling the process of storage degradation. Thus, our results add evidence to suggest that ABA and ethylene antagonistically control the storage mobilisation in seeds of S. virgata, together with the sugars, through the hydrolytic enzymes activation, controlling the process of storage protein and galactomannan degradation, in other to avoiding the excess production of reductor sugars and sucrose during the post-germinative period and assuring the efficient afflux of the carbon and nitrogen to the seedling development. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Papel do ABA nas relações hídricas em espécies sensíveis ao Al3+ /

Gavassi, Marina Alves. January 2020 (has links)
Orientador: Gustavo Habermann / Resumo: O alumínio (Al) é o metal mais abundante na crosta terrestre. Em solos ácidos (pH < 5,0) é encontrado principalmente na forma de Al3+, tóxico à maioria das plantas. Nas plantas sensíveis a esse metal, o primeiro e mais conspícuo sintoma de toxicidade é a inibição do crescimento das raízes, onde a maior parte do Al é covalentemente retido. Além disso, o Al também causa sintomas indiretos, reduzindo o crescimento da parte aérea. Tal redução tem sido associada à assimilação de CO2 (A), e evidências sugerem o comprometimento das reações fotoquímicas, além da redução de 30 a 80% da condutância estomática (gs). Além disso, o Al também tem sido associado à redução na hidratação do mesofilo, como ocorre em condições de limitação hídrica. Baseado nestes fatos, testamos a hipótese de que parte dos sintomas de fitotoxicidade ao Al em plantas sensíveis, sobretudo aqueles relacionados ao baixo crescimento e desenvolvimento da parte aérea, bem como menos trocas gasosas, ocorrem em resposta à ativação de mecanismos associados à percepção de deficiência hídrica, principalmente à biossíntese de ácido abscísico (ABA). Utilizamos duas espécies sensíveis ao Al, mas cujos sintomas de toxicidade são induzidos por concentrações significativamente distintas, como Solanum lycopersicum (100 M Al) e Citrus limonia (1480 M Al). As plantas foram cultivadas em solução de nutrientes com e sem Al, em experimentos independentes com duração de 10 e 90 dias, para S. lycopersicum e C. limonia, respectivamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Aluminum (Al) is the most abundant metal in the Earth's crust. In acidic soils (pH < 5.0) it is found mostly as Al3+, which is toxic to most plants. In Al-sensitive plants, the first and most conspicuous symptom is the inhibition of the growth of the root system, where most of Al is covalently retained. Aluminum also causes indirect symptoms, such as reduced shoot growth. In Al-sensitive plants, Al-reduced CO2 assimilation rate (A) is observed, and there is evidence suggesting the impairment of photochemical reactions, as well as 30 to 80% reduction in stomatal conductance (gs). In addition, Al has also been associated with a reduction in mesophyll hydration, as occurs under water-limited conditions. Based on these facts, we tested the hypothesis that part of Al symptoms in sensitive plants, especially those related to low shoot growth and development, as well as low gas exchange, occur in response to activation of mechanisms closely associated with the perception of water deficiency, especially as signalled by abscisic acid (ABA) biosynthesis. We used two Al-sensitive species, whose symptoms of toxicity are induced by significantly different concentrations, such as Solanum lycopersicum (100 M Al) and Citrus limonia (1480 M Al). Plants were grown in nutrient solution with and without Al, in independent experiments of 10 and 90 days, for S. lycopersicum and C. limonia, respectively. In the experiments with both species, biometric parameters, root system morphology, biomass, ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Avaliação da importância do controle da estabilidade de RNAm na sinalização por glicose e ABA e na interação desses sinais em Arabidopsis thaliana / Evaluation of the importance of mRNA stability control in glucose and ABA-signaling and in the interaction of these signals in Arabidopsis thaliana

Duarte, Gustavo Turqueto, 1982- 21 August 2018 (has links)
Orientador: Michel Georges Albert Vincentz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T12:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Duarte_GustavoTurqueto_D.pdf: 11219627 bytes, checksum: b885f7a08525b694c5783c91f122c6c1 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: As plantas, sendo organismos sésseis, desenvolveram um conjunto de mecanismos que possibilitam a adaptação a condições ambientais adversas visando à manutenção da homeostase energética para o desenvolvimento e propagação. Tais respostas valem-se da integração entre a biossíntese de hormônios, ativação de vias gênicas de resposta a estresse e um balanço adequado do uso da energia disponível. Os açúcares, além de serem fontes de carbono e energia, também atuam como moléculas sinalizadoras podendo agir conjuntamente com sinais hormonais na adaptação a estresses bióticos e abióticos e no controle do desenvolvimento. Nesse contexto, diversos estudos apontam para uma importante relação entre o ácido abscísico (ABA), um dos principais hormônios relacionados à resposta a estresses, e a glicose. A sinalização por ABA, além de atuar sobre a regulação da transcrição, é conhecida por envolver fatores de controle de estabilidade do RNAm. Contudo, a participação destes mecanismos em respostas mediadas por glicose ainda é pouco explorada. Num primeiro momento, o presente trabalho visou avaliar o potencial das participações de regulações pós-transcricionais em resposta a ABA e glicose em Arabidopsis thaliana, através da determinação do perfil de expressão de RNAm após a inibição da transcrição. Um modelo experimental com condições de inibição de transcrição otimizadas foi estabelecido e utilizado para análise de transcriptoma por microarranjos CATMA em resposta à glicose e ABA. Um total de 962 genes foi identificado como diferencialmente expresso após os tratamentos, sugerindo uma possível regulação pós-transcricional por glicose sobre 204 transcritos, por ABA sobre 245 e pela combinação dos dois sinais sobre 513 transcritos. Esses genes foram classificados de acordo com o Gene Ontology, sugerindo uma relação importante com respostas adaptativas a condições de estresse. Aparentemente, as respostas mediadas por glicose e ABA seguem estratégias opostas, sendo que as respostas pós-transcricionais por ABA podem também atuar como um mecanismo rápido de retro-regulação negativa sobre a via central de sinalização desse hormônio, uma forma de dessensibilizar e reiniciar as respostas da via. Na segunda parte deste trabalho, levando em consideração as evidências do envolvimento do controle de estabilidade de RNAm na sinalização por glicose, foi avaliada a participação da via de regulação por microRNAs (miRNAs) em respostas mediadas por esses sinal durante os estágios iniciais de desenvolvimento da planta. Os mutantes ago1-25 e hyl1-2, deficientes em atividade e biossíntese de miRNAs, respectivamente, apresentaram hipossensibilidade à glicosedurante um determinado período do desenvolvimento da planta, entre a germinação e o estabelecimento. Tal resultado levanta a possibilidade de que a via dos miRNAs participa do atraso do desenvolvimento mediado por glicose. Visando compreender quais miRNAs poderiam estar envolvidos, análise de expressão em larga escala por reação em cadeia da polimerase em tempo real (qRT-PCR) de 200 precursores de miRNAs (pri-miRs) em resposta a glicose foi conduzida, apontando para uma potencial regulação sobre 38 deles, vários dos quais já são conhecidos por participarem direta ou indiretamente do controle de desenvolvimento da planta. Aparentemente, a deficiência na maquinaria de miRNAs leva a um desbalanço nas regulações de genes responsivos à glicose durante os primeiros estágios de desenvolvimento / Abstract: Plants, as sessile organisms, have developed a set of mechanisms that allow efficient adaptation to adverse environmental conditions. These processes rely on the integration of hormone biosynthesis, activation of stress-responsive pathways and on a balanced use of the available energy. Sugars, besides their role as carbon and energy sources, may also function as signaling molecules that may act together with hormonal signals to trigger adaptive responses to biotic and abiotic stresses. In this context, several studies have indicated an important relation between abscisic acid (ABA), one of the major hormones related to abiotic stresses responses, and glucose. ABA signaling, besides its function over transcription control, is known to involve factors regulating the stability of mRNAs. However, the importance of glucose-mediated mRNA decay control is essentially unknown. Our work intended to evaluate the potential of the participation of post-transcriptional regulations in response to ABA and glucose in Arabidopsis thaliana, by determining mRNA profile alteration in response to these signals after transcription inhibition. An experimental model which optimizes the conditions for transcription inhibition was established and used for transcriptome profiling with CATMA microarrays. A total of 962 genes were found to be differentially expressed after the treatments, suggesting a possible post-transcriptional control acting upon 204, 245 and 513 transcripts in response to glucose, ABA and the combination glucose + ABA, respectively. The genes were classified by their functions according to Gene Ontology, suggesting a close relation with adaptive response to stress conditions. Apparently, ABA- and glucose-mediated control of mRNA stability follows two opposite strategies, while ABA post-transcriptional responses may also act as a fast negative feedback mechanism over its own core signaling pathway, as a way to desensitize and reset the pathway responses. The second part of this work focused on the participation of microRNAs (miRNAs) pathway in responses mediated by glucose during plant early developmental stages. The mutants ago1-25 and hyl1-2, which are deficient in miRNA activity and biogenesis, respectively, showed hyposensitivity to glucose during a narrow time window of early plant development, between germination and seedling establishment. Such result raises the possibility that miRNA pathway may be involved in the glucose-mediated delay of early seedling development. To obtain further evidences about which miRNAs could be involved, the expression profile of 200 pri-miRs was evaluated by large-scale quantitative real-timepolymerase chain reaction (qRT-PCR) profiling, indicating that 38 pri-miRNA are potentially regulated by glucose, several of which are known to participate directly or indirectly in plant development. The data indicate that deficiency in miRNA machinery leads to an imbalance on glucose control over gene expression during early seedling development / Doutorado / Genetica Vegetal e Melhoramento / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

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