Diss.-- Franeker (D. Sylvius, defendant)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-10-04Bitstream added on 2014-06-13T21:01:12Z : No. of bitstreams: 1 varella_sd_dr_arafcf.pdf: 406128 bytes, checksum: 731423647cfb057752f7d36b74cee720 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A exposição ocupacional a solventes orgânicos é um sério problema para milhares de trabalhadores. A literatura demonstra a ocorrência de um elevado risco de danos no material genético desses indivíduos, no entanto, os efeitos da mistura dos solventes orgânicos não são bem conhecidos. As diferenças genéticas (polimorfismos enzimáticos) também têm um importante papel na capacidade de ativação e de detoxificação de xenobióticos, incluindo os solventes orgânicos. As mutações causadas por agentes ambientais associadas aos diferentes genótipos, são fatores relacionados ao desenvolvimento de neoplasias e outras doenças degenerativas. O ensaio de mutagenicidade urinária indica a ocorrência de possíveis lesões préclínicas enquanto que a determinação dos polimorfismos enzimáticos mostra um perfil genético de risco. Assim, os profissionais da saúde envolvidos com a qualidade de vida do trabalhador, podem ter subsídios para o controle da exposição ocupacional e conseqüentemente evitar o aparecimento de doença (lesão clínica), principalmente o câncer. O trabalho diário num laboratório de pesquisa onde são utilizados vários tipos de solventes é igualmente preocupante. Diante disso, este estudo teve os seguintes objetivos: caracterizar a atividade mutagênica na urina de 30 indivíduos ocupacionalmente expostos a solventes orgânicos e indivíduos sem essa exposição (controles); identificar o polimorfismo constitucional desses indivíduos para os genes GSTM1, GSTT1 e CYP2E1 ; e tentar correlacionar a influência desses genótipos com a atividade mutagênica urinária. A coleta da urina foi realizada em frascos de polietileno durante o dia de trabalho, até a obtenção de aproximadamente 1000mL. Para a concentração e extração dos compostos presentes na urina foi usada a resina XAD-2 e o solvente acetona. Diferentes concentrações... / The occupational exposure to organic solvents is a serious problem to millions of workers. The reports shows a high risk of genetic damage on these workers. However, the effects of mixtures of solvents are not well known. The genetic differences (enzimatic polymorphisms) are very important for the capacity of activating and detoxifying carcinogens, such as organic solvents. Mutations caused by environmental agents associated with the different genotypes are related to cancer development and other degenerative diseases. The urinary mutagenicity assay shows pre-clinical damages while the enzimatic polymorphisms show a genetic risk profile. In this way, the health professionals can have subsity to occupational exposure control in order to avoid disease development (clinical damage), cancer especially. The work in a research laboratory that uses several types of solvents is equaly preocupating. In this way, in this study the genotyping approach was used to study the influence of the metabolic polymorphisms CYP2E1, GSTM1 and GSTT1 on urinary mutagenicity, detected with Salmonella/microsome assay, in 30 subjects exposed to solvents, and 30 subjects without occupational exposure (controls). Urine samples were collected in polyethylene containers at the end of the work shift. For the concentration and extraction of urine samples was used the XAD-2 resin and acetone as eluting agent. Different doses of extract (1.5; 3.0; 6.0 and 12.0 mL equivalents per plate) were tested on Salmonella typhimurium strains TA100 and YG1024, with and without metabolic activation. Genomic DNA was extracted from blood and the GSTM1, GSTT1 and CYP2E1-PstI genotypes were deternined using a PCR method. The mutagenic activity of urine samples from exposed workers shows a significant difference (p£ 0.05) when compared to those in the control group in the Salmonella typhimurium YG1024 with S9 mix... (Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Denise Crispin Tavares / Banca: Lusânia Maria Greggi Antunes / Banca: Ilce Mara de Syllos Cólus / Banca: Christiane Pienna Soares / Resumo: A exposição ocupacional a solventes orgânicos é um sério problema para milhares de trabalhadores. A literatura demonstra a ocorrência de um elevado risco de danos no material genético desses indivíduos, no entanto, os efeitos da mistura dos solventes orgânicos não são bem conhecidos. As diferenças genéticas (polimorfismos enzimáticos) também têm um importante papel na capacidade de ativação e de detoxificação de xenobióticos, incluindo os solventes orgânicos. As mutações causadas por agentes ambientais associadas aos diferentes genótipos, são fatores relacionados ao desenvolvimento de neoplasias e outras doenças degenerativas. O ensaio de mutagenicidade urinária indica a ocorrência de possíveis lesões préclínicas enquanto que a determinação dos polimorfismos enzimáticos mostra um perfil genético de risco. Assim, os profissionais da saúde envolvidos com a qualidade de vida do trabalhador, podem ter subsídios para o controle da exposição ocupacional e conseqüentemente evitar o aparecimento de doença (lesão clínica), principalmente o câncer. O trabalho diário num laboratório de pesquisa onde são utilizados vários tipos de solventes é igualmente preocupante. Diante disso, este estudo teve os seguintes objetivos: caracterizar a atividade mutagênica na urina de 30 indivíduos ocupacionalmente expostos a solventes orgânicos e indivíduos sem essa exposição (controles); identificar o polimorfismo constitucional desses indivíduos para os genes GSTM1, GSTT1 e CYP2E1 ; e tentar correlacionar a influência desses genótipos com a atividade mutagênica urinária. A coleta da urina foi realizada em frascos de polietileno durante o dia de trabalho, até a obtenção de aproximadamente 1000mL. Para a concentração e extração dos compostos presentes na urina foi usada a resina XAD-2 e o solvente acetona. Diferentes concentrações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The occupational exposure to organic solvents is a serious problem to millions of workers. The reports shows a high risk of genetic damage on these workers. However, the effects of mixtures of solvents are not well known. The genetic differences (enzimatic polymorphisms) are very important for the capacity of activating and detoxifying carcinogens, such as organic solvents. Mutations caused by environmental agents associated with the different genotypes are related to cancer development and other degenerative diseases. The urinary mutagenicity assay shows pre-clinical damages while the enzimatic polymorphisms show a genetic risk profile. In this way, the health professionals can have subsity to occupational exposure control in order to avoid disease development (clinical damage), cancer especially. The work in a research laboratory that uses several types of solvents is equaly preocupating. In this way, in this study the genotyping approach was used to study the influence of the metabolic polymorphisms CYP2E1, GSTM1 and GSTT1 on urinary mutagenicity, detected with Salmonella/microsome assay, in 30 subjects exposed to solvents, and 30 subjects without occupational exposure (controls). Urine samples were collected in polyethylene containers at the end of the work shift. For the concentration and extraction of urine samples was used the XAD-2 resin and acetone as eluting agent. Different doses of extract (1.5; 3.0; 6.0 and 12.0 mL equivalents per plate) were tested on Salmonella typhimurium strains TA100 and YG1024, with and without metabolic activation. Genomic DNA was extracted from blood and the GSTM1, GSTT1 and CYP2E1-PstI genotypes were deternined using a PCR method. The mutagenic activity of urine samples from exposed workers shows a significant difference (p£ 0.05) when compared to those in the control group in the Salmonella typhimurium YG1024 with S9 mix... (Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Cardiovascular diseases (CVDs) have been recorded as the number one cause of death worldwide, accounting for 32% of total deaths annually. More than two-thirds of all CVD cases are associated with atherosclerosis, which is the accumulation of fats and other substances causing plaque formation in the interior walls of major arteries. This leads to narrowing of the lumen and hardening of the arteries, ultimately resulting in angina, heart attack and/or stroke. Studies have shown that the pathogenesis of atherosclerosis and associated CVDs is strongly linked to elevated secretion of liver-specific lipoproteins called very-low-density-lipoprotein (VLDL). VLDLs are crucial lipoproteins responsible for transportation of triacylglycerides (TAGs), chemically inert particles that are physiologically significant for their energy storing capacity, from the liver to peripheral tissues. These VLDL particles are synthesized in the lumen of the endoplasmic reticulum (ER) of hepatocytes, transported from the ER to the cis-Golgi in special transport vesicles called VLDL-transport-vesicles (VTVs) and secreted into plasma through a highly regulated secretory pathway. Previous studies from our laboratory have shown that VTV-mediated ER-to-Golgi VLDL trafficking is the rate-limiting step in overall VLDL secretion from hepatocytes into plasma. In this project, we investigated intracellular VLDL trafficking and VLDL secretion in Ames dwarf (Prop1df, df/df) mice, a mutant mouse model homozygous for a recessive mutation at Prop1 gene locus (Prop1df) having deficiency of growth hormone (GH), thyroid stimulating hormone (TSH) and prolactin (PRL). This model is characteristic of prolonged longevity (~50% longer) and improved insulin sensitivity in comparison to their wild-type (N) counterparts. Ames dwarf (df/df) mice have recently been shown to have highly reduced plasma TAG levels, associating them with reduced susceptibility to atherosclerosis and associated CVDs. The underlying mechanism responsible for reduced VLDL secretion in Ames dwarf mice is yet to be characterized. We hypothesize that VTV-mediated trafficking of VLDL is reduced in Ames dwarf mice because of reduced expression of proteins regulating VLDL and VTV formation. To test our hypothesis, we first performed VTV-budding assay using cellular fractions isolated separately from Ames dwarf (df/df) and wild-type (N) mice livers. Our results show a significant (45%) reduction in VTV-budding process in Ames dwarf (df/df) mice compared to wild-type (N). Next we performed 2-dimensional differential gel electrophoresis (2-DIGE) on VTV and whole cell lysate (WCL) samples in order to examine the differences in protein expression and to have highly specific protein separation. ExPASy database was used to analyze protein spots that allowed us in identifying proteins specifically expressed in each of the mouse groups. Employing western blotting, samples (ER, cytosol, VTV and WCL) from both sets of mice were tested for expression levels of VLDL and VTV associated proteins (ApoB100, Sec22b, CideB, MTP, Apo-A1 and Apo-AIV) with ?-actin as the loading control. Significant differences in expression level of these proteins were observed which strongly suggest that the formation of VTV from ER in male Ames dwarf (df/df) mice is reduced compared to wild-type (N). Overall, we conclude that the differential expression of proteins required for VLDL transport causes reduced VLDL secretion in male Ames dwarf (df/df) mice.

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Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GivanilsonBO.pdf: 48546 bytes, checksum: 6d0b44024c65b7dfd816424f9804452d (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The groundwater represents the most important freshwater supply of planet. Dailly, in all world a great amount of toxic and genotoxic material reaches the aquatic systems, mainly the aquifers. The Barreiras aquifer through of five water wells is responsible for the supplying of Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN). All water wells are polluted with nitrate and some heavy metals, two of them were disabled. The genotoxicity of groundwater samples from Barreiras Aquifer in UFRN was assessed using the Allium cepa test, the Ames test and the Salmonella typhymurium microsuspension test (Kado test). For the Allium cepa test the influence of the groundwater samples collected on macroscopic (root length, colour and form) and microscopic (root tip mitotic index, chromosome aberrations and micronucleus) parameters was examined. All water samples caused a significant increase of the chromosome and mitotic aberration frequency and reduction on the rooth growth compared to negative control. Bridges and chromosome stickness were the most frequent kind of aberration in dividing cells. Furthermore, breaks were also observed. No significant increase in the number of micronuclei was found in relation to the negative controls. For Ames test were used the Salmonella typhymurium strains TA98 and TA100 without metabolic activation, applying the direct method. Prior to the Kado test, organic fractions from the water samples were obtained through XAD resin concentration. The mutagenicity organic extracts were evaluated by Kado test using TA98 and TA100 strains, in the absence and presence of S9 mix (metabolic activation). The concentrations of seven heavy metal ions were measured in water samples, but only Ni, Cu and Cr levels exceeded the permissible maximum concentration for the natural reservoirs. The results obtained for mutagenic activity using the Ames test were negative in all raw water samples analyzed. Positive results in XAD4 extracts of water samples were obtained for TA98 in the presence of S9 mix for two stations. Concentrations of heavy metals and nitrate can be correlated with the toxicity and genotoxicity of water analyzed. The mutagenic effect detected with TA98 strain suggested that organic compounds (after metabolization) are involved with the mutagenicity detected in the samples analyzed. The data set obtained in this work indicated the presence of at least two classes of mutagens: organic and inorganic compounds / As ?guas subterr?neas representam o suprimento mais importante de ?gua doce do planeta. Diariamente, em todo planeta, uma grande quantidade de material t?xico e genot?xico atingem os sistemas aqu?ticos, principalmente os aq??feros. O aq??fero Barreiras, atrav?s de cinco po?os, ? respons?vel pelo abastecimento da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN). Todos os po?os encontram-se contaminados com nitrato e alguns metais pesados. Dois deles foram desativados. A genotoxicidade das amostras das ?guas subterr?neas do aq??fero Barreiras na UFRN foi avaliada usando os teste Allium cepa, o teste de Ames e o teste de microsuspens?o com Salmonella typhimurium (Teste de kado). Para o teste Allium cepa a influ?ncia das amostras de ?gua subterr?neas coletadas nos par?metros macrosc?picos (crescimento, colora??o e forma da raiz), microsc?pico (?ndice mit?tico, aberra??es cromoss?micas e micron?cleo) foram examinadas. Todas as amostras de ?gua causaram aumento significante na freq??ncia de aberra??es cromoss?micas e mit?ticas e redu??o no crescimento das ra?zes comparando com o controle negativo. Pontes e cromossomos stickness foram os tipos de aberra??es mais freq?entes nas c?lulas em divis?o. Al?m disso, quebras de DNA tamb?m foram observadas. N?o foi encontrado aumento significante no n?mero de micron?cleos comparando com o controle negativo. Para execu??o do teste de Ames, aplicando o m?todo direto foram usadas ?s linhagens de Salmonella typhymurium TA98 e TA100 sem ativa??o metab?lica. As amostras de ?gua foram submetidas ao processo de concentra??o em resina XAD antes do teste de Kado. Extra??o org?nica foi realizada em colunas contendo resina XAD4 que absorve uma grande classe de compostos mutag?nicos. A mutagenicidade dos extratos org?nicos foi avaliada pelo teste de Kado usando as linhagens TA98 e TA100, na aus?ncia e na presen?a da fra??o S9 (ativa??o metab?lica). As concentra??es de sete metais pesados foram medidas nas amostras de ?gua, apenas os n?veis de Ni, Cu e Cr excederam os n?veis m?ximos de concentra??es permitidas para os reservat?rios naturais. Os resultados obtidos para a atividade mutag?nica usando o teste de Ames foi negativo em todas amostras de ?gua bruta analisadas. Resultados positivos com o extrato da resina XAD4 das amostras de ?gua foram obtidos para cepa TA98 na presen?a da fra??o S9 para duas amostras. Metais pesados e nitrato podem estar correlacionadas com a toxicidade e genotoxicidade observada nas amostras de ?gua analisadas. O efeito mutag?nico detectado com a linhagem TA98 sugere que compostos org?nicos (depois de metabolizados) causaram a mutagenicidade detectada nas amostras analisadas. Em conjunto, os dados obtidos neste trabalho indicam a presen?a de pelo menos duas classes de mut?genos: compostos org?nicos e inorg?nicos

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThiagoMC.pdf: 54368 bytes, checksum: 8e14c2b4d3fe392bf725d169831359dc (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / A contamina??o de reservat?rios de ?gua ? um dos principais problemas da atualidade. A Barragem Engenheiro Armando Ribeiro Gon?alves (EARG), (06?08 S; 37?07 W) localizada no estado do Rio Grande do Norte, ? a segunda maior barragem do nordeste brasileiro, respons?vel pelo abastecimento dom?stico de aproximadamente 415 mil habitantes do semi-?rido brasileiro. A ?gua da EARG ? captada por um sistema de adutoras, onde ? tratada e distribu?da para a popula??o. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial genot?xico da ?gua da Barragem EARG. Para isso, foram realizados os testes cometa e micron?cleo com eritr?citos de til?pias (Oreochromis niloticus) capturadas nesse reservat?rio. Os testes Allium cepa e muta??o reversa com Salmonela typhimurium foram realizados com ?gua do reservat?rio antes e ap?s o tratamento. Al?m disso, an?lises quantitativa e qualitativa de cianobact?rias, assim como a quantifica??o das microcistinas produzidas pelas cianobact?rias presentes nesse reservat?rio foram realizados, apenas com amostras coletadas na barragem. Os resultados obtidos indicaram aumento significativo na freq??ncia de micron?cleos em eritr?citos de O. niloticus (p<0,05). A m?dia obtida foi de 2,38 ? 3,02 micron?cleos em mil c?lulas analisadas, enquanto que o controle negativo apresentou m?dia de 0,20 ? 0,41 micron?cleos. O ensaio cometa realizado com peixes da EARG foi analisado em uma escala crescente de danos (0 - 4), e mostrou resultados classificados nos n?veis 0, 1, 2 e 3, enquanto que o controle negativo apresentou resultados nos n?veis 0 e 1. Nos par?metros macrosc?picos avaliados no teste A. cepa n?o foi verificado altera??es estatisticamente significativas. Os par?metros microsc?picos indicaram diminui??o significativa no ?ndice mit?tico nos dois pontos estudados. Al?m disso, tamb?m foi detectado aumento na freq??ncia de met?fases e an?fases aberrantes em ambos os pontos, por?m estatisticamente significativo apenas na amostra sem tratamento para an?fases aberrantes. A freq??ncia de micron?cleos no teste A. cepa n?o foi significativo em rela??o ao controle negativo. Para o teste de muta??o reversa com S. typhimurium realizado com ?gua sem extra??o, os resultados n?o demonstraram mutagenicidade para ambos os pontos. Os resultados encontrados com os extratos das amostras coletadas em ambos os pontos apresentaram diferen?as estatisticamente significativa quando foi utilizada a fra??o S9 como ativador metab?lico. Para a ?gua n?o tratada, essas diferen?as foram encontradas apenas para a cepa TA98, enquanto que para a ?gua tratada, as duas linhagens apresentaram diferen?as significativas. A an?lise qualitativa de cianobact?rias demonstrou a exist?ncia de cianobact?rias potencialmente t?xicas tais como Planktothrix agardii, Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis panniformes. O ensaio de HPLC indicou a presen?a de 38,1 &#956;g/L de microcistinas na ?gua da EARG. O teste de muta??o reversa realizado com o extrato contendo microcistinas, n?o apresentou aumento na raz?o de mutagenicidade para TA100. O conjunto dos resultados obtidos no presente trabalho sugere que as ?guas da Barragem EARG podem conter agentes genot?xicos, capazes de alterar a informa??o gen?tica dos indiv?duos. Esses resultados indicam a necessidade de um programa de monitoramento e controle desses poluentes