O adenoma pleomorfo é o tipo de tumor de glândula salivar mais comum e caracteriza-se pela diversidade morfológica. Sua transformação maligna origina os carcinomas ex-adenomas pleomorfos. A molécula ?-catenina participa nas junções celulares e tem sido intensamente associada à carcinogênese das neoplasias humanas, sua atividade metastática e ainda à transformação maligna de adenomas em carcinomas de alguns órgãos como, por exemplo, o estômago. O objetivo deste trabalho foi traçar o perfil clínico e morfológico de todos os adenomas pleomorfos e carcinomas ex-adenomas pleomorfos dos arquivos do Departamento de Estomatologia, Disciplina de Patologia da Faculdade de Odontologia de Bauru - USP compreendendo o período de 1963 até 2003. Em seguida, marcar imunohistoquimicamente e comparar a expressão da ?-catenina em dez glândulas salivares normais, 16 adenomas pleomorfos e três carcinomas ex-adenomas pleomorfos no intuito de observar sua importância na patogênese das lesões e estabelecer correlações com os aspectos microscópicos. A técnica padrão do complexo estreptavidina-biotina-peroxidase foi utilizada para marcação do anticorpo monoclonal ?-catenina. Como resultados, o gênero mais afetado pelo adenoma pleomorfo e carcinoma ex-adenoma pleomorfo foi o feminino, com faixa etária da 3ªa 5ª e 6ª a 7ª décadas de vida, respectivamente. A localização mais freqüente foi no palato para ambos, assim como as características microscópicas representativas foram o estroma fibroialino, as estruturas epiteliais em ilhotas, cordões e ductos para os adenomas e nos carcinomas a metaplasia escamosa, as estruturas ductais, acinares, e as células claras. Observou-se a diminuição estatisticamente significante (p=0,008)da expressão da proteína nos adenomas pleomorfos em comparação às glândulas. Estes resultados sugerem a participação da ?-catenina no desenvolvimento dos adenomas pleomorfos. / Pleomorphic adenomas (PAs) are the most frequent type of salivary gland neoplasms, and their malignant counterpart, the carcinoma in pleomorphic adenomas(CPAs) arises much less commonly. ß-catenin was originally identified on the basis of its association with cadherin adhesion molecules and has been implicated in carcinogenesis because it is frequently absent in human epithelial cancers. ß-catenin also is significantly associated with the invasion and metastasis of carcinoma in the head and neck, esophagus and other organ. In this study we evaluated the morphological and clinical features of all the PAs and CPAs of the archives of the Department of Pathology at the Bauru Dental School of the University of São Paulo since 1963 until 2003. We also realized immunohistochemical analysis in formalinfixed, paraffin embedded specimens of 10 salivary glands, 16 PAs and 3 CPAs by the avidin-biotin-peroxidase complex method. Our results showed that in both lesions the predominant gender was the feminine with age ranging between 3ª and 5ª decades in PA and 6ª and 7ª in CPA. The most commonly glands affected were located in the palate in both types of tumours. The more significant histopathological features in PAs were fibrohialine stroma with epithelial cells organized in clusters and islands or ductal structures. In CPAs, squamous cell carcinomas were originated in all the cases. In the benign counterpart, there was fibrohialine stroma with clear cells, squamous metaplasia, epithelial cells organized in clusters or acinic or ductal structures. All specimens have membranous and cytoplasmic immunostaining. Higher ß-catenin index rates were seen mainly in ductal structures. The loss of expression of the protein in PAs was statistically significant when comparing with salivary glands (p=0,008) and there was cytoplasmic accumulation of the ß-catenin in CPAs. Our experiment showed that the loss of ß-catenin participates in the development of pleomorphic adenoma and that the cytoplasmic accumulation of the molecule takes part in the malignant transformation of the PA into CPA.

Primary aldosteronism (PA) accounts for 5-10% of all hypertension. One of the major causes of PA is sporadic formation of aldosterone-producing adenomas (APAs). These benign tumours develop in the cortical region of adrenal glands and autonomously secrete excessive amounts of aldosterone. This hormone increases sodium retention and water reabsorption by the kidneys, leading to high blood pressure. Landmark discoveries of somatic mutations in APAs led to better understanding of molecular mechanisms causing autonomous aldosterone secretion. The first mutations were found in KCNJ5, followed by ATP1A1, ATP2B3 and CACNA1D, all encoding cation-channels or transporters. Several in vitro studies showed disruption of cellular ion-balance leading to the phenotype of hyper-aldosterone secretion from APAs. Following our lab's discovery of initial four somatic mutations by whole exome sequencing, over 30 single-base change mutations have been reported in the CACNA1D gene, which encodes the a1 subunit of an L-type Ca2+ channel (LTCC), CaV1.3. Initial and several subsequent mutations cause electrophysiological gain-of-function with increased activation and/or slowed inactivation of CaV1.3. Prior to the discovery of these mutations, L-type Ca2+ channels were not considered important in regulation of aldosterone production. In the first part of my thesis, I investigated two of the mutations and showed that the gain-of-function results in increased aldosterone secretion from an adrenocortical carcinoma cell line, H295R, when transiently transfected with the mutants. I also showed that CaV1.3 can play a role in physiological aldosterone secretion, finding that CYP11B2 expression is reduced by 50% in the adrenals of CaV1.3 knockout mice. The discovery of mutations in CACNA1D led to a drug discovery challenge award from a pharmaceutical company in which high-throughput screening of CaV1.3-expressing cells was undertaken against the company's 1.8M compound library. I identified the adrenal isoforms of the channel's alpha and beta subunits (CACNA1D and CACNB2), and helped development of the stable HEK293 cell line used for screening. This led to 3 tool compounds (A, B & C) that were selective antagonists for CaV1.3 over another family member of the ion channels in high-throughput electrophysiological experiments using IonWorks Barracuda and QPatch platforms. I showed compound B to effectively inhibit aldosterone secretion in both H295R and primary adrenal cells isolated from a normal adrenal. This finding is a significant step in developing compound B further into a CaV1.3-selective drug for treating PA patients without cardiovascular side effects as in the case of existing dihydropyridine class of Ca2+ channel blockers. The second part of my thesis focused on genotyping and whole exome sequencing of 59 APAs from 52 patients, in order to identify further genes underlying primary aldosteronism. Mutations in previously reported genes were identified in 34 of the APAs (57.6%). CACNA1D was the most commonly mutated gene (20.3%) in this cohort, but not KCNJ5 (16.9%) as previously reported. This variation in the frequencies observed is perhaps due to the different methods used for screening PA. For example, many of our patients were detected by renin measurement in resistant hypertension, and their APA identified by a unique PET-CT (using C11 metomidate), in place of adrenal vein sampling. In addition to this, novel somatic mutation was found in a gene not encoding an ion channel, however, this protein was previously linked to cell-cell adhesion and tumour suppression. The gene identified is CADM1, a cell adhesion molecule 1, and the mutation found leads to substitution of uncharged by negatively charged amino acid in the single transmembrane domain of this cell surface protein. The likely significance of this discovery was greatly enhanced when we ascertained that one of the 'private' somatic mutations found on whole exome sequencing of APAs in Munich was in fact a similar substitution in the adjacent amino acid of the membrane-spanning domain. High expression of CADM1 in zona glomerulosa (ZG) was found, the site of aldosterone synthesis in the adrenal cortex and in the APAs, as well as the aldosterone producing cell clusters (APCCs) within the ZG. In vitro experiments using H295R cells showed both mutations in CADM1 lead to 10-20 fold upregulation of CYP11B2 transcription, on qPCR, resulting in 2-4-fold increase of aldosterone secretion, compared to the wild-type CADM1. Despite the introduction of a negative charge into the transmembrane domain, both mutants could translocate to the cell surface. The evidence to date, points to the loss of cell-cell adhesion in the presence of mutant CADM1 as the cause of uncontrolled aldosterone synthesis. Silencing of CADM1 in H295R cells revealed downregulation of aldosterone synthesis and secretion. Transcriptome analysis by RNAseq, of H295R cells expressing wild-type or mutant CADM1 or silenced CADM1 showed a large number of differentially expressed genes. Mutant CADM1 upregulated genes involved in steroidogenesis and ACTH response pathways. A possible role of CADM1 was found to be in the regulation of inter-cell communication via gap junction protein, connexin-43 (Cx43). This was upregulated with higher expression on plasma membrane in the CADM1 silenced cells. TSG101, a protein involved in lysosomal degradation of Cx43 was downregulated in the absence of CADM1 and possibly the mechanism for increased Cx43 expression. Also, immunostaining of adrenal sections showed internalised para-nuclear staining localisation of Cx43 in the ZG, APAs and APCCs, regions with high CADM1 expression compared to membranous localisation of Cx43 in ZF. In contrast to the common and numerous mutations in CACNA1D, mutations in CADM1 are rare. Nonetheless, they may enhance our understanding of the functional significance of glomerular structure of the outer zone of adrenal cortex, where cell-cell adhesion and intercellular communication appear critical for the regulation of aldosterone secretion.

O adenoma pleomorfo é o tipo de tumor de glândula salivar mais comum e caracteriza-se pela diversidade morfológica. Sua transformação maligna origina os carcinomas ex-adenomas pleomorfos. A molécula ?-catenina participa nas junções celulares e tem sido intensamente associada à carcinogênese das neoplasias humanas, sua atividade metastática e ainda à transformação maligna de adenomas em carcinomas de alguns órgãos como, por exemplo, o estômago. O objetivo deste trabalho foi traçar o perfil clínico e morfológico de todos os adenomas pleomorfos e carcinomas ex-adenomas pleomorfos dos arquivos do Departamento de Estomatologia, Disciplina de Patologia da Faculdade de Odontologia de Bauru - USP compreendendo o período de 1963 até 2003. Em seguida, marcar imunohistoquimicamente e comparar a expressão da ?-catenina em dez glândulas salivares normais, 16 adenomas pleomorfos e três carcinomas ex-adenomas pleomorfos no intuito de observar sua importância na patogênese das lesões e estabelecer correlações com os aspectos microscópicos. A técnica padrão do complexo estreptavidina-biotina-peroxidase foi utilizada para marcação do anticorpo monoclonal ?-catenina. Como resultados, o gênero mais afetado pelo adenoma pleomorfo e carcinoma ex-adenoma pleomorfo foi o feminino, com faixa etária da 3ªa 5ª e 6ª a 7ª décadas de vida, respectivamente. A localização mais freqüente foi no palato para ambos, assim como as características microscópicas representativas foram o estroma fibroialino, as estruturas epiteliais em ilhotas, cordões e ductos para os adenomas e nos carcinomas a metaplasia escamosa, as estruturas ductais, acinares, e as células claras. Observou-se a diminuição estatisticamente significante (p=0,008)da expressão da proteína nos adenomas pleomorfos em comparação às glândulas. Estes resultados sugerem a participação da ?-catenina no desenvolvimento dos adenomas pleomorfos. / Pleomorphic adenomas (PAs) are the most frequent type of salivary gland neoplasms, and their malignant counterpart, the carcinoma in pleomorphic adenomas(CPAs) arises much less commonly. ß-catenin was originally identified on the basis of its association with cadherin adhesion molecules and has been implicated in carcinogenesis because it is frequently absent in human epithelial cancers. ß-catenin also is significantly associated with the invasion and metastasis of carcinoma in the head and neck, esophagus and other organ. In this study we evaluated the morphological and clinical features of all the PAs and CPAs of the archives of the Department of Pathology at the Bauru Dental School of the University of São Paulo since 1963 until 2003. We also realized immunohistochemical analysis in formalinfixed, paraffin embedded specimens of 10 salivary glands, 16 PAs and 3 CPAs by the avidin-biotin-peroxidase complex method. Our results showed that in both lesions the predominant gender was the feminine with age ranging between 3ª and 5ª decades in PA and 6ª and 7ª in CPA. The most commonly glands affected were located in the palate in both types of tumours. The more significant histopathological features in PAs were fibrohialine stroma with epithelial cells organized in clusters and islands or ductal structures. In CPAs, squamous cell carcinomas were originated in all the cases. In the benign counterpart, there was fibrohialine stroma with clear cells, squamous metaplasia, epithelial cells organized in clusters or acinic or ductal structures. All specimens have membranous and cytoplasmic immunostaining. Higher ß-catenin index rates were seen mainly in ductal structures. The loss of expression of the protein in PAs was statistically significant when comparing with salivary glands (p=0,008) and there was cytoplasmic accumulation of the ß-catenin in CPAs. Our experiment showed that the loss of ß-catenin participates in the development of pleomorphic adenoma and that the cytoplasmic accumulation of the molecule takes part in the malignant transformation of the PA into CPA.

O carcinoma colorretal é um dos tumores malignos mais freqüentes no mundo ocidental. Sua incidência varia mundialmente; nos Estados Unidos (EUA), é o terceiro câncer mais comum entre os homens e o segundo entre as mulheres, sendo a segunda causa de morte por câncer, ficando atrás apenas do tumor de pulmão. No Brasil é a quarta neoplasia mais freqüente em homens e a segunda em mulheres na região sul. Os principais indicadores prognósticos do adenocarcinoma colorretal incluem a diferenciação histológica, profundidade de invasão e ocorrência de metástases. Recentemente, têm sido realizados diversos estudos em biologia molecular objetivando a identificação de novos parâmetros prognósticos. Dentre eles, os fatores que regulam o ciclo celular, influenciam no crescimento e no mecanismo de apoptose têm demonstrado resultados promissores. Os avanços da biologia molecular permitiram demonstrar a carcinogênese como uma série de alterações progressivas e particulares em cada neoplasia. Embora algumas alterações já estejam bem estabelecidas, outras ainda necessitam ser melhor avaliadas e ter assim sua importância determinada. Entre os muitos componentes desse ciclo tem-se destacado como objeto de interesse a proteína ciclooxigenase-2 (COX-2) por seu aparecimento freqüente nas neoplasias colorretais bem como pelos resultados promissores dos estudos com seus inibidores na profilaxia e tratamento das neoplasias colorretais. A ciclooxigenase é uma enzima fundamental na síntese de eicosanóides como as prostaglandinas PGE2 e PGD2 a partir do ácido araquidônico. Foi isolada pela primeira vez por Hemler em 1976. Trata-se de um homodímero (complexo formado por duas moléculas) que possui um peso molecular de 71 Kd. A expressão da COX-2 pode ocorrer em uma variedade de tipos celulares e tecidos especializados onde desempenha funções biológicas específicas, tais como reprodução, imunidade, fisiologia renal, reabsorção óssea e secreção pancreática. Freqüentemente encontrada em várias neoplasias, tem como prováveis formas de ação a formação de prostaglandinas e o estímulo das mesmas em mecanismos de angiogênese, crescimento celular, adesão e diferenciação. O objetivo deste estudo é avaliar a prevalência da proteína COX-2 nas neoplasias colorretais e sua relação com parâmetros patológicos prognósticos para o câncer colorretal. Foram avaliadas 65 lesões neoplásicas colorretais através de imunoistoquímica para a presença de COX-2. Também analisaram-se fatores patológicos prognósticos e estagiamento das lesões. A COX-2 expressou-se positivamente em 27% dos adenomas tubulares, 40% dos adenomas vilosos e 70% dos carcinomas. Diferença estatisticamente significante foi obtida na expressão da COX-2 entre adenomas e carcinomas, porém não houve significância nas demais variáveis estudadas. Concluiu-se que a expressão da COX-2 variou progressivamente com a progressão da lesão neoplásica, mas não influenciou os parâmetros patológicos de mau prognóstico. / the western world. Its occurrence varies worldwide, and in the USA colorectal cancer is the third most common manifestation of cancer among men and the second among women. In the south region of Brazil, colorectal cancer is ranked fourth among men and second among women as the most frequent neoplasia. Prognosis includes mainly the investigation of tumor histology, extent of invasion, and metastases. Several molecular biology studies have been recently conducted to identify novel prognostic parameters, including cell cycle regulating factors that modify growth and apoptosis. These parameters have shown great promise to therapeutic approach in colorectal carcinoma. Advancements in molecular biology have shown that carcinogenesis comprises a series of progressive, specific alterations for different neoplasias. Although some alterations have been steadily characterized, others are still demanding more research to determine their actual role. Among many elements involved in carcinogenic process, expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) has raised considerable interest due to the frequency of enzyme occurrence in colorectal neoplasias and the promising results obtained with COX-2 inhibitors in prophylaxis and treatment of the disease. COX-2 plays a fundamental role in the synthesis of eicosanoids as prostaglandins PGE2 and PGD2, starting from arachidonic acid. COX-2 is a 71-kD homodimer (a complex formed by two molecules), and was first isolated by Hemler in 1976. COX-2 is expressed in a variety of cell types and purpose-specific tissues, with particular biological functions such as reproduction, immunoresponse, kidney physiology, bone reabsorption and pancreatic secretion Often detected in various neoplasias, COX-2 is supposed to act by forming prostaglandins and by stimulating prostaglandin action in angiogenesis, cell growth, adhesion and differentiation. This study aimed at evaluating COX-2 prevalence in colorectal neoplasias, and to establish the relationship with pathologic prognostic parameters for colorectal cancer. Sixty-five neoplastic lesions were immunohistochemically evaluated for COX-2 expression according to lesion stages. COX-2 was positively expressed in 27% of the tubular adenomas, in 40% of the villous adenomas, and in 70% of the carcinomas analyzed. A statistically significant difference was observed for COX-2 expression between adenomas and carcinomas p=0.002, but no such significance was seen among the other variables investigated. COX-2 expression was therefore understood to vary progressively with the neoplasia stage, yet with no established influence on pathologic parameters for poor prognosis.

Thesis (doctoral)--Umeå Universitet, 1985. / Added t.p. with thesis statement inserted. Includes bibliographical references (p. 35-41).

O carcinoma colorretal é um dos tumores malignos mais freqüentes no mundo ocidental. Sua incidência varia mundialmente; nos Estados Unidos (EUA), é o terceiro câncer mais comum entre os homens e o segundo entre as mulheres, sendo a segunda causa de morte por câncer, ficando atrás apenas do tumor de pulmão. No Brasil é a quarta neoplasia mais freqüente em homens e a segunda em mulheres na região sul. Os principais indicadores prognósticos do adenocarcinoma colorretal incluem a diferenciação histológica, profundidade de invasão e ocorrência de metástases. Recentemente, têm sido realizados diversos estudos em biologia molecular objetivando a identificação de novos parâmetros prognósticos. Dentre eles, os fatores que regulam o ciclo celular, influenciam no crescimento e no mecanismo de apoptose têm demonstrado resultados promissores. Os avanços da biologia molecular permitiram demonstrar a carcinogênese como uma série de alterações progressivas e particulares em cada neoplasia. Embora algumas alterações já estejam bem estabelecidas, outras ainda necessitam ser melhor avaliadas e ter assim sua importância determinada. Entre os muitos componentes desse ciclo tem-se destacado como objeto de interesse a proteína ciclooxigenase-2 (COX-2) por seu aparecimento freqüente nas neoplasias colorretais bem como pelos resultados promissores dos estudos com seus inibidores na profilaxia e tratamento das neoplasias colorretais. A ciclooxigenase é uma enzima fundamental na síntese de eicosanóides como as prostaglandinas PGE2 e PGD2 a partir do ácido araquidônico. Foi isolada pela primeira vez por Hemler em 1976. Trata-se de um homodímero (complexo formado por duas moléculas) que possui um peso molecular de 71 Kd. A expressão da COX-2 pode ocorrer em uma variedade de tipos celulares e tecidos especializados onde desempenha funções biológicas específicas, tais como reprodução, imunidade, fisiologia renal, reabsorção óssea e secreção pancreática. Freqüentemente encontrada em várias neoplasias, tem como prováveis formas de ação a formação de prostaglandinas e o estímulo das mesmas em mecanismos de angiogênese, crescimento celular, adesão e diferenciação. O objetivo deste estudo é avaliar a prevalência da proteína COX-2 nas neoplasias colorretais e sua relação com parâmetros patológicos prognósticos para o câncer colorretal. Foram avaliadas 65 lesões neoplásicas colorretais através de imunoistoquímica para a presença de COX-2. Também analisaram-se fatores patológicos prognósticos e estagiamento das lesões. A COX-2 expressou-se positivamente em 27% dos adenomas tubulares, 40% dos adenomas vilosos e 70% dos carcinomas. Diferença estatisticamente significante foi obtida na expressão da COX-2 entre adenomas e carcinomas, porém não houve significância nas demais variáveis estudadas. Concluiu-se que a expressão da COX-2 variou progressivamente com a progressão da lesão neoplásica, mas não influenciou os parâmetros patológicos de mau prognóstico. / the western world. Its occurrence varies worldwide, and in the USA colorectal cancer is the third most common manifestation of cancer among men and the second among women. In the south region of Brazil, colorectal cancer is ranked fourth among men and second among women as the most frequent neoplasia. Prognosis includes mainly the investigation of tumor histology, extent of invasion, and metastases. Several molecular biology studies have been recently conducted to identify novel prognostic parameters, including cell cycle regulating factors that modify growth and apoptosis. These parameters have shown great promise to therapeutic approach in colorectal carcinoma. Advancements in molecular biology have shown that carcinogenesis comprises a series of progressive, specific alterations for different neoplasias. Although some alterations have been steadily characterized, others are still demanding more research to determine their actual role. Among many elements involved in carcinogenic process, expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) has raised considerable interest due to the frequency of enzyme occurrence in colorectal neoplasias and the promising results obtained with COX-2 inhibitors in prophylaxis and treatment of the disease. COX-2 plays a fundamental role in the synthesis of eicosanoids as prostaglandins PGE2 and PGD2, starting from arachidonic acid. COX-2 is a 71-kD homodimer (a complex formed by two molecules), and was first isolated by Hemler in 1976. COX-2 is expressed in a variety of cell types and purpose-specific tissues, with particular biological functions such as reproduction, immunoresponse, kidney physiology, bone reabsorption and pancreatic secretion Often detected in various neoplasias, COX-2 is supposed to act by forming prostaglandins and by stimulating prostaglandin action in angiogenesis, cell growth, adhesion and differentiation. This study aimed at evaluating COX-2 prevalence in colorectal neoplasias, and to establish the relationship with pathologic prognostic parameters for colorectal cancer. Sixty-five neoplastic lesions were immunohistochemically evaluated for COX-2 expression according to lesion stages. COX-2 was positively expressed in 27% of the tubular adenomas, in 40% of the villous adenomas, and in 70% of the carcinomas analyzed. A statistically significant difference was observed for COX-2 expression between adenomas and carcinomas p=0.002, but no such significance was seen among the other variables investigated. COX-2 expression was therefore understood to vary progressively with the neoplasia stage, yet with no established influence on pathologic parameters for poor prognosis.

O carcinoma colorretal é um dos tumores malignos mais freqüentes no mundo ocidental. Sua incidência varia mundialmente; nos Estados Unidos (EUA), é o terceiro câncer mais comum entre os homens e o segundo entre as mulheres, sendo a segunda causa de morte por câncer, ficando atrás apenas do tumor de pulmão. No Brasil é a quarta neoplasia mais freqüente em homens e a segunda em mulheres na região sul. Os principais indicadores prognósticos do adenocarcinoma colorretal incluem a diferenciação histológica, profundidade de invasão e ocorrência de metástases. Recentemente, têm sido realizados diversos estudos em biologia molecular objetivando a identificação de novos parâmetros prognósticos. Dentre eles, os fatores que regulam o ciclo celular, influenciam no crescimento e no mecanismo de apoptose têm demonstrado resultados promissores. Os avanços da biologia molecular permitiram demonstrar a carcinogênese como uma série de alterações progressivas e particulares em cada neoplasia. Embora algumas alterações já estejam bem estabelecidas, outras ainda necessitam ser melhor avaliadas e ter assim sua importância determinada. Entre os muitos componentes desse ciclo tem-se destacado como objeto de interesse a proteína ciclooxigenase-2 (COX-2) por seu aparecimento freqüente nas neoplasias colorretais bem como pelos resultados promissores dos estudos com seus inibidores na profilaxia e tratamento das neoplasias colorretais. A ciclooxigenase é uma enzima fundamental na síntese de eicosanóides como as prostaglandinas PGE2 e PGD2 a partir do ácido araquidônico. Foi isolada pela primeira vez por Hemler em 1976. Trata-se de um homodímero (complexo formado por duas moléculas) que possui um peso molecular de 71 Kd. A expressão da COX-2 pode ocorrer em uma variedade de tipos celulares e tecidos especializados onde desempenha funções biológicas específicas, tais como reprodução, imunidade, fisiologia renal, reabsorção óssea e secreção pancreática. Freqüentemente encontrada em várias neoplasias, tem como prováveis formas de ação a formação de prostaglandinas e o estímulo das mesmas em mecanismos de angiogênese, crescimento celular, adesão e diferenciação. O objetivo deste estudo é avaliar a prevalência da proteína COX-2 nas neoplasias colorretais e sua relação com parâmetros patológicos prognósticos para o câncer colorretal. Foram avaliadas 65 lesões neoplásicas colorretais através de imunoistoquímica para a presença de COX-2. Também analisaram-se fatores patológicos prognósticos e estagiamento das lesões. A COX-2 expressou-se positivamente em 27% dos adenomas tubulares, 40% dos adenomas vilosos e 70% dos carcinomas. Diferença estatisticamente significante foi obtida na expressão da COX-2 entre adenomas e carcinomas, porém não houve significância nas demais variáveis estudadas. Concluiu-se que a expressão da COX-2 variou progressivamente com a progressão da lesão neoplásica, mas não influenciou os parâmetros patológicos de mau prognóstico. / the western world. Its occurrence varies worldwide, and in the USA colorectal cancer is the third most common manifestation of cancer among men and the second among women. In the south region of Brazil, colorectal cancer is ranked fourth among men and second among women as the most frequent neoplasia. Prognosis includes mainly the investigation of tumor histology, extent of invasion, and metastases. Several molecular biology studies have been recently conducted to identify novel prognostic parameters, including cell cycle regulating factors that modify growth and apoptosis. These parameters have shown great promise to therapeutic approach in colorectal carcinoma. Advancements in molecular biology have shown that carcinogenesis comprises a series of progressive, specific alterations for different neoplasias. Although some alterations have been steadily characterized, others are still demanding more research to determine their actual role. Among many elements involved in carcinogenic process, expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) has raised considerable interest due to the frequency of enzyme occurrence in colorectal neoplasias and the promising results obtained with COX-2 inhibitors in prophylaxis and treatment of the disease. COX-2 plays a fundamental role in the synthesis of eicosanoids as prostaglandins PGE2 and PGD2, starting from arachidonic acid. COX-2 is a 71-kD homodimer (a complex formed by two molecules), and was first isolated by Hemler in 1976. COX-2 is expressed in a variety of cell types and purpose-specific tissues, with particular biological functions such as reproduction, immunoresponse, kidney physiology, bone reabsorption and pancreatic secretion Often detected in various neoplasias, COX-2 is supposed to act by forming prostaglandins and by stimulating prostaglandin action in angiogenesis, cell growth, adhesion and differentiation. This study aimed at evaluating COX-2 prevalence in colorectal neoplasias, and to establish the relationship with pathologic prognostic parameters for colorectal cancer. Sixty-five neoplastic lesions were immunohistochemically evaluated for COX-2 expression according to lesion stages. COX-2 was positively expressed in 27% of the tubular adenomas, in 40% of the villous adenomas, and in 70% of the carcinomas analyzed. A statistically significant difference was observed for COX-2 expression between adenomas and carcinomas p=0.002, but no such significance was seen among the other variables investigated. COX-2 expression was therefore understood to vary progressively with the neoplasia stage, yet with no established influence on pathologic parameters for poor prognosis.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-16T21:08:19Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-27T20:18:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-27T20:18:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianoCoelhodeOliveiraZakir.pdf: 2644036 bytes, checksum: 22458c760d745c99929170bb13f921be (MD5) / A grande maioria dos tumores hipofisários são benignos, no entanto, alguns adenomas podem apresentar comportamento agressivo. Ainda há controvérsias sobre fatores que possam predizer o comportamento biológico desses tumores específicos. Este estudo avaliou potenciais marcadores de invasão e proliferação em comparação com os sistemas de classificação vigentes e parâmetros epidemiogeográficos. Foram incluídos no presente estudo 50 pacientes submetidos, previamente, a tratamento cirúrgico, por tumores hipofisários maiores que 30 mm, com tempo médio de seguimento pós-operatório de 15,2 ± 4,8 anos. Parâmetros anatômicos, como invasão e extensão para estruturas adjacentes, e recrescimento/recorrência tumoral foram avaliados por meio de ressonância nuclear magnética de sela túrcica. Três biomarcadores teciduais de proliferação foram analisados: p53, Ki-67, e c-erbB2. Os tumores foram classificados de acordo com uma combinação de características histológicas e radiológicas, variando de não-invasivos e não-proliferativos (grau 1A) até invasivo-proliferativos (grau 2B). Os tumores classificados como graus 2A e 2B representaram 42% e 52% da amostra, respectivamente. Ki-67 (p-valor = 0,23) e c-erbB2 (p-valor = 0,71) não mostraram relação significativa com o status de progressão tumoral. O biomarcador p53 (p-valor = 0,003), invasão para-selar (p-valor = 0,03), e a classificação clínico-patológica, grau 2B (p-valor = 0,01), estiveram associados com o desfecho clínico desfavorável. Invasão para-selar prevalece como forte fator preditivo de recorrência tumoral. Extensão supra-selar avançada deve ser considerada como parâmetro adicional de invasão e pode ter impacto no prognóstico. Não houve fatores ambientais ou agrupamentos geográficos associados ao comportamento evolutivo tumoral. / Although some pituitary adenomas may have an aggressive behavior, the vast majority are benign. There are still controversies about predictive factors regarding the biological behavior of these particular tumors. This study evaluated potential markers of invasion and proliferation compared to current classification patterns and epidemiogeographical parameters. The study included 50 patients, operated on for tumors greater than 30 mm, with a mean postoperative follow-up of 15.2 ± 4.8 years. Pituitary magnetic resonance was used to evaluate regrowth/recurrence, invasion, and extension to adjacent tissue. Three tissue proliferation biomarkers were analyzed: p53, Ki-67, and c-erbB2. Tumors were classified according to a combination of histological and radiological features, ranging from noninvasive and nonproliferative (grade 1A) to invasive-proliferative (grade 2B). Tumors grades 2A and 2B represented 42% and 52%, respectively. Ki-67 (p-value = 0.23) and c-erbB2 (p-value = 0.71) had no significant relation to tumor progression status. The biomarker p53 (p-value = 0.003), parasellar invasion (p-value = 0.03), and clinicopathological classification, grade 2B (p-value = 0.01), were associated with worse clinical outcome. Parasellar invasion prevails as strong predictive factor of tumor recurrence. Severe suprasellar extension should be considered as additional invasion parameter and could impact prognosis. No environmental factors or geographical cluster were associated with tumor behavior.

Orientador: Albina Messias de Almeida Milani Altemani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T05:51:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soares_AndresaBorges_D.pdf: 9373793 bytes, checksum: c79095bbf9f926b5658e0a10dfc3f94c (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Carcinoma ex-adenoma pleomórfico (CXAP) é uma neoplasia geralmente de alto grau, com risco moderado para metástase cervical. O objetivo do trabalho foi analisar a vascularização tumoral sanguínea e linfática numa série de CXAP, que representam as diferentes fases da seqüência adenoma-carcinoma. Em oito CXAP precoces (intracapsulares ou minimamente invasores), oito avançados (francamente invasores) e 10 adenomas pleomórficos (AP) sem transformação maligna usamos os seguintes anticorpos: D2-40, Ki-67, CD34, CD105, a- SMA, CK7 e 14. A vascularização sanguínea foi estudada através da microdensidade vascular intratumoral (MDV) e área vascular total (AVT). A vascularização linfática, através da microdensidade vascular linfática (MVL) intratumoral e peritumoral. Em relação à vascularização sanguínea, a MDV pelo CD 105 mostrou forte correlação positiva com a progressão tumoral, enquanto que a MDV pelo CD 34 e a ATV não apresentaram nenhuma correlação. Carcinomas com diferenciação mioepitelial apresentavam MDV pelo CD 105 mais baixa, mas os mais altos valores de ATV. Quanto à vascularização linfática, em AP e CXAP precoces, foram encontrados raros, se algum, linfático intratumoral, enquanto que em CXAP avançados eles eram mais numerosos, porém Ki 67 negativos. Êmbolos peri e intratumorais foram vistos apenas nos CXAP sem diferenciação mioepitelial. Em conclusão, com o CD 105 demostrou-se forte correlação positiva entre angiogênese e progressão tumoral. A vascularização linfática é formada predominantemente por vasos pré-existentes, encontrados principalmente nos CXAP avançados. Tanto linfáticos intratumorais como peritumorais são condutores de êmbolos neoplásicos. CXAP com diferenciação mioepitelial mostram atividade angiogênica mais baixa associada a valores mais altos de área vascular e capacidade mais baixa para invadir vasos linfáticos / Abstract: Carcinoma ex pleomorphic adenoma (CXPA) usually is a high-grade carcinoma with a moderate risk for neck metastasis. In a series of CXPAs, which represent the different phases of the adenoma¿carcinoma sequence, we investigated lymphatic vascular density (LVD), lymph vessel endothelial proliferation and whether an angiogenic switch would take place during the malignant transformation of PA into carcinoma and during tumor progression. The CXPAs were classified into two main groups: early tumors - 8 cases (4 intracapsular and 4 minimally invasive carcinomas), and advanced tumors ¿ 8 cases (8 widely invasive carcinomas). In addition, 10 cases of pleomorphic adenoma (PA) without malignant transformation were also analyzed. The following antibodies were used: CD34, CD 105, D2-40, Ki-67, a-smooth-muscle actin, vimentin, cytokeratins 7 and 14. Microvascular density (MVD) for CD 105 increased significantly during tumor progression whereas this was not the case for CD 34 MVD. Comparing widely invasive CXPA with and without myoepithelial differentiation, CXPA with myoepithelial differentiation showed a significantly lower number of CD 105 positive vessels but revealed higher total vascular area (TVA) values. In terms of lymph vessels, PA without malignant transformation and early CXPA contained rare, if any, lymph vessels whereas in widely invasive carcinomas they were more numerous but Ki-67 negative. Carcinomatous emboli were found in peritumoral as well as in intratumoral lymphatics only in advanced CXPA without myoepithelial differentiation. In conclusion, the antibody CD 105 shows an angiogenic switch during the progression from adenoma to carcinoma in salivary glands. In terms of lymphatic vessels, in CXPA, the lymphatic network is mainly composed of pre-existing lymphatics which are mainly found in advanced CXPA. In the widely invasive CXPA, intratumoral as well as peritumoral lymphatics are a conduit for carcinoma cells. Carcinomas with myoepithelial differentiation show low angiogenesis associated with high TVA value and the neoplastic cells seem to have a lower vascular invasion capacity / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Several standard methods are available to analyze and estimate parameters of count data. None of these methods are designed to account for potential misclassification of the data, where counts are observed or recorded as higher or lower than their actual value. These false counts can result in erroneous conclusions and biased estimates. For this paper, a standard estimation model was modified in several ways in order to incorporate each misclassification mechanism. The probability distribution of the observed data was derived and combined with informative distributions for the misclassification parameters. Once this additional information was taken into account, a distribution of observed data conditional on only the parameter of interest was obtained. By incorporating information about the misclassification mechanisms, the resulting estimation will be more accurate than the standard methods. To demonstrate the flexibility of this approach, data from a count distribution affected by various misclassification mechanisms were simulated. Each dataset was analyzed by several standard estimation methods and an appropriate new method. The results from all simulated data were compared, and the impact of each mechanism in regards to each estimation method was discussed. Data from a colorectal polyp prevention study were also analyzed with all available methods to showcase the incorporation of additional covariates.