Submitted by MARIA EDUARDA CHIARADIA FURQUIM null (mecfurquim@yahoo.com.br) on 2016-12-12T22:31:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Maria Eduarda Chiaradia Furquim 2016.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-12-15T15:41:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 furquim_mec_me_jabo.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T15:41:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 furquim_mec_me_jabo.pdf: 2147185 bytes, checksum: 9cbd94cd959a4435ddb99f33983dbb76 (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Com o intuito avaliar a frequência de aglutinas anti-Leptospira dentre as amostras analisadas no Laboratório de Brucelose e Leptospirose da Unesp, Câmpus Jaboticabal, realizou- se uma investigação retrospectiva dos resultados de exames sorológicos para diagnóstico de leptospirose entre os anos de 2007 e 2015. Neste período foram recebidas 24.483 amostras bovinas, 1.855 amostras equinas, 819 amostras caninas, 532 amostras ovinas, 230 amostras caprinas e 123 amostras suínas. As amostras bovinas provinham de 21 estados brasileiros e a frequência de reagentes foi de 35,30% (IC 95%: 34,70% - 35,90%), sendo o sorogrupo Sejroe o mais relevante. Das amostras caninas, a maioria foi originaria do Estado de São Paulo e a frequência de amostras reagentes foi de 23,93% (IC 95%: 21,01% - 26,85%), sendo o sorogrupo Canicola o mais relevante. Nos equinos, a frequência de amostras reagentes encontrada foi de 46,95% (IC 95%: 44,68% - 49,23%), sendo o sorogrupo Icterohaemorrhagiae o mais importante nesta espécie. A frequência de reagentes encontrada nas amostras das espécies ovina, caprina e suína foi 7,32% (IC 95%: 5,12% - 9,55%), 1,30% (IC 95%: 0,0044% - 3,764%) e 6,03% (IC 95%: 1,70% - 10,37%), respectivamente, e o sorogrupo de maior ocorrência nesses animais foi Icterohaemorrhagiae. Tais resultados permitem confirmar o caráter endêmico da leptospirose em território brasileiro, bem como evidenciar a importância dos hospedeiros de manutenção do agente na disseminação da doença. / In order to evaluate the frequency of anti-Leptospira agglutinins among the samples analyzed in the Leptospirosis and Brucellosis Laboratory, Unesp, Jaboticabal Campus, a retrospective investigation of the results of serological tests for leptospirosis between the years 2007 and 2015 was performed. During this period, 24,483 bovine samples, 1,855 equine samples, 819 canine samples, 532 sheep samples, 230 goats samples and 123 swine samples were received. Bovine samples came from 21 Brazilian states and the frequency of reactors was 35.30% (95% CI: 34.70% - 35.90%) and serogroup Sejroe was the most relevant. Of canine samples, most were originally from the state of São Paulo and the frequency of reacting samples was 23.93% (95% CI: 21.01% - 26.85%), the serogroup Canicola was the most relevant. In horses, the frequency of reagent samples was found to be 46.95% (95% CI: 44.68% - 49.23%), the serogroup Icterohaemorrhagiae was the most important in this species. The frequency of reactors among of sheep, goats and swine samples was 7.32% (95% CI: 5.12% - 9.55%), 1.30% (95% CI: 0.0044% - 3.764%) and 6.03% (95% CI: 1.70% - 10.37%), respectively, and the serogroup most frequent in these animals was Icterohaemorrhagiae. These results confirm the endemicity of leptospirosis in Brazil, as well as highlight the importance of the agent maintenance hosts in the dissemination of the disease.

Submitted by RAFAEL MASSA null (rmassavet@yahoo.com.br) on 2017-01-25T17:36:12Z No. of bitstreams: 1 TESE versão final.pdf: 300203 bytes, checksum: 56039d51bf4b813ec825d1d9f0da7f3e (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém o certificado de aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-01-27T13:23:12Z (GMT) / Submitted by RAFAEL MASSA null (rmassavet@yahoo.com.br) on 2017-01-27T16:30:18Z No. of bitstreams: 1 Tese_Rafael_Massa.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-01-30T16:06:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 massa_r_dr_jabo.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T16:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 massa_r_dr_jabo.pdf: 774602 bytes, checksum: 777b45d4c1d3d2fb5b52fd11f14af8ad (MD5) Previous issue date: 2017-01-17 / Com o objetivo de analisar as diferentes formas de interpretação dos resultados em pesquisas epidemiológicas com Leptospira spp., em quatro espécies de hospedeiros, as concordâncias entre os resultados da soroaglutinação microscópica (SAM) contra 24 sorovariedades foram testadas por meio do coeficiente Kappa. Os resultados obtidos com o cálculo clássico da soroprevalência, o método da sorovariedade mais provável (SMP) com 24 e oito antígenos e três variações do SMP foram comparados por meio da intersecção entre os intervalos de confiança de 95%. As concordâncias entre sorovariedades nos resultados da SAM indicam que a maioria das coaglutinações ocorre dentro do esperado pelo acaso e que não é possível atribuí-las apenas a reações cruzadas. O SMP resultou em soroprevalências menores que as obtidas pelo método clássico. Quanto mais antígenos são utilizados na SAM, menores serão a soroprevalências para cada sorovariedade, demonstrando que a bateria de antígenos interfere nos resultados. As diferentes formas de calcular o resultado do SMP mostraram ser coeficientes diferentes, que podem confundir os leitores, caso não sejam bem definidos nos trabalhos. Conclui-se que o método clássico de cálculo da soroprevalência seria o mais indicado, respeitando-se as limitações da SAM na conclusão das pesquisas. / Aiming to analyze the different ways of interpreting the results of epidemiological research with Leptospira spp. in four host species, the agreement between the results in the microscopic agglutination test (MAT) against 24 serovars was tested by the Kappa coefficient. The results with the classic seroprevalence method, the most likely serovar method (SMP) with 24 and eight antigens and three variations of the SMP were compared by the intersection of the 95% confidence intervals. Agreements between serovars in the results of MAT indicate that most co-agglutinations occur randonly, and cross-reactions can not assign as the only cause of them. The SMP resulted in lower seroprevalences than those obtained by the classical method. The more antigens are used in MAT, lower the seroprevalences for each serovar, demonstrating that the antigen battery interferes with the results. The different ways of calculating the result of the SMP proved to be different coefficients, which may confuse readers, if they are not well defined in the research. It was concluded that the classic seroprevalence would be the most appropriate method of calculation, respecting the limitations of the MAT in the research's conclusions.

Orientador: Luís Antonio Mathias / Resumo: Com o intuito avaliar a frequência de aglutinas anti-Leptospira dentre as amostras analisadas no Laboratório de Brucelose e Leptospirose da Unesp, Câmpus Jaboticabal, realizou- se uma investigação retrospectiva dos resultados de exames sorológicos para diagnóstico de leptospirose entre os anos de 2007 e 2015. Neste período foram recebidas 24.483 amostras bovinas, 1.855 amostras equinas, 819 amostras caninas, 532 amostras ovinas, 230 amostras caprinas e 123 amostras suínas. As amostras bovinas provinham de 21 estados brasileiros e a frequência de reagentes foi de 35,30% (IC 95%: 34,70% - 35,90%), sendo o sorogrupo Sejroe o mais relevante. Das amostras caninas, a maioria foi originaria do Estado de São Paulo e a frequência de amostras reagentes foi de 23,93% (IC 95%: 21,01% - 26,85%), sendo o sorogrupo Canicola o mais relevante. Nos equinos, a frequência de amostras reagentes encontrada foi de 46,95% (IC 95%: 44,68% - 49,23%), sendo o sorogrupo Icterohaemorrhagiae o mais importante nesta espécie. A frequência de reagentes encontrada nas amostras das espécies ovina, caprina e suína foi 7,32% (IC 95%: 5,12% - 9,55%), 1,30% (IC 95%: 0,0044% - 3,764%) e 6,03% (IC 95%: 1,70% - 10,37%), respectivamente, e o sorogrupo de maior ocorrência nesses animais foi Icterohaemorrhagiae. Tais resultados permitem confirmar o caráter endêmico da leptospirose em território brasileiro, bem como evidenciar a importância dos hospedeiros de manutenção do agente na disseminação da doença. / Mestre

Toxoplasma gondii is a single-celled parasite that has a wide range of hosts including humans. A cross-sectional survey was conducted to investigate T. gondii seroprevalence and associated risk factors in small ruminants, pigs, poultry and cats in the Oliver Reginald Tambo District in the Eastern Cape in South Africa between June 2016 and October 2016. Household-level and animal-level data were collected using a close-ended questionnaire. One sample of each present species was collected in each household. The Toxoreagent ®, Mast Group, United Kingdom, latex agglutination test, was used for T. gondii antibody detection. Positive samples had agglutination patterns at dilutions of 1:64 or greater, except for chickens, whose cut off titre was 1:32. A household was classified as T. gondii seropositive if at least one species tested positive. The study revealed that 78 out of 121 sheep (64.46%), 69 out of 128 goats (53.91%), 36 out of 106 pigs (33.96%), 35 out of 109 cats (32.11%) and 46 out of 137 chickens (33.58%) were seropositive for the parasite. Seropositivity was assessed for association with potential risk factors. Age, location, climate, animal production system, rodent control, cat-feed access and cat faecal disposal were found to be significantly associated with seropositivity using the Chi-Squared test or odds ratio confirmed by the Fisher's exact test. The relatively high seroprevalence of T. gondii detected in this study suggests that the infection T. gondii poses a substantial public health risk through the consumption of infected raw or undercooked meat infected with T.gondii cysts as well as contact with cat faeces infected with T. gondii oocysts. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2016. / Veterinary Tropical Diseases / MSc / Unrestricted

This project was undertaken to establish whether the Onderstepoort Biological Products Fowl Typhoid (OBPft) vaccine registered as an injectable vaccine was effective and safe when administered orally to commercial layers. Its efficacy and duration of protection were compared to the intramuscular injectable route. Commercial brown layer hens were used as they were found to be highly susceptible to Salmonella gallinarum infections. In the safety trial birds were euthanased at timed intervals spanning 4-weeks post vaccination. Necropsies were performed and samples were taken and tested. No clinical signs or mortalities could be attributed to the OBPft vaccine. No active shedding of the vaccine strain could be detected. Slight pathological changes were noted with both routes of vaccination; however these changes were transient, returning to normal within the observation period. The injected group showed a better serological response with the serum agglutination test than the orally vaccinated groups. In the duration of protection trial the two routes of vaccination were compared, the birds were challenged at three 8-week intervals post vaccination. All the unvaccinated birds died. The protection offered to the vaccinated groups was good when birds were challenged 8 and 16-weeks after vaccination. However, this dipped steeply by the challenge 24-weeks post vaccination. Statistically (ANOVA, p<0.05) it was found that there was no significant difference between the protection offered by either the oral or injected route of vaccination with the OBPft vaccine. / Dissertation (MSc (Veterinary Science))--University of Pretoria, 2006. / Production Animal Studies / unrestricted

Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Resumo: O carbúnculo sintomático é um problema sanitário mundial, responsável por elevados coeficientes de mortalidade em bovinos e ovinos. A imunização dos animais jovens, seguida de reforço anual até 2,5 anos de idade, é a principal medida profilática. Foram realizados três experimentos distintos com intuito de avaliar as respostas sorológicas de bovinos vacinados contra o carbúnculo sintomático, pelos testes de aglutinação em placa e Elisa, empregando-se como antígenos a cepa de referência (MT) e uma cepa de campo (SP). No primeiro experimento, os bezerros foram organizados em três grupos (G1, G2 e G3) e submetidos a três protocolos distintos de vacinação empregando-se uma vacina comercial polivalente contra clostridioses. O G1 foi primovacinado aos 4 meses de idade e recebeu o reforço na desmama (8 meses). O G2 recebeu a primeira dose na desmama e reforço 30 dias após. O G3 foi vacinado somente na desmama. As coletas de soro foram realizas aos 4, 8, 9 e 10 meses de idade dos bezerros. O G1 apresentou a melhor resposta sorológica em comparação aos outros dois protocolos. Quando a avaliação dos grupos foi realizada aos 10 meses de idade, independente do protocolo empregado, a resposta sorológica foi similar. No segundo experimento, foi avaliada a imunidade natural passiva de bezerros, filhos de vacas vacinadas até 30 dias antes do parto (2ª dose), empregando-se duas vacinas comercias polivalente contra clostridioses. As coletas de soro foram realizadas aos (±)7, 45 e 90 dias de idade dos bezerros. Independente das vacinas empregadas na imunização ativa das mães, a resposta sorológica passiva dos bezerros avaliados foi similar até os 3 meses de idade. Houve uma correlação linear da resposta sorológica passiva dos bezerros com a data de vacinação das mães e o dia do parto quando empregado o teste de Elisa. No terceiro experimento, as 30 vacas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Black leg disease is one of the most important sanitary problem, responsible for high levels of mortality observed in bovines and ovines herds. The vaccination of young animals, followed by annual booter until 2,5 years-old, is the major preventive measure against outbreaks. Three distinct experiments were conducted to measure the vaccinal response from bovines. The vaccinal strains used were the reference MT and field Clostridium chauvoei isolated. Sera from vaccinated animals were tested by agglutination and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa), both standardized for the present study. First experiment, calves were divided into three groups (G1, G2 and G3); and submitted to three vaccination schedule with a polyvalent vaccine. The G1 received first vaccine at 4 months of age and a subsequent booster after calving (8 month-old). The G2 received first vaccine dose after calving and booster at 30 days after. The G3 received only one vaccine dose at 8 months. The sera were colleted at 4, 8, 9 and 10 months for all groups studied. The G1 group showed the best serological response at 10 months of age in comparison to G2 e G3 and control. Moreover, at 10 months of age all groups presented similar levels of serological response. The second experiment, the natural immunity of calves, separated from their mothers vaccinated 30 days before calving with two polyvalent vaccines. The respective serum was colleted at (±) 7, 45 and 90 days of age. All calves presented similar serological response at 3 months of age, independent of vaccinal strain used. The third experiment, 30 heifers, Nelore race, aged above 4 years-old, without vaccination against black leg, were vaccinated with two Clostridium strains. When the SP strain was used the serological response was considered good in G3 (first experiment), second and third experiment for agglutination assay. To compare both techniques, agglutination... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:48:02Z : No. of bitstreams: 1 araujo_rf_me_jabo.pdf: 248554 bytes, checksum: e7d4bd27c73efa391fb0fac3082dd622 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O carbúnculo sintomático é um problema sanitário mundial, responsável por elevados coeficientes de mortalidade em bovinos e ovinos. A imunização dos animais jovens, seguida de reforço anual até 2,5 anos de idade, é a principal medida profilática. Foram realizados três experimentos distintos com intuito de avaliar as respostas sorológicas de bovinos vacinados contra o carbúnculo sintomático, pelos testes de aglutinação em placa e Elisa, empregando-se como antígenos a cepa de referência (MT) e uma cepa de campo (SP). No primeiro experimento, os bezerros foram organizados em três grupos (G1, G2 e G3) e submetidos a três protocolos distintos de vacinação empregando-se uma vacina comercial polivalente contra clostridioses. O G1 foi primovacinado aos 4 meses de idade e recebeu o reforço na desmama (8 meses). O G2 recebeu a primeira dose na desmama e reforço 30 dias após. O G3 foi vacinado somente na desmama. As coletas de soro foram realizas aos 4, 8, 9 e 10 meses de idade dos bezerros. O G1 apresentou a melhor resposta sorológica em comparação aos outros dois protocolos. Quando a avaliação dos grupos foi realizada aos 10 meses de idade, independente do protocolo empregado, a resposta sorológica foi similar. No segundo experimento, foi avaliada a imunidade natural passiva de bezerros, filhos de vacas vacinadas até 30 dias antes do parto (2ª dose), empregando-se duas vacinas comercias polivalente contra clostridioses. As coletas de soro foram realizadas aos (±)7, 45 e 90 dias de idade dos bezerros. Independente das vacinas empregadas na imunização ativa das mães, a resposta sorológica passiva dos bezerros avaliados foi similar até os 3 meses de idade. Houve uma correlação linear da resposta sorológica passiva dos bezerros com a data de vacinação das mães e o dia do parto quando empregado o teste de Elisa. No terceiro experimento, as 30 vacas... / Black leg disease is one of the most important sanitary problem, responsible for high levels of mortality observed in bovines and ovines herds. The vaccination of young animals, followed by annual booter until 2,5 years-old, is the major preventive measure against outbreaks. Three distinct experiments were conducted to measure the vaccinal response from bovines. The vaccinal strains used were the reference MT and field Clostridium chauvoei isolated. Sera from vaccinated animals were tested by agglutination and Enzyme Linked Immunosorbent Assay (Elisa), both standardized for the present study. First experiment, calves were divided into three groups (G1, G2 and G3); and submitted to three vaccination schedule with a polyvalent vaccine. The G1 received first vaccine at 4 months of age and a subsequent booster after calving (8 month-old). The G2 received first vaccine dose after calving and booster at 30 days after. The G3 received only one vaccine dose at 8 months. The sera were colleted at 4, 8, 9 and 10 months for all groups studied. The G1 group showed the best serological response at 10 months of age in comparison to G2 e G3 and control. Moreover, at 10 months of age all groups presented similar levels of serological response. The second experiment, the natural immunity of calves, separated from their mothers vaccinated 30 days before calving with two polyvalent vaccines. The respective serum was colleted at (±) 7, 45 and 90 days of age. All calves presented similar serological response at 3 months of age, independent of vaccinal strain used. The third experiment, 30 heifers, Nelore race, aged above 4 years-old, without vaccination against black leg, were vaccinated with two Clostridium strains. When the SP strain was used the serological response was considered good in G3 (first experiment), second and third experiment for agglutination assay. To compare both techniques, agglutination... (Complete abstract click electronic access below)

Globalmente ocorrem cerca de 800.000 mortes de crianças menores de cinco anos associadas à diarreia, principalmente na África subsaariana, sul da Ásia e América Latina. Dentre os patógenos causadores de diarreia, Escherichia coli diarreiogênica (DEC) é o agente etiológico bacteriano mais comum, incluindo E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli produtora da toxina de Shiga e seu subgrupo enterohemorrágica (STEC/EHEC). Os dados epidemiológicos indicam a importância do diagnóstico precoce e sua realização em locais com pouca infraestrutura. Desta forma o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um teste rápido, sensível e específico para o diagnóstico de EPEC e STEC/EHEC. Primeiramente, foram definidas diferentes condições do cultivo bacteriano: Dulbecco\'s modified Eagle\'s (DMEM), DMEM contendo 1% de triptona e DMEM pré-condicionado para o cultivo dos isolados de EPEC/EHEC e avaliação da produção/secreção das proteínas secretadas EspA e EspB, utilizando anticorpos monoclonais (MAb) e policlonais (PAb) anti-EspA ou anti-EspB por ELISA indireto. Para a avaliação da liberação das toxinas de Shiga para o sobrenadante do cultivo bacteriano de STEC/EHEC, foram testados diferentes condições de tratamento, o cultivo bacteriano foi tratado com Triton X-100 e o sedimento foi tratado com tampão de lise B-PER utilizando MAb e PAb anti-Stx1 ou anti-Stx2 por ELISA de captura. Subsequentemente, foi desenvolvido e avaliado o teste de aglutinação em látex para a detecção de EspB em isolados de EPEC/EHEC, e Stx1 e Stx2 em isolados de STEC/EHEC. EspB foi definida como biomarcador, o MAb anti-EspB como ferramenta para o diagnóstico de EPEC/EHEC, e a condição ideal para a produção/secreção de EspB foi o cultivo em DMEM. Para o diagnóstico de STEC/EHEC a condição ideal para liberação das toxinas Stx foi o tratamento do cultivo com Triton X-100. Tanto o ELISA, como a aglutinação em látex apresentaram sensibilidades e especificidades exigidas para testes diagnósticos de doenças negligenciadas em países em desenvolvimento e os testes de aglutinação em látex para a detecção destes patógenos foram precisos, rápidos e fáceis de executar, sendo portanto promissores para a utilização em laboratórios com mínima infraestrutura. / There are 800,000 deaths associated with diarrhea worldwide in children under five, and these are mainly in sub-Saharan Africa, Southeast Asia and Latin America. Among the causative pathogens of diarrhea, diarrheagenic Escherichia coli (DEC) is the most common bacterial etiological agent, including enteropathogenic E. coli (EPEC) and Shiga toxin-producing E. coli and its subgroup enterohemorrhagic E. coli (STEC/EHEC). Epidemiological data indicate the importance of early diagnosis and its realization in places with limited resources. Therefore, the objective of this work was to develop a rapid, sensitive and specific test for the diagnosis of EPEC and STEC/EHEC. First, different bacterial growth conditions were evaluated: Dulbecco\'s modified Eagle\'s medium (DMEM) or DMEM containing 1% tryptone, and DMEM pre-conditioned with EPEC/EHEC isolates. The production/secretion of the secreted proteins EspA and EspB was determined by indirect ELISA utilizing anti-EspA or anti-EspB monoclonal (MAb) and polyclonal (PAb) antibodies. Different treatments were tested for their effect on the release of Shiga toxins into the medium of STEC/EHEC bacterial cultures. The bacterial culture supernatant was treated with Triton X-100, and the sediment was treated with B-PER lysis buffer. The toxins release was determined by capture ELISA using anti-Stx1 or anti-Stx2 MAb and PAb. Subsequently, a latex agglutination test was developed and evaluated for the detection of EspB in EPEC/EHEC isolates and of Stx1 and Stx2 in STEC/EHEC isolates. EspB was defined as the biomarker and anti-EspB MAb as the tool for the diagnosis of EPEC/EHEC. The ideal conditions for the production/secretion of EspB were cultivation in DMEM. For the diagnosis of STEC/EHEC, the ideal conditions for the release of Stx were Triton X-100 treatment. ELISA as well as latex agglutination showed the sensitivities and specificities required for diagnostic tests of neglected diseases in developing countries. The latex agglutination test for the detection of these pathogens was precise, rapid and easy to perform, thereby being promising for their utilization in laboratories with limited resources.

Globalmente ocorrem cerca de 800.000 mortes de crianças menores de cinco anos associadas à diarreia, principalmente na África subsaariana, sul da Ásia e América Latina. Dentre os patógenos causadores de diarreia, Escherichia coli diarreiogênica (DEC) é o agente etiológico bacteriano mais comum, incluindo E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli produtora da toxina de Shiga e seu subgrupo enterohemorrágica (STEC/EHEC). Os dados epidemiológicos indicam a importância do diagnóstico precoce e sua realização em locais com pouca infraestrutura. Desta forma o objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um teste rápido, sensível e específico para o diagnóstico de EPEC e STEC/EHEC. Primeiramente, foram definidas diferentes condições do cultivo bacteriano: Dulbecco\'s modified Eagle\'s (DMEM), DMEM contendo 1% de triptona e DMEM pré-condicionado para o cultivo dos isolados de EPEC/EHEC e avaliação da produção/secreção das proteínas secretadas EspA e EspB, utilizando anticorpos monoclonais (MAb) e policlonais (PAb) anti-EspA ou anti-EspB por ELISA indireto. Para a avaliação da liberação das toxinas de Shiga para o sobrenadante do cultivo bacteriano de STEC/EHEC, foram testados diferentes condições de tratamento, o cultivo bacteriano foi tratado com Triton X-100 e o sedimento foi tratado com tampão de lise B-PER utilizando MAb e PAb anti-Stx1 ou anti-Stx2 por ELISA de captura. Subsequentemente, foi desenvolvido e avaliado o teste de aglutinação em látex para a detecção de EspB em isolados de EPEC/EHEC, e Stx1 e Stx2 em isolados de STEC/EHEC. EspB foi definida como biomarcador, o MAb anti-EspB como ferramenta para o diagnóstico de EPEC/EHEC, e a condição ideal para a produção/secreção de EspB foi o cultivo em DMEM. Para o diagnóstico de STEC/EHEC a condição ideal para liberação das toxinas Stx foi o tratamento do cultivo com Triton X-100. Tanto o ELISA, como a aglutinação em látex apresentaram sensibilidades e especificidades exigidas para testes diagnósticos de doenças negligenciadas em países em desenvolvimento e os testes de aglutinação em látex para a detecção destes patógenos foram precisos, rápidos e fáceis de executar, sendo portanto promissores para a utilização em laboratórios com mínima infraestrutura. / There are 800,000 deaths associated with diarrhea worldwide in children under five, and these are mainly in sub-Saharan Africa, Southeast Asia and Latin America. Among the causative pathogens of diarrhea, diarrheagenic Escherichia coli (DEC) is the most common bacterial etiological agent, including enteropathogenic E. coli (EPEC) and Shiga toxin-producing E. coli and its subgroup enterohemorrhagic E. coli (STEC/EHEC). Epidemiological data indicate the importance of early diagnosis and its realization in places with limited resources. Therefore, the objective of this work was to develop a rapid, sensitive and specific test for the diagnosis of EPEC and STEC/EHEC. First, different bacterial growth conditions were evaluated: Dulbecco\'s modified Eagle\'s medium (DMEM) or DMEM containing 1% tryptone, and DMEM pre-conditioned with EPEC/EHEC isolates. The production/secretion of the secreted proteins EspA and EspB was determined by indirect ELISA utilizing anti-EspA or anti-EspB monoclonal (MAb) and polyclonal (PAb) antibodies. Different treatments were tested for their effect on the release of Shiga toxins into the medium of STEC/EHEC bacterial cultures. The bacterial culture supernatant was treated with Triton X-100, and the sediment was treated with B-PER lysis buffer. The toxins release was determined by capture ELISA using anti-Stx1 or anti-Stx2 MAb and PAb. Subsequently, a latex agglutination test was developed and evaluated for the detection of EspB in EPEC/EHEC isolates and of Stx1 and Stx2 in STEC/EHEC isolates. EspB was defined as the biomarker and anti-EspB MAb as the tool for the diagnosis of EPEC/EHEC. The ideal conditions for the production/secretion of EspB were cultivation in DMEM. For the diagnosis of STEC/EHEC, the ideal conditions for the release of Stx were Triton X-100 treatment. ELISA as well as latex agglutination showed the sensitivities and specificities required for diagnostic tests of neglected diseases in developing countries. The latex agglutination test for the detection of these pathogens was precise, rapid and easy to perform, thereby being promising for their utilization in laboratories with limited resources.

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Clinical course of the disease, results of serological tests and detection of bacteria by polymerase chain reaction (PCR) and bacterial isolation during the experiment, were compared between groups. Additionally, the main histological changes observed in brain, liver, lymph nodes, lung and kidney of 12 animals experimentally infected and seropositive for leptospirosis were described. In lesions suggestive of the disease the technique of silver impregnation of Warthin-Starry, was used as direct detection method. During the experimental period, all samples of the GI (control) were negative in the microscopic agglutination test, with the GII positivity exclusive to serogroup Pomona in six animals from 6 dpi, and in GIII, only to serogroup Icterohaemorrhagiae in five animals from 3 dpi. At necropsy the only change was pale kidney in 50% of GI, 83.33% of GII and 83.33% of GIII (p> 0.05). Only in seropositive pigs was found lesions suggestive of leptospirosis as focal microgliosis in the brain (8.33%), lymphoid hyperplasia in lymph nodes of the mediastinum a nd mesentery (41.66%), mononuclear interstitial pneumonia (58.33 %), multifocal mononuclear hepatitis, further acute tubular nephrosis (100%) and interstitial nephritis (91.66%). There was a strong association between serological condition and lesions of mononuclear hepatitis (p = 0.0128), mononuclear interstitial nephritis (p = 0.0004), tubular nephrosis (p <0.0001) and mononuclear interstitial pneumonia (p = 0, 0377). / A leptospirose suína é uma antropozoonose difundida mundialmente e causada por espiroquetas da espécie Leptospira interrogans, principalmente pelos sorovares Pomona, Icterohaemorrhagiae, Taravossi, Canicola, Grippotyphosa e Bratislava. Neste trabalho descreve-se a infecção experimental por L. interrogans sorogrupo Icterohaemorrhagiae sorovar Conpenhageni estirpe Fiocruz L1 -130, e sorogrupo Pomona sorovar Kennewicki estirpe Pomona From, em 18 fêmeas suínas com 40 dias de idade divididas em três grupos: GI (controle), GII (inoculados com sorogrupo Pomona) e GIII (inoculados com sorogrupo Icterohaemorrhagiae). Compararam -se entre os grupos, o curso clínico da doença, os resultados dos exames sorológicos e de detecção da bactéria durante o período experimental pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento bacteriano. Foram ainda descritas as principais alterações histológicas observadas em cérebro, fígado, linfonodos, pulmão e rins de 12 animais experimentalmente infectados e soropositivos para leptospirose. Em lesões sugestivas da doença utilizou-se a técnica de impregnação pela prata de Warthin-Starry, como método de detecção direta. Durante o período experimental foram negativas na soroaglutinação microscópica todas as amostras do GI (controle), havendo no GII positividade exclusiva ao sorogrupo Pomona nos seis animais a partir do 6º dia pós-infecção (dpi), e no GIII, apenas ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae, em cinco animais a partir do 3º dpi. Na necropsia a única alteração observada foi rim pálido em 50% do G I, 83,33% do GII e em 83,33% GIII (p>0,05). Somente nos suínos soropositivos constataram-se lesões sugestivas de leptospirose, como microgliose mononuclear focal no cérebro (8,33%), hiperplasia linfoide em linfonodos do mediastino e mesentério (41,66%), pneumonia intersticial mononuclear multifocal (58,33%), hepatite mononuclear focal (41,66%), além de nefrose tubular aguda (100%) e nefrite intersticial (91,66%). Houve forte associação entre a condição sorológica e as lesões de hepatite mononuclear (p=0,0128), nefrite intersticial mononuclear (p=0,0004), nefrose tubular (p<0,0001) e pneumonia intersticial mononuclear (p=0,0377).