Os venenos das serpentes são compostos protéicos complexos com extensas atividades biológicas. Estas moléculas abrangem até 95% do peso seco do veneno, e compreendem enzimas, toxinas não enzimáticas e proteínas atóxicas. Dentre as complicações fisiológicas, a Insuficiência Renal Aguda - IRA é bem comum nos acidentes crotálicos, onde as concentrações renais do veneno se apresentam até 50% maiores do que na concentração plasmática. A fração tóxica responsável por essa complicação é a crotoxina. O veneno das serpentes, quando irradiado com raios gama de 60Co, tem a sua toxicidade diminuída, entretanto, são mantidas as suas propriedades imunológicas. Nossa hipótese é que a utilização de veneno irradiado em substituição ao nativo pode reduzir a taxa de lesões renais em animais de grande porte durante a produção de soros antiofídicos, propiciando melhor qualidade de vida e bem estar desses animais. No presente estudo realizou-se o isolamento da crotoxina por técnicas cromatográficas, a partir do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus. Parte da toxina isolada foi reservada e denominada crotoxina nativa (CTXN) enquanto que outra parte foi irradiada com 2 kGy de raios gama oriundos de uma fonte de 60Co e denominada crotoxina irradiada (CTXI). Diferentes grupos de camundongos Balb/c receberam a toxina nativa ou irradiada e tiveram seus rins removidos em diferentes tempos pós-injeção da crotoxina. Realizou-se a nefrectomia dos animais e foi feito o preparo dos cortes histológicos em Hematoxilina-Eosina (HE) e cortes de imunohistoquímica com anticorpo policlonal de coelho anticrotoxina. As alterações histopatológicas encontradas nas amostras foram glomerulonefrite (GN), congestão capilar (CC) e necrose tubular aguda (NTA). Verificou-se que a GN teve maior ocorrência no grupo CTXN que no grupo CTXI. A NTA foi dominante no grupo CTXN em relação ao grupo CTXI. A CC foi predominante no grupo CTXI que no grupo CTXN. Entretanto esta diferença não é estatisticamente significante segundo o teste t Student de amostras independentes. O tratamento imunohistoquímico revelou que a concentração de antígeno marcado com o anticorpo é decrescente segundo os intervalos de tempo de eutanásia dos animais do grupo inoculado com CTXI, pois a crotoxina quando irradiada tem a sua excreção renal facilitada. Conclui-se que as alterações histopatológicas GN e a NTA foram significativamente menos frequentes em rins de animais inoculados com CTXI. Diferentemente da crotoxina nativa, a crotoxina irradiada é detectada pelo anticorpo anticrotoxina apenas nos tempos intermediários pós-inoculação e em baixa concentração, indicando que a radiação gama promoveu mudanças na forma de ligação da toxina ao tecido renal, facilitando sua eliminação e diminuindo, portanto, as chances de lesão. Esses resultados reforçam as evidências de que o uso de veneno irradiado no processo de imunização garante uma melhor qualidade de vida e bem estar aos animais soroprodutores. / Snake venoms are complex mixtures of proteins and peptides with a wide spectrum of physiological targets such as the blood coagulation and cardiovascular systems and the motor end plate among others. Acute renal failure is a common complication in accidents with the South American rattlesnake. The toxin involved in this pathology is crotoxin, a major component of the venom in terms of concentration and toxicity. Snake venoms, when irradiated with 60Co gamma rays present a significant decrease in toxicity while the immunogenic properties of its components are preserved. The use of irradiated rattlesnake venom is an attractive alternative for antisera production since it might reduce the appearance of renal lesions improving the welfare and lifespan of animals employed for antivenom production. In the present work, we have isolated crotoxin from crude venom of C. d. terrificus and irradiates part of it with 2 kGy of gamma rays from 60Co and compared the effects of native (CTXN) and irradiated (CTXI) crotoxin on the mice renal function. We conducted nephrectomy of animals and preparation of histological sections with hematoxylin-eosin (HE) and immunohistochemistry with polyclonal rabbit anticrotoxin for analysis in optical microscopy. Histopatological changes found in the samples were glomerulonephritis (GN), capillary congestion (CC) acute kidney tubular necrosis (NTA). Immunohistochemistry indicates that the concentration of bound antibody labelled antigen decreases in a time dependent manner. The GN ante NTA were significantly less frequent in kidneys of animals inoculated with irradiated toxin. The capillary congestion was evidenced in all animals treated with irradiated or native crotoxin. Concluding, ionizing radiation appears to mitigate the nephrotoxic effects of crotoxin and may represent an alternative for antivenin production, improving welfare for seroproductor animal.

Os venenos das serpentes são compostos protéicos complexos com extensas atividades biológicas. Estas moléculas abrangem até 95% do peso seco do veneno, e compreendem enzimas, toxinas não enzimáticas e proteínas atóxicas. Dentre as complicações fisiológicas, a Insuficiência Renal Aguda - IRA é bem comum nos acidentes crotálicos, onde as concentrações renais do veneno se apresentam até 50% maiores do que na concentração plasmática. A fração tóxica responsável por essa complicação é a crotoxina. O veneno das serpentes, quando irradiado com raios gama de 60Co, tem a sua toxicidade diminuída, entretanto, são mantidas as suas propriedades imunológicas. Nossa hipótese é que a utilização de veneno irradiado em substituição ao nativo pode reduzir a taxa de lesões renais em animais de grande porte durante a produção de soros antiofídicos, propiciando melhor qualidade de vida e bem estar desses animais. No presente estudo realizou-se o isolamento da crotoxina por técnicas cromatográficas, a partir do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus. Parte da toxina isolada foi reservada e denominada crotoxina nativa (CTXN) enquanto que outra parte foi irradiada com 2 kGy de raios gama oriundos de uma fonte de 60Co e denominada crotoxina irradiada (CTXI). Diferentes grupos de camundongos Balb/c receberam a toxina nativa ou irradiada e tiveram seus rins removidos em diferentes tempos pós-injeção da crotoxina. Realizou-se a nefrectomia dos animais e foi feito o preparo dos cortes histológicos em Hematoxilina-Eosina (HE) e cortes de imunohistoquímica com anticorpo policlonal de coelho anticrotoxina. As alterações histopatológicas encontradas nas amostras foram glomerulonefrite (GN), congestão capilar (CC) e necrose tubular aguda (NTA). Verificou-se que a GN teve maior ocorrência no grupo CTXN que no grupo CTXI. A NTA foi dominante no grupo CTXN em relação ao grupo CTXI. A CC foi predominante no grupo CTXI que no grupo CTXN. Entretanto esta diferença não é estatisticamente significante segundo o teste t Student de amostras independentes. O tratamento imunohistoquímico revelou que a concentração de antígeno marcado com o anticorpo é decrescente segundo os intervalos de tempo de eutanásia dos animais do grupo inoculado com CTXI, pois a crotoxina quando irradiada tem a sua excreção renal facilitada. Conclui-se que as alterações histopatológicas GN e a NTA foram significativamente menos frequentes em rins de animais inoculados com CTXI. Diferentemente da crotoxina nativa, a crotoxina irradiada é detectada pelo anticorpo anticrotoxina apenas nos tempos intermediários pós-inoculação e em baixa concentração, indicando que a radiação gama promoveu mudanças na forma de ligação da toxina ao tecido renal, facilitando sua eliminação e diminuindo, portanto, as chances de lesão. Esses resultados reforçam as evidências de que o uso de veneno irradiado no processo de imunização garante uma melhor qualidade de vida e bem estar aos animais soroprodutores. / Snake venoms are complex mixtures of proteins and peptides with a wide spectrum of physiological targets such as the blood coagulation and cardiovascular systems and the motor end plate among others. Acute renal failure is a common complication in accidents with the South American rattlesnake. The toxin involved in this pathology is crotoxin, a major component of the venom in terms of concentration and toxicity. Snake venoms, when irradiated with 60Co gamma rays present a significant decrease in toxicity while the immunogenic properties of its components are preserved. The use of irradiated rattlesnake venom is an attractive alternative for antisera production since it might reduce the appearance of renal lesions improving the welfare and lifespan of animals employed for antivenom production. In the present work, we have isolated crotoxin from crude venom of C. d. terrificus and irradiates part of it with 2 kGy of gamma rays from 60Co and compared the effects of native (CTXN) and irradiated (CTXI) crotoxin on the mice renal function. We conducted nephrectomy of animals and preparation of histological sections with hematoxylin-eosin (HE) and immunohistochemistry with polyclonal rabbit anticrotoxin for analysis in optical microscopy. Histopatological changes found in the samples were glomerulonephritis (GN), capillary congestion (CC) acute kidney tubular necrosis (NTA). Immunohistochemistry indicates that the concentration of bound antibody labelled antigen decreases in a time dependent manner. The GN ante NTA were significantly less frequent in kidneys of animals inoculated with irradiated toxin. The capillary congestion was evidenced in all animals treated with irradiated or native crotoxin. Concluding, ionizing radiation appears to mitigate the nephrotoxic effects of crotoxin and may represent an alternative for antivenin production, improving welfare for seroproductor animal.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-30T18:14:04Z No. of bitstreams: 1 Maria Brandão Tavares Insufuciencia renal aguda em pacientes....pdf: 663822 bytes, checksum: 274b01e71441d9fca8554368ed006f32 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-30T18:14:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Brandão Tavares Insufuciencia renal aguda em pacientes....pdf: 663822 bytes, checksum: 274b01e71441d9fca8554368ed006f32 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A insuficiência renal aguda é comum em pacientes com síndrome nefrótica, podendo requerer terapia de substituição renal e ser irreversível. A insuficiência renal aguda nesses pacientes pode ser precipitada por processos infecciosos, hipovolemia, drogas nefrotóxicas; entretanto na maioria dos casos a etiologia não é identificada e a insuficiência renal aguda é considerada idiopática. A necrose tubular aguda foi associada à insuficiência renal aguda em adultos com lesão mínima. O objetivo deste estudo é avaliar a correlação entre a necrose tubular aguda definida histologicamente com insuficiência renal aguda em pacientes com doença glomerular. Biópsias renais de pacientes com glomerulopatia foram analisadas quanto à intensidade da necrose tubular aguda e esses dados correlacionados com os dados clínicos e presença de insuficiência renal aguda. A análise foi realizada em duas amostras e a intensidade de necrose tubular aguda graduada de duas formas: na primeira amostra a intensidade de necrose tubular aguda foi graduada em cinco níveis de intensidade; na segunda amostra foi feita uma estimativa em percentual da área da cortical acometida. A acurácia da análise semiquantitativa na primeira amostra foi avaliada por meio da correlação com análise morfométrica relativa ao número de túbulos com características necróticas por área de cortical (Spearman r=0,88, P<0,0001) e ao percentual de área da cortical com necrose tubular aguda (Spearman r=0,93, P<0,0001). A reprodutibilidade da análise intraobservador foi regular (kappa=0,53, P<0,0001). A primeira amostra constou de 149 casos com idade média de 21±16 anos. A síndrome nefrótica esteve presente em 104 (72%) pacientes e os principais diagnósticos foram: doenças do espectro Lesão Mínima – Glomeruesclerose Segmentar e Focal (45%). Necrose tubular aguda foi observada em 114 (77%) pacientes. insuficiência renal aguda foi diagnosticada em 43 (42%) pacientes. Houve correlação positiva entre a intensidade da necrose tubular aguda e a presença de insuficiência renal (gamma=0,70, P<0,0001). A segunda amostra foi composta por 80 pacientes com idade média 32 ± 18 anos. Síndrome nefrótica foi diagnosticada em 72 (90%) casos e os principais diagnósticos foram as doenças do espectro lesão mínima-Glomeruloesclerose segmentar e focal (54, 68%). Necrose tubular aguda foi observada em 60 (75%) pacientes e insuficiência renal aguda foi diagnosticada em 28 (35%) casos. A intensidade de necrose tubular aguda foi maior nos pacientes com (29,1 ± 27,7) que nos pacientes sem insuficiência renal aguda (5.4 ± 5.1, P<0,0001). A presença de necrose tubular aguda apresentou alta especificidade para diagnóstico de insuficiência renal aguda quando estimada em 10% da cortical representada (especificidade 96,1%, curva ROC [AUC=0,832, P<0,0001]). Não houve diferença entre os grupos com e sem insuficiência renal aguda em relação ao sexo, proteinúria, doença renal e albumina sérica, colesterol e triglicérides. A freqüência de hipertensão arterial sistêmica foi maior no grupo com insuficiência renal aguda com idade mais elevada (P=0,015). / Acute renal failure is common in patients with nephrotic syndrome and may require substitutive renal therapy and be irreversible. Acute renal failure in these patients may be precipitated by infection, hypovolemia and nephrotoxic drugs. However, in most cases the etiology of acute renal failure is not identified and the condition is considered idiopathic. Acute tubular necrosis was associated with acute renal failure in adults with minimal change disease. The aim of this study is to estimate the association between the histologically defined acute tubular necrosis with acute renal failure in patients with glomerular disease. Renal biopsies of patients with renal disease were analyzed for the intensity of acute tubular necrosis and these data correlated with the clinical data incouding presence of acute renal failure. The analysis was performed on two samples and the intensity of acute tubular necrosis was estimated in two ways: in the first sample the intensity of acute tubular necrosis was graded into five levels of intensity, in the second sample an estimate was made of the percentage of cortical area affected by acute tubular necrosis. The accuracy of the semiquantitative analysis in the first sample was evaluated by correlation with morphometric estimate of the number of necrotic tubules in a given cortical area (Spearman r = 0.88, P <0.0001) and the percentage of cortical area with acute tubular necrosis (Spearman r = 0.93, P <0.0001). The intraobserver reproducibility of the analysis was fair (kappa = 0.53, P <0.0001). The first sample consisted of 149 cases with mean age of 21 ± 16 years. Nephrotic syndrome was present in 104 (72%) and the main diagnoses were: disease spectrum Minimal Change - Focal and Segmental glomerulosclerosis (45%). Acute tubular necrosis was observed in 114 (77%) patients. Acute renal failure was diagnosed in 43 (42%) patients. There was a positive correlation between the intensity of tubular necrosis and acute renal failure (gamma = 0.70, P <0.0001). The second sample consisted of 80 patients with mean age of 32 ± 18 years. Nephrotic syndrome was diagnosed in 72 (90%) and the main diagnoses were diseases of the spectrum, Minimal Change-Focal and segmental glomerulosclerosis (54, 68%). Acute tubular necrosis was observed in 60 (75%) patients and acute renal failure was diagnosed in 28 (35%). The intensity of acute tubular necrosis was higher in patients with (29 ± 8) than in patients without acute renal failure (5 ± 5, P <0.0001). The presence of acute tubular necrosis showed high specificity for diagnosis of acute renal failure when 10% of represented cortical had necrotic tubules (96.1% specificity, ROC curve [AUC = 0.832, P <0.0001]). No difference between groups with or without acute renal failure was observed in relation to gender, proteinuria, kidney disease and serum albumin, cholesterol and triglycerides. The frequency of hypertension was higher in patients with acute renal failure with higher age (P = 0.015).

Ultrasound measurement of change in kidney volume is a sensitive indicator of severity of renal parenchymal injury. Am J Physiol Renal Physiol 319: F447–F457, 2020. First published July 20, 2020; doi:10.1152/ajprenal.00221.2020.—Noninvasive determination of the severity of parenchymal injury in acute kidney injury remains challenging. Edema is an early pathological process following injury, which may correlate with changes in kidney volume. The goal of the present study was to test the hypothesis that “increases in kidney volume measured in vivo using ultrasound correlate with the degree of renal parenchymal injury.” Ischemia-reperfusion (IR) of varying length was used to produce graded tissue injury. We first determined 1) whether regional kidney volume in rats varied with the severity (0, 15, 30, and 45 min) of warm bilateral IR and 2) whether this correlated with tubular injury score. We then determined whether these changes could be measured in vivo using three-dimensional ultrasound. Finally, we evaluated cumulative changes in kidney volume up to 14 days post-IR in rats to determine whether changes in renal volume were predictive of latent tubular injury following recovery of filtration. Experiments concluded that noninvasive ultrasound measurements of change in kidney volume over 2 wk are predictive of tubular injury following IR even in animals in which plasma creatinine was not elevated. We conclude that ultrasound measurements of volume are a sensitive, noninvasive marker of tissue injury in rats and that the use of three-dimensional ultrasound measurements may provide useful information regarding the timing, severity, and recovery from renal tissue injury in experimental studies.

Pesquisas com células tronco têm demonstrado que essa alternativa terapêutica tem grande potencial em diversas patologias. Contudo, muito ainda precisa ser elucidado quanto aos mecanismos de ação, dose e melhores vias de aplicação, para que essa alternativa terapêutica seja efetivamente incorporada às outras. Neste contexto, a via de aplicação se torna crucial na efetividade do tratamento. O objetivo do presente estudo foi avaliar no modelo de necrose tubular aguda (NTA) induzido pelo glicerol o potencial de migração das células tronco mesenquimais derivadas de polpa dentária humana, utilizando as vias intraperitoneal e a via intravenosa. Os nossos resultados demonstraram que neste modelo, não há diferença na migração das células para o órgão alvo, o rim. Contudo, a via intravenosa proporcionou uma melhora da função renal mais significativa do que quando comparada a via intraperitoneal. / Stem cell research have demonstrated that this alternative therapy has great potential in various diseases. However, much remains to be elucidated about the mechanisms of action, dosage and best means of implementation, so that alternative therapy may be incorporated other. In this context, the route of application becomes crucial in the effectiveness of treatment. The aim of this study was to evaluate the model of acute tubular necrosis (NTA) induced by glycerol the potential for migration of mesenchymal stem cells derived from human dental pulp, using the intraperitoneal and intravenous route. Our results demonstrate that this model, there is no difference in cell migration to the target organ, the kidney. However, the intravenous route provided an improvement in renal function more significantly than when compared to the intraperitoneal route.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-07-23T16:46:26Z No. of bitstreams: 1 CarolineVilas Boas Marcadores de necrose...2015pdf.pdf: 1302220 bytes, checksum: 613dbdf2246da02be096b6c54c07f4c7 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-07-23T16:46:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 CarolineVilas Boas Marcadores de necrose...2015pdf.pdf: 1302220 bytes, checksum: 613dbdf2246da02be096b6c54c07f4c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T16:46:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolineVilas Boas Marcadores de necrose...2015pdf.pdf: 1302220 bytes, checksum: 613dbdf2246da02be096b6c54c07f4c7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Necrose tubular aguda (NTA) é a causa mais frequente de lesão renal aguda (LRA) em pacientes hospitalizados. Em pacientes com síndrome nefrótica (SNO), a NTA mimetiza, por vezes, quadro de glomerulonefrite rapidamente progressiva e requer instituição precoce de imunossupressores. A análise do sedimento urinário é uma ferramenta não invasiva, de baixo custo e ampla disponibilidade. O achado de células epiteliais no sedimento urinário de pacientes com LRA foi associado ao diagnóstico de NTA. Entretanto, estudos em pacientes com SNO associada são escassos. Técnicas de diagnóstico utilizando sedimento urinário corado normalmente não são utilizadas nesses casos. Além do mais, o sedimento urinário é uma importante fonte de proteínas; estudos proteômicos do sedimento urinário revelaram importantes frações de proteínas não encontradas em sobrenadante, que pode ser usado como potencial biomarcador de LRA. Nosso objetivo é identificar alterações citológicas e protéicas no sedimento urinário que permitam o diagnóstico diferencial entre NTA ou lesão inflamatória-proliferativa glomerular (INF) em pacientes com SNO. Trata-se de um estudo de corte transversal, onde foram incluídos 32 pacientes: 5 pacientes normais (grupo controle), 10 com NTA, 9 sem NTA e 8 com glomerulonefrites exsudativas. As células do sedimento urinário foram contadas, citocentrifugadas, coradas em hematoxilina/eosina ou Papanicolaou e contadas diferencialmente como pequenas (<30μm de diâmetro), médias (30-48μm) e grandes (>48μm) ou classificadas por fenótipo (escamosas, uroteliais, tubulares e leucócitos). A média de creatinina sérica foi 1,6±1,2 mg/dL e mediana da proteinúria/24h foi 8279[3482– 13662] mg. Os diagnósticos histológicos mais frequentes foram Lesão Mínima e Glomerulopatia Membranosa em pacientes sem glomerulonefrites exsudativas com ou sem NTA, e Nefrite Lúpica em pacientes com glomerulonefrites exsudativas. A análise morfométrica por tamanho de células mostrou menor proporção de células pequenas (P=0,05) e maior de células grandes (P=0,01) no grupo de pacientes normais comparado ao grupo de pacientes com NTA ou INF, enquanto na análise fenotípica a proporção de células escamosas é maior no grupo controle que os grupos com NTA (P=0,01) ou INF (P=0,01). O número de leucócitos foi maior em pacientes com INF (50%) que nos pacientes sem INF (13%, P=0,05). A eletroforese de amostras de 32 pacientes revela importante fração proteica em termos de quantidade e variabilidade no sedimento urinário de pacientes com síndrome nefrótica. Nossos dados sugerem que o achado de leucócitos pode ser um parâmetro para identificação diferencial de pacientes com lesões inflamatórias-proliferativas glomerulares e a eletroforese do sedimento urinário tem importante perfil de bandas para pesquisa de biomarcadores para o diagnóstico diferencial não invasivo e rápido de lesão renal aguda em pacientes com síndrome nefrótica. / Acute tubular necrosis (ATN) is the most frequent cause of acute kidney injury (AKI) in hospitalized patients. In patients with nephrotic syndrome (NS), acute tubular necrosis mimic, sometimes, rapidly progressive glomerulonephritis and requires premature institution of immunosuppressive treatment. The analysis of urinary sediment is a noninvasive tool, low cost and wide availability. The found of epithelial cells in the urinary sediment of patients with AKI was associated to ATN diagnosis. However, studies in patients with AKI in the set of NS are scarce. Diagnostics techniques using stained urinary sediment are not ordinarily used in these cases. Furthermore, urinary sediment is an important source of proteins; proteomic studies revealed important fractions of proteins not found in urinary supernatant that could be used as potential biomarkers for AKI. Our goal is identify cytological alterations and protein in urinary sediment which allow the differential diagnosis between ATN and inflammatory-proliferative glomerular lesion (INF) in patients with NS. This is a cross sectional study, in which 32 patients were included: 5 normal patients (control group), 10 with ATN, 9 without ATN and 8 with exudative glomerulonephritis. The cells of urinary sediment were counted, cytocentrifuged, stained of hematoxylin/eosin or Papanicolaou and differentially counted as small (<30μm of diameter), medium (30-48μm) and large (>48μm) or classified for phenotype (scamous, urothelial, tubular and leucocyte cells). The mean of serum creatinine was 1,6±1,2 mg/dL and median of proteinuria/24h was 8279[3482– 13662] mg. The most frequent diagnostics were Minimal Lesion and Membranous Glomerulopathy in patients with or without ATN and Lupus Nephritis in patients with exudative glomerulonephritis. The morphometric analysis for size of cells showed smaller proportion of small cells (P=0,05) and bigger of large cells (P=0,01) in group of normal patients compared to group of patients with ATN or INF, while in phenotypic analysis the proportion of scamous cells is larger in control group than in ATN (P=0,01) or INF (P=0,01) groups. The number of leucocytes was bigger in patients with INF (50%) compared with patiens without INF (13%, P=0,05). The electrophoretic analysis of 32 patients reveal important protein fraction in terms of quantity and variability in urinary sediment of NS patients. Our data suggests that leukocytes can be a parameter to identify patients with proliferative-inflammatory glomerular lesion and the electrophoresis of urinary sediment has important bands profile to proteomic research of biomarkers to differential diagnosis of acute kidney injury in patients with nephrotic syndrome.

Pesquisas com células tronco têm demonstrado que essa alternativa terapêutica tem grande potencial em diversas patologias. Contudo, muito ainda precisa ser elucidado quanto aos mecanismos de ação, dose e melhores vias de aplicação, para que essa alternativa terapêutica seja efetivamente incorporada às outras. Neste contexto, a via de aplicação se torna crucial na efetividade do tratamento. O objetivo do presente estudo foi avaliar no modelo de necrose tubular aguda (NTA) induzido pelo glicerol o potencial de migração das células tronco mesenquimais derivadas de polpa dentária humana, utilizando as vias intraperitoneal e a via intravenosa. Os nossos resultados demonstraram que neste modelo, não há diferença na migração das células para o órgão alvo, o rim. Contudo, a via intravenosa proporcionou uma melhora da função renal mais significativa do que quando comparada a via intraperitoneal. / Stem cell research have demonstrated that this alternative therapy has great potential in various diseases. However, much remains to be elucidated about the mechanisms of action, dosage and best means of implementation, so that alternative therapy may be incorporated other. In this context, the route of application becomes crucial in the effectiveness of treatment. The aim of this study was to evaluate the model of acute tubular necrosis (NTA) induced by glycerol the potential for migration of mesenchymal stem cells derived from human dental pulp, using the intraperitoneal and intravenous route. Our results demonstrate that this model, there is no difference in cell migration to the target organ, the kidney. However, the intravenous route provided an improvement in renal function more significantly than when compared to the intraperitoneal route.

Sepsis and septic shock remain major cause of mortality in non-coronary intenisve care units. Prognosis of septic patiens worsens further in case of concomitant acute kidney injury. Pathophysiological pathways leading to renal dysfunction in sepsis remain unclear despite of enormous experimental and clinical research. Similarly, the role of extracorporeal blood purification techniques as an adjunctive treatment in sepsis is highly controversial. The aim of our study was to dynamically assess renal haemodynamic, microvascular and metabolic responses in a porcine clinically relevant model of septic shock. The same experimental model was used in experiments elucidating potential benefit effects of two distinct haemopurification methods on different biological responses to infectious insult.

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A lesão renal aguda (LRA) é uma séria complicação dos pacientes hospitalizados, causada principalmente pela isquemia/reperfusão (I/R). Ela é definida como um abrupto declínio da função renal baseada em alterações agudas da creatinina sérica e débito urinário. Porém, alterações na creatinina sérica são tardias e variam com o gênero, idade, massa muscular, metabolismo e hidratação do indivíduo. Novos biomarcadores para um diagnóstico mais preciso e precoce da doença são necessários. No entanto, devido em humanos a LRA ser uma doença, em sua maioria, secundária a outras doenças, o desenvolvimento de modelos animais com resposta similar aos humanos é de extrema importância. Assim, o presente estudo tem como objetivo o desenvolvimento e caracterização de um modelo suíno de I/R renal, seguido da identificação de alterações nos perfis metabólicos séricos durante à I/R renal aguda. Além de colaborar com o melhor entendimento da fisiopatologia da doença, pode prover novos biomarcadores com potencial uso no diagnóstico e prognóstico através do monitoramento dos pacientes hospitalizados. Primeiramente, foi desenvolvido um modelo controlado e percutâneo, com único insulto de I/R renal, sem nefrectomia contralateral usando suínos como modelo. A isquemia foi induzida por um cateter-balão inflado por 120min na artéria renal direita seguida de 24 horas de reperfusão. Amostras seriadas de soro e urina foram coletadas. A caracterização do modelo foi feita por análises histológicas e bioquímicas, e a identificação de novos biomarcadores, através da ressonância magnética nuclear (600MHz) seguida da análise por PLS-DA e biologia de sistemas. A necrose tubular aguda foi identificada em todos os animais, porém apenas dois deles apresentaram níveis de creatinina sérica acima de 150% dos seus valores basais. Como esperado, a I/R elevou os níveis de uréia e creatinina e ainda modulou a excreção de Na+, K+, Cl-, bicarbonato e glicose. A NGAL e as proteínas nitradas séricas apresentaram dois perfis: diminuíram com a isquemia e aumentaram com a reperfusão. Este declínio foi associado com o aumento da excreção de proteínas durante a isquemia e início da reperfusão. A partir deste modelo de I/R renal desenvolvido, selecionamos 8 marcadores metabólicos: L-glutamato, L-serina, N-isovaleroilglicina, L-metionina, L-prolina, 2-aminobutirato, colina e creatinina. Estes metabólitos foram capazes de distinguir indivíduos saudáveis e isquêmicos, restaurando seus valores após 11 horas da reperfusão. Através da análise de biologia de sistemas, estes metabólitos se mostraram altamente representativos da via dos aminoácidos, se relacionaram com alterações no transporte iônico e foram associados às vias do fator nuclear kappa B (NF?B), huntingtina (HTT) e pró-insulina. Assim, foi possível desenvolver um modelo de I/R renal percutâneo em modelo suíno, capaz de permitir o desenvolvimento de estudos para explorar respostas fisiopatológicas e novos biomarcadores isquêmicos renais. A partir dele, com ferramentas metabolômicas, foi possível elaborar um painel metabólico que contribui para o estudo da fisiopatologia da isquemia e pode tornar-se uma ferramenta promissora para a identificação precoce de pacientes com LRA geradas pela I/R renal / Acute kidney injury (AKI) is a serious complication in hospitalized patients mainly caused by ischemia/reperfusion. AKI is defined as the abrupt decrease in kidney function based on acute alterations in serum creatinine or urine output. Nevertheless, changes in serum creatinine are late and vary with muscular mass, age, gender, metabolism and hydration of individuals. In this sense, new biomarkers for the accurate and early diagnosis are needed. In humans LRA is a secondary disease, related to the progress of other diseases. Thus, the development of animal models with similar response to humans is extremely important. This study aimed to develop and characterize a swine model of renal ischemia/reperfusion (I/R), followed by the identification of changes in serum metabolic profiles during acute renal I/R. In addition to collaborating with a better understanding of the physiopathology of the disease, these findings may provide new biomarkers with potential use in diagnosis and prognosis through the monitoring hospitalized patients. Here we report the development of a controlled, single-insult model of unilateral renal I/R without contralateral nephrectomy, using a suitable model, the pig. Animals underwent renal ischemia by balloon catheter placed and inflated into the right renal artery for 120 minutes and reperfusion over 24 hours. Serial serum and urine were sampled. The characterization of the renal I/R model was made by histological and biochemical analyzes. Identification of new biomarkers was performed by nuclear magnetic resonance (600MHz) followed by PLS-DA analysis and systems biology. Acute tubular necrosis (ATN) was identified in every animal, but only two animals showed levels of serum creatinine above 150% of baseline values. As expected, I/R increased serum creatinine and BUN. Fractional sodium, potassium, chloride, bicarbonate and glucose excretion were modulated during ischemia. Serum nitrated proteins and NGAL presented two profiles: decreased with ischemia and increased after reperfusion. This decline was associated with increased protein excretion during ischemia and early reperfusion. From this renal I/R model developed, eight metabolites were selected: L-glutamate, L-serine, N-isovaleroylglicine, L-methionine, L-proline, 2-aminobutyrated, choline and creatinine. PLS-DA analysis for these metabolites resulted in an accurate separation between pre ischemia and ischemia groups. All selected metabolites recovered to baseline conditions after 11 hours of reperfusion. Through network analysis we found changes in H+, Na+ and Cl- ion transport pathways and association with Nuclear Factor-KappaB (NF?B), Huntingtin (HTT) and proinsulin (insulin) pathways. Thus, it was possible to develop a percutaneous model of renal I/R in swine model, allowing the development of studies to explore physiopathology responses and new renal ischemic biomarkers. With this model and metabolomic tools, it was possible to develop a metabolic panel that contributes to the study of ischemia physiopathology and may become a promising tool for the early identification of patients with AKI generated by renal I/R