Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2012. / Submitted by Elna Araújo (elna@bce.unb.br) on 2012-09-15T15:13:17Z No. of bitstreams: 1 2012_SandroCoelhoLinharesMontalvao.PDF: 2194982 bytes, checksum: f5a803522c4c5023f0e41def8b3258f8 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2012-09-19T14:09:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SandroCoelhoLinharesMontalvao.PDF: 2194982 bytes, checksum: f5a803522c4c5023f0e41def8b3258f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-19T14:09:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SandroCoelhoLinharesMontalvao.PDF: 2194982 bytes, checksum: f5a803522c4c5023f0e41def8b3258f8 (MD5) / O trabalho foi realizado no Laboratório de Fitopatologia do Prédio de Controle Biológico da Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) com os seguintes objetivos: (a) isolar e selecionar isolados de Trichoderma antagônicos aos patógenos Sclerotinia sclerotiorum e Sclerotium rolfsii e como promotores de crescimento de plantas de tomate e (b) verificar a existência de efeitos negativos na germinação de sementes microbiolizadas com os isolados estudados. Foram utilizados 21 isolados de Trichoderma previamente selecionados, além de outros 13 obtidos de rizosfera de tomateiro para a microbiolização das sementes, sem pré-tratamento com fungicidas. Vários isolados apresentaram capacidade de supressão do crescimento das colônias dos patógenos estudados, nos estudos conduzidos in vitro, utilizando os métodos de pareamento de culturas e produção de metabólitos voláteis e não-voláteis. Promoção de crescimento de plantas foi observada com 20 isolados. Nos testes de germinação de sementes de tomate microbiolizadas com Trichoderma spp., em alguns casos, observou-se a presença de lesões cotiledonares das plântulas, porém sem interferência no número e vigor de plantas germinadas. Para o controle do tombamento de plântulas em casa de vegetação, três isolados foram eficientes, sendo eles CEN281, CEN1070 e CEN1080. Marcadores moleculares foram utilizados para identificação em nível específico, de 19 dos 34 isolados e os outros 15 estão em fase de sequenciamento. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This work was conducted at the Laboratory of Phytophatology in Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia (CENARGEN) with the following objectives: (a) isolate and select strains of Trichoderma against Sclerotinia sclerotiorum and Sclerotium rolfsii, and; (b) evaluate the potential to induce growth promotion of tomato plants and verify the existence of negative effects on seed germination with the isolates studied. There were used twenty one strains of Trichoderma previously selected, and another thirteen obtained from the tomato rhizosphere to microbiolization seeds without pre-treatment with fungicides. Several isolates were capable of suppressing the growth of colonies of the pathogens in vitro, using the methods of the culture pairing and production of volatile and non-volatile metabolites. A promotion of plant growth was induced by twenty Trichoderma strains. In some cases, was observed the presence of cotyledon lesions in the seedlings, in seeds with Trichoderma, but without interfering with the number and vigor of germinated seeds. For the control of damping off of seedlings in the greenhouse, three strains were efficient, CEN281, CEN1070 and CEN1080. Molecular markers were used for identification nineteen species, and the identification of the other fifteen are in process.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ecologia, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-10-09T16:22:41Z No. of bitstreams: 1 2013_AndreRicardoBellinati.pdf: 1659286 bytes, checksum: 7714c496218b3b618a03b036e7a33842 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-10T15:24:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AndreRicardoBellinati.pdf: 1659286 bytes, checksum: 7714c496218b3b618a03b036e7a33842 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-10T15:24:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AndreRicardoBellinati.pdf: 1659286 bytes, checksum: 7714c496218b3b618a03b036e7a33842 (MD5) / O plantio extensivo de monoculturas e o uso de práticas agronômicas intensivas tornam a agricultura, e a produção em massa de alimentos, um dos principais fatores de risco à conservação da biodiversidade. Avanços no campo da engenharia genética propõem-se a diminuir tais impactos, promovendo aumento de produtividade e redução no uso de agrotóxicos, principalmente através da transferência de genes interespécies. Um exemplo desse tipo de manipulação genética é a inserção de genes de Bacillus thuringiensis em plantas cultivadas, para expressão de proteínas Cry, tóxicas a insetos-praga. Essa prática resulta em plantas com características que não existiam anteriormente na natureza, o que suscita o temor de novos riscos à biodiversidade, resultando em uma regulamentação de análises de risco para liberação de tais plantas modificadas no ambiente. O desenvolvimento de cadeias tróficas artificiais que simulem rotas de exposição a proteínas Bt tem permitido seu rastreamento ao longo dos níveis tróficos, de forma a possibilitar a detecção de prejuízos ambientais antes mesmo do estabelecimento de novos eventos ou da transformação da planta. Este trabalho se propôs a desenvolver um método de exposição de endotoxinas expressas em plantas geneticamente modificadas a predadores não-alvo por meio de dietas artificiais, permitindo a avaliação em laboratório do impacto de tais compostos sobre a bionomia de organismos presentes no ambiente. Para tal, foram realizados aprimoramentos da criação em laboratório de Cycloneda sanguinea, predador não-alvo, e Aphis gossypii e Myzus persicae, insetos fitófagos não-alvo predados por C. sanguinea. Diferentes composições de dietas artificiais foram testadas, assim como seu uso para a exposição das endotoxinas Cry8Ka5, Cry1Ac e Cry1F às três espécies de insetos não-alvo. Não foi detectada atividade biológica de Cry8Ka5 testados sobre o inseto-alvo, Anthonomus grandis, o que impossibilitou testes sobre organismos não-alvo. Foram obtidas composições de dietas sólidas artificiais à base de A. gossypii para a criação de larvas de C. sanguinea até o estágio adulto, no entanto, sem a obtenção de reprodução dos indivíduos. Assim, não foi possível estabelecer uma rota de exposição bitrófica de toxinas Cry para o predador não-alvo C. sanguinea através de dieta artificial. Um sistema eficaz de criação de M. persicae com dieta líquida foi estabelecido, possibilitando o desenvolvimento de uma via segura de exposição das toxinas Cry a C. sanguinea. Tal sistema não se mostrou apropriado para A. gossypii, espécie para a qual novos estudos nutricionais deverão ser realizados. As toxinas Cry1Ac e Cry1F, detectadas em todos os níveis tróficos, não apresentaram efeito letal ou subletal sobre o inseto não-alvo C. sanguinea. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The adoption of an extensive model with monoculture and agronomical intensive practices, in response to the global demand for food, has been considered one of the main risk factor to biodiversity conservation. Advances in genetic engineering propose to diminish such impacts by promoting increased productivity and reduced pesticides adoption, mainly through gene transfer among species. Transformation of cultivated plants by inserting Bacillus thuringiensis genes is an example of such genetic manipulation techniques, aiming the expression of Cry proteins, which present toxic activity on pest insects. This practice result in plants with new features never experienced before in nature, raising concern about new risks to biodiversity, which resulted in a specific regulatory framework of risk assessment for the release of such transformed plants in the environment. The development artificial trophic chains that simulates the exposure of Bt toxins has allowed its tracking throughout the trophic levels, enabling the detection of environment damages prior to the establishment of new events or, even, the plant transformation. This work proposes to develop a new method of exposure of non-target predators to Bt toxins, expressed in genetically modified plants, through artificial diet, allowing the evaluation of such compound impacts on the organisms bionomics in laboratory. Therefore, improvements were promoted on the rearing of Cycloneda sanguinea, a non-target predator, and Aphis gossypii and Myzus persicae, non-target phytophagous insects preyed by C. sanguinea. Different compositions of artificial diet were tested, such as their use for endotoxins Cry8Ka5, Cry1Ac and Cry1F exposure to the three non-target species. Cry8Ka5 presented no biological activity on its target, Anthonomus grandis, thwarting non-target tests. Solid artificial diet compositions A. gossypii based were obtained for C. sanguinea rearing from its larval until its adult stage. However, with no reproductive success observed. Thus, it was not possible to establish a bitrophic exposure to Cry toxins for the nontarget predator C. sanguinea using artificial diet. An effective M. persicae rearing system was established, adopting liquid artificial diet, and allowing a secure exposure of C. sanguinea to Cry toxins. This rearing system was not appropriate for A. gossypii, and new nutritional studies shall be developed for this species. Cry1Ac and Cry1F toxins were detected in all trophic stages and did not present lethal or sublethal effects on nontarget insect C. sanguinea.

Nomuraea rileyi é um entomofungo que infecta principalmente lepidópteros representantes da superfamília Noctuoidea, que inclui pragas-chave de diversas culturas de grande importância econômica. No entanto, a susceptibilidade das espécies a este agente é variável, mesmo entre representantes da mesma família e até de mesmo gênero. Um dos fatores responsáveis por esta susceptibilidade diferenciada pode ser a composição lipídica da cutícula larval. O objetivo deste estudo foi avaliar a estrutura e composição cuticular de larvas de lepidópteros e sua relação com a susceptibilidade a N. rileyi. Foram utilizadas as espécies Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu e Spodoptera cosmioides e duas linhagens do fungo (CH87551 e UB93150). Larvas de segundo instar foram obtidas a partir da criação massal no Laboratório de Controle de Pragas da Universidade de Caxias do Sul e submetidas a suspensões de 107, 108 e 109 conídios/mL por 24 horas e após, transferidas para recipientes de 200mL contendo dietas artificiais específicas. Os bioensaios foram mantidos em condições controladas e avaliados diariamente por 14 dias. Para análise da composição lipídica cuticular, exúvias oriundas da metamorfose larval-pupal foram submetidas à extração com hexano e posteriormente à diclorometano-metanol. Para obtenção das exúvias de M. sequax, as larvas foram alimentadas com Lolium multiflorum. Os extratos obtidos foram analisados por cromatografia de camada delgada e seus componentes separados por cromatografia em coluna aberta, cujas frações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas (GCMS). Imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram obtidas de larvas de segundo ínstar de cada espécie, submetidas uma suspensão de 108 conídios/mL e analisadas 24, 48 e 72 horas após a exposição ao patógeno. Os resultados demonstraram que as espécies avaliadas foram diferentemente afetadas por N. rileyi e, mesmo pelas diferentes linhagens avaliadas. A CL50 (log dose) obtida com as linhagens CH e UB foi de 6,73 e 7,97 para A. gemmatalis e 8,26 e 9,16 para R. nu respectivamente. S. cosmioides foi susceptível apenas à linhagem UB, porém a taxa de mortalidade foi de apenas 11,5% na maior concentração e M. sequax não foi susceptível a nenhuma das linhagens avaliadas. A composição lipídica cuticular apresentou diferenças quali-quantitativas entre as larvas. Os principais componentes identificados em A gemmatalis, M. sequax e R nu foram hidrocarbonetos, respondendo por 72,3, 74,5 e 83,6% respectivamente, com menor diversidade de compostos para M. sequax. Ácidos graxos lineares e ramificados (C14 a C20) foram identificados, com diferentes composições em cada uma das espécies. Identificou-se um aldeído e um álcool graxo em A. gemmatalis e outro aldeído graxo em R. nu. Em S. cosmioides, o componente majoritário identificado foi vitamina E, com mais de 70%. Nas imagens de MEV foi possível observar conídios de N. rileyi aderidos à superfície cuticular das quatro espécies avaliadas, especialmente na região abdominal e nos pseudopodes, mesmo depois de 48 horas após contato, sobretudo em S. cosmioides e M. sequax, espécies nas quais muitos dos conídios visualizados apresentaram tubo germinativo crescendo paralelamente à superfície. As espécies que se mostraram mais susceptíveis nestes bioensaios foram as que apresentaram, além de grandes quantidades de alcanos, as maiores diversidades destes compostos. As espécies menos susceptíveis apresentaram pouca quantidade e/ou variedade de alcanos ou ainda algum composto antioxidante, como no caso da vitamina E. Os resultados obtidos sugerem que, além das diferenças na composição lipídica e na estrutura cuticular das larvas, a variabilidade de N. rileyi pode estar relacionada à susceptibilidade diferenciada observada nas espécies, no entanto o potencial de uso deste agente como ferramenta no manejo integrado de pragas é considerável e precisa ser mais bem compreendido e explorado. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Nomuraea rileyi is an entomofungus that mainly infects lepidopteran representatives of the Noctuoidea superfamily, which includes key-pests of various crops of large economic importance. Nevertheless, the susceptibility of species in relation to this agent is variable, even among representatives of the same family or genus. One of the factors responsible for this differentiated susceptibility might be the lipid composition of the larval cuticle. The aim of this study was to assess the cuticular structure and composition of lepidopteran larvae and their relationship with the susceptibility to N. rileyi fungi. The species Anticarsia gemmatalis, Mythimna sequax, Rachiplusia nu and Spodoptera cosmioides and two strains of the fungus (CH87551 and UB93150) were used. Second instar larvae were obtained from the mass creation of the Pest Control Laboratory at the University of Caxias do Sul and subjected to suspensions of 107, 108 and 109 conidia/mL for 24 hours and subsequently transferred to 200mL containers containing specific artificial diets. The bioassays were maintained in controlled conditions and assessed daily for 14 days. In order to perform an analysis of the cuticular lipid composition, exuviae derived from the larval-pupal metamorphosis were subjected to extraction with hexane and with dichloromethane-methanol afterwards. For obtaining the M. sequax exuviae, the larvae were fed with Lolium multiflorum. The obtained extracts were analyzed by means of slender layer chromatography and their components were separated using open column chromatography components, whose resulting fractions were analyzed through gas chromatography attached to mass detector (GCMS). Images of scanning electron microscopy (SEM) were obtained from second instar larvae of each species, subjected to a suspension of 108 conidia/mL and analyzed 24, 48 and 72 hours after exposure to the pathogen. The results showed that the assessed species were differently affected by N. rileyi fungi or even by different assessed strains. The LC50 (log dose) obtained with the CH and UB strains was 6,73 and 7,97 for A. gemmatalis and 8,26 and 9,16 for R. nu respectively. S. cosmioides was susceptible only to the UB strain, but the mortality was limited to 11.5% in the highest concentration and M. sequax was not susceptible to any of the assessed strains. The cuticular lipid composition showed qualitative and quantitative differences between the larvae. The main components identified in A. gemmatalis, M. sequax and R. nu were hydrocarbons, accounting for 72,3, 74,5 and 83,6% respectively, with lower diversity of compounds for M. sequax. Linear and branched fatty acids (C14 to C20) have been identified, with different compositions in each one of the species. It was found an aldehyde and a fatty alcohol in A. gemmatalis and other fatty aldehyde in R. nu. In S. cosmioides, the major identified component was vitamin E, with more than 70%. In the SEM images, it was possible to observe conidia of N. rileyi attached to the cuticular surface of the four assessed species, especially in the abdominal region and in pseudopods, even after 48 hours of contact, mainly in S. cosmioides and M. sequax, species in which many observed conidia showed germ tube growing in tandem with the surface. The species that were more likely in these bioassays were the ones that presented, in addition to large amounts of alkanes, the greatest diversities of these compounds. The less susceptible species showed little quantity and/or variety of alkanes or even some antioxidant compound, as in the case of the vitamin E. The obtained results suggest that, besides differences in the lipid composition and cuticular structure of the larvae, the variability of N. rileyi might be related to the differentiated susceptibility observed in species, however, the potential usage of this agent as a tool for holding an integrated pest management is sizeable and needs to be better understood and explored.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T14:23:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 166311 bytes, checksum: 83322a34768e7a94f65989a1722e7533 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T14:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 166311 bytes, checksum: 83322a34768e7a94f65989a1722e7533 (MD5) Previous issue date: 2004-08-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Três procariotas obtidos de filoplano de tomateiro (Bacillus cereus, Pseudomonas putida, Novosphingobium capsulatum), previamente selecionados como bons antagonistas de patógenos da cultura foram formulados em cinco formas distintas e avaliados quanto a sua efetividade como agentes de biocontrole. Quatro das cinco formulações, consistiam de produtos comerciais (Agromil-Raiz, Agromil-S, Ecolife 40 and ISR 2000) os quais propágulos dos antagonistas foram incorporados. A quinta formulação foi proposta no presente trabalho e consiste de uma solução de nutrientes com estratos de parede de células de Saccharomyces cerevisiae e goma xantana. Os efeitos deletérios das formulações sobre o crescimento dos antagonistas bem como a sobrevivência foram investigados. Os resultados indicam que Agromil-S e ISR 2000 tem efeito inibitório sobre o crescimento dos antagonistas os outros produtos não interferem significantemente na multiplicação dos antagonistas. A vida de prateleira dos antagonistas na formulação proposta foi estudada e nenhuma foi eficiente em aumentar a sobrevivência quando comparadas com o controle. O biocontrole experimental de doenças do tomateiro induzidas por três patógenos Corynespora cassiicola, Pseudomonas syringae pv. tomato, e oidio respectivamente, em casa de vegetação foi tentado para todos aos antagonistas e para todas as formulações, o controle foi alcançado embora em alguns casos não se encontrou diferença significativa entre o tratamento e o controle. Mais esforços e pesquisas devem ser realizados afim de melhorar a proteção de células a serem dispensadas em plantas. / To improve each antagonist efficiency as control agent of tomato leaf diseases, a study was carried out on five distinct formulae consisting of additives and one out of three autochthonous, isolated prokaryotic residents (Bacillus cereus, Pseudomonas putida, Novosphingobium capsulatum) of the tomato phylloplane and already selected as good antagonists to tomato pathogens. Four of these five formulations consisted of commercial products (Agromil-Raiz, Agromil-S, Ecolife 40 and ISR 2000) to which each antagonist living propagules were incorporated. The fifth of these combinations consisted of a nutrient solution amended with a Saccharomyces cerevisiae cell wall extract along with xanthan gum. Therefore, under consideration were the effects of each formula on each antagonist protective action and survival. Results of in vitro studies indicated that Agromil-S and ISR 2000 inhibited the antagonists' growth while the others didn't interfere in a significant way with the antagonists’ multiplication. In shelf live experiments, none of the studied formulation was efficient enough to increase significantly the antagonist survival when compared to controls. Under greenhouse conditions, every antagonist, in all formulas, controlled the tomato leaf diseases caused by Corynespora cassiicola, Pseudomonas syringae pv. tomato, or Oidium sp., although differences between some treatments and controls were not significant. We feel that with this we have only begun our efforts to find ways to improve protection of the antagonist’s living cells being delivered to tomato plants, and which will render them eventually well protected against leaf pathogens. . / Dissertação importada do Alexandria

Os agentes de controle biológico têm recebido grande reconhecimento, e o seu uso tem contribuído como um complemento ou substituição de agroquímicos. No entanto, existem poucos estudos sobre o controle biológico da Pinta Preta dos Citros, causada pelo fungo Guignardia citricarpa, o que impede o seu mercado in natura, além de prejudicar a sua exportação pelo uso intensivo de insumos químicos para controlar este patógeno. Os fungos do gênero Trichoderma são agentes de controle utilizados em todo o mundo contra vários fitopatógenos relevantes. Este estudo visou identificar proteínas extracelulares secretadas por T. atroviride T17 e por T.harzianum T1A, eficazes para o controle de G. citricarpa. Por eletroforese bidimensional (2D) foram obtidos perfis de proteínas secretadas por Trichoderma em meio de glicose (controle) e em meio suplementado com micélio desativado de G. citricarpa. As proteínas foram identificadas por LC-MS/MS mostrando que ambas as espécies secretam proteínas diferentes. Foram identificadas 68 proteínas das 178 diferencialmente expressas por T. harzianum, sendo a maioria relacionada aos mecanismos de biocontrole, mesmo no meio controle. Foi verificado que em contato com o patógeno a expressão de proteínas relacionadas com o metabolismo primário diminui. Por outro lado, Trichoderma atroviride mostrou uma maior expressão de proteínas relacionadas com biocontrole na presença de micélio do patógeno. Nesta espécie identificamos 59 proteínas de 116 diferencialmente expressas, principalmente proteínas relacionadas com a degradação da parede celular: α- manosidase, quitinase, mutanase, glicosidase, endoquitinase e, algumas famílias de glicoside hidrolases. Os resultados indicam que estas espécies apresentam um elevado potencial como agentes de controle de G. citricarpa. Os resultados são pioneiros em detalhar a interação de Trichoderrma com G. citricarpa, por meio da análise do secretoma. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2016-05-11T14:24:21Z No. of bitstreams: 1 Tese Fernanda Blauth de Lima.pdf: 5347447 bytes, checksum: 314027a9e2af4a7cf6e30be761df9f99 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-11T14:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Fernanda Blauth de Lima.pdf: 5347447 bytes, checksum: 314027a9e2af4a7cf6e30be761df9f99 (MD5) Previous issue date: 2016-05-11 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Biological control agents (BCA) have received great recognition, and their use has contributed as a complement or replacement of agrochemicals. However, there are few studies on the biological control of Black spot of citrus, caused by the fungus Guignardia citricarpa, which prevents the market in natura, besides damaging their export by the intensive use of chemical inputs to control this pathogen. Trichoderma fungi are the most applied worldwide BCA against various relevant plant pathogens. The purpose of this study was to identify extracellular proteins secreted by T. atroviride T17 and of T. harzianum T1A, which are effective for the control of G. citricarpa. Bidimensional electrophoresis (2D) allowed obtaining the secreted protein profiles of Trichoderma grown in glucose medium (control) and in medium containing inactivated mycelium of G. citricicarpa. From the 178 differentially expressed proteins by T. harzianum, 68 were identified, most of them related to biocontrol mechanisms, even in the control medium. In the presence of the pathogen, the expression of proteins related to the metabolism decreases. On the other hand, Trichoderma atroviride showed higher expression of proteins related to biocontrol pathogen when grown in the presence of pathogen mycelium, when compared to the control medium. From the 116 differentially expressed proteins, 59 were identified, mainly proteins related to fungi cell wall degradation such as α-mannosidase, chitinase, mutanase, glycosidase, endochitinase and, some families of glycoside hydrolases. The results indicate that these species have a high potential as biocontrol agents of G. citricicarpa. These results are pioneers in to detail the Trichoderrma interaction with G. citricicarpa through the secretome analysis.

Os agentes de controle biológico têm recebido grande reconhecimento, e o seu uso tem contribuído como um complemento ou substituição de agroquímicos. No entanto, existem poucos estudos sobre o controle biológico da Pinta Preta dos Citros, causada pelo fungo Guignardia citricarpa, o que impede o seu mercado in natura, além de prejudicar a sua exportação pelo uso intensivo de insumos químicos para controlar este patógeno. Os fungos do gênero Trichoderma são agentes de controle utilizados em todo o mundo contra vários fitopatógenos relevantes. Este estudo visou identificar proteínas extracelulares secretadas por T. atroviride T17 e por T.harzianum T1A, eficazes para o controle de G. citricarpa. Por eletroforese bidimensional (2D) foram obtidos perfis de proteínas secretadas por Trichoderma em meio de glicose (controle) e em meio suplementado com micélio desativado de G. citricarpa. As proteínas foram identificadas por LC-MS/MS mostrando que ambas as espécies secretam proteínas diferentes. Foram identificadas 68 proteínas das 178 diferencialmente expressas por T. harzianum, sendo a maioria relacionada aos mecanismos de biocontrole, mesmo no meio controle. Foi verificado que em contato com o patógeno a expressão de proteínas relacionadas com o metabolismo primário diminui. Por outro lado, Trichoderma atroviride mostrou uma maior expressão de proteínas relacionadas com biocontrole na presença de micélio do patógeno. Nesta espécie identificamos 59 proteínas de 116 diferencialmente expressas, principalmente proteínas relacionadas com a degradação da parede celular: α- manosidase, quitinase, mutanase, glicosidase, endoquitinase e, algumas famílias de glicoside hidrolases. Os resultados indicam que estas espécies apresentam um elevado potencial como agentes de controle de G. citricarpa. Os resultados são pioneiros em detalhar a interação de Trichoderrma com G. citricarpa, por meio da análise do secretoma. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Biological control agents (BCA) have received great recognition, and their use has contributed as a complement or replacement of agrochemicals. However, there are few studies on the biological control of Black spot of citrus, caused by the fungus Guignardia citricarpa, which prevents the market in natura, besides damaging their export by the intensive use of chemical inputs to control this pathogen. Trichoderma fungi are the most applied worldwide BCA against various relevant plant pathogens. The purpose of this study was to identify extracellular proteins secreted by T. atroviride T17 and of T. harzianum T1A, which are effective for the control of G. citricarpa. Bidimensional electrophoresis (2D) allowed obtaining the secreted protein profiles of Trichoderma grown in glucose medium (control) and in medium containing inactivated mycelium of G. citricicarpa. From the 178 differentially expressed proteins by T. harzianum, 68 were identified, most of them related to biocontrol mechanisms, even in the control medium. In the presence of the pathogen, the expression of proteins related to the metabolism decreases. On the other hand, Trichoderma atroviride showed higher expression of proteins related to biocontrol pathogen when grown in the presence of pathogen mycelium, when compared to the control medium. From the 116 differentially expressed proteins, 59 were identified, mainly proteins related to fungi cell wall degradation such as α-mannosidase, chitinase, mutanase, glycosidase, endochitinase and, some families of glycoside hydrolases. The results indicate that these species have a high potential as biocontrol agents of G. citricicarpa. These results are pioneers in to detail the Trichoderrma interaction with G. citricicarpa through the secretome analysis.

A viticultura é uma atividade de grande importância econômica, destacando-se a sustentabilidade da pequena propriedade e o desenvolvimento territorial associados às atividades ligadas ao turismo. As plantas cultivadas se tornam vulneráveis a patógenos e insetos-praga e a videira apresenta diversas espécies consideradas pragas que reduzem sua produção e rentabilidade, entre estas, Spodoptera frugiperda, causando danos em diferentes partes da planta. Fungos entomopatogênicos podem oferecer uma alternativa aos pesticidas convencionais para o controle de pragas, pois produzem enzimas que degradam o exoesqueleto do inseto como quitinases e proteases facilitando o modo de infecção. Neste trabalho foi avaliado o potencial inseticida do fungo Nomurea rileyi, linhagem UCS03, contra S. frugiperda e o perfil eletroforético por SDS-PAGE das proteínas secretadas por N. rileyi em presença da cutícula do inseto em diferentes intervalos de tempo em gel unidimensional. O fungo N. rileyi apresentou virulência contra S. frugiperda, determinando um CL50 de 2 x 109conídios/mL com a linhagem UCS03 demonstrando atividade bionseticida. Na avaliação do perfil proteico do secretoma de N. rileyi em presença da cutícula do inseto, em diferentes tempos de cultivo, foi possível verificar um perfil altamente diferenciado. A maior concentração de proteína foi encontrada no 14° dia de incubação (0,3507 mg/mL) reduzindo a quantidade de proteínas após este período. Na análise por SDS-PAGE foi possível verificar diferentes proteínas de diferentes massas moleculares, nos intervalos de tempo considerados, sendo muitas inferiores a 75 kDa. Estas proteínas com diferentes massas moleculares podem estar envolvidas no metabolismo do fungo. Desta forma, estes resultados podem contribuir para a compreensão do processo de infecção de N. rileyi em S. frugiperda, oferecendo potencial para o desenvolvimento de novas pesquisas e aplicações destas em processos biotecnológicos. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-03-14T12:21:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ana Carolina Ruiz.pdf: 656327 bytes, checksum: 52c5a7db081b0ec94339972595956f52 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T12:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ana Carolina Ruiz.pdf: 656327 bytes, checksum: 52c5a7db081b0ec94339972595956f52 (MD5) Previous issue date: 2017-03-14 / Viticulture is an activity of great economic importance with emphasis on the sustainability of small property and territorial development associated with tourism related activities. Cultivated plants become vulnerable to pathogens and insect pests and the vine has several species considered as pests that reduce their production and profitability, among them, Spodoptera frugiperda, with causes damage in different parts of the plant. Entomopathogenic fungi can provide an alternative to conventional pesticides for controlling pests, they produce enzymes that degrade the insect exoskeleton, such aschitinases and proteases facilitating the infection. In this work, the insecticide potential of the fungus Nomurea rileyi and S. frugiperda was evaluated, as well as the proteins secreted by N. rileyi in the presence of insect cuticle at different time intervals in one-dimensional gel. The fungus N. rileyi presented virulence against S. frugiperda, determining a CL50 of 2 x 109 con / mL with UCS03 strain demonstrating bionseticida activity. In assessing the protein profile of secretome N. rileyi in the presence of insect cuticle, at different times of cultivation, a highly differentiated profile was verified. The highest concentration of protein was found at day 14 of incubation (0.3507 mg / ml) reducing the amount of protein after this period. In the one-dimensional gel analysis was verified different molecular weights of proteins, in the time interval considered being many less than 75kDa. These proteins with different molecular weights may be involved in fungal metabolism. Thus, these results can contribute to the understanding of the infection process of N. rileyi in S. frugiperda, offering potential for the development of new researches and applications in biotechnological processes.

O Brasil é o maior produtor de citros, sendo um dos seus principais produtos de exportação da cadeia agroindustrial. Um dos fatores que afetam a qualidade e a produção do produto final obtido é a Mancha Marrom de Alternaria, causado pelo fungo Alternaria alternata. A doença provoca desfolha, seca de ramos e queda de frutos em tangerinas e seus híbridos. Para controle dessa doença são utilizados fungicidas, porém, a mancha marrom é uma doença de difícil controle podendo ser necessárias de 7 a 10 aplicações do fungicida, aparecimento de resistência dos fungos, intoxicação nas pessoas e contaminação do meio ambiente devido ao emprego de fungicidas. Métodos alternativos como o controle biológico com aplicações de micro-organismos antagonistas e a nutrição das plantas são opções de menor impacto ao meio ambiente. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de Trichoderma spp., Bacillus subtilis e fertilizante organomineral, no controle da Mancha Marrom de Alternaria em plantas cítricas de tangerina Ponkan. O experimento foi realizado com delineamento casualizado, constituído de oito tratamentos com quatro repetições. Os experimentos foram avaliados quanto a incidência da doença. Os dados mostraram que o melhor controle foi o tratamento químico, porém os tratamentos com Trichoderma spp., Trichoderma spp. + fertilizante e Trichoderma spp. + Bacillus subtilis apresentaram ótimas taxas de controle, podendo inclusive substituir o tratamento químico no controle desta doença. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2017-06-13T14:28:19Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Bianca Luzardo Porto.pdf: 1070166 bytes, checksum: 4e890666fce3c2b0d8ce25ef2c71241f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T14:28:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Bianca Luzardo Porto.pdf: 1070166 bytes, checksum: 4e890666fce3c2b0d8ce25ef2c71241f (MD5) Previous issue date: 2017-06-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Brazil is the largest citrus producer, being one of its main exports of agro-industrial chain. One of the factors that affect the quality and production of the final product is the Brown Spot Alternaria, caused by the fungus Alternaria alternata. The disease causes leaf drop, dry branches and fruit drop in tangerines and their hybrids. To control this disease fungicides are used, however, the brown spot is a difficult to control disease, may be required from 7 to 10 applications of fungicide, appearance of resistance of fungi, intoxication in people and environment contamination owing the application of fungicides. Alternative methods such as biological control with applications antagonistic microorganisms and plant nutrition are options of smaller impact to the environment. Therefore, the objective of this work was to evaluate the potential of Trichoderma spp., Bacillus subtilis and fertilizer, in control of Alternaria Brown Spot in citrus plants Ponkan tangerine. The experiment was carried out in a randomized design, consisting of eight treatments with four replicates. The experiments were evaluated for the incidence of the disease. The data showed that the best control was the chemical treatment, but the treatments with Trichoderma spp., Trichoderma spp. + Fertilizer and Trichoderma spp. + Bacillus subtilis presented excellent control rates, and may even replace chemical treatment in the control of this disease.

A viticultura é uma atividade de grande importância econômica, destacando-se a sustentabilidade da pequena propriedade e o desenvolvimento territorial associados às atividades ligadas ao turismo. As plantas cultivadas se tornam vulneráveis a patógenos e insetos-praga e a videira apresenta diversas espécies consideradas pragas que reduzem sua produção e rentabilidade, entre estas, Spodoptera frugiperda, causando danos em diferentes partes da planta. Fungos entomopatogênicos podem oferecer uma alternativa aos pesticidas convencionais para o controle de pragas, pois produzem enzimas que degradam o exoesqueleto do inseto como quitinases e proteases facilitando o modo de infecção. Neste trabalho foi avaliado o potencial inseticida do fungo Nomurea rileyi, linhagem UCS03, contra S. frugiperda e o perfil eletroforético por SDS-PAGE das proteínas secretadas por N. rileyi em presença da cutícula do inseto em diferentes intervalos de tempo em gel unidimensional. O fungo N. rileyi apresentou virulência contra S. frugiperda, determinando um CL50 de 2 x 109conídios/mL com a linhagem UCS03 demonstrando atividade bionseticida. Na avaliação do perfil proteico do secretoma de N. rileyi em presença da cutícula do inseto, em diferentes tempos de cultivo, foi possível verificar um perfil altamente diferenciado. A maior concentração de proteína foi encontrada no 14° dia de incubação (0,3507 mg/mL) reduzindo a quantidade de proteínas após este período. Na análise por SDS-PAGE foi possível verificar diferentes proteínas de diferentes massas moleculares, nos intervalos de tempo considerados, sendo muitas inferiores a 75 kDa. Estas proteínas com diferentes massas moleculares podem estar envolvidas no metabolismo do fungo. Desta forma, estes resultados podem contribuir para a compreensão do processo de infecção de N. rileyi em S. frugiperda, oferecendo potencial para o desenvolvimento de novas pesquisas e aplicações destas em processos biotecnológicos. / Viticulture is an activity of great economic importance with emphasis on the sustainability of small property and territorial development associated with tourism related activities. Cultivated plants become vulnerable to pathogens and insect pests and the vine has several species considered as pests that reduce their production and profitability, among them, Spodoptera frugiperda, with causes damage in different parts of the plant. Entomopathogenic fungi can provide an alternative to conventional pesticides for controlling pests, they produce enzymes that degrade the insect exoskeleton, such aschitinases and proteases facilitating the infection. In this work, the insecticide potential of the fungus Nomurea rileyi and S. frugiperda was evaluated, as well as the proteins secreted by N. rileyi in the presence of insect cuticle at different time intervals in one-dimensional gel. The fungus N. rileyi presented virulence against S. frugiperda, determining a CL50 of 2 x 109 con / mL with UCS03 strain demonstrating bionseticida activity. In assessing the protein profile of secretome N. rileyi in the presence of insect cuticle, at different times of cultivation, a highly differentiated profile was verified. The highest concentration of protein was found at day 14 of incubation (0.3507 mg / ml) reducing the amount of protein after this period. In the one-dimensional gel analysis was verified different molecular weights of proteins, in the time interval considered being many less than 75kDa. These proteins with different molecular weights may be involved in fungal metabolism. Thus, these results can contribute to the understanding of the infection process of N. rileyi in S. frugiperda, offering potential for the development of new researches and applications in biotechnological processes.

O Brasil é o maior produtor de citros, sendo um dos seus principais produtos de exportação da cadeia agroindustrial. Um dos fatores que afetam a qualidade e a produção do produto final obtido é a Mancha Marrom de Alternaria, causado pelo fungo Alternaria alternata. A doença provoca desfolha, seca de ramos e queda de frutos em tangerinas e seus híbridos. Para controle dessa doença são utilizados fungicidas, porém, a mancha marrom é uma doença de difícil controle podendo ser necessárias de 7 a 10 aplicações do fungicida, aparecimento de resistência dos fungos, intoxicação nas pessoas e contaminação do meio ambiente devido ao emprego de fungicidas. Métodos alternativos como o controle biológico com aplicações de micro-organismos antagonistas e a nutrição das plantas são opções de menor impacto ao meio ambiente. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de Trichoderma spp., Bacillus subtilis e fertilizante organomineral, no controle da Mancha Marrom de Alternaria em plantas cítricas de tangerina Ponkan. O experimento foi realizado com delineamento casualizado, constituído de oito tratamentos com quatro repetições. Os experimentos foram avaliados quanto a incidência da doença. Os dados mostraram que o melhor controle foi o tratamento químico, porém os tratamentos com Trichoderma spp., Trichoderma spp. + fertilizante e Trichoderma spp. + Bacillus subtilis apresentaram ótimas taxas de controle, podendo inclusive substituir o tratamento químico no controle desta doença. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Brazil is the largest citrus producer, being one of its main exports of agro-industrial chain. One of the factors that affect the quality and production of the final product is the Brown Spot Alternaria, caused by the fungus Alternaria alternata. The disease causes leaf drop, dry branches and fruit drop in tangerines and their hybrids. To control this disease fungicides are used, however, the brown spot is a difficult to control disease, may be required from 7 to 10 applications of fungicide, appearance of resistance of fungi, intoxication in people and environment contamination owing the application of fungicides. Alternative methods such as biological control with applications antagonistic microorganisms and plant nutrition are options of smaller impact to the environment. Therefore, the objective of this work was to evaluate the potential of Trichoderma spp., Bacillus subtilis and fertilizer, in control of Alternaria Brown Spot in citrus plants Ponkan tangerine. The experiment was carried out in a randomized design, consisting of eight treatments with four replicates. The experiments were evaluated for the incidence of the disease. The data showed that the best control was the chemical treatment, but the treatments with Trichoderma spp., Trichoderma spp. + Fertilizer and Trichoderma spp. + Bacillus subtilis presented excellent control rates, and may even replace chemical treatment in the control of this disease.