Seminario para optar al grado de Ingeniero en Información y Control de Gestión / El presente seminario tiene como objetivo presentar una propuesta basada en el enfoque de factores críticos de éxito para empresas en etapa de incubación. Las empresas en etapa de incubación, son empresas que recién nacen y que cuentan con el apoyo de las instituciones incubadoras que generalmente están ligadas a universidades o centros de investigación y que proporcionan infraestructura y servicios de gestión y comercial a los llamados “emprendedores”, que son los ciudadanos que llegan con una idea innovadora a estos centros y solicitan sus servicios. Debido a lo importante que ha sido el papel de las incubadoras en el éxito de las empresas nacientes, parece importante el aporte que quiere entregar esta propuesta de factores críticos de éxito, pues se pretende establecer cuales son las condiciones que deben tener los incubandos para asegurar el éxito en sus etapas tanto de incubación como las que le siguen, logrando por un lado, fortalecer la imagen de la incubadora al lograr tener en su cartera proyectos exitosos atrayendo potenciales clientes y por otro lado que los emprendedores sean capaces de analizar que es lo critico en su negocio para así obtener alguna mejora. En el primer capítulo se dan conocer los objetivos de la propuesta, junto con los alcances y las limitaciones que afectaron a nuestra investigación y posterior propuesta de factores críticos de éxito. Luego en el capitulo II se exponen los fundamentos conceptuales del tema a tratar junto con el desarrollo de la incubación en Chile y Latinoamérica. A continuación en el capitulo III se presenta el diseño del modelo en si, con los resultados de la investigación que llevan a establecer los objetivos de los incubandos como tales, los factores críticos de éxito que los afectan y los atributos con los cuales se puede determinar si se cumple con el factor o no. Por ultimo el capitulo lV muestra una propuesta de análisis de resultados de instituciones incubadoras, la que surge a partir del modelo antes propuesto en el capitulo III, el que sienta las bases para caracterizar la incubadora a nivel general y de cartera de proyectos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / AvaliaÃÃo dos efeitos da administraÃÃo diÃria, intragÃstrica (ig) e subcutÃnea (sc) prolongada do produto hidrossolÃvel da prÃpolis verde, extraÃda em L-lisina e do aminoÃcido L-lisina ig sobre a angiogÃnese de carcinomas de bexiga e a carcinogÃnese de bexiga induzida pelo BBN (N-butil-N{4-hidroxibutil}nitrosamina) em ratas Wistar. O total de 125 ratas foi distribuÃdo inicialmente em 14 grupos: I, IIA, IIB, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII e XIII. Os grupos de I a X receberam BBN por 14 semanas em Ãgua de beber. O grupo I foi tratado com prÃpolis ig 150 mg/kg/peso, por 44 s, iniciado 30 dias antes do inÃcio do BBN. Os grupos IIA, III e VIII foram tratados com prÃpolis (150 mg/kg/peso), por 40s, vias sc e ig iniciada simultaneamente com o BBN. Na 32Âs, os animais dos grupos IV, V, VI, VII e IX, apÃs ultrassonografia, foram estratificados e realocados em 4 grupos K, L, M e N, de forma que cada grupo recebesse o mesmo nÃmero de animais sem lesÃo vesical ou com imagem tumoral pequena, mÃdia e grande. As ratas dos grupos L, M e N, foram tratadas ig com: L-lisina (300mg/kg/peso), celecoxibe (30 mg/kg/peso) e prÃpolis (300 mg/kg/peso) respectivamente, da 32 a 40Âs. Os grupos controles positivos (que receberam apenas BBN) IIB e K foram tratados com Ãgua, via sc e oral, respectivamente, por 40 s. Os grupos controles negativos XI, XII e XIII receberam nesta sequÃncia, prÃpolis (150mg/kg/peso), L-lisina (150 mg/kg/peso) e Ãgua ig por 40 semanas (s). Os grupos III e VIII foram reunidos em um Ãnico grupo, o grupo III. Os animais foram sacrificados ao final da 40Âs. A carcinogÃnese foi estudada em todos os grupos. A angiogÃnese foi avaliada nos grupos K, L, M, N III e X, pela quantificaÃÃo da densidade microvascular em hot spots, atravÃs de imunomarcaÃÃo (CD-31), utilizando-se um programa de computador. O Ãndice de carcinogÃnese (21,00) e a incidÃncia de carcinomas (20%) no grupo I, tratado com prÃpolis 30 dias antes do inÃcio do BBN, foram menores (P<005) que os do grupo controle K (39,67% e 66,67%, respectivamente). A densidade microvascular de hot spot em carcinomas de bexigas foi menor (P<0,05) tanto em ratos tratados com prÃpolis por 40 semanas (grupo III), quanto em tratados com prÃpolis da 32 a 40Âs (grupo N), quando comparada com a densidade dos carcinomas de animais que receberam apenas carcinÃgeno (grupo K). A multiplicidade de carcinomas (P= 0, 00267), o Ãndice de carcinogÃnese (P<0,05) a densidade microvascular (P<0,05) no grupo X (tratado com L-lisina) foram maiores que os do grupo controle K. Somando-se a isso, a incidÃncia de carcinomas no grupo X foi de 100% e apresentando tumores mais invasivos (p= 0, 0039) que os verificados no grupo K. O grupo que recebeu apenas L-lisina nÃo apresentou lesÃes vesicais. Isso significa que a L-lisina por si sà nÃo gera carcinomas. NÃo hà descriÃÃo de efeito promotor da L - lisina na carcinogÃnese de bexiga na literatura pesquisada. A incidÃncia de 100% de carcinomas no grupo tratado com L- lisina pode fazer desta modelo para estudo da carcinogÃnese de bexiga. Conclui-se que o produto de prÃpolis verde administrado diariamente na dose de 150 mg/kg/peso ig, diminui a incidÃncia de carcinomas quando iniciada 30 dias antes do BBN e inibe a angiogÃnese de carcinomas de bexiga na dose de 150 mg/kg/peso quando iniciada simultaneamente ou na dose de 300 mg/kg/peso apÃs a 31 semana do inÃcio de BBN. / The present study evaluated the effects of prolonged, daily intragastric (ig) or subcutaneous (sc) administration of water-soluble derivative of green propolis extracted in L-lysine and of ig administration of L-lysine upon Wistar rat bladder carcinomas angiogenesis and bladder carcinogenesis induced with BBN (N-butyl-N-[4-hydroxybutyl] nitrosamine). At baseline 125 rats were distributed in 14 groups (I, IIA, IIB, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, XI, XII and XIII). Groups I through X received BBN in drinking water for 14 weeks. Group I was treated with propolis ig (150 mg/kg body weight) during 44 weeks beginning 30 days before challenge with BBN. Groups IIA, III and VIII were treated for 40 weeks with propolis (150 mg/kg) sc and ig initiated concurrently with BBN. By the 32nd week, the animals in Groups IV, V, VI, VII and IX were ultrasound-scanned, stratified and reallocated into 4 groups (K, L, M and N) so that the groups contained the same number of animals with small, medium and large tumors or without lesions. Groups L, M and N were treated with L-lysine ig (300mg/kg), celecoxib (30 mg/kg) and propolis (300 mg/kg), respectively, from the 32nd to the 40th week. Groups IIB and K (positive control groups receiving BBN only) were treated with water sc and orally, respectively, during 40 weeks. Groups XI, XII and XIII (negative control groups) received propolis (150mg/kg), L-lysine (150 mg/kg) and water ig, respectively, for 40 weeks. Groups III and VIII were merged into a single group (Group III). The animals were euthanized after 40 weeks. Carcinogenesis was studied in all groups. Angiogenesis was evaluated for Groups K, L, M, N, III and X using quantifying microvascular density of hot spots in histological sections stained with the marker CD-31 and analyzed with specific software. The carcinogenesis index (21.00) and the carcinoma incidence (20%) in Group I (treated with propolis 30 days prior to challenge with BBN) were smaller (p<0.05) than for Group K (control; 39.67 and 66.67%, respectively). The microvascular density of bladder carcinoma hot spots was smaller (p<0.05) for rats treated with propolis for 40 weeks (Group III) and rats treated with propolis from the 32nd to the 40th week (Group N) than for rats receiving BBN only (Group K). Carcinoma multiplicity (p=0.00267), carcinogenesis index (p<0.05) and microvascular density (p<0.05) were greater for Group X (treated with L-lysine) than for group K. In addition, the carcinoma incidence in Group X was 100%, and tumors were more invasive (p=0.0039) than in Group K. The group receiving only L-lysine presented no vesical lesions, indicating that L-lysine in itself does not generate carcinomas. Our review of the literature identified no reports of L-lysine acting as a promoter of bladder carcinogenesis. However, the 100% carcinoma incidence observed in the group treated with L-lysine suggests the amino acid may serve as a model for the study of carcinogenesis. In conclusion, daily ig administration of water-soluble derivative of green propolis at 150 mg/kg body weight reduced the incidence of carcinoma when initiated 30 days prior to challenge with BBN, and inhibited angiogenesis in bladder carcinoma at 150 mg/kg when initiated concurrently with BBN or when administered at 300 mg/kg after 31a week of the initiate BBN.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_fabiana_fonseca_santos.PDF: 358501 bytes, checksum: 566ce94854cb74cc7a2d26d876462a45 (MD5) Previous issue date: 2010-08-17 / The understanding of the genetic structure of the oat species can be obtained with the use of microsatellite molecular markers which represent powerful tools in the investigation of genetic parameters. This study aimed to search the identification and characterization of microsatellite markers occurrence in oat through bioinformatics, describing the possible role of individual genes based on the genome of rice and Arabidopsis thaliana. For the development and validation of EST (Expressed Sequence Tags) primers, sequences were obtained from a public database. A total of 7632 oat contigs were obtained after eliminating the redundancy. To characterize SSR (simple sequence repeats) loci, the SSRLocator program was used. For the design of primers, the module containing the program Primer3 was used. A total of 58 primers were found, from which ten were selected for validation by polymerase chain reaction. Ten genotypes were used to assess polymorphism detection ability of primers. Polymorphism was observed in 80% of primers, whereas the rest showed monomorphic bands. The high genetic diversity revealed by microsatellite markers in this study may reflect a high genetic diversity within the germplasm of Avena sativa. / O conhecimento da estrutura genética de diversas espécies de aveia pode ser obtido com o uso de marcadores moleculares microssatélites, os quais representam poderosa ferramenta na averiguação de parâmetros genéticos. Este trabalho teve como objetivo buscar a identificação e a caracterização da ocorrência de marcadores microssatélites em aveia através da bioinformática, descrevendo a possível função de cada um dos genes, com base no genoma do arroz e da Arabidopsis thaliana. Visando o desenvolvimento e a validação de primers, foram obtidos a partir de um banco de dados público de EST (Expressed Sequence Tag) de aveia um total de 7.632 contigs que tiveram eliminada sua redundância, e para caracterização de locos SSR (Simple Sequence Repeat) foi utilizado o programa SSRLocator. Para o desenho de iniciadores foi utilizado no SSRLocator o módulo contendo o programa Primer3 sendo encontrados 58 primers, dos quais dez foram selecionados para a validação através da reação em cadeia da polimerase. Dez genótipos de aveia foram avaliados quanto ao nível de polimorfismo. Foi verificado polimorfismo em 80% dos primers, sendo que, o restante apresentou bandas monomórficas. A alta diversidade gênica revelada pelos marcadores microssatélites neste estudo possivelmente reflete uma alta diversidade genética dentro do germoplasma de Avena sativa.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SARA GISELLE DE CASSIA ALEXANDRE GONDIM.pdf: 1809475 bytes, checksum: 7b6fa0472c86151e208d21086f933a63 (MD5) Previous issue date: 2010-04-08 / Hoplias malabaricus is a characiforme fish (family Erythrinidae) with a wide distribution in the Neotropical region. The species has been considered by several authors as a group of species in urgent need of a taxonomic revision. Under this context, genetic studies are needed in order to increase the amount of information available for this species. Microsatellite markers are codominant, multiallelic, abundant and well distributed throughout the genome, and therefore are efficient to evaluate the genetic variability in natural populations. Also for conservation and managment studies. This study uses a strategy of development of primers for microsatellite regions based on the sequencing of random fragments from a genomic library "shotgun" for the detection of microsatellite regions in H. malabaricus. From 864 sequences obtained, I found 78 microsatellite regions that allowed the construction of pairs of primers. These regions are composed of different types of repeat motifs, including dinucleotide, trinucleotídes, tetranucleotídes and pentanucleotídes. Alleles varied in size from 136 to 236 base pairs. This shows that the strategy of random sequence from libraries "shotgun" is interesting to obtain repetitive regions with different motives. From 78 pairs of primers found, 25 were synthesized for standardization and characterzation. Of these 25, 14 had satisfactory standard of amplification, and among these, six (Hmal-9, Hmal-23, Hmal-33, Hmal-34, Hmal-46 and Hmal-60) showed polymorphisms. Considering the 14 loci evaluated, the observed heterozygosity (Ho) had a mean of 0.054 and expected heterozygosity (He) had a mean value equal to 0.246. Among the loci that showed polymorphisms, only the reported Hmal-9 showed significant deviations for the test of adherence to the proportions expected for the Hardy-Weinberg. The strategy of development of starters from library shotgun was efficient for the detention of different types of regions microssatélites in the genome of the species Hoplias malabaricus exists low polimorfismos in the 14 locos microssatélites evaluated in 48 individuals. / A espécie Hoplias malabaricus, pertencente à família Erythrinidae, representa uma das espécies de peixes characiformes com maior distribuição na região Neotropical. O grupo vem sendo considerado por diversos autores como um conjunto de espécies que necessita de uma revisão quanto à classificação. Para tanto, dentre outros, são necessários estudos genéticos, aumentando a quantidade de informações disponível para a espécie. Os marcadores microssatélites, por serem codominantes, multialélicos, abundantes e bem distribuídos ao longo do genoma, são eficientes para avaliar a variabilidade genética em populações naturais e para a realização de estudos de genética com aplicação em manejo e conservação. Este estudo utiliza uma estratégia de desenvolvimento de iniciadores para regiões microssatélites que se baseia no sequenciamento aleatório de fragmentos provenientes de uma biblioteca genômica shotgun para a detecção de regiões microssatélites, em H. malabaricus (traíra). Das 864 sequências obtidas, foram encontradas 78 regiões microssatélites que possibilitaram a construção de pares de iniciadores. Estas regiões são compostas por vários tipos de motivos de repetição, incluindo dinucleotídios, trinucleotídios, tetranucleotídios, pentanucleotídios. Os alelos apresentaram amplitude de variação de tamanho entre 136 a 236 pares de bases. Isto mostra que a estratégia de sequenciamento aleatório a partir de bibliotecas shotgun é interessante para a obtenção de regiões repetitivas com diferentes motivos. Dos 78 pares de iniciadores encontrados, 25 foram sintetizados para padronização e caraterização. Destes 25, apenas 14 apresentaram padrão de amplificação satisfatório, e dentre estes, seis (Hmal 9, Hmal 23, Hmal 33, Hmal 34, Hmal 46 e Hmal 60) apresentaram polimorfismos. Considerando os 14 locos avaliados, a heterozigosidade observada (Ho) apresentou uma média igual a 0,054 e a heterozigosidade esperada (He) apresentou um valor médio igual a 0,246. Dentre os locos que apresentaram polimorfismos, apenas Hmal-9 apresentou desvios significativos para o teste de aderência às proporções esperadas para o equilíbrio de Hardy- Weinberg. A estratégia de desenvolvimento de iniciadores a partir de biblioteca shotgun foi eficiente para a detecção de diferentes tipos de regiões microssatélites no genoma da espécie Hoplias malabaricus. Existe um baixo polimorfismos nos 14 locos microssatélites avaliados em 48 indivíduos da espécie Hoplias malabaricus.

A microbiota intestinal é um ecossistema complexo que geralmente vive em harmonia com seu hospedeiro. É essencial para o desenvolvimento e funcionamento adequado do sistema imunológico da mucosa durante o início da vida, um processo que atualmente é conhecido por ser importante para a imunidade de adultos. A microbiota intestinal compreende aproximadamente 1000 espécies, das quais 80% não são cultiváveis. Tendo em vista a importância de se conhecer a microbiota humana e a utilização da ferramenta da construção da biblioteca genômica RNAr 16S ser relativamente recente, esse estudo tem como objetivo analisar diferentes protocolos para avaliar o uso desta ferramenta para o estudo da microbiota intestinal humana. Para a realização dos ensaios experimentais, o DNA extraído de fezes de seis crianças, em diferentes faixas etárias, foi utilizado para a criação de um pool, o qual foi utilizado nos ensaios de PCR. As bibliotecas RNAr 16S foram construídas utilizando 2 pares de iniciadores bactéria-específicos 27F-1492R e 63F-1387R, variando o tempo de desnaturação inicial de cada reação de amplificação do gene RNAr 16S entre 5 e 10 minutos, e 1 par de iniciadores 341F-518R. Os clones foram selecionados aleatoriamente, parcialmente sequenciados e analisados com base em banco de dados do gene RNAr 16S. A diversidade da microbiota foi menor quando os iniciadores 63F-1387R foram utilizados, em comparação aos resultados dos iniciadores 27F-1492R, no entanto, apenas o par de iniciadores 63F-1387R identificou Bifidobacterium sp., gênero importante para o desenvolvimento da microbiota intestinal humana. Não houve diferenças significativas na diversidade quando o tempo de desnaturação inicial da reação de PCR foi estendido para 10 minutos. Com o uso do par de iniciadores 341F-518R mostrou uma diversidade satisfatória, uma maior riqueza, quando comparada com os outros pares de iniciadores e detectou a presença de Bifidobacterium sp. Os dados obtidos sugerem que mais de um par de iniciadores deve ser empregado para o estudo da microbiota fecal quando se utilizar a biblioteca de RNAr 16S como ferramenta. / The intestinal microbiota is a complex ecosystem that usually lives in harmony with its host. It is essential for the development and proper functioning of the mucosal immune system during beginning of the life, a process that is currently known to be important for overall immunity of adults. The intestinal microbiota comprises about 1000 species, 80% of which are not cultivable. Given the importance of understanding the human microbiota and that the use of the tool library construction genomic 16S rRNA is relatively recent, this study aims to analyze different protocols to evaluate the use of this tool to study of the human intestinal microbiota. To perform the experimental tests, the DNA extracted from feces of six children, in different age groups, was used for the creation of a pool, which was used in the PCR assays. The 16S rRNA libraries were constructed using 2 pairs of primers specific-bacterium 27F-1492R and 63F-1387R, varying the denaturation time of each initial amplification reaction between 5 and 10 minutes, and the pair of primers 341F - 518R.The clones were randomly selected, partially sequenced and analyzed based on database 16S rRNA gene. The diversity of the microbiota was lower when the primers 63F - 1387R were used when compared with the results of the primers 27F - 1492R. However, only the pair 63F - 1387R was able to identified Bifidobacterium spp., important genus for the development of the microbiota from human gut. No significant differences in diversity were observed when the time of initial denaturation of the PCR reaction was extended to 10 minutes. By using the pair of primers 341F - 518R a satisfactory diversity, with detection of Bifidobacterium spp., and greater richness were observed, compared with the other pairs of primer. The data suggests that more than one pair of primers should be used for the study of fecal microbiota when using the library of 16S rRNA as a tool.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO OSVALDO 2010.pdf: 388813 bytes, checksum: 7524bca9b65d53027197a0e944792085 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / The visceral leishmaniasis (LV) is a very important disease in public health, including zoonosis caused by members of Leishmania gender, occurring in many regions of the world. Several methods are being used to diagnose these diseases; among these methods are the Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA), indirect immunofluorescence reaction (RIFI) and direct examination by microscope. As none of these techniques allows a fast and sensitive diagnostic, methods of molecular diagnosis based on polymerase chain reaction (PCR) were developed. Recently, many groups have shown that PCR is a sensitive and specific method to Leshmania DNA detection in a variety of samples of humans, dogs and other animals. The protocols developed until these days to the parasite diagnose by PCR, although they be effective in the identification of the genomic DNA target, promote some inespecific amplifications or are inconclusive in the distinction of L.chagasi from other species of the gender. This work`s objective was the construction of speciesspecific iniciadores to detection of L.chagasi, and evaluation of protocols described by other authors, aiming LV diagnosis. The primers were selected from the alignment of 18S rRNA gene sequences and also of the LSU rRNA. Were selected six new pairs of species-specific primers for L. chagasi. Besides these new pairs were assessed seven other pairs of primers described in the literature. The results showed that the new primer pairs LCS2/LCS3 LCS1/LCS3 were efficient for the species-specific amplification of DNA fragments of L. chagasi of 259 bp and 820 bp, respectively. In the other hand the two new PCR assays optimized in this study using the primer pairs and LCS1/LCS3 LCS2/LCS3 were effective for species-specific detection of up to 1 pg / mL of DNA from L. chagasi. The pairs of primers MC1/MC2 as well as the pair of primers PIA-94 were effective for the discrimination of species-specific L. chagasi.Other pairs of primers evaluated didn´t showed a satisfactory results regarding the specificity for L. chagasi. / A leishmaniose visceral (LV) é uma doença de grande importância em saúde pública, compreendendo zoonoses causadas por membros do gênero Leishmania, sendo de ocorrência em diversas regiões do mundo. Vários métodos já são utilizados para o diagnóstico dessas enfermidades, entre eles o ensaio imunoenzimático (ELISA), a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o exame direto ao microscópio. Como nenhuma destas técnicas permite um diagnóstico sensível e rápido, métodos de diagnóstico molecular baseados na reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram desenvolvidos. Recentemente, vários grupos têm mostrado que a PCR é um método sensível e específico para a detecção do DNA da Leishmania em uma variedade de amostras de humanos, cães e outros animais. Os protocolos desenvolvidos até o presente para o diagnóstico deste parasito por PCR, apesar de serem eficazes na identificação do DNA genômico alvo, promovem algumas amplificações inespecíficas ou não são conclusivos na distinção de L. chagasi de outras espécies do gênero. O objetivo deste trabalho foi a construção de iniciadores espécie-específicos para a detecção de L. chagasi, assim como a avaliação de protocolos descritos por outros autores, visando o diagnóstico da LV. Os iniciadores foram selecionados a partir do alinhamento das seqüências do gene 18S rRNA e também do LSU rRNA. Foram selecionados seis novos pares de iniciadores espécie-específicos para L. chagasi. Além desses novos pares, foram avaliados outros sete pares de iniciadores descritos na literatura. Os resultados permitiram concluir que os novos pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3 foram eficientes para a amplificação espécie específica de fragmentos de DNA de L. chagasi de 259 pb e 820 pb, respectivamente. Já os os dois novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de iniciadores LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção espécie-específica de até 1 pg/`L de DNA de L. chagasi. Os pares de iniciadores MC1/MC2 descritos por CORTES et al. (2004) assim como o par de iniciadores publicado por PIARROUX et al., (1994) foram efetivos para a discriminação espécie-específica de L. chagasi. Os outros pares de iniciadores avaliados não apresentaram resultados satisfatórios quanto a especificidade para L. chagasi.

A microbiota intestinal é um ecossistema complexo que geralmente vive em harmonia com seu hospedeiro. É essencial para o desenvolvimento e funcionamento adequado do sistema imunológico da mucosa durante o início da vida, um processo que atualmente é conhecido por ser importante para a imunidade de adultos. A microbiota intestinal compreende aproximadamente 1000 espécies, das quais 80% não são cultiváveis. Tendo em vista a importância de se conhecer a microbiota humana e a utilização da ferramenta da construção da biblioteca genômica RNAr 16S ser relativamente recente, esse estudo tem como objetivo analisar diferentes protocolos para avaliar o uso desta ferramenta para o estudo da microbiota intestinal humana. Para a realização dos ensaios experimentais, o DNA extraído de fezes de seis crianças, em diferentes faixas etárias, foi utilizado para a criação de um pool, o qual foi utilizado nos ensaios de PCR. As bibliotecas RNAr 16S foram construídas utilizando 2 pares de iniciadores bactéria-específicos 27F-1492R e 63F-1387R, variando o tempo de desnaturação inicial de cada reação de amplificação do gene RNAr 16S entre 5 e 10 minutos, e 1 par de iniciadores 341F-518R. Os clones foram selecionados aleatoriamente, parcialmente sequenciados e analisados com base em banco de dados do gene RNAr 16S. A diversidade da microbiota foi menor quando os iniciadores 63F-1387R foram utilizados, em comparação aos resultados dos iniciadores 27F-1492R, no entanto, apenas o par de iniciadores 63F-1387R identificou Bifidobacterium sp., gênero importante para o desenvolvimento da microbiota intestinal humana. Não houve diferenças significativas na diversidade quando o tempo de desnaturação inicial da reação de PCR foi estendido para 10 minutos. Com o uso do par de iniciadores 341F-518R mostrou uma diversidade satisfatória, uma maior riqueza, quando comparada com os outros pares de iniciadores e detectou a presença de Bifidobacterium sp. Os dados obtidos sugerem que mais de um par de iniciadores deve ser empregado para o estudo da microbiota fecal quando se utilizar a biblioteca de RNAr 16S como ferramenta. / The intestinal microbiota is a complex ecosystem that usually lives in harmony with its host. It is essential for the development and proper functioning of the mucosal immune system during beginning of the life, a process that is currently known to be important for overall immunity of adults. The intestinal microbiota comprises about 1000 species, 80% of which are not cultivable. Given the importance of understanding the human microbiota and that the use of the tool library construction genomic 16S rRNA is relatively recent, this study aims to analyze different protocols to evaluate the use of this tool to study of the human intestinal microbiota. To perform the experimental tests, the DNA extracted from feces of six children, in different age groups, was used for the creation of a pool, which was used in the PCR assays. The 16S rRNA libraries were constructed using 2 pairs of primers specific-bacterium 27F-1492R and 63F-1387R, varying the denaturation time of each initial amplification reaction between 5 and 10 minutes, and the pair of primers 341F - 518R.The clones were randomly selected, partially sequenced and analyzed based on database 16S rRNA gene. The diversity of the microbiota was lower when the primers 63F - 1387R were used when compared with the results of the primers 27F - 1492R. However, only the pair 63F - 1387R was able to identified Bifidobacterium spp., important genus for the development of the microbiota from human gut. No significant differences in diversity were observed when the time of initial denaturation of the PCR reaction was extended to 10 minutes. By using the pair of primers 341F - 518R a satisfactory diversity, with detection of Bifidobacterium spp., and greater richness were observed, compared with the other pairs of primer. The data suggests that more than one pair of primers should be used for the study of fecal microbiota when using the library of 16S rRNA as a tool.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-10 / The objective of this study was to evaluate the effectiveness of benzodioxole derivatives as co-initiators of radical polymerization of experimental self-etching adhesive systems. To compose the experimental self-etching adhesive systems a primer, containing methacrylate monomers and solvents, was developed. A monomer mixture, based on 50 wt % of Bisphenol A glicidyl dimethacrylate (Bis-GMA), 25 wt% of triethyleneglycol dimethacrylate (TEGDMA) and 25 wt% of 2-hydroxyethyl methacrylate(HEMA), was used as a model dental adhesive resin. Camphorquinone (CQ) 1 mol % was used as a photoinitiator to initiate polymerization. Different co-initiators (1,3- benzodioxole and piperonyl alcohol) and concentrations (0.25, 0.50, 1, 2, 4, 8, 16 mol %) were used in a model dental adhesive resin, to compose the experimental groups. Additionally, tertiary amine (EDAB) was used as co-initiator in the control group. The physical, chemical and mechanical properties and characteristics of the polymer obtained for the experimental adhesives (ABDO, APA, AEDAB) were evaluated using polymerization kinetics, sorption and solubility, flexural strength and elastic modulus. The microtensile bond strength (µTBS) to enamel and dentin, and fracture mode were investigated. Adicionalmente morphological analysis of the dentin bonding Interface were evaluated. The results indicated that the BDO and PA were effective co-initiators for the photoinitiator system based on CQ. Comparisons between the benzodioxole derivative co-initiators and traditionally used amine EDAB, showed similar performance in the kinetics of polymerization, flexural strength, water sorption and solubility of the model dental adhesive resin evaluated. In the microtensile bond strength dentin means were higher than enamel and mixed failures were predominant. APA showed higher bond strengths than AEDAB, while ABDO showed intermediate data. The hybrid layer for all groups was shown to be shallow (1-2 µm thick). No appreciable differences in homogeneity were detected along the bonded interface. BDO and PA were feasible alternatives to conventional amine as co-initiator of radical polymerization, moreover, as these benzodioxoles are found in the human diet, this characteristic made them more promising and advantageous to use in dental adhesive resin formulations than amine. / O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade de componentes derivados de benzodioxolas, como co-iniciadores da polimerização radicalar de um adesivo autocondicionante experimental. Para compor sistemas adesivos autocondicionantes experimentais foi desenvolvido um primer, composto por monômeros metacrilatos e solventes. O adesivo foi formulado utilizando uma resina adesiva modelo, composta por 50% de bisfenol A glicidil dimetacrilato (Bis-GMA), 25% de 2-hidroxietil metacrilato (HEMA) e 25% de trietilenoglicol dimetacrilato (TEGDMA), em massa. Canforoquinona (CQ) na concentração 1% molar foi utilizada como fotoiniciador da polimerização da resina modelo. Os grupos experimentais foram formulados com diferentes coiniciadores na resina adesiva: 1,3-benzodioxola (BDO) e álcool piperonílico (AP), em diferentes concentrações molares (0.25, 0.50, 1, 2, 4, 8, 16 %). Adicionalmente um grupo com amina terciária, etil,4-dimetilamino benzoato (EDAB) como co-iniciador, foi formulado como controle. Características e propriedades físicas, químicas e mecânicas do polímero obtido pelos adesivos experimentais foram avaliadas utilizando as metodologias de cinética de polimerização, sorção e solubilidade, resistência à flexão e módulo de elasticidade. A resistência de união à microtração (MPa) ao esmalte e à dentina, com a caracterização do tipo de fratura foi investigada. Adicionalmente, análise morfológica da interface adesiva em dentina foi avaliada. Os resultados indicaram que o BDO e PA foram co-iniciadores efetivos para sistemas fotoiniciadores à base de canforoquinona (CQ). Comparações entre os adesivos experimentais com co-iniciadores derivados de benzodioxolas (ABDO e AAP) e amina (AEDAB), mostraram performance similar na avaliação da cinética de polimerização, resistência à flexão, sorção e solubilidade da resina adesiva modelo avaliada. Na avaliação da resistência de união ao esmalte e à dentina, foi detectada diferença estatística e houve predominância de falhas mistas. APA apresentou maior resistência de união que AEDAB, enquanto ABDO mostrou resultados intermediários. A camada híbrida para todos os grupos apresentou uma espessura entre 1 e 2 Vm. Não foi observada diferença na homogeneidade da interface adesiva em dentina. BDO e PA se revelaram alternativas viáveis à amina como co-iniciadores para a polimerização radicalar. Ademais, estas benzodioxolas são mais promissoras e vantajosas que as aminas, por sua biocompatibilidade e presença na dieta humana