CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / The Epstein-Barr virus (EBV) has been related to the tumorigenesis of the gastric carcinomas, varying from 1.3-19.3% according to the studied population. Several studies have demonstrated strong evidences of its relation in this process, such as the monoclonality of the viral genome and its the presence in almost all tumor cells. However, most of the mechanisms used by the virus to control this process are still unknown. In this context, the present study aimed to investigate the frequency of the EBV and the association with the BCL-2, BAX and c-MYC proteins. Therefore, 100 cases of gastric carcinoma (67 males and 33 females), obtained from two hospitals in Fortaleza, were assessed to detect the EBV by PCR and in situ hybridization (aimed to the EBER1 transcript) using the standard method and GenPointÂ. Immunohistochemistry technique was done to evaluate the expression of the referred cellular proteins, by streptavidin-biotin-peroxidase method. The distribution by sex, age, tumor anatomic site and the histopathologic analysis, in general, reproduced the pattern of the world scientific bibliographies. Regarding virus detection by in situ hybridization, 8 (8%) cases were positive, 6 of these had shown diffuse pattern of staining, and 2 had demonstrated focal pattern. From 100 cases, only 2 presented infected lymphocytes. In general, the EBV demonstrated higher association with: males (87.5%[p=0.265]), tumors situated in the cardia (37.5% [p=0.549]), advanced stage (IIIB and IV), intestinal type (87.5%[p=0.136]), and moderately differentiated (75%).There were no EBV-positive cases which exhibited BCL-2 staining. Although the BAX and the c-MYC (nuclear) proteins have demonstrated significant positivity index and scores averages in the EBV-positive group, these were lower than the values of the EBV-negative group, notably the c-MYC nuclear protein (Mann-Withney test LI p=0.039 and HS p=0.045). The cytoplasmic staining of the c-MYC protein revealed slightly higher staining values in the EBV-positive group. The balance between the BCL-2 and BAX proteins demonstrated that the majority of the evaluated cases had exhibited apoptosis-orientation, however 62.3% of the EBV-positive cases exhibited equilibrium between these proteins. Twenty-nine cases (28 negative and 1 positive) were submitted to the biotinyl tyramide system (in situ hybridization method - GenPointÂ), demonstrating the same results obtained by the standard technique. From the 61 cases assessed by PCR, 35 (57.4%) were positive, being verified a low concordance index (kappa = -0.026 [Â0.069]) with the standard in situ hybridization technique. The 30bp deletion of LMP1 gene was investigated in 24 out of 35 positive cases, being verified in 37.5% of these. The results obtained in the present study, concerning the EBV frequency and the correlation with clinic-histopathologic data, reproduced findings of researches done in several world regions. The correlation with the proteins suggests that in vivo the virus is not related to the overexpression of BCL-2 and c-MYC (nuclear) that could act in synergism to promote the tumor development. The suppression of the BAX expression might represent a viral mechanism for apoptosis inhibition. The results of the cytoplasmic c-MYC point to a possible involvement of the EBV with transport mechanisms of the nuclear membrane, resulting in its accumulation in the cytoplasm. The low frequency of infected lymphocytes indicates that they are not the main responsible of the high number of positivity in the PCR technique. It could be, at least in part, due to the infected normal and/or pre-neoplastic epithelium, suggesting a new latency pattern which not express the EBER1. / O vÃrus Epstein-Barr (EBV) tem sido associado com a tumorigÃnese dos adenocarcinomas gÃstricos, variando entre 1,3-19,3% de acordo com a populaÃÃo estudada. Diversos estudos tÃm demonstrado importantes evidÃncias do envolvimento do EBV nesse processo, tais como a monoclonalidade do genoma viral e a presenÃa do vÃrus em quase todas as cÃlulas tumorais do sitio primÃrio e em cÃlulas metastÃticas. No entanto, os mecanismos utilizados pelo vÃrus para orquestrar a transformaÃÃo tumoral, ainda nÃo foram totalmente elucidados. Neste contexto, o presente estudo objetivou investigar a freqÃÃncia do EBV e a associaÃÃo com as proteÃnas BCL-2, BAX e c-MYC. Para tanto, 100 casos de adenocarcinomas gÃstricos (67 homens e 33 mulheres), obtidos de dois hospitais de Fortaleza, foram analisados quanto à presenÃa do EBV, detectado atravÃs das tÃcnicas de PCR e de hibridaÃÃo in situ (direcionada ao transcrito viral EBER1) pelo mÃtodo usual e GenPointÂ. Procedeu-se tambÃm, estudo imuno-histoquÃmico das referidas proteÃnas celulares, atravÃs do mÃtodo da estreptoavidina-biotina-peroxidase. A distribuiÃÃo por sexo, idade, sÃtio anatÃmico do tumor e as anÃlises histopatolÃgicas, de modo geral, reproduziram as tendÃncias da literatura mundial. Pela tÃcnica de hibridaÃÃo in situ, 8 (8%) casos foram positivos, 6 destes apresentaram marcaÃÃo difusa e 2 apresentaram marcaÃÃo focal. Apenas 2 apresentaram linfÃcitos infectados. De modo geral, o EBV apresentou maior associaÃÃo com o sexo masculino (87,5% [p=0,265]), com tumores situados na cÃrdia (37,5% [p=0,549]), de estadiamento avanÃado (IIIB e IV), do tipo intestinal (87,5% [p=0,136]) e moderadamente diferenciados (75%). Nenhum dos casos EBV-positivos exibiram marcaÃÃo para BCL-2. Embora as proteÃnas BAX e c-MYC (nuclear) apresentaram Ãndices de positividade e mÃdias de escores significativos no grupo EBV-positivo, estes foram inferiores aos valores do grupo EBV-negativo, sobretudo a proteÃna c-MYC nuclear (Teste de Mann-Withney LI p=0,039 e HS p=0,045). A marcaÃÃo citoplasmÃtica da proteÃna c-MYC revelou valores de marcaÃÃo discretamente superiores no grupo EBV-positivo. O balanÃo entre as proteÃnas BCL-2 e BAX demonstrou que a maioria dos casos estudados apresentavam tendÃncia à apoptose, mas 62,5% dos casos EBV-positivos exibiram um equilÃbrio. Vinte e nove casos (28 negativos e 1 positivo) foram submetidos a outro mÃtodo de hibridaÃÃo in situ que emprega o sistema da biotinil-tiramida (GenPointÂ),demonstrando resultados idÃnticos aos obtidos pela tÃcnica convencional. De 61 casos analisados atravÃs da tÃcnica de PCR, 35 (57,4%) foram positivos, sendo constatado um baixÃssimo Ãndice de concordÃncia (kappa = -0,026 [Â0,069]) com a tÃcnica de hibridaÃÃo in situ. Em 24/35 casos positivos, a deleÃÃo de 30pb do gene LMP1 foi investigada, sendo constatada em 37,5% destes. Os resultados obtidos no presente estudo quanto à freqÃÃncia do EBV e a correlaÃÃo com critÃrios clÃnico-histopatolÃgicos, reproduziram os achados de estudos realizados em diversas partes do mundo. A correlaÃÃo com as proteÃnas sugere que in vivo, o vÃrus nÃo esteja relacionado com a expressÃo de BCL-2 e de c-MYC (nuclear), que poderiam atuar em sinergismo favorecendo o desenvolvimento tumoral. A supressÃo da expressÃo de BAX, pode representar um mecanismo viral para inibiÃÃo da apoptose. Os resultados da c-MYC citoplasmÃtica apontam para um possÃvel envolvimento do EBV com mecanismos de transporte da membrana nuclear, determinando o acÃmulo da proteÃna no citoplasma. A baixa freqÃÃncia de linfÃcitos infectados indica que os mesmos nÃo sÃo os principais responsÃveis pela elevada positividade da tÃcnica de PCR, devendo ser ao menos em parte, decorrente de epitÃlio normal e/ou prÃ-neoplÃsico infectado sugerindo um padrÃo de latÃncia que nÃo expresse EBER1.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O carcinoma gÃstrico à a segunda causa de morte por cÃncer no mundo. No Cearà à o segundo mais freqÃente entre os homens e o terceiro entre as mulheres. Dos cÃnceres gÃstricos os adenocarcinomas representam em torno de 95%. A doenÃa tem sido associada a fatores genÃticos e ambientais sendo demonstrada Ãntima relaÃÃo com a infecÃÃo por Helicobacter pylori, principalmente associada à presenÃa do gene cagA e genÃtipos vacAs1m1. Entretanto, apesar dos mecanismos pelos quais a bactÃria promove a carcinogÃnese gÃstrica ainda nÃo estarem esclarecidos, uma das hipÃteses seria atravÃs da inativaÃÃo de supressores tumorais. O objetivo do presente trabalho foi verificar, em adenocarcinomas gÃstricos, se a presenÃa de H. pylori, e de seus genes cagA e vacA, està relacionada com a mutaÃÃo e/ou alteraÃÃo na expressÃo protÃica dos supressores tumorais p53 e p27. Neste estudo, 74 amostras de pacientes foram analisadas quanto à presenÃa de H. pylori, cagA+ e os genÃtipos de vacA, pela reaÃÃo em cadeia da polimerase (PCR). A anÃlise mutacional do gene p53 foi realizada por PCR-SSCP e a detecÃÃo da mutaÃÃo/superexpressÃo do p53 e expressÃo da proteÃna p27 pelo mÃtodo imunohistoquÃmico. A bactÃria foi detectada em 95% das amostras, das quais 63% eram cagA(+). Dentre os alelos de vacA, observou-se predomÃnio de s1 (74%) e m1 (82%), associados em 69% dos casos. Na anÃlise mutacional do p53 verificou-se que 72% dos casos exibiram alteraÃÃo no padrÃo de mobilidade eletroforÃtica, sendo esta associada significativamente à presenÃa do gene cagA. Por outro lado, apenas 29% dos casos apresentaram detecÃÃo pelo mÃtodo imunohistoquÃmico, nÃo sendo encontrada associaÃÃo com a H. pylori. A proteÃna p27 demonstrou acentuada reduÃÃo em sua expressÃo (detectada em apenas 19% dos casos), nÃo demonstrando atividade compensatÃria em relaÃÃo à proteÃna p53 mutada e sem associaÃÃo estatÃstica dos casos negativos com a presenÃa da H. pylori. Finalmente, os resultados sugerem que estes supressores simultaneamente inativados podem ser o ponto chave da desregulaÃÃo do ciclo celular que, associados a outros fatores, favoreÃam o desenvolvimento e progressÃo dos adenocarcinomas gÃstricos. Hà indÃcios de que a presenÃa bacteriana, e dos seus genes cagA(+) e vacA/s1m1, possam influenciar, de forma nÃo esclarecida, as alteraÃÃes moleculares ocorridas nos supressores tumorais p53 e p27. / Gastric carcinoma is the second cause of death by cancer in the world. On State of Ceara-Brazil is the second most frequent type of cancer in men and third in women. Adenocarcinomas account for approximately 95% of all malignant gastric neoplasms. It has been associated to genetic and environmental factors and a intimate relationship between the infection by the bacteria Helicobacter pylori and the gastric carcinoma have been related. The presence of the cagA gene and specific genotypes (s1m1) of the gene vacA have been detected in more pathogenic strains. Although the precise molecular mechanisms by which H. pylori could promote the process of gastric carcinogenesis are under investigation, one hypothesized mechanism involves the tumor supressor genes inactivation. The aim of the present study was to verify if the presence of Helicobacter pylori, cagA and vacA genes is related to mutations in the tumor supressor gene p53 and altered expression of p53 and p27 proteins in gastric adenocarcinomas. Seventy-four (74) samples were analyzed to detect the presence of H. pylori, cagA and genotypes of vacA by Polymerization Chain Reaction (PCR). The mutational analysis of p53 gene was performed by PCR-SSCP (Polymerization Chain Reaction for analysis of the Single-strand Conformation Polymorphism). Analysis of mutation or overexpression of p53 protein and p27 expression was detected by the immunohistochemical method. The bacteria was detected in 95% of the samples, 63% was cagA(+). Among the vacA allele it was observed prevalence of s1 (74%) and m1 (82%), associated in 69% of the cases. Mutation analysis of p53 demonstrated 72% of the cases with altered electrophoretic mobility; The alterations were significatively more frequent in the presence of the cagA gene. Immunohistochemical analysis detected only 29% of cases with the expression of p53 protein. The protein p27 showed accentuated reduction in its expression (detected in only 19% of the cases), it has not demonstrated compensatory activity in relation to the p53 altered protein, neither association to H. pylori presence. Finally, these data suggest that simultaneous inactivation of these tumor suppressors genes may be the key point of deregulation of the cellular cycle that, associated to the other factors, favor the development and progression of the gastric cancer. There is some evidence that the bacterial presence, cagA and vacA/s1m1 genes, may influence, in a not understood way, the alterations observed in the tumor suppressors p53 and p27.