CAPES / Os carotenoides compõe um grupo de pigmentos lipossolúveis que apresentam inúmeros benefícios à saúde humana. Dentre eles, a luteína, uma xantofila de coloração amarelo-alaranjado, destaca-se devido à sua atividade biológica. Uma vez que o organismo humano é incapaz de sintetizar carotenoides, a aquisição de luteína é possibilitada apenas pela alimentação ou suplementação. Dietas ricas em luteína tem sido associadas à melhora da função cognitiva em adultos, contudo a estrutura química da luteína que proporciona seus efeitos benéficos é extremamente sensível ao calor, baixo pH, oxigênio dissolvido e exposição a luz. A encapsulação é uma técnica que tem se mostrado eficiente na proteção de compostos bioativos contra esses agentes externos e no aumento da biodisponibilidade no organismo, permitindo que tais compostos cheguem ao sítio de absorção. Este trabalho teve como objetivos obter e caracterizar luteína nanoencapsulada em polímeros biodegradáveis, realizar a validação de um método analítico para a determinação de luteína encapsulada por espectrofotometria UV-Vis, bem como avaliar seu efeito na memória declarativa de camundongos. Luteína foi encapsulada com êxito em matrizes de zeína e poli(vinil pirrolidona) separadamente, possibilitando a obtenção de partículas nanométricas e de formato esférico. Na primeira parte do trabalho, um método analítico para a determinação de luteína em nanopartículas de zeína foi validado, apresentando limite de quantificação de 4,407 mg.L-1, parâmetro suficiente para calcular a eficiência de encapsulação em sistemas nanopartículados. Na segunda parte do trabalho, a encapsulação da luteína em nanopartículas de PVP foi capaz de aumentar em 43 vezes a solubilidade da luteína em água. Sua administração oral em camundongos (10 mg.Kg-1e 1,5 mg.Kg-1), durante 14 dias apresentou efeito 66 vezes maior que a luteína livre na memória declarativa durante a tarefa de reconhecimento de objetos. A técnica se mostrou uma alternativa viável para aumentar sua solubilidade em água e, consequentemente, sua biodisponibilidade, contribuindo com o papel da luteína no comprometimento cognitivo. / Carotenoids are a group of fat-soluble pigments presenting numerous benefits to human health. Among them, lutein, a yellow-orange xanthophyll, has attracted attention due its biological activity. Since the human body is unable to synthesize carotenoids, lutein acquisition is only possible through food or supplementation. Lutein rich diets have been associated with the improvement of cognitive functions in adults. However, the chemical structure of lutein, which is responsible for its beneficial effects, is extremely sensitive to heat, low pH, dissolved oxygen and exposure to light. Encapsulation is a technique that has proved effective in protecting bioactive compounds against external agents and increased bioavailability in the body, allowing such compounds to reach its absorption site. This study aimed to obtain and characterize lutein nanoencapsulated in biodegradable polymers, perform the analytical validation of a UV-Vis procedure to determine the lutein concentration in the nanoparticles and to evaluate the effect of encapsulated lutein on declarative memory of mice. Lutein was successful encapsulated in zein and polyvinylpirrolidone matrix, separately, allowing obtaining nanometric and spherical particles. In the first part of this work, an analytical procedure for lutein determination in zein nanoparticles was validated presenting quantification limit of 4.407 mg.L-1, which is a sufficient parameter to calculate entrapment efficiency in nanoparticulate systems. In the second part of this work, lutein encapsulation in PVP nanoparticles was able to increase 43 times lutein water solubility and its oral administration to mice (10 mg.Kg-1and 1.5 mg.Kg-1), during 14 days presented effect 66 higher than pristine lutein on mice’s declarative memory during object discrimination task. This technique showed to be a viable alternative to increase lutein water solubility and, consequently, its bioavailability, contributing with lutein’s role in cognitive impairment.

CAPES / O camu-camu (Myrciaria dúbia H. B. K. (McVaugh)) é um fruto nativo da região amazônica, reconhecido por um alto teor de vitamina C, fonte de compostos fenólicos, antocianinas e antioxidantes. Em função do seu potencial de ácido ascórbico, estudos são conduzidos com o objetivo de agregar valor a fruta como aditivo alimentar. Por isso, o presente trabalho tem por finalidade a avaliação do uso da polpa de camu-camu microencapsulada e liofilizada nas características tecnológicas da farinha de trigo e na qualidade do pão de forma, pelos métodos da caracterização físico-química e microencapsulação da polpa, avaliação físico-química do liofilizado e microencapsulados, sua eficiência, rendimento e estabilidade (25 e 45ºC), o efeito do liofilizado e microencapsulados nas propriedades da farinha, no volume especifico e nos atributos sensoriais do pão de forma. A polpa de camu-camu apresentou elevados teores de ácido ascórbico, compostos fenólicos totais e atividade antioxidante. O liofilizado contém maior teor de umidade, higroscopicidade e compostos bioativos em comparação aos microencapsulados. Com a análise da eficiência da encapsulação, verificou-se que a maltodextrina foi o mais eficiente, para o rendimento, a dextrina lactato obteve maior valor de compostos fenólicos e a maltodextrina do ácido ascórbico. A estabilidade se manteve maior à temperatura de 25ºC, entretanto analisando ambas as temperaturas, a dextrina lactato, mostrou-se como o melhor material protetor. A presença do camu – camu provocou mudanças nas características das farinhas de trigo, porém ocorreu o fortalecimento da rede de glúten da massa, tornando as massas mais curtas em relação ao controle. Os pães não diferiram sensorialmente, exceto no atributo aparência e intenção de compra do pão com camu – camu microencapsulado com dextrina lactato que foi o de maior pontuação e o preferido pelos avaliadores. A adição dos derivados de camu – camu nos pães provocou aumento de seus volumes específicos, dos compostos bioativos e da retenção de ácido ascórbico no produto final. / The camu-camu (Myrciaria dubious H. B. K. (McVaugh)) is a native fruit of the Amazon region, recognized by a high content of vitamin C, source of phenolic compounds, anthocyanins and antioxidants. Due to their potential ascorbic acid, studies are conducted with the objective of adding value to fruit as a food additive. Therefore, the present work has the purpose of evaluating the use of microencapsulated and lyophilized camu-camu pulp in the technological characteristics of wheat flour and in the quality of bread form, by the methods of physicalchemical characterization and microencapsulation of pulp, evaluation (25 and 45ºC), the effect of the lyophilized and microencapsulated in the properties of the flour, the specific volume and the sensorial attributes of the bread of form. The camu-camu pulp presented high levels of ascorbic acid, total phenolic compounds and antioxidant activity. The lyophilizate contains higher moisture content, hygroscopicity and bioactive compounds compared to microencapsulated ones. With the analysis of the efficiency of the encapsulation, maltodextrine was found to be the most efficient for yield, lactate dextrin obtained higher value of phenolic compounds and maltodextrin of ascorbic acid. The stability remained higher at 25 °C, however analyzing both temperatures, lactate dextrin, proved to be the best protective material. The presence of camu - camu caused changes in the characteristics of wheat flour, but the gluten network of the mass was strengthened, making the pasta shorter in relation to the control. The breads did not differ sensorially, except in the attribute appearance and intention to buy the bread with camu - camu microencapsulated with dextrin lactate that was the one with the highest score and the one preferred by the evaluators. The addition of the camu - camu derivatives in the breads provoked an increase in their specific volumes, the bioactive compounds and the retention of ascorbic acid in the final product.

O eugenol é um composto fenólico natural que apresenta atividade antioxidante e antimicrobiana e o seu uso como substituto de aditivos sintéticos em alimentos tem sido proposto. Contudo, pela sua instabilidade frente aos agentes externos (luz, oxigênio e calor), seu uso no processamento de alimentos é comprometido. Assim, a microencapsulação é uma alternativa viável para sua aplicação. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o efeito da variação das condições operacionais do atomizador (temperatura do ar de entrada e vazão de alimentação) na obtenção de eugenol microencapsulado em carragena, e estudar a influência da combinação de carragena e proteína do farelo de arroz, albumina sérica bovina e proteína do soro de leite com baixo teor de lactose na microencapsulação de eugenol. Em uma primeira etapa, um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) do tipo 22 com duas variáveis independentes (temperatura do ar de secagem e vazão de alimentação), três pontos centrais e quatro pontos axiais, foi desenvolvido para avaliar as condições operacionais de atomização. A quantificação do eugenol, recuperação (RE %) e a eficiência de encapsulação (EE %) foi avaliadada por espectrofometria UV-Vis e a morfologia por microscopia ótica. Na segunda etapa, a influência do uso de carragena em combinação com proteína do farelo de arroz, albumina sérica bovina e proteína do soro de leite com baixo teor de lactose foi avaliada por meio de um planejamento de mistura do tipo simplex-centroid. A caracterização das microcápsulas foi determinada pela RE % e EE % por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), análise termogravimétrica acoplada à espectrofotometria de infravermelho e, morfologia por microscopia eletrônica de varredura. Para o DCCR, o valor máximo de RE% obtido foi de 12% e as condições operacionais estudadas não influenciaram significativamente (p > 0,05). Já a EE% variou de 18,0 a 84,8% e, o termo quadrático para vazão de alimentação apresentou influência significativa (p ≤ 0,05) na resposta avaliada. Para o planejamento simplex-centroid, o valor médio de RE % das microcápsulas variou de 37,9 a 104,5% e o de EE% de 0,0 a 79,4%, sendo que ambas as respostas foram influenciadas (p ≤ 0,05%) pelos agentes encapsulantes da formulação. A albumina sérica bovina apresentou boa propriedade de estabilização da suspensão (RE % = 86,5) e em combinação com proteína de farelo do arroz possibilitou maior EE % (79,4). As microcápsulas exibiram diâmetro médio entre 3,4 a 4,6 µm e a morfologia das microcápsulas produzidas com a combinação da albumina sérica bovina e a proteína do farelo de arroz apresentaram superfícies esféricas com ausência de fissuras ou deformações. As análises térmicas e de FTIR, confirmam a eficiência de encapsulação do processo, indicando uma possível interação entre os agentes encapsulantes e o eugenol. / Eugenol is a natural phenolic compound with antioxidant and antimicrobial activity and its use as substitute the synthetic additives in food has been suggested. However, due eugenol instability to extern agents (light, oxygen and hot), its use in food processing has been hampered. Therefore, microencapsulation is a viable alternative for your application. The aims of this work were evaluate the effect of variation of operating conditions of spray drying (inlet air temperature and feed flow rate) in obtainment eugenol microencapsulated in carrageenan, and study the influence of combination of carrageenan and protein from rice bran protein, bovine serum albumin and, whey protein with low lactose content in the eugenol microencapsulation. Composite Central Desing (CCD) of type 22 with two independent variables (inlet air temperature, and feed flow rate), three key points and four axial points, were developed to assess the operational conditions of spray dryer. Eugenol quantification, recovery (% ER) and encapsulation efficiency (EE%) of process were evaluated by UV-Vis spectrophotometry and morphology by optical microscopy. In the second stage of the study, the influence of the use of carrageenan in combination with rice bran protein, bovine serum albumin and whey protein with low lactose content was evaluated by simplex-centroid desing. Microcapsules were characterizated by Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) (ER and EE%), thermogravimetric analysis coupled to the infrared spectrophotometry, and morphology by scanning electron microscopy (SEM). In the CCD, the maximum ER% value was 12% and the operating conditions studied did not influence significantly (p > 0.05). EE% varied from 18.0 to 84.8% and the quadratic term to feed flow rate presented significant influence (p ≤ 0.05) in the evaluated answer. In the simplex-centroid mixture desing the ER% average of microcapsules ranged from 37.9 to 104.5% and EE% 0.0 to 79.4%, being that both responses were influenced (p ≤ 0.05%) by encapsulating agents of formulation. Bovine serum albumin presented good stabilizing property of suspension (ER% = 86.5) and in combination with rice bran protein resulted greater EE% (79.4). Microcapsules exhibited a average diameter range from 3.4 to 4.6 µm and the microcapsules morphology produced combination with the bovine serum albumin and protein rice bran showed surface with absence no cracks or deformation. Thermal and FTIR analysis confirmed the encapsulation efficiency of the process, observed a possible interaction between the encapsulating agents and eugenol.

CNPQ; Fundação Araucária / As bacteriocinas possuem amplo espectro de atividade antimicrobiana sobre diversas bactérias patogênicas e deteriorantes de alimentos. Diversos gêneros bacterianos produzem enterocinas, dentre estes, o gênero Enterococcus sp. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo estudar a produção de enterocinas produzidas por linhagens de Enterococcus faecium, nos pHs 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 e 6.5 onde o meio de cultura foi suplementado com lactose, manose, manitol, glicerol, tween® 20 e tween® 80 com diferentes concentrações. Os testes de antagonismo foram realizados contra a bactéria Listeria innocua CLIP 12612. Diante dos melhores parâmetros para a produção de enterocina, estas foram testadas quanto a estabilidade diante da ação dos produtos químicos SDS, EDTA, Tween® 20, Tween® 80 e NaCl, temperaturas de 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100°C por 30 minutos e 121°C por 15 minutos, diversos pHs 3, 5, 7 e 9, adsorção e sobre sua ação bactericida e/ou bacteriostática. Os resultados obtidos mostram que, os pHs ótimo de produção foram entre 6,0 e 6,5 e as suplementações com maior atividade de inibição foram lactose 20 g/L, glicerol 20 g/L, tween®20 5,0g/L. Estes suplementos também foram acrescidos juntos no meio MRS sendo denominado de MIX. As enterocinas permaneceram estáveis aos pHs analisados e mantiveram sua atividade inibitória após tratamento térmico até 100°C por 30 minutos. Porém, houve uma redução na atividade das enterocinas quando submetida a 121°C por 15 minutos.Dentre os produtos químicos avaliados, o SDS e EDTA foram os que apresentaram maior atividade sendo que a enterocina produzida com o Mix foi a que apresentou maior halo de inibição. Também foi evidenciado efeito bactericida e/ou bacteriostática e a adsorção de maior porcentagem ocorreu entre 60-65% entre ambas enterocinas produzidas. Os resultados obtidos indicam que, as enterocinas produzidas pelas linhagens de Enterococcus faecium possuem potencial de aplicabilidade em alimentos como bioconservadores. / Bacteriocins has a broad spectrum of antimicrobial activity on various pathogenic and deteriorating bacterium in food. Several bacterial genera produce enterocins, between them, the genus Enterococcus sp. The objective of this study was to study the production of enterocins produced by Enterococcus faecium in the pH 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 and 6.5 where the culture medium was supplemented with lactose, mannose, mannitol, glycerol, tween® 20 and tween 80 with different concentrations. The antagonistic tests used bacterium Listeria innocua CLIP 12612. About the best parameters for the production of enterocin, these were tested for stability against the action of the chemicals SDS, EDTA, Tween® 20, Tween® 80 and NaCl, Temperatures of 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100°C for 30 minutes and 121°C for 15 minutes, various pHs 3, 5, 7 and 9, adsorption and on their bactericidal and/or bacteriostatic action. The results showed that the pH great of production was between 6.0 and 6.5, and the supplements with larger inhibition activity were lactose 20 g/L, glycerol 20 g/L and tween®20 5.0 g/L. These supplements also were added in the medium MRS, referred to as MIX. The enterocins remained stable at the analyzed pHs and maintained their inhibitory activity after heat treatment at 100°C for 30 minutes. However, had reduction in the activity of the enterocins when submitted to 121°C for 15 minutes. Among the chemicals evaluated, the SDS and EDTA were the ones that presented the highest activity, and the enterocins produced with the Mix showed the highest inhibition halo. It was also evidenced effect bactericidal and/or bacteriostatic, and the highest percentage adsorption occurred between 60-65% between enterocins produced. The results indicate that the enterocins produced by Enterococcus faecium strains have potential applicability in foods as bioconservatives.

Micro-organismos probióticos promovem diversos efeitos benéficos à saúde do hospedeiro. Entretanto, para que isso ocorra é necessário que este permaneça viável no trato digestório humano, sendo este o principal desafio para que promovam efeitos benéficos à saúde do hospedeiro. / Probiotic microorganisms promote several beneficial effects on host health. However, for this to occur it is necessary that it remains viable in the human digestive tract, being that the main challenge for the elaboration of functional foods.

Tendo em vista fazer uma verificação de algumas das características de microorganismos com potencial probiótico, esse trabalho tem por objetivo identificar, avaliar e comparar o potencial probiótico de Enterococcus faecium isolados de queijo artesanal da cidade de Londrina. Primeiramente foram identificadas por técnica molecular as cepas já isoladas de Enterococcus. O restante dos testes foram feitos somente com os isolados de Enterococcus faecium. Fez-se então, um antibiograma frente à eritromicina 15 µg, tetraciclina 30 µg e vancomicina 30 µg, verificando-se a resistência ou sensibilidade de cada isolado frente a estes antibióticos. Em seguida foram realizados testes de simulação in vitro do trato gastro-intestinal e comparados com a cepa comercial de Lactobacillus acidophilus. Para simular as condições na boca foi realizado o teste de resistência à lisozima, verificando assim a sua viabilidade. Já para simular as condições no estômago realizou-se o teste de tolerância em meio ácido, em cultivo. Foram avaliadas as condições de sobrevivência simulando o intestino delgado, determinando-se a viabilidade destes micro-organismos frente à pancreatina em pH 8,0. No estudo de auto-agregação, cada isolado de E. faecium e a cepa comercial de L. acidophilus, foram colocados separadamente e verificados em densidade óptica de 540 nm. Os resultados demonstraram que dos 98 isolados de Enterococcus, 54,0 % eram E. faecium, 39,8% eram E. faecalis e 6,2% eram Enterococcus spp. Em relação à susceptibilidade à antimicrobianos foram pouco resistentes aos antibióticos testados, sendo que 24,5% apresentaram resistência à eritromicina e 1,9% apresentaram resistência à tetraciclina e vancomicina. Já no teste de resistência à lisozima após 120 min obteve-se 15 isolados que não apresentaram diferença significativa ao nível de 5% quando comparados ao L. acidophilus e 7 isolados que foram mais resistentes que o mesmo. No resultado frente ao estresse ácido após 3 h, 3 isolados não apresentaram diferença significativa ao nível de 5 % quando comparados com L. acidophilus e 2 isolados apresentaram maior resistência que o Lactobacillus. Em relação ao teste sobrevivência ao intestino delgado, em comparação a cepa comercial de L. acidophilus, apresentaram-se com taxas de sobrevivência sem diferença significativa, 21 isolados de E. faecium, e ainda pode-se destacar 7 isolados, onde encontrou-se uma taxa de sobrevivência maior que o controle. Dos 53 isolados analisados 60 % apresentaram capacidade de auto-agregação. / The purpose of this work was to identify, assess and compare some Enterococcus faecium potential probiotic micro-organisms isolated from artisanal cheese in Londrina. First, identified by molecular techniques already isolated strains of Enterococcus. The rest of the tests were made only with isolates of Enterococcus faecium. There was then a antibiogram forward to erythromycin 15 mg, 30 mg tetracycline and vancomycin 30 mg, checking the resistance or sensitivity of each isolate against these antibiotics. It was then performed simulation tests in vitro gastro-intestinal tract and compared with the commercial Lactobacillus acidophilus strain. To simulate the conditions in the mouth was performed to test for resistance to lysozyme, thus verifying its viability. Have to simulate conditions in the stomach was performed tolerance test in acid medium in cultivation. We evaluated the survival conditions simulating the small intestine, determining the viability of these micro-organisms against the pancreatin at pH 8.0. In the study of auto-aggregation, either isolated from E. faecium and a strain of commercial L.acidophilus were separately placed and the optical density verified of 540 nm. The results showed that the 98 Enterococcus, isolated from cheese, was 54.0% E. faecium, 39.8% E. faecalis and 6.2% Enterococcus spp. Regarding antimicrobial susceptibility were slightly resistant to the antibiotics tested, and 24.5% were resistant to erythromycin and 1.9% to tetracycline and vancomycin. Already in lysozyme resistance test after 120 min showed 15 isolates that had no significant difference at 5% when compared to L. acidophilus and 7 isolates were more resistant than the same. In result against acid stress after 3 h, 3 isolates showed no significant difference at 5% when compared with L. acidophilus and 2 isolates had greater resistance than Lactobacillus. Regarding testing survival to the small intestine, compared to commercial strain of L. acidophilus, presented with survival rates without significant difference, 21 isolates of E. faecium, and still can highlight the isolates 7 isolates, which found a higher survival rate than the control. 32 of the 53 isolates tested showed the ability to auto-aggregation, or 60%.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dis_Cinthya M F Fleury.pdf: 340462 bytes, checksum: 8bfbe121280bc66c1b0b439872531e30 (MD5) Previous issue date: 2010-02-08 / The purpose of this work is to contribute to the research in new diagnostic tests for bovine tuberculosis. To this end a study was performed to identify Mycobacterium bovis immunogenic proteins isolated from bovines in the field. Total extracted protein, were initially fractioned by electrophoresis in a poliacrylamide gel and then identified by Western Blotting, using serum from reagent and non-reagent animals to the purified protein derivate (PPD) intradermal diagnostic test. Protein immunogenicity was assessed according to the molecular weight profile of the positive bands. 93 serum samples were tested from PPD positive and PPD negative animals from Goiás, Distrito Federal and Minas Gerais, as well as tuberculosis free regions of the USA. By means of the Western Blotting technique it was possible to identify the 26kDa protein as the most immunogenic among the positive PPD tested animals. / Com o objetivo de contribuir com pesquisas em novos testes de diagnóstico para a tuberculose bovina, foi realizado um estudo baseado na identificação de proteínas imunogênicas de Mycobacterium bovis isolado de bovinos infectados à campo. Para isso, proteínas totais extraídas de M. bovis caracterizado geneticamente por Spoligotyping, foram inicialmente fracionados por eletroforese em gel de poliacrilamida e posteriormente identificados por Western Blot utilizando soro de animais reagentes e não reagentes ao teste de diagnóstico intradérmico com derivado protéico purificado (PPD). A imunogenicidade das proteínas foi avaliada conforme o perfil do peso molecular das bandas expressadas. Foram testadas um total de 93 amostras de soro de animais PPD positivos e negativos provenientes do estado de Goiás, Distrito Federal, Minas Gerais e região livre de tuberculose dos Estados Unidos. Pela técnica de Western Blot pode-se identificar a proteína de 26kDa como a mais imunogênica dentre os animais PPD-positivos testados.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO OSVALDO 2010.pdf: 388813 bytes, checksum: 7524bca9b65d53027197a0e944792085 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / The visceral leishmaniasis (LV) is a very important disease in public health, including zoonosis caused by members of Leishmania gender, occurring in many regions of the world. Several methods are being used to diagnose these diseases; among these methods are the Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), indirect immunofluorescence reaction (RIFI) and direct examination by microscope. As none of these techniques allows a fast and sensitive diagnostic, methods of molecular diagnosis based on polymerase chain reaction (PCR) were developed. Recently, many groups have shown that PCR is a sensitive and specific method to Leshmania DNA detection in a variety of samples of humans, dogs and other animals. The protocols developed until these days to the parasite diagnose by PCR, although they be effective in the identification of the genomic DNA target, promote some inespecific amplifications or are inconclusive in the distinction of L.chagasi from other species of the gender. This work`s objective was the construction of speciesspecific iniciadores to detection of L.chagasi, and evaluation of protocols described by other authors, aiming LV diagnosis. The primers were selected from the alignment of 18S rRNA gene sequences and also of the LSU rRNA. Were selected six new pairs of species-specific primers for L. chagasi. Besides these new pairs were assessed seven other pairs of primers described in the literature. The results showed that the new primer pairs LCS2/LCS3 LCS1/LCS3 were efficient for the species-specific amplification of DNA fragments of L. chagasi of 259 bp and 820 bp, respectively. In the other hand the two new PCR assays optimized in this study using the primer pairs and LCS1/LCS3 LCS2/LCS3 were effective for species-specific detection of up to 1 pg / mL of DNA from L. chagasi. The pairs of primers MC1/MC2 as well as the pair of primers PIA-94 were effective for the discrimination of species-specific L. chagasi.Other pairs of primers evaluated didn´t showed a satisfactory results regarding the specificity for L. chagasi. / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença de grande importância em saúde pública, compreendendo zoonoses causadas por membros do gênero Leishmania, sendo de ocorrência em diversas regiões do mundo. Vários métodos já são utilizados para o diagnóstico dessas enfermidades, entre eles o ensaio imunoenzimático (ELISA), a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o exame direto ao microscópio. Como nenhuma destas técnicas permite um diagnóstico sensível e rápido, métodos de diagnóstico molecular baseados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram desenvolvidos. Recentemente, vários grupos têm mostrado que a PCR é um método sensível e específico para a detecção do DNA da Leishmania em uma variedade de amostras de humanos, cães e outros animais. Os protocolos desenvolvidos até o presente para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou não são conclusivos na distinção de L. chagasi de outras espécies do gênero. O objetivo deste trabalho foi a construção de iniciadores espécie-específicos para a detecção de L. chagasi, assim como a avaliação de protocolos descritos por outros autores, visando o diagnóstico da LV. Os iniciadores foram selecionados a partir do alinhamento das seqüências do gene 18S rRNA e também do LSU rRNA. Foram selecionados seis novos pares de iniciadores espécie-específicos para L. chagasi. Além desses novos pares, foram avaliados outros sete pares de iniciadores descritos na literatura. Os resultados permitiram concluir que os novos pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3 foram eficientes para a amplificação espécie específica de fragmentos de DNA de L. chagasi de 259 pb e 820 pb, respectivamente. Já os os dois novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção espécie-específica de até 1 pg/`L de DNA de L. chagasi. Os pares de iniciadores MC1/MC2 descritos por CORTES et al. (2004) assim como o par de iniciadores publicado por PIARROUX et al., (1994) foram efetivos para a discriminação espécie-específica de L. chagasi. Os outros pares de iniciadores avaliados não apresentaram resultados satisfatórios quanto a especificidade para L. chagasi.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese Maria Luiza Stringhini.pdf: 1950735 bytes, checksum: 3968be9688ed5eaf09c6664365da77c0 (MD5) Previous issue date: 2008-12-05 / This study was developed in order to study the behavior of Pseudomonas aeruginosa inoculated on shell of washed and unwashed eggs. It was evaluated the socioeconomic and microbiological profiles of hands, nasal cavity and oropharynx of 32 volunteers staff from four commercial poultry farms located in the metropolitan region of Goiânia-GO. It was found that 56% of the workers are males and that the most common age group (47%) is between 18 and 23 years. Approximately 41% (13/32) had 6th to 9th grade of elementary school and 44% had monthly family income between two and three minimum salaries. Most microorganisms isolated and identified among the workers belong to the natural microflora of them. However, Escherichia coli was isolated from the hands of 12.5% individuals before starting day of work indicating contamination of fecal origin. Deteriorated microorganisms for eggs also were identified in the handlers as Pseudomonas spp. and Enterobacter spp. Among the Gram-positive bacteria identified detached Staphylococcus coagulase positive that can pose dangers to health of consumers. After this initial research, it was evaluated the bacteriological quality of 576 washed and 132 unwashed eggs of Dekalb White hens obtained in four commercial poultry farms located in the metropolitan area of Goiânia, collected half in the classification hall, and the other half, in the facilities. Counts of mesophilic and positive Staphylococcus coagulase and Most Probable Number (MPN) of total and fecal coliforms in shells and internal content of eggs and Salmonella spp. research in eggshells were made. It was concluded that washed eggs from commercial egg farms had better eggshell bacteriological quality than unwashed eggs but the washing process adopted must be made appropriate in order to avoid contamination. In the following experiment aimed to verify the quality of commercial unwashed eggs submitted to experimental contamination by Pseudomonas aeruginosa. Were contaminated, by handling, with 3.0 x 102 and 6.0 x 105 colony-forming units (CFUs) of Pseudomonas aeruginosa/mL of solution, 576 unwashed eggs without cracks, classified as large, laying hens with 30 to 40 weeks of age. After contamination, the eggs were stored at 5oC and 28oC for 30 days. Every 10 days were carried out analyses of physical quality of eggs (weight of the egg, specific gravity, shell thickness, percentage of yolk, albumen and shell, Haugh unit, rates of yolk and albumen) and pH and counting of the contaminated bacteria in shell and contents of the eggs. During storage, there was control of bacterial multiplication in the shell of the eggs kept at 5oC (p<0,05). However, in content, the cooling controlled the growth of bacteria only in eggs contaminated with initial higher inoculum. It was concluded that the cooling maintains the internal quality of the eggs, even when contaminated and also retains the hygienic-sanitary characteristics of the product. In the last experiment aimed to check the quality of commercial washed eggs inoculated in the shell with Pseudomonas aeruginosa, stored at 5oC and 25oC. It was used 576 eggs, without cracks, classified as large, from laying hens with 30 to 40 weeks of age, line Dekalb White. The experimental design was completely randomized in a 3 x 2 factorial (contamination and temperature storage) with 12 repetitions for physical quality and pH and four repetitions for microbiological variables. The eggs were contaminated by handling, with 7.8 x 102 and 6.0 x 105 colony-forming units (CFUs) of Pseudomonas aeruginosa/mL of solution and stored at 5oC and 25oC for 30 days. Every ten days it was carried out analyses of physical quality of eggs, similar to the previous experiment, pH and counts of Pseudomonas aeruginosa in shell and contents of the eggs. The eggs stored at 5oC showed better internal quality (p<0,05) and lower bacterial counts in shell and contents of the eggs (p<0,05) regardless of the initial concentration of inoculum. It was concluded that the cooling provides better internal quality, physical, chemical and bacteriological of eggs, during 30 days of storage. / O presente estudo foi desenvolvido com o intuito de estudar o comportamento de Pseudomonas aeruginosa inoculadas na casca de ovos lavados e não lavados. Foram determinados os perfis socioeconômico e microbiológico de mãos, cavidade nasal e orofaringe de 32 funcionários de quatro granjas de postura comercial da região metropolitana de Goiânia-GO. Verificou-se que 56% dos funcionários pertenciam ao gênero masculino e que a faixa etária mais frequente estava entre 18 e 23 anos. Treze dentre 32 indivíduos (41%) possuíam do 6º ao 9º ano do ensino fundamental e 44% tinham renda mensal familiar entre dois e três salários mínimos. A maioria dos microrganismos isolados e identificados entre os operários pertence à microbiota natural do homem. Entretanto, Escherichia coli foi encontrada nas mãos de 12,5% dos funcionários, antes de iniciar jornada de trabalho, indicando contaminação fecal. Também foram isoladas, das mãos dos trabalhadores, bactérias deteriorantes para os ovos como Pseudomonas spp. e Enterobacter spp. Dentre as bactérias Gram-positivas, destacou-se Staphylococcus coagulase positivo, que pode representar perigo à saúde do consumidor. Após essa investigação inicial, foi avaliada a qualidade bacteriológica de 576 ovos lavados e 132 ovos não lavados da linhagem Dekalb White obtidos em quatro granjas de postura comercial da região metropolitana de Goiânia-GO, sendo a metade coletada na sala de classificação e, a outra metade, nos galpões. Foram realizadas contagens de mesófilos e Staphylococcus coagulase positivo e Número Mais Provável de coliformes totais e fecais nas cascas e conteúdos e pesquisa de Salmonella spp. nas cascas. Concluiu-se que ovos lavados possuem melhor qualidade bacteriológica de casca do que ovos não-lavados, entretanto, o procedimento de lavagem deve ser realizado de forma adequada a fim de se evitar contaminação. No experimento seguinte objetivou-se verificar a influência da contaminação experimental na casca de ovos não-lavados com Pseudomonas aeruginosa. Foram contaminados, pelo manuseio, com inóculos de 3 x 102 e 6 x 105 unidades formadoras de colônias (UFCs) de Pseudomonas aeruginosa/mL de solução, 576 ovos grandes, sem trincas de poedeiras leves, com 30 a 40 semanas de idade. Após contaminação, os ovos foram armazenados a 5ºC e a 28ºC por 30 dias. A cada dez dias foram realizadas análises de qualidade física dos ovos (peso, gravidade específica, espessura de casca, porcentagem de gema, albume e casca, unidade Haugh, índices de gema e albume), pH e contagens da bactéria contaminante na casca e conteúdo dos ovos. Durante o armazenamento, houve controle da multiplicação bacteriana nas cascas dos ovos contaminados e mantidos a 5ºC (p<0,05). No entanto, no conteúdo, a refrigeração controlou o crescimento da bactéria apenas de ovos contaminados com maior inóculo. Pode-se concluir que a refrigeração mantém a qualidade interna dos ovos, mesmo quando contaminados e que também conserva as características higiênico-sanitárias do produto. No último experimento, objetivouse verificar a influência da contaminação experimental com Pseudomonas aeruginosa na qualidade física de ovos lavados e armazenados a 5ºC e 25ºC. Foram utilizados 576 ovos, sem trincas, classificados como grandes, de poedeiras leves com 30 a 40 semanas de idade, da linhagem Dekalb White. O delineamento empregado foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 3 x 2 (contaminação e temperatura de armazenamento) com 12 repetições para variáveis de qualidade física e pH e quatro repetições para variáveis microbiológicas. Os ovos foram contaminados, pelo manuseio, com 7,8 x 102 e 6 x 105 UFCs de Pseudomonas aeruginosa/mL de solução e armazenados a 5oC e 25oC por 30 dias. A cada dez dias foram realizadas análises de qualidade física dos ovos, semelhantes ao experimento anterior, pH e contagens de Pseudomonas aeruginosa na casca e conteúdo dos ovos. Os ovos armazenados a 5ºC apresentaram melhores valores (p<0,05) de qualidade interna e menor contagem bacteriana na casca e no conteúdo (p<0,05), independentemente da concentração inicial do inóculo. Concluiu-se que a refrigeração proporciona melhor quallidade interna, física, química e bacteriológica de ovos, durante 30 dias de armazenamento.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karyne_Coelho.pdf: 479024 bytes, checksum: d5d2ef481cb3e5c58f1498940178254f (MD5) Previous issue date: 2007-12-19 / The subclinical mastitis is a mammary gland inflammatory reaction that is characterized by increased levels of somatic cells in the milk. The milk with higher somatic cell counting (SCC) shows alteration in the composition that alters the quality of the milk products. This study aimed to evaluate the effects of the SCC in the milk products in relation to the microbiologic and the physical-chemistry features of the mozzarella cheese. It was chosen cattle with SCC &#61603;200.000 cells/mL; SCC >200 a &#61603;400.000 cells/mL; SCC >400.000 cells/mL to &#61603;750.000 cells/mL and SCC >750.000 cells/mL. The animals did not receive antimicrobial treatment before and on the day of the milk collection. The mozzarella cheese preparation were realized at Planta de Laticínios do Centro de Treinamento da Agência Rural. It was analyzed the milk sub products compositions. The cheese were evaluated after 1, 15 and 30 days of maturation or storage at 7°C for the pH, acidity, humidity, total and soluble protein, fat, total dry extract, defatted, milk acid bacteria count, total and fecal coliforms and psicotrofics microorganism. The experiment was repeated four times in order to demonstrate reproducibility. The results were homogenous for the residues (turkey test) and the variances were compared using a F test, adopting &#61621;=0,05. The milk with high SCC showed low concentration of protein and the higher nitrogen levels. There was loosing of protein and fat to serum. The cheese elaborated from milk with higher SCC (>750.000cells/mL) showed lower protein level, more humidity and less industrial income and presented lower growth of lactic acid bacteria during the maturation time. Mozzarella cheese prepared with milk containing SCC around 400.000 cells/mL presented increased proteolysis. The results showed here demonstrated that in order to get a good quality mozzarella cheese is necessary the utilization of the milk with somatic cell counts bellow 400.000 cells /mL / A mastite sub-clínica é uma reação inflamatória da glândula mamária que cursa com o aumento da contagem de células somáticas (CCS) no leite. Leite com alta CCS apresenta alterações na composição que influenciam a qualidade dos produtos lácteos. A realização do presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do nível de células somáticas (CCS) no leite sobre o rendimento e as características microbiológicas e físico-químicas do queijo mussarela. Foram selecionadas vacas com contagem de células somáticas (CCS) &#61603;200mil células/mL; CCS >200 a &#61603;400mil células/mL; CCS >400mil células/mL a &#61603;750mil células/mL e CCS >750mil células/mL e que não receberam tratamento com antimicrobianos nos dias que antecederam a obtenção do leite utilizado no processamento do queijo mussarela, na Planta de Laticínios do Centro de Treinamento da Agência Rural. Foram avaliadas as composições dos leites, soros e queijos. Os queijos foram avaliados após 1, 15 e 30 dias de armazenamento a 7ºC, por meio das análises de pH, acidez, umidade, proteína total e solúvel, gordura, extrato seco total, desengordurado, contagem de bactérias ácido lácticas, de coliformes totais, fecais e de microrganismos psicrotróficos. O experimento completo foi repetido quatro vezes e o delineamento experimental foi em blocos aleatórios. Os resultados foram inicialmente avaliados para a normalidade dos resíduos, por meio do teste de tukey, e a homogeneidade das variâncias pelo teste F, adotando-se, &#61621;=0,05. O leite com elevada CCS apresentou concentração menor de proteína e maior de nitrogênio não protéico. Observou-se perda de proteína e gordura para o soro. O queijo elaborado a partir do leite com alta CCS, >750 mil céls./mL, apresentou menor teor de proteína, maior umidade e menor rendimento industrial. Observou-se menor crescimento das bactérias ácido lácticas durante o período de armazenamento para o queijo produzido com CCS superior a 750 mil céls./mL. Em relação a proteólise foi constatada o aumento do índice de extensão e profundidade nos queijos mussarela elaborados com leite contendo níveis de CCS superiores a 400 mil céls./mL. Considerando os quatros tratamentos avaliados, pode-se afirmar que para obter queijos mussarela com qualidade satisfatória é necessário a utilização de um leite com CCS inferior a 400 mil céls./mL