Orientador: Carmen Sílvia Bertuzzo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T04:59:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Assis_AngelaMariade_D.pdf: 2409399 bytes, checksum: 620279a2d72b5132a10f7af956d4bebf (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A Telangiectasia Hemorrágica Hereditária (THH) é uma desordem autossômica dominante caracterizada por epistaxe recorrente, telangiectases mucocutânea, hemorragia gastrointestinal, e malformação arteriovenosa pulmonar (PAVM), cerebral e hepática. A prevalência da doença é de 1/5000 e a mortalidade relatada da doença entre pacientes jovens quando comparado com aqueles com mais de 60 anos é de 36%. Dois genes da superfamília de receptores para TGF-? têm sido relacionados com THH, o gene da endoglina e o gene da activina (activin receptor-like-kinase). Estes genes são altamente expressos em células endoteliais e outros tecidos altamente vascularizados como pulmão e placenta. Mutações no gene da endoglina causam a THH tipo 1 que é caracterizada pela alta incidência de malformação arteriovenosa pulmonar sintomática (PAVMs). Mutações no gene da activina levam a THH tipo 2 caracterizada por epistaxe recorrente e malformação arteriovenosa gastrointestinal. Foi objetivo deste trabalho realizar uma triagem de mutações na região codificadora dos genes ALK-1 e endoglina em doze pacientes portadores de THH atendidos no Hemocentro da Unicamp. A abordagem metodológica incluiu a amplificação dos exóns dos genes da activina e endoglina seguida pela técnica de PCR/CSGE, clonagem e sequenciamento. Dos doze pacientes estudados, sete apresentaram alguma alteração molecular, destes três pacientes apresentaram uma deleção de um nucleotídeo T na posição 913 no exon 7, um paciente apresentou uma inserção de um nucleotídeo G na posição 204-205 no exon 3 e três pacientes apresentavam uma mutação misense nos exons 7 e 8 na posição 976 e 1204 respectivamente. Nossos resultados mostraram que a THH tipo 1 e tipo 2 são raras no Brasil e todas as mutações citadas na tabela IV e Figura 10 são novas, somente a mutação ocorrida no exon 8 foi previamente descrita na literatura / Abstract: Background: Hereditary hemorrhagic telangiectasia in humans, also known as HHT or Osler-Rendu-Weber syndrome, is an autosomal dominant vascular disorder characterizes by recurrent epistaxis, mucocutaneous telangiectases, gastrointestinal, pulmonary, cerebral and hepatic arteriovenous malformations (HAVM). The prevalence of the illness is of 1/5000 and the reported mortality of the illness among young patients when compared with those with more than 60 years is 36%. Two genes of the receptors superfamily for TGF-? have been related with THH, the gene of the endoglin (ENG) in the chromosome 9q33-34 and the gene of the activin (receptor-like-kinase 1 ALK-1), in the chromosome 12q11q14. These genes are highly express in endothelial cells and other tissue highly vascularized as lung and placenta. Mutations in the gene of the endoglin cause the HHT type 1 which is characterized by the high incidence of symptomatic pulmonary arteriovenous malformation (PAVM). Mutations in the activin gene cause HHT were described among patients in whom the linking with HHT in the chromosome 9q33 or mutation in the endoglin gene was excluded. It was the objective of this work to carry through a selection of mutations in the coding region of gene ALK-1 and endoglin in 12 patients carrying HHT whose are treated in the Blood Center at Unicamp. Methods: Twelve patients were analyzed. Diagnosis of HHT was carried out by means of clinical history of recurrent bleeding, heredity studies, and the presence of multiple telangiectases lesions. PCR products with consistent abnormal migration patterns were cloned into the SureCloneTM ligation kit vector system and sequenced using the DYEnamic TM ET dye terminator cycle sequencing Kit, and analyzed by the MegaBace 1000 DNA automated analyzer. A panel of 252 chromosomes from unrelated individuals without the disease was used to evaluate the frequency of each mutation in the general population. Results: In six patients three novel mutations were identified in the coding sequence of the ALK-1 gene in their families, which demonstrated clinical manifestations of HHT type 2. These mutations included an insertion a deletion of single base pairs in éxons 3 (c.204-205insG) and 7 (c.913del T), as well as missense mutations in éxons 7 (c.976A>G) and 8 (c.1204G>A) of the ALK-1 gene. The mutations identified in éxons 7 and 8 affect the kinase domain and the mutation identified in éxon 3 affect the extracellular domain. These data indicate that loss-of-function mutations in a single allele of the ALK1 locus are sufficient to contribute to defects in maintaining endothelial integrity. Conclusion: We suggest the high rate of mutation detection and the small size of the ALK-1 gene make genomic sequencing a viable diagnostic test for HHT2. This was the only research about this subject made in Brazil so far / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutora em Genética e Biologia Molecular

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Orientador: Eliana Pereira de Araujo / Texto em português e inglês / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T05:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomes_FabianadeSouza_M.pdf: 1469055 bytes, checksum: 01ebfd4043c839e80e30bebeeb9bef95 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O desenvolvimento de métodos que tem por objetivo acelerar e melhorar a qualidade do processo de cicatrização de feridas tem impacto positivo na condução de distúrbios de cicatrização associados a inúmeras condições médicas. Neste estudo, avaliamos os efeitos moleculares, celulares e clínicos da aplicação tópica de 5-azacitidina na cicatrização de feridas em ratos. De acordo com estudos pregressos, a 5-azacitidina reduz a expressão de folistatina, que é um regulador negativo das ativinas. Estas, por sua vez, promovem o crescimento de células em diferentes tecidos, incluindo a pele. Ratos Wistar machos com oito semanas de vida foram submetidos a um ferimento cutâneo com punch de oito milímetros na região dorsal. A seguir os ratos foram aleatoriamente separados em grupo controle (veículo) ou submetidos à aplicação tópica de 5-azacitidina (10 mM), uma vez por dia por até 12 dias, iniciando-se no terceiro dia após a lesão. A documentação fotográfica e coleta de amostras ocorreram nos dias 5, 9 e 15. O emprego desta droga resultou em aceleração da cicatrização da ferida, (99,7±7,0% versus 71,2±2,8% no dia 15, p <0,01). Este resultado clínico foi acompanhado pela redução de aproximadamente três vezes na expressão protéica de folistatina. O exame histológico da pele revelou re-epitelização eficiente com aumento da expressão de queratinócitos e aumento significativo na expressão do gene de TGF-? além da diminuição significativa de citocinas, tais como TNF-? e IL-10. Analisamos também a proliferação celular na lesão de pele através do método de incorporação de BrdU. O número de células positivas para BrdU aumentou significativamente quando comparado ao controle. No entanto, quando folistatina exógena foi aplicada na pele em paralelo ao tratamento tópico de 5-azacitidina a maioria dos benefícios do medicamento foi perdida. Assim, 5-azacitidina atua, pelo menos em parte, através da via folistatina/ativina para melhorar a cicatrização de feridas em ratos. Este trabalho pertence à linha de pesquisa Processo de Cuidar em Saúde e Enfermagem / Abstract: The development of new methods aimed at improving wound healing may have an impact on the outcomes of a number of medical conditions. Here we evaluate the molecular and clinical effects of topical 5-azacytidine, a compound used in myelodysplasia, on the wound healing in rats. According to previous studies, 5-Azacytidine decreases the expression of follistatin 1, which is a negative regulator of activins. Activins, in turn, promote cell growth in different tissues, including the skin. Eight-week old male Wistar rats were submitted to an 8 mm punchwound in the dorsal region. After three days, rats were randomly assigned to either control or topical application of a solution containing 5-azacytidine (10mM), once a day. Photo documentation and collection of samples occurred at days 5, 9 and 15. Overall, 5-azacytidine resulted on a significant acceleration of complete wound healing (99.7% ±0.7.0 vs. 71.2%±2.8 on days 15; n=10; p<0,01). This was accompanied by an up to 3-fold reduction in follistatin expression. Histological examination of the skin revealed efficient reepithelization with increase in gene expression of TGF-? and keratinocytes markers, involucrin and citokeratin, besides the significant decrease of cytokines such as TNF-? and IL-10. In addition, we analyzed cell proliferation in injured skin employing the BrdU incorporation method. The treatment with 5-azacytidine led to a progressive increase of BrdU positive cells. Finally when recombinant follistatin was employed in the skin in parallel to topical 5-azacytidine most of the benefits of the drug were lost. Thus, 5-azacytidine acts, at least in part, through the follistatin/activin pathway to improve wound healing in rats. This study belongs to online research process Caring in Nursing and Health / Mestrado / Enfermagem e Trabalho / Mestra em Ciências da Saúde

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4384.pdf: 6022457 bytes, checksum: 1327718b29745e1447375271aa448490 (MD5) Previous issue date: 2012-04-10 / Universidade Federal de Sao Carlos / Nonalcoholic Fatty Liver disease (NAFLD) is characterized by fat accumulation in the liver and associated with obesity and insulin resistance. Activin A is a member of the transforming growth factor (TGF)-&#946; superfamily which inhibits hepatocyte growth and induces apoptosis. Follistatin is a glycoprotein which antagonizes the biological actions of activin. Exercise is an important therapeutic strategy to decrease the metabolic effects of obesity. In this study, we evaluated the pattern of Activin A and follistatin liver expression in obese rats submitted to swimming exercise. Adult male Wistar rats were allowed free access to standard rodent chow (control group, C) or HF diet (58% Kcal from fat, high-fat group, HF) during 12 weeks. Glucose tolerance test (GTT) and insulin tolerance test (ITT) were performed at 12 weeks. After 12 weeks, C and HF rats were randomly assigned to a swimming training group (C-Ex and HF-Ex) or a sedentary group (C-Sed and HF-Sed). C-Ex and HF-Ex swam for 45 minutes at 0900h and 1700h, 5 day week-1, for 4 weeks. After this period, rats were submitted again to GTT and then killed by decapitation. Plasma was collected for liver enzymes, alanine transaminase (ALT), aspartate transaminase (AST) and gammaglutamyl transaminase (GGT) determination. Liver was dissected and immediately frozen in liquid nitrogen and stored at -700 C for subsequent analysis. Actvin &#946;A subunit and follistatin mRNA was quantified by real time RT-PCR. HF developed insulin resistance according to GTT and ITT tests. ALT levels were significantly higher in HF-Sed than in C-Sed and significantly lower in HF-Ex than in HF-Sed. AST and GGT did not vary among the groups. Actvin &#946;A subunit mRNA was significantly higher in HF-Ex than in HF-Sed. Follistatin mRNA was significantly lower in C-Ex and HF-Ex compared to C-Sed and HF-Sed, respectively. There was no evidence of steatosis or inflammation (grade 0) in C. In contrast, in HF the severity of steatosis varied from grade 1 to grade 3. This was not associated with inflammation or fibrosis. After the training period, HF-Ex showed improvement in the extent of liver parenchyma damage, the severity of steatosis varying from grade 0 to grade 1. These data suggest that exercise may reduce the deleterious effects of high-fat diet on liver and the local expression of activin-follistatin may be involved. / A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é caracterizada pelo acúmulo de gordura no fígado e está associada à obesidade e à resistência insulínica. A activina A, membro da superfamília do fator de crescimento e transformação &#946; (TGF-&#946;), inibe o crescimento de hepatócitos e induz a apoptose. A folistatina é uma glicoproteína que antagoniza as ações biológicas da activina. O exercício é uma importante ferramenta terapêutica na diminuição dos efeitos metabólicos da obesidade. Neste estudo, foi avaliado o padrão de expressão de activina A e folistatina no fígado de ratos obesos submetidos ao exercício de natação. Ratos Wistar, machos e adultos tiveram acesso livre à dieta padrão (grupo controle, C) ou dieta hiperlipídica (58% Kcal de gordura, grupo dieta hiperlipídica, DH) durante 12 semanas. O teste de tolerância à glicose (TTG) e o teste de tolerância à insulina (TTI) foram realizados antes e após 3, 4, 8 e 12 semanas. Após 12 semanas, os animais C e DH foram distribuídos aleatoriamente em grupos exercício (CE e DHE) ou grupos sedentários (CS e DHS). Os grupos CE e DHE nadaram por 45 minutos às 9:00h e 17:00h, 5 vezes por semana, durante 4 semanas. Após este período, os animais foram submetidos novamente ao TTG e foram sacrificados por decapitação. O plasma foi coletado para analisar as enzimas hepáticas alanina transaminase (ALT), aspartato transaminase (AST) e gama glutamil transferase (GGT). O fígado foi dissecado e imediatamente congelado em nitrogênio líquido e armazenado a -80ºC para posterior análise. O RNAm da subunidade &#946;A de activina e folistatina foi quantificado por PCR-RT em tempo real. O grupo DH desenvolveu resistência à insulina de acordo com os testes TTG e TTI. Os níveis de ALT foram significativamente maiores no grupo DHS comparados com o grupo CS e significativamente menores no grupo DHE comparados com o grupo DHS. Os níveis de AST e GGT não variaram entre os grupos. A expressão da subunidade &#946;A de activina foi significativamente maior no grupo DHE comparada com o grupo DHS. A expressão de folistatina foi significativamente menor nos grupos CE e DHE comparado aos grupos CS e DHS, respectivamente. Não houve evidências de esteatose ou inflamação (grau 0) no grupo C. Porém, no grupo DH a severidade da esteatose variou do grau 1 ao grau 3, mas não foi associada com inflamação ou fibrose. Após o período de treinamento, o grupo DHE apresentou melhora na extensão da lesão do parênquima hepático, com severidade da esteatose variando do grau 0 ao grau 1. Estes dados sugerem que o exercício reduziu os efeitos deletérios da dieta hiperlipídica no fígado e a expressão local de activina-folistatina pode está envolvida.