O Pinus elliotti representa o principal produtor atual de exploração de resina no setor florestal brasileiro. Recentemente, plantios de P. elliottii X P. caribaea vêm se destacando, principalmente, pela sua maior produtividade em biomassa. Além disto, a resina do híbrido apresenta características químicas semelhantes aos seus parentais. Porém, poucas são as informações quanto a estaquia de espécies do gênero Pinus, e se focarmos na propagação de árvores adultas, tal carência é ainda maior, principalmente ao se considerar a dificuldade de rejuvenescimento/revigoramento do material genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o enraizamento adventício do P. elliottii var. elliottii e P. elliottii X P. caribaea adultos. Para tanto, o trabalho foi dividido em três diferentes estudos. O primeiro (Capítulo 2) avaliou o enraizamento adventício de estacas das matrizes adultas de P. elliottii e P. elliottii X P. caribaea no 5° estágio de enxertia seriada com e sem podas sucessivas, sob ação do AIB, talco com fungicida Cerconil® e terebentina. O segundo (Capítulo 3) foi baseado na avaliação do enraizamento adventício de estacas no 2° estágio de enxertia seriada de uma matriz adulta de P. elliottii var. elliottii submetida a um ano de podas sucessivas, sob ação do AIB, terebentina e paclobutrazol. Por sua vez, o terceiro estudo (Capítulo 4) consistiu na avaliação do enraizamento adventício de braquiblastos e brotos de duas matrizes adulta de P. elliottii e P. elliottii X Pinus caribaea, sob ação do AIB e paclobutrazol. Os resultados permitiram inferir que a sobrevivência e o enraizamento adventício aos diferentes tratamentos variaram de acordo com o genótipo e com as características morfológicas das estacas (grau de lignificação e tipo de estacas, brotos e braquiblastos). De maneira geral, os resultados evidenciaram a atuação das enxertias seriadas e das podas sucessivas na restauração da competência rizogênica das estacas dos brotos das matrizes adultas de P. elliottii e P. elliottii X P. caribaea, promovido pelo rejuvenescimento/ revigoramento parcial das matrizes. Além disto, a estaquia de braquiblastos mostrou ser uma ferramenta promissora para a propagação de espécies do gênero Pinus. / Pinus elliottii is the main current resin extraction producer in the Brazilian forest sector. Recently, plantations of P. elliottii X P. caribaea play a great importance in the production systems mainly by its high biomass productivity. In addition, the hybrid resin has chemical characteristics similar to their parents. However, there is little information on obtaining clones, and considering the propagation of mature trees, this lack of information is even greater, mainly concerning the difficulty to achieve the rejuvenation/ reinvigoration of the genetic material. Based on theses information, the present work was aimed to evaluate the adventitious rooting of mature P. elliottii var. elliottii and P. elliottii X P. caribaea cuttings. Therefore, the work was divided into three basic studies. The first study (Chapter 2) was based on the evaluation of adventitious rooting of mature P. elliottii and P. elliottii X caribaea cuttings of grafts up five sequential grafting with and without pruning, under the action of AIB, talc with fungicide and turpentine. The second (Chapter 3) was based on the evaluation of adventitious rooting of mature P. elliottii cuttings of grafts up two sequential grafting with pruning, under the action of IBA, paclobutrazol and turpentine. The third (Chapter 4) evaluated the adventitious rooting of brachyblast and shoots of mature P. elliottii and P. elliottii X caribaea cuttings, under the action of IBA and paclobutrazol. Results showed that the cutting survival and root growth, under the action of different treatments, varied according to the genotype and morphological characteristics of the material (cutting lignifications and type, brachyblast or shoot). Overall, our results showed the performance of serial grafting and pruning on the restoration of rooting competence in P. elliottii and P. elliottii X P. caribaea stem cuttings, promoted by the rejuvenation of trees. Moreover, the cutting of brachyblast can be a promising tool for the propagation of Pinus species.

Poucas espécies de Eucalyptus apresentam aptidão ao cultivo em regiões de baixas temperaturas e geadas frequentes, limitando seu cultivo em algumas regiões do Brasil. Genótipos de Eucalyptus globulus podem representar opções futuras para plantios florestais, tendo em vista o seu ótimo desempenho silvicultural nessas condições. No entanto, informações quanto à obtenção de mudas clonais são escassas, e se focarmos as espécies recomendadas para plantio em condições subtropicais, tal carência é ainda maior, principalmente em termos endógenos e exógenos de enraizamento de propágulos. Esta espécie se destaca também, pelo grande interesse no setor florestal, sobretudo em relação às características de sua madeira para obtenção de celulose, porém, é considerada recalcitrante ao enraizamento de estacas, especialmente quando envolve material adulto, dificultando o aproveitamento dos benefícios da clonagem. Por essa razão, o presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a técnica de micropropagação de clones de E. globulus, visando a reversão à juvenilidade, aumentando os índices de enraizamento e, consequentemente a produção de mudas clonais. Para tanto, os clones (USP 01, USP 24 e USP 33) foram estudados e apresentaram estabelecimento satisfatório, onde avaliou-se: (a) a multiplicação in vitro, testando-se três meios de cultura (WPM, JADS e MS) suplementados com concentrações do regulador de crescimento BAP (0; 0,50 e 1,0 mg L-1) combinado com ANA (0; 0,05 e 0,10 mg L-1); (b) o alongamento in vitro, testando-se o meio de cultura WPM suplementado com concentrações de BAP (0; 0,05 e 0,10 mg L-1) combinadas com ANA (0; 0,1; 0,2 e 0,3 mg L-1); (c) e o enraizamento in vitro, em que brotações alongadas in vitro dos clones foram coletadas e transferidas para meio de cultura WPM, suplementado com 0 e 0,05 mg L-1 de BAP combinado com 0; 0,1; 0,5 e 1,0 mg L-1 de AIB. Os resultados revelaram comportamentos diferenciados dos clones quanto à multiplicação e alongamento in vitro. As taxas de multiplicação in vitro dos clones variaram ao longo dos 10 subcultivos, com uma estabilização a partir do 6º subcultivo para todos os clones avaliados, sendo a maior taxa de multiplicação (número médio de 13 gemas) na concentração de 0,7 mg L-1 de BAP e 0,05 mg L-1 de ANA no meio de cultura WPM. O meio de cultura WPM avaliado no alongamento in vitro, contribuiu favoravelmente para o alongamento das brotações, assim como ANA na concentração de 0,3 mg L-1 combinando com 0,1 mg L-1 de BAP. Portanto, o protocolo desenvolvido mostrou-se eficiente para micropropagação via proliferação de gemas axilares dos clones avaliados, porém, em relação ao enraizamento constatou-se apenas uma raiz emitida na concentração de 0,5 mg L-1 de AIB no clone 01. De forma geral, em razão dos resultados observados, conclui-se que apesar de mostrar-se viável, a micropropagação não promoveu rejuvenescimento significativo dos clones de E. globulus, uma vez que não foi observado enraizamento expressivo das microestacas para as características avaliadas. / Few Eucalyptus species present adaptation for cultivation in regions with low temperatures and frequent frosts, limiting their cultivation in some regions of Brazil. E. globulus genotypes may to represent future options for forest plantations, in view of its optimal silvicultural performance in these conditions. However, information about obtaining clonal seedlings are scarce, and considering the species recommended for planting in subtropical conditions, this lack of information is even greater, mainly when considering the endogenous and exogenous factors for the rooting. This species is distinguished by great interest in forestry, particularly in relation to characteristics of its wood to obtain cellulose, however, it is considered recalcitrant to rooting, especially when it involves adult material, making it difficult to utilize the cloning benefits. Therefore, this study aimed to evaluate the micropropagation technique of E. globulus clones, in order to revert to juvenility, increasing the rate of rooting and consequently the clonal production. For this, the clones (USP 01, USP 24 and USP 33) were studied and showed satisfactory in vitro culture establishment, where it was evaluated: (a) the in vitro multiplication, testing three culture media (WPM, JADS and MS) supplemented with concentrations plant growth regulator BAP (0; 0,50 and 1,0 mg L-1) combined with NAA (0; 0,05 and 0,10 mg L-1); (b) the in vitro elongation, testing the WPM medium culture supplemented with BAP concentrations (0; 0,05 and 0,10 mg L-1) combined with NAA (0; 0,1; 0,2 and 0,3 mg L-1); and (c) in vitro rooting, where elongated shoots in vitro of the clones were collected and transferred to WPM, supplemented with 0 and 0,05 mg L-1 BAP combined with 0; 0,1, 0,5 and 1,0 mg L-1 IBA. The results showed different behaviors of clones as in vitro multiplication and elongation. Rates of clones in vitro multiplication varied over the 10 subcultures, with the stabilization from the sixth subculture for all clones, the largest rate multiplication (average number of 13 buds) in the concentration of 0,7 mg L-1 BAP and 0,05 mg L-1 NAA in WPM. The culture media WPM evaluated in vitro elongation, contributed positively to the shoots elongation, with 0,3 mg L-1 NAA and 0,1 mg L-1 BAP. Therefore, with the micropropagation protocol using axillary buds proliferation of these clones showed be well developed , however, in relation to rooting, only one root was emitted at 0,5 mg L-1 IBA in clone 01. In general, it is possible concluded that despite viable, the micropropagation did not promote significant rejuvenation of E. globulus clones, due to the not expressive rooting for the microcutting evaluated.

O Pinus elliotti representa o principal produtor atual de exploração de resina no setor florestal brasileiro. Recentemente, plantios de P. elliottii X P. caribaea vêm se destacando, principalmente, pela sua maior produtividade em biomassa. Além disto, a resina do híbrido apresenta características químicas semelhantes aos seus parentais. Porém, poucas são as informações quanto a estaquia de espécies do gênero Pinus, e se focarmos na propagação de árvores adultas, tal carência é ainda maior, principalmente ao se considerar a dificuldade de rejuvenescimento/revigoramento do material genético. Neste contexto, o presente trabalho teve como objetivo geral avaliar o enraizamento adventício do P. elliottii var. elliottii e P. elliottii X P. caribaea adultos. Para tanto, o trabalho foi dividido em três diferentes estudos. O primeiro (Capítulo 2) avaliou o enraizamento adventício de estacas das matrizes adultas de P. elliottii e P. elliottii X P. caribaea no 5° estágio de enxertia seriada com e sem podas sucessivas, sob ação do AIB, talco com fungicida Cerconil® e terebentina. O segundo (Capítulo 3) foi baseado na avaliação do enraizamento adventício de estacas no 2° estágio de enxertia seriada de uma matriz adulta de P. elliottii var. elliottii submetida a um ano de podas sucessivas, sob ação do AIB, terebentina e paclobutrazol. Por sua vez, o terceiro estudo (Capítulo 4) consistiu na avaliação do enraizamento adventício de braquiblastos e brotos de duas matrizes adulta de P. elliottii e P. elliottii X Pinus caribaea, sob ação do AIB e paclobutrazol. Os resultados permitiram inferir que a sobrevivência e o enraizamento adventício aos diferentes tratamentos variaram de acordo com o genótipo e com as características morfológicas das estacas (grau de lignificação e tipo de estacas, brotos e braquiblastos). De maneira geral, os resultados evidenciaram a atuação das enxertias seriadas e das podas sucessivas na restauração da competência rizogênica das estacas dos brotos das matrizes adultas de P. elliottii e P. elliottii X P. caribaea, promovido pelo rejuvenescimento/ revigoramento parcial das matrizes. Além disto, a estaquia de braquiblastos mostrou ser uma ferramenta promissora para a propagação de espécies do gênero Pinus. / Pinus elliottii is the main current resin extraction producer in the Brazilian forest sector. Recently, plantations of P. elliottii X P. caribaea play a great importance in the production systems mainly by its high biomass productivity. In addition, the hybrid resin has chemical characteristics similar to their parents. However, there is little information on obtaining clones, and considering the propagation of mature trees, this lack of information is even greater, mainly concerning the difficulty to achieve the rejuvenation/ reinvigoration of the genetic material. Based on theses information, the present work was aimed to evaluate the adventitious rooting of mature P. elliottii var. elliottii and P. elliottii X P. caribaea cuttings. Therefore, the work was divided into three basic studies. The first study (Chapter 2) was based on the evaluation of adventitious rooting of mature P. elliottii and P. elliottii X caribaea cuttings of grafts up five sequential grafting with and without pruning, under the action of AIB, talc with fungicide and turpentine. The second (Chapter 3) was based on the evaluation of adventitious rooting of mature P. elliottii cuttings of grafts up two sequential grafting with pruning, under the action of IBA, paclobutrazol and turpentine. The third (Chapter 4) evaluated the adventitious rooting of brachyblast and shoots of mature P. elliottii and P. elliottii X caribaea cuttings, under the action of IBA and paclobutrazol. Results showed that the cutting survival and root growth, under the action of different treatments, varied according to the genotype and morphological characteristics of the material (cutting lignifications and type, brachyblast or shoot). Overall, our results showed the performance of serial grafting and pruning on the restoration of rooting competence in P. elliottii and P. elliottii X P. caribaea stem cuttings, promoted by the rejuvenation of trees. Moreover, the cutting of brachyblast can be a promising tool for the propagation of Pinus species.

Poucas espécies de Eucalyptus apresentam aptidão ao cultivo em regiões de baixas temperaturas e geadas frequentes, limitando seu cultivo em algumas regiões do Brasil. Genótipos de Eucalyptus globulus podem representar opções futuras para plantios florestais, tendo em vista o seu ótimo desempenho silvicultural nessas condições. No entanto, informações quanto à obtenção de mudas clonais são escassas, e se focarmos as espécies recomendadas para plantio em condições subtropicais, tal carência é ainda maior, principalmente em termos endógenos e exógenos de enraizamento de propágulos. Esta espécie se destaca também, pelo grande interesse no setor florestal, sobretudo em relação às características de sua madeira para obtenção de celulose, porém, é considerada recalcitrante ao enraizamento de estacas, especialmente quando envolve material adulto, dificultando o aproveitamento dos benefícios da clonagem. Por essa razão, o presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a técnica de micropropagação de clones de E. globulus, visando a reversão à juvenilidade, aumentando os índices de enraizamento e, consequentemente a produção de mudas clonais. Para tanto, os clones (USP 01, USP 24 e USP 33) foram estudados e apresentaram estabelecimento satisfatório, onde avaliou-se: (a) a multiplicação in vitro, testando-se três meios de cultura (WPM, JADS e MS) suplementados com concentrações do regulador de crescimento BAP (0; 0,50 e 1,0 mg L-1) combinado com ANA (0; 0,05 e 0,10 mg L-1); (b) o alongamento in vitro, testando-se o meio de cultura WPM suplementado com concentrações de BAP (0; 0,05 e 0,10 mg L-1) combinadas com ANA (0; 0,1; 0,2 e 0,3 mg L-1); (c) e o enraizamento in vitro, em que brotações alongadas in vitro dos clones foram coletadas e transferidas para meio de cultura WPM, suplementado com 0 e 0,05 mg L-1 de BAP combinado com 0; 0,1; 0,5 e 1,0 mg L-1 de AIB. Os resultados revelaram comportamentos diferenciados dos clones quanto à multiplicação e alongamento in vitro. As taxas de multiplicação in vitro dos clones variaram ao longo dos 10 subcultivos, com uma estabilização a partir do 6º subcultivo para todos os clones avaliados, sendo a maior taxa de multiplicação (número médio de 13 gemas) na concentração de 0,7 mg L-1 de BAP e 0,05 mg L-1 de ANA no meio de cultura WPM. O meio de cultura WPM avaliado no alongamento in vitro, contribuiu favoravelmente para o alongamento das brotações, assim como ANA na concentração de 0,3 mg L-1 combinando com 0,1 mg L-1 de BAP. Portanto, o protocolo desenvolvido mostrou-se eficiente para micropropagação via proliferação de gemas axilares dos clones avaliados, porém, em relação ao enraizamento constatou-se apenas uma raiz emitida na concentração de 0,5 mg L-1 de AIB no clone 01. De forma geral, em razão dos resultados observados, conclui-se que apesar de mostrar-se viável, a micropropagação não promoveu rejuvenescimento significativo dos clones de E. globulus, uma vez que não foi observado enraizamento expressivo das microestacas para as características avaliadas. / Few Eucalyptus species present adaptation for cultivation in regions with low temperatures and frequent frosts, limiting their cultivation in some regions of Brazil. E. globulus genotypes may to represent future options for forest plantations, in view of its optimal silvicultural performance in these conditions. However, information about obtaining clonal seedlings are scarce, and considering the species recommended for planting in subtropical conditions, this lack of information is even greater, mainly when considering the endogenous and exogenous factors for the rooting. This species is distinguished by great interest in forestry, particularly in relation to characteristics of its wood to obtain cellulose, however, it is considered recalcitrant to rooting, especially when it involves adult material, making it difficult to utilize the cloning benefits. Therefore, this study aimed to evaluate the micropropagation technique of E. globulus clones, in order to revert to juvenility, increasing the rate of rooting and consequently the clonal production. For this, the clones (USP 01, USP 24 and USP 33) were studied and showed satisfactory in vitro culture establishment, where it was evaluated: (a) the in vitro multiplication, testing three culture media (WPM, JADS and MS) supplemented with concentrations plant growth regulator BAP (0; 0,50 and 1,0 mg L-1) combined with NAA (0; 0,05 and 0,10 mg L-1); (b) the in vitro elongation, testing the WPM medium culture supplemented with BAP concentrations (0; 0,05 and 0,10 mg L-1) combined with NAA (0; 0,1; 0,2 and 0,3 mg L-1); and (c) in vitro rooting, where elongated shoots in vitro of the clones were collected and transferred to WPM, supplemented with 0 and 0,05 mg L-1 BAP combined with 0; 0,1, 0,5 and 1,0 mg L-1 IBA. The results showed different behaviors of clones as in vitro multiplication and elongation. Rates of clones in vitro multiplication varied over the 10 subcultures, with the stabilization from the sixth subculture for all clones, the largest rate multiplication (average number of 13 buds) in the concentration of 0,7 mg L-1 BAP and 0,05 mg L-1 NAA in WPM. The culture media WPM evaluated in vitro elongation, contributed positively to the shoots elongation, with 0,3 mg L-1 NAA and 0,1 mg L-1 BAP. Therefore, with the micropropagation protocol using axillary buds proliferation of these clones showed be well developed , however, in relation to rooting, only one root was emitted at 0,5 mg L-1 IBA in clone 01. In general, it is possible concluded that despite viable, the micropropagation did not promote significant rejuvenation of E. globulus clones, due to the not expressive rooting for the microcutting evaluated.

Enquanto as raízes laterais (RL) se desenvolvem a partir da raiz primária, as raízes adventícias (RA) são geralmente formadas em órgãos da parte aérea da planta. As RA podem ser formadas como uma resposta adaptativa a estresses, como ferimentos ou alagamentos e a sua formação também é importante para a propagação vegetativa de espécies economicamente relevantes, que frequentemente dependem da propagação clonal de genótipos elite. A aplicação de hormônios pode estimular o desenvolvimento das RA (DRA), e as auxinas são consideradas os principais hormônios envolvidos nesse processo. Neste estudo, o sistema de plântulas estioladas foi usado em Arabidopsis thaliana para analisar diversos aspectos do DRA. Diferentes tipos de auxinas, naturais ou sintéticas, foram testadas e verificou-se que AIA causou um aumento no número de raízes sem afetar seu comprimento, ANA foi efetivo para o DRA, mas as raízes ficaram pequenas, e altas concentrações de 2,4-D causaram a formação de calos. Através de imunolocalização, um nível elevado de AIA foi detectado nos tecidos do hipocótilo que deram origem ao primórdio radicular. O padrão de expressão de genes potencialmente envolvidos com o enraizamento adventício foi testado por PCR em Tempo Real. O DRA foi marcado essencialmente por aumento na expressão de PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 e IAA28. A expressão dos genes induzidos foi mais estimulada por ANA, seguida de AIA. A expressão de IAA28 aumentou com o DRA, diferente do que foi observado no desenvolvimento de RL. Os receptores de auxinas TIR1/AFB e ABP1 iniciam a sinalização de auxinas na célula pelo controle da expressão gênica, proteólise seletiva e afrouxamento da parede celular. Verificou-se que TIR1 e as proteínas AFBs são importantes para o DRA, mas que estes receptores devem estar exercendo funções redundantes no processo e que ABP1 pode agir complementando a sua ação. Durante a organogênese das RA, TIR1 e AFB2 parecem exercer uma maior influência. As auxinas são transportadas de maneira polar, célula a célula e geralmente dependem de transportadores. Analisamos o DRA em diferentes mutantes deficientes no transporte de influxo e efluxo de auxinas juntamente com construções com genes repórteres, na presença ou ausência de auxina exógena. Uma função essencial foi estabelecida para AUX1 no enraizamento adventício e, embora LAX3 per se não tenha sido chave no processo, este parece agir em conjunto com AUX1. Também observamos que a formação eficiente de RA depende dos transportadores de efluxo PIN, principalmente PIN1, 3 e 7. A adequada fosforilação dos PINs pelas quinases PID, WAG1 e WAG2 e, consequentemente, a direção do transporte, foi igualmente essencial para o estabelecimento das RA. / Lateral roots (LR) develop from the primary root, whereas adventitious roots (AR) are generally formed from above-ground organs. AR can be formed as an adaptive response to stresses, like wounding or flooding, and their formation is also important for efficient vegetative propagation of economically relevant species, which often depend on clonal propagation of elite genotypes. Hormonal application can stimulate AR development (ARD) and auxins are recognized as major hormones involved in this process. Here, the etiolated seedlings system was used in Arabidopsis thaliana to study several aspects of ARD. Different auxin types, natural or synthetic, were tested and it was found that IAA caused an increase in root number without affecting root length, NAA was effective for ARD, but roots remained short and higher levels of 2,4-D caused callus formation. Through immunolocalization, a higher level of IAA was detected in hypocotyl tissues from which the root primordia differentiated. The expression pattern of genes potentially involved in adventitious rooting was tested by Real-Time PCR. ARD was essentially marked by increased expression of PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 and IAA28. The magnitude of expression of induced genes was much stimulated by NAA, followed by IAA. IAA28 expression increased with ARD, differently from what is known for lateral root development. The auxin receptors TIR1/AFB and ABP1 initiate auxin signaling in the cell through changes in gene expression, selective proteolysis and cell wall loosening. We observed that TIR1/AFB are important in ARD but might be playing redundant roles in the process, whereas ABP1 could be complementing their action. During AR organogenesis, TIR1 and AFB2 seemed to exert greater influence. Auxins are transported in a polar, cell to cell way and depend on several transporters. We analyzed ARD in different mutants affected in auxin influx and efflux transporters, coupled with reporter gene constructs, in presence or absence of exogenous auxin. An essential role was established for AUX1 in AR. Although LAX3 per se was not a key player in the process, it seemed to act in conjunction with AUX1. We also observed that efficient formation of AR depends on the PIN efflux transporters, mainly PIN1, 3 and 7. The proper phosphorylation of PINs by the kinases PID, WAG1 and WAG2, and hence the direction of auxin transport, was equally essential for AR establishment.

Enquanto as raízes laterais (RL) se desenvolvem a partir da raiz primária, as raízes adventícias (RA) são geralmente formadas em órgãos da parte aérea da planta. As RA podem ser formadas como uma resposta adaptativa a estresses, como ferimentos ou alagamentos e a sua formação também é importante para a propagação vegetativa de espécies economicamente relevantes, que frequentemente dependem da propagação clonal de genótipos elite. A aplicação de hormônios pode estimular o desenvolvimento das RA (DRA), e as auxinas são consideradas os principais hormônios envolvidos nesse processo. Neste estudo, o sistema de plântulas estioladas foi usado em Arabidopsis thaliana para analisar diversos aspectos do DRA. Diferentes tipos de auxinas, naturais ou sintéticas, foram testadas e verificou-se que AIA causou um aumento no número de raízes sem afetar seu comprimento, ANA foi efetivo para o DRA, mas as raízes ficaram pequenas, e altas concentrações de 2,4-D causaram a formação de calos. Através de imunolocalização, um nível elevado de AIA foi detectado nos tecidos do hipocótilo que deram origem ao primórdio radicular. O padrão de expressão de genes potencialmente envolvidos com o enraizamento adventício foi testado por PCR em Tempo Real. O DRA foi marcado essencialmente por aumento na expressão de PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 e IAA28. A expressão dos genes induzidos foi mais estimulada por ANA, seguida de AIA. A expressão de IAA28 aumentou com o DRA, diferente do que foi observado no desenvolvimento de RL. Os receptores de auxinas TIR1/AFB e ABP1 iniciam a sinalização de auxinas na célula pelo controle da expressão gênica, proteólise seletiva e afrouxamento da parede celular. Verificou-se que TIR1 e as proteínas AFBs são importantes para o DRA, mas que estes receptores devem estar exercendo funções redundantes no processo e que ABP1 pode agir complementando a sua ação. Durante a organogênese das RA, TIR1 e AFB2 parecem exercer uma maior influência. As auxinas são transportadas de maneira polar, célula a célula e geralmente dependem de transportadores. Analisamos o DRA em diferentes mutantes deficientes no transporte de influxo e efluxo de auxinas juntamente com construções com genes repórteres, na presença ou ausência de auxina exógena. Uma função essencial foi estabelecida para AUX1 no enraizamento adventício e, embora LAX3 per se não tenha sido chave no processo, este parece agir em conjunto com AUX1. Também observamos que a formação eficiente de RA depende dos transportadores de efluxo PIN, principalmente PIN1, 3 e 7. A adequada fosforilação dos PINs pelas quinases PID, WAG1 e WAG2 e, consequentemente, a direção do transporte, foi igualmente essencial para o estabelecimento das RA. / Lateral roots (LR) develop from the primary root, whereas adventitious roots (AR) are generally formed from above-ground organs. AR can be formed as an adaptive response to stresses, like wounding or flooding, and their formation is also important for efficient vegetative propagation of economically relevant species, which often depend on clonal propagation of elite genotypes. Hormonal application can stimulate AR development (ARD) and auxins are recognized as major hormones involved in this process. Here, the etiolated seedlings system was used in Arabidopsis thaliana to study several aspects of ARD. Different auxin types, natural or synthetic, were tested and it was found that IAA caused an increase in root number without affecting root length, NAA was effective for ARD, but roots remained short and higher levels of 2,4-D caused callus formation. Through immunolocalization, a higher level of IAA was detected in hypocotyl tissues from which the root primordia differentiated. The expression pattern of genes potentially involved in adventitious rooting was tested by Real-Time PCR. ARD was essentially marked by increased expression of PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 and IAA28. The magnitude of expression of induced genes was much stimulated by NAA, followed by IAA. IAA28 expression increased with ARD, differently from what is known for lateral root development. The auxin receptors TIR1/AFB and ABP1 initiate auxin signaling in the cell through changes in gene expression, selective proteolysis and cell wall loosening. We observed that TIR1/AFB are important in ARD but might be playing redundant roles in the process, whereas ABP1 could be complementing their action. During AR organogenesis, TIR1 and AFB2 seemed to exert greater influence. Auxins are transported in a polar, cell to cell way and depend on several transporters. We analyzed ARD in different mutants affected in auxin influx and efflux transporters, coupled with reporter gene constructs, in presence or absence of exogenous auxin. An essential role was established for AUX1 in AR. Although LAX3 per se was not a key player in the process, it seemed to act in conjunction with AUX1. We also observed that efficient formation of AR depends on the PIN efflux transporters, mainly PIN1, 3 and 7. The proper phosphorylation of PINs by the kinases PID, WAG1 and WAG2, and hence the direction of auxin transport, was equally essential for AR establishment.

Enquanto as raízes laterais (RL) se desenvolvem a partir da raiz primária, as raízes adventícias (RA) são geralmente formadas em órgãos da parte aérea da planta. As RA podem ser formadas como uma resposta adaptativa a estresses, como ferimentos ou alagamentos e a sua formação também é importante para a propagação vegetativa de espécies economicamente relevantes, que frequentemente dependem da propagação clonal de genótipos elite. A aplicação de hormônios pode estimular o desenvolvimento das RA (DRA), e as auxinas são consideradas os principais hormônios envolvidos nesse processo. Neste estudo, o sistema de plântulas estioladas foi usado em Arabidopsis thaliana para analisar diversos aspectos do DRA. Diferentes tipos de auxinas, naturais ou sintéticas, foram testadas e verificou-se que AIA causou um aumento no número de raízes sem afetar seu comprimento, ANA foi efetivo para o DRA, mas as raízes ficaram pequenas, e altas concentrações de 2,4-D causaram a formação de calos. Através de imunolocalização, um nível elevado de AIA foi detectado nos tecidos do hipocótilo que deram origem ao primórdio radicular. O padrão de expressão de genes potencialmente envolvidos com o enraizamento adventício foi testado por PCR em Tempo Real. O DRA foi marcado essencialmente por aumento na expressão de PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 e IAA28. A expressão dos genes induzidos foi mais estimulada por ANA, seguida de AIA. A expressão de IAA28 aumentou com o DRA, diferente do que foi observado no desenvolvimento de RL. Os receptores de auxinas TIR1/AFB e ABP1 iniciam a sinalização de auxinas na célula pelo controle da expressão gênica, proteólise seletiva e afrouxamento da parede celular. Verificou-se que TIR1 e as proteínas AFBs são importantes para o DRA, mas que estes receptores devem estar exercendo funções redundantes no processo e que ABP1 pode agir complementando a sua ação. Durante a organogênese das RA, TIR1 e AFB2 parecem exercer uma maior influência. As auxinas são transportadas de maneira polar, célula a célula e geralmente dependem de transportadores. Analisamos o DRA em diferentes mutantes deficientes no transporte de influxo e efluxo de auxinas juntamente com construções com genes repórteres, na presença ou ausência de auxina exógena. Uma função essencial foi estabelecida para AUX1 no enraizamento adventício e, embora LAX3 per se não tenha sido chave no processo, este parece agir em conjunto com AUX1. Também observamos que a formação eficiente de RA depende dos transportadores de efluxo PIN, principalmente PIN1, 3 e 7. A adequada fosforilação dos PINs pelas quinases PID, WAG1 e WAG2 e, consequentemente, a direção do transporte, foi igualmente essencial para o estabelecimento das RA. / Lateral roots (LR) develop from the primary root, whereas adventitious roots (AR) are generally formed from above-ground organs. AR can be formed as an adaptive response to stresses, like wounding or flooding, and their formation is also important for efficient vegetative propagation of economically relevant species, which often depend on clonal propagation of elite genotypes. Hormonal application can stimulate AR development (ARD) and auxins are recognized as major hormones involved in this process. Here, the etiolated seedlings system was used in Arabidopsis thaliana to study several aspects of ARD. Different auxin types, natural or synthetic, were tested and it was found that IAA caused an increase in root number without affecting root length, NAA was effective for ARD, but roots remained short and higher levels of 2,4-D caused callus formation. Through immunolocalization, a higher level of IAA was detected in hypocotyl tissues from which the root primordia differentiated. The expression pattern of genes potentially involved in adventitious rooting was tested by Real-Time PCR. ARD was essentially marked by increased expression of PIN1, SUR2, GH3.3, GH3.6, ARF8 and IAA28. The magnitude of expression of induced genes was much stimulated by NAA, followed by IAA. IAA28 expression increased with ARD, differently from what is known for lateral root development. The auxin receptors TIR1/AFB and ABP1 initiate auxin signaling in the cell through changes in gene expression, selective proteolysis and cell wall loosening. We observed that TIR1/AFB are important in ARD but might be playing redundant roles in the process, whereas ABP1 could be complementing their action. During AR organogenesis, TIR1 and AFB2 seemed to exert greater influence. Auxins are transported in a polar, cell to cell way and depend on several transporters. We analyzed ARD in different mutants affected in auxin influx and efflux transporters, coupled with reporter gene constructs, in presence or absence of exogenous auxin. An essential role was established for AUX1 in AR. Although LAX3 per se was not a key player in the process, it seemed to act in conjunction with AUX1. We also observed that efficient formation of AR depends on the PIN efflux transporters, mainly PIN1, 3 and 7. The proper phosphorylation of PINs by the kinases PID, WAG1 and WAG2, and hence the direction of auxin transport, was equally essential for AR establishment.

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O objetivo da presente pesquisa foi avaliar a eficiência das técnicas de miniestaquia, enxertia e alporquia visando estabelecer protocolos de propagação clonal de genótipos de Khaya anthotheca. Na primeira etapa do experimento de miniestaquia, as minicepas foram submetidas às seguintes soluções de fertirrigação: S100 - 100% da concentração dos sais da solução nutritiva básica (testemunha), S50 - 50% da concentração dos sais da solução nutritiva básica e S25 - 25% da concentração dos sais da solução nutritiva básica. O delineamento experimental foi em blocos completos ao acaso em arranjo fatorial (3x5) com parcelas subdivididas no tempo, sendo os fatores constituídos por 3 soluções de fertirrigação (S100, S50 e S25) e 5 coletas de propágulos, sendo avaliadas a sobrevivência e a produção de miniestacas. Na segunda etapa do experimento de miniestaquia, foram confeccionadas miniestacas a partir dos propágulos obtidos de minicepas, as quais foram submetidas a diferentes soluções nutritivas (S100, S50 e S25). Parte das miniestacas foram tratadas com ácido indolbutírico (AIB), na concentração de 2 g.L-1 e a outra parte não foi tratada com AIB (testemunha). O experimento foi conduzido no delineamento inteiramente casualizado no arranjo fatorial (3x5x2) com parcelas subdivididas no tempo, sendo os fatores constituídos por 3 soluções de fertirrigação (S100, S50 e S25), 5 coletas de propágulos e duas concentrações de AIB (A0 - ausência de AIB, testemunha e A2 - 2 g.L-1 de AIB), sendo avaliada a sobrevivência de miniestacas na saída da casa de vegetação (SCV); sobrevência na saída da casa de sombra (SCS); enraizamento em pleno sol (EAPS) e presença de calo (CAL). Em um terceiro experimento referente às combinações entre enxertos de Khaya anthotheca e Swietenia macrophylla King., foram testadas combinações de porta-enxerto + enxerto, as quais foram: TSK - Swietenia macrophylla + Khaya anthotheca; TKS - Khaya anthotheca + Swietenia macrophylla; TSS - Swietenia macrophylla + Swietenia macrophylla; TKK - Khaya anthotheca + Khaya anthotheca. O experimento foi conduzido no delineamento em blocos ao acaso, sendo os tratamentos constituídos pela combinação dos materiais enxertados onde foi avaliado o pegamento aos 45 e aos 200 dias após a realização do enxerto, seguido da análise histológica. No quarto experimento foi realizada a alporquia nas mudas de Khaya anthotheca que estavam sendo fertirrigadas com as soluções S100, S50 e S25 e, após 45 dias, foi realizada a alporquia com três concentrações de AIB (A0 - ausência de AIB, testemunha; A3 - 3 g.L-1 de AIB e A8 - 8 g.L-1 de AIB). O experimento foi conduzido no delineamento em blocos completos ao acaso, em arranjo fatorial (3x3), sendo os fatores constituídos por 3 soluções de fertirrigação e 3 concentrações de AIB. A xii sobrevivência de minicepas não variou significativamente ao longo das coletas de brotações e não dependeu da solução nutritiva. A produção de miniestacas por metro quadrado ao ano dependeu da solução nutritiva, onde a S100 (100% da concentração de macro e micronutrientes) resultou nos maiores valores para a maioria das coletas de brotações. Houve elevada sobrevivência de miniestacas na saída da casa de vegetação, independente das coletas de propágulos, solução nutritiva e aplicação de AIB. A porcentagem de sobrevivência de miniestacas na saída da casa de sombra e o enraizamento em área de pleno sol foram maiores quando as minicepas receberam as soluções de fertirrigação S100 e S50 associada a presença de AIB na concentração de 2 g.L-1. Os menores índices de enraizamento e os maiores de calos ocorreram nas miniestacas advindas de minicepas tratadas com a solução S25 na ausência da aplicação de AIB. Na enxertia, o melhor tratamento em relação à sobrevivência dos enxertos, tanto aos 45, quanto aos 200 dias foi a combinação de TKK (92%), seguido pela combinação TSK (52%), TSS (48%). Não houve pegamento nos enxertos de TKS, demonstrando incompatibilidade entre as espécies ao usar esse tipo de enxertia. Para a alporquia, as mudas tratadas com solução S100 e S50, seguidas de aplicação de AIB (3 g.L-1 ou 8 g.L-1) apresentaram os maiores percentuais de enraizamento. No tratamento com a solução S25 sem aplicação de AIB ocorreu maior formação de calos e menor de enraizamento. No geral, as três técnicas de propagação (miniestaquia, enxertia e alporquia) foram adequadas para a multiplicação de Khaya anthotheca, demostrando viabilidade para a produção de mudas. / Khaya anthotheca A. Juss. (Welw.) is a species of african mahogany that rises in brazilian scene as a promising alternative for forestation with species of hardwood. However, the high cost of its seeds and its short period of viability are some factors that hinder the provision seedlings in the market at affordable prices. The aim this research was to evaluate the efficiency of minicutting technique, grafting and air layering to establish an clonal propagation method for Khaya anthotheca. In the first experiment of minicutting, ministumps were treated with the following fertigation solutions: S100 - 100% of nutrient concentration (control solution), S50 - 50% of nutrient concentration and S25 - 25% of nutrient concentration. The experimental design was randomized complete block in a factorial arrangement (3x5) with split-plot in the time. The factors consisted of 3 fertirrigation solutions (S100, S50 and S25) and 5 propagules collection. Ministump survival and minicutting production were evaluated. In the second stage of the experiment, minicuttings were submitted to different nutrient solutions and part of them been treated with Indol-3-butyric acid - IBA (2 g.L-1) and other part was not treated with IBA (control). The experimental design was completely randomized in a factorial arrangement (3x5x2) with split-plot in time. The factors consisting of 3 fertirrigation solutions (S100, S50 and S25), 5 propagules collection and two IBA concentrations (A0 - without AIB, A2 - 2 g.L-1 IBA). Minicutting survival in greenhouse (SCV); minicutting survival in shade-house (SCS), adventitious rooting in full sun area (EAPS) and presence of callus (CAL) were evaluated. In the grafting, combinations of Khaya anthotheca and Swietenia macrophylla King. were tested (rootstock + graft): TSK - Swietenia macrophylla + Khaya anthotheca; TKS - Khaya anthotheca + Swietenia macrophylla; TSS - Swietenia macrophylla + Swietenia macrophylla; TKK - Khaya anthotheca + Khaya anthotheca. The experimental design was randomized complete block, with the treatments constituted by 4 grafting combination. The survival was evaluated at 45 and 200 days after the grafting, followed by histological analysis. The fourth experiment was performed air layering in seedlings of Khaya anthotheca. Seedlings were fertigated with solutions of S100, S50 and S25, and after 45 days, was performed air layering with application of three IBA concentrations (A0 - without IBA, control; A3 - 3 g.L-1 IBA and A8 - 8 g.L-1 AIB). The experimental design was randomized complete block in a factorial arrangement (3x3). The factors consist of 3 fertigation solutions and 3 IBA concentrations. Survival of ministumps did not vary significantly, regardless of shoots collection and nutrient solution. The S100 solution resulted in higher values of minicuttings production per square meter per year. The minicutting survival in the greenhouse was high, regardless of the shoots collection, nutrient solution and IBA application. The minicuttings survival in shade house and rooting in full sun area were xiv higher when treated with S100 and S50 solutions and application of 2 g.L-1 de IBA. The S25 solution in the IBA absence resulted in low rooting index and greater callogenesis index. In grafting, the best survival (45 and 200 days) was the TKK combination (92%), followed by the TSK (52%) and TSS (48%). There wasn’t survival in grafting of TKS, indicating incompatibility. For air layering, the seedlings treated with S100 and S50 solutions and AIB application (3 g.L-1 and 8 g.L-1) showed the highest adventitious rooting percentage. The S25 solution without IBA application increased the callus formation and low adventitious rooting. The three propagation techniques (i.e., minicutting, grafting and air layering) were suitable for multiplication of Khaya anthotheca, demonstrating feasibility for the clone production.

O Eucalyptus cloeziana se destaca pelas propriedades tecnológicas da sua madeira, principalmente em razão da sua durabilidade, densidade e resistência. Entretanto, essa espécie apresenta limitações quanto ao enraizamento adventício de estacas, dificultando a obtenção de mudas clonais e o avanço nos programa de melhoramento da espécie. Nesta perspectiva, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a micropropagação de E. cloeziana a partir de materiais juvenis e adultos como uma técnica para a propagação da espécie. Para tanto, o trabalho foi dividido em quatro partes. No primeiro estudo, estabeleceu-se um protocolo de organogênese indireta de E. cloeziana a partir de hipocótilos e cotilédones. No segundo estudo avaliou-se o resgate de matrizes adultas de E. cloeziana através da indução de brotações epicórmicas em megaestacas. No terceiro estudo definiu-se um protocolo de micropropagação via proliferação de gemas axilares de matrizes adultas de E. cloeziana. Por último, no quarto estudo avaliou-se o rejuvenescimento in vitro de matrizes adultas de E. cloeziana por meio da micropropagação via proliferação de gemas axilares e a microestaquia, a partir das matrizes rejuvenescidas in vitro,para comprovar a viabilidade do cultivo in vitro como alternativa de propagação da espécie. A organogênese indireta de E. cloeziana mostrou-se possível e dependente do tipo de explante, dos reguladores de crescimento, suas concentrações e combinações utilizadas nas diferentes fases de morfogênese. As brotações adventícias foram micropropagadas e aclimatizadas com sucesso, obtendo-se mudas clonais de E. cloeziana. No resgate das matrizes adultas de E. cloeziana ocorreu maior indução de brotações epicórmicas para as megaestacas coletadas na época do ano com maior pluviosidade e temperatura. O diâmetro médio das megaestacas, compreendido entre 2,0 e 5,0 cm, correspondeu ao mais adequado para a obtenção de maior número de brotações epicórmicas no resgate das matrizes adultas de E. cloeziana. O protocolo de micropropagação das matrizes adultas de E. cloeziana foi estabelecido com sucesso, utilizando como explantes, brotações epicórmicas induzidas nas megaestacas. A multiplicação in vitro das microcepas foi realizada com êxito no meio de cultura WPM suplementado com BAP e ANA, cujas concentrações variaram entre os genótipos. Os tratamentos de \"pulse\" com GA3 não foi adequado para promover o alongamento in vitro das brotações, o qual foi obtido coma redução da concentração do BAP (0,1 mg L-1). A aclimatização e o enraizamento ex vitro das microestacas foi realizada com sucesso nos miniestufas, garantindo a obtenção de mudas clonais das matrizes adultas de E. cloeziana para a composição de um microjardim clonal. As microcepas das árvores matrizes de E. cloeziana apresentaram diferentes taxas de multiplicação in vitro, apresentando especificidades dos materiais genéticos à micropropagação. Os resultados da microestaquia das matrizes rejuvenescidas in vitro de E. cloeziana corroboraram as evidências de rejuvenescimento desses genótipos durante a micropropagação. Além disso, constatou-se que outros fatores, além da maturidade, podem estar atuando diretamente na recalcitrância do E. cloeziana ao enraizamento adventício. Dessa forma, comprovou-se a importância da micropropagação como uma ferramenta para a clonagem de E. cloeziana, abrindo perspectivas para investigações futuras para otimizar os métodos de propagação da espécie. / Eucalyptus cloeziana has importance for its wood technologic characteristics, mainly the durability, density and resistance. Moreover, this species has limitations on adventitious rooting of cuttings, having difficulties to obtain clonal seedlings and to advance in the improvement programs. In this perspective, the present work aimed to evaluate the E. cloeziana micropropagation by juvenile and mature explants as a technique for propagation this specie. Therefore, the work was divided into four basic studies. The first study was the establishment of the protocol to indirect organogenesis to E. cloeziana hypocotyls and cotyledons. In the second study evaluated the rescue of E. cloeziana adult matrices for epicormic shoots induction in crow branches. In the third study was definite a micropropagation protocol by axillary branching of E. cloeziana adult matrices. Finally, in the fourth study was evaluated the in vitro rejuvenation of E. cloeziana adult matrices to micropropagation by axillary branching and the micro-cutting technique of in vitro rejuvenated matrices to prove the in vitro culture viability to the propagation of this specie. The indirect organogenesis E. cloeziana was dependent of explant type and growth regulator and its concentration used in the different morphogenesis phases. The adventitious shoots were multiplicities and acclimatized with success to obtain E. cloeziana clonal seedlings. The vegetative rescue results of E. cloeziana adult matrices showed a higher induction epicormic shoots from branches collected in warmer and rain season. The medium diameter between 2.0 and 5.0 cm was considered the better to obtain higher epicormic shoots number in vegetative rescue. The micropropagation protocol of E. cloeziana adult matrices was realized with success using epicormic shoots, induced in the branches, like explants. The shoots in vitro multiplication was realized on WPM medium culture, supplemented with BA and NAA. The better growth regulators concentrations were different for each genotype. Treatments pulse with GA3 was not suitable to promote the elongation of shoots in vitro, which was obtained by the BA concentration reduction at 0.1 mg L-1. The in vitro shoots acclimatization and ex vitro rooting was performed in mini-incubators with success and it permit to obtain clonal seedlings from E. cloeziana adult matrices to form a clonal micro-garden. The shoots of E. cloeziana adult matrices showed different in vitro multiplication rates with specific-genotype responses to micropropagation. The micro-cutting technique results of E. cloeziana adult matrices provide evidence that occurred in vitro rejuvenation of these genotypes, during the micropropagation. Therefore, the nursery results showed that other factors, not only maturation, can be involved in the adventitious recalcitrance of E. cloeziana. In conclusion, the importance micropropagation like a biotechnological tool to propagation of E. cloeziana was proved and opened important perspectives for future investigations to optimize the propagation methods for this specie.

O Eucalyptus cloeziana se destaca pelas propriedades tecnológicas da sua madeira, principalmente em razão da sua durabilidade, densidade e resistência. Entretanto, essa espécie apresenta limitações quanto ao enraizamento adventício de estacas, dificultando a obtenção de mudas clonais e o avanço nos programa de melhoramento da espécie. Nesta perspectiva, o presente trabalho teve por objetivo avaliar a micropropagação de E. cloeziana a partir de materiais juvenis e adultos como uma técnica para a propagação da espécie. Para tanto, o trabalho foi dividido em quatro partes. No primeiro estudo, estabeleceu-se um protocolo de organogênese indireta de E. cloeziana a partir de hipocótilos e cotilédones. No segundo estudo avaliou-se o resgate de matrizes adultas de E. cloeziana através da indução de brotações epicórmicas em megaestacas. No terceiro estudo definiu-se um protocolo de micropropagação via proliferação de gemas axilares de matrizes adultas de E. cloeziana. Por último, no quarto estudo avaliou-se o rejuvenescimento in vitro de matrizes adultas de E. cloeziana por meio da micropropagação via proliferação de gemas axilares e a microestaquia, a partir das matrizes rejuvenescidas in vitro,para comprovar a viabilidade do cultivo in vitro como alternativa de propagação da espécie. A organogênese indireta de E. cloeziana mostrou-se possível e dependente do tipo de explante, dos reguladores de crescimento, suas concentrações e combinações utilizadas nas diferentes fases de morfogênese. As brotações adventícias foram micropropagadas e aclimatizadas com sucesso, obtendo-se mudas clonais de E. cloeziana. No resgate das matrizes adultas de E. cloeziana ocorreu maior indução de brotações epicórmicas para as megaestacas coletadas na época do ano com maior pluviosidade e temperatura. O diâmetro médio das megaestacas, compreendido entre 2,0 e 5,0 cm, correspondeu ao mais adequado para a obtenção de maior número de brotações epicórmicas no resgate das matrizes adultas de E. cloeziana. O protocolo de micropropagação das matrizes adultas de E. cloeziana foi estabelecido com sucesso, utilizando como explantes, brotações epicórmicas induzidas nas megaestacas. A multiplicação in vitro das microcepas foi realizada com êxito no meio de cultura WPM suplementado com BAP e ANA, cujas concentrações variaram entre os genótipos. Os tratamentos de \"pulse\" com GA3 não foi adequado para promover o alongamento in vitro das brotações, o qual foi obtido coma redução da concentração do BAP (0,1 mg L-1). A aclimatização e o enraizamento ex vitro das microestacas foi realizada com sucesso nos miniestufas, garantindo a obtenção de mudas clonais das matrizes adultas de E. cloeziana para a composição de um microjardim clonal. As microcepas das árvores matrizes de E. cloeziana apresentaram diferentes taxas de multiplicação in vitro, apresentando especificidades dos materiais genéticos à micropropagação. Os resultados da microestaquia das matrizes rejuvenescidas in vitro de E. cloeziana corroboraram as evidências de rejuvenescimento desses genótipos durante a micropropagação. Além disso, constatou-se que outros fatores, além da maturidade, podem estar atuando diretamente na recalcitrância do E. cloeziana ao enraizamento adventício. Dessa forma, comprovou-se a importância da micropropagação como uma ferramenta para a clonagem de E. cloeziana, abrindo perspectivas para investigações futuras para otimizar os métodos de propagação da espécie. / Eucalyptus cloeziana has importance for its wood technologic characteristics, mainly the durability, density and resistance. Moreover, this species has limitations on adventitious rooting of cuttings, having difficulties to obtain clonal seedlings and to advance in the improvement programs. In this perspective, the present work aimed to evaluate the E. cloeziana micropropagation by juvenile and mature explants as a technique for propagation this specie. Therefore, the work was divided into four basic studies. The first study was the establishment of the protocol to indirect organogenesis to E. cloeziana hypocotyls and cotyledons. In the second study evaluated the rescue of E. cloeziana adult matrices for epicormic shoots induction in crow branches. In the third study was definite a micropropagation protocol by axillary branching of E. cloeziana adult matrices. Finally, in the fourth study was evaluated the in vitro rejuvenation of E. cloeziana adult matrices to micropropagation by axillary branching and the micro-cutting technique of in vitro rejuvenated matrices to prove the in vitro culture viability to the propagation of this specie. The indirect organogenesis E. cloeziana was dependent of explant type and growth regulator and its concentration used in the different morphogenesis phases. The adventitious shoots were multiplicities and acclimatized with success to obtain E. cloeziana clonal seedlings. The vegetative rescue results of E. cloeziana adult matrices showed a higher induction epicormic shoots from branches collected in warmer and rain season. The medium diameter between 2.0 and 5.0 cm was considered the better to obtain higher epicormic shoots number in vegetative rescue. The micropropagation protocol of E. cloeziana adult matrices was realized with success using epicormic shoots, induced in the branches, like explants. The shoots in vitro multiplication was realized on WPM medium culture, supplemented with BA and NAA. The better growth regulators concentrations were different for each genotype. Treatments pulse with GA3 was not suitable to promote the elongation of shoots in vitro, which was obtained by the BA concentration reduction at 0.1 mg L-1. The in vitro shoots acclimatization and ex vitro rooting was performed in mini-incubators with success and it permit to obtain clonal seedlings from E. cloeziana adult matrices to form a clonal micro-garden. The shoots of E. cloeziana adult matrices showed different in vitro multiplication rates with specific-genotype responses to micropropagation. The micro-cutting technique results of E. cloeziana adult matrices provide evidence that occurred in vitro rejuvenation of these genotypes, during the micropropagation. Therefore, the nursery results showed that other factors, not only maturation, can be involved in the adventitious recalcitrance of E. cloeziana. In conclusion, the importance micropropagation like a biotechnological tool to propagation of E. cloeziana was proved and opened important perspectives for future investigations to optimize the propagation methods for this specie.