Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-12Bitstream added on 2014-06-13T20:56:35Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_aps_me_arafcf.pdf: 946584 bytes, checksum: 6c4fbb82549dc1046e8b7771847a8f5b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A família Eriocaulaceae possui cerca de 1200 espécies divididas em 10 gêneros e suas espécies de plantas são conhecidas como sempre-vivas, por sua grande durabilidade e coloração paleácea. Neste trabalho foram estudadas as espécies: Eriocaulon ligulatum, Leiothrix flavescens e Leiothrix spiralis, as quais foram avaliadas quanto à mutagenicidade e estrogenicidade e algumas substâncias isoladas foram utilizadas para um estudo de relação estrutura-atividade mutagênica e estrogênica. Para avaliação da mutagenicidade, utilizou-se o teste de Ames, e o teste RYA (Recombinant Yeast Assay) foi o empregado para avaliação da estrogenicidade. Os resultados da atividade mutagênica demonstraram que apenas E. ligulatum foi considerado mutagênico e isso foi atribuído às isocumarinas e flavonóides agliconas. Os estudos de relação estrutura-atividade mutagênica mostraram que esta ação foi devida à presença de hidroxilas em posições estratégicas e à ausência de glicosilações, metoxilações, ou qualquer outro tipo de substituição. Para complementar os estudos de relação estrutura-atividade mutagênica com as isocumarinas, utilizou-se resultados já publicados de mutagenicidade de moléculas semelhantes à isocumarina eriocaulina, isolada de E. ligulatum. Verificou-se que os dímeros de isocumarinas têm a sua mutagenicidade influenciada pela conformação espacial, pela presença de grupos hidroxilas mais afastados de grupos volumosos, e pelo tipo de ligação que une os seus monômeros. Quando o potencial estrogênico foi avaliado, apenas a L. flavescens apresentou resultados positivos e que esses são devidos à presença de flavonas agliconas, como a luteolina e a metoxiluteolina. As mesmas isocumarinas, pertencentes a outras espécies da família Eriocaulaceae, avaliadas no teste de Ames, foram avaliadas no teste RYA... / Eriocaulaceae family comprises around 1200 species, divided into 10 genera, and their plant species are known as “sempre-vivas” (everlasting flowers) for its durability and color. In this work the species Eriocaulon ligulatum, Leiothrix flavescens and Leiothrix spiralis were studied. These species were evaluated for the mutagenic and the estrogenic potential and some of their isolated compounds were used for a study of structuremutagenic and estrogenic activities. To assess mutagenicity we used Ames test and the Recombinant Yeast Assay (RYA test) was used for evaluation of estrogenicity. The results of mutagenic activity showed that only E. ligulatum presented mutagenicity and that these results were due to its naphthopyranones and flavonoid aglicons. The structuremutagenic activity studies shown that this action were due to the presence of hydroxyl groups in strategic positions and no glycosylations, methoxylation or any type of substitutions. To complement the studies of structure-mutagenic activity with the naphthopyranones, we use results already published of the mutagenicity of similar compounds to the naphthopyranone eriocaulina, isolated from E. ligulatum, and compare them with the data from ericauline. It was found that the dimers of naphthopyranones have their mutagenicity influenced by its spatial conformation, for the presence of hydroxyl groups furthest away from large groups, and the type of connection that join their monomers. When the estrogenic potential was assessed, we found that only L. flavescens showed positive results and that these results are due to the presence of flavones in the form of aglycones, such as luteolin and methoxyluteolin. The same naphthopyranones belonging to other species of Eriocaulaceae family, evaluated in the Ames test, were assessed in the RYA test. Their results were crucial for the establishment of structureestrogenic activity... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Edson Luis Maistro / Resumo: Cerca de 11% dos medicamentos considerados essenciais pela OMS são derivados de plantas medicinais, daí a importância do desenvolvimento de testes científicos sobre essas plantas, avaliando, além do seu real potencial farmacológico, a genotoxicidade, mutagenicidade, antigenotoxicidade, citotoxicidade, dentre outros, para esclarecer se o uso de tais plantas por seres humanos é seguro. Crataegus oxyacantha é uma planta originalmente encontrada na Europa e, devido à suas potencialidades medicinais, já há muito tempo foi introduzida no continente sulamericano. Pertencente à família Rosaceae, a árvore forma, na primavera, cachos grandes de flores brancas ou rosas de fragrância agradável, que no outono se transformam em pequenos frutos vermelhos. A importância da C. oxyacantha se dá pela presença comprovada de flavonóides, que são conhecidos por sua ação antioxidante. Devido a inexistência na literatura de estudos investigando a toxicidade genética de C. oxyacantha para os seres humanos, o presente estudo foi elaborado visando avaliar se o extrato de frutos desta planta apresenta efeitos citotóxico, genotóxico e clastogênico/aneugênico em leucócitos humanos e células HepG2 em cultura, e mutagênico em cepas de Salmonella typhimurium (teste de Ames). Os resultados da análise de genotoxicidade mostraram que o extrato não apresentou efeitos genotóxicos nas concentrações de 2,5 e 5,0 µg/ml em ambos os tipos celulares analisados, no entanto, em concentrações acima de 10 µg/ml verificou-s... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: About 11% of medicines considered essential by WHO are derived from medicinal plants, being important to develop scientific tests on these plants, evaluating several aspects as its pharmacological potential, genotoxicity, mutagenicity, antigenotoxicity, cytotoxicity, among others, to clarify if the use of such plants is safe for humans. Crataegus oxyacantha is a plant originally found in Europe and due to its medicinal potential, was at long time introduced in the South American continent. Belonging to the Rosaceae family, the tree form in the spring, large bunches of white flowers and pleasant fragrance of roses, which in autumn turn into small red fruits. The importance of C. oxyacantha is attributed to the presence of flavonoids as constituents, which are known for their antioxidant activity. Considering the absence in the literature of studies investigating the genetic toxicity of C. oxyacantha to humans, this study was designed to evaluate if the fruits extract of this plant present a cytotoxic, genotoxic and clastogenic/aneugenic effects in cultured human HepG2 and leukocytes cells, and mutagenicity in Salmonella typhimurium strains (Ames test). The results of genotoxicity analysis evidenced that the extract showed no genotoxic effects at 2.5 and 5.0 ug/ml concentrations, in both cell types tested, however, at concentrations above of 10 ug/ml significant DNA damage was observed. The micronucleus test results showed that the concentrations above of 10 ug/ml also produced... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-21Bitstream added on 2014-06-13T18:08:04Z : No. of bitstreams: 1 cardoso_crp_me_arafcf.pdf: 859101 bytes, checksum: dc8d0d66975b1493a8b7a5a2830d3074 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Considerando a pesquisa de novas moléculas farmacologicamente ativas, orientada pelo uso tradicional das plantas com finalidade terapêutica, o presente trabalho avaliou os efeitos genotóxicos e de ativação do sistema imunológico em duas espécies de plantas do gênero Byrsonima: Byrsonima crassa e Byrsonima intermedia. Essas espécies são plantas de uso popular, pertencentes à flora do Cerrado Brasileiro, utilizadas pela população para disfunções gástricas e diarréias. Foram realizados ensaios para a caracterização da mutagenicidade dos extratos, através do Teste de Ames (TA), utilizando-se linhagens geneticamente modificadas de Salmonella typhimurium e de ativação da resposta imune celular, utilizando-se cultura de macrófagos de exsudato peritoneal (PEC) de camundongos Swiss, avaliando a liberação celular de Fator de Necrose Tumoral-alfa (TNF-α) e Óxido nítrico (NO), importantes moduladores da resposta inflamatória. Foi verificado que somente o extrato metanólico de B.crassa apresentou atividade mutagênica positiva na linhagem TA98, com e sem ativação metabólica. Analisando-se as frações aquosa e acetato de etila, verificou-se que o composto provavelmente responsável pela atividade mutagênica do extrato metanólico está presente na fração acetato. Testes realizados com os compostos isolados dessa fração (catequina, galato de metila, querecetina -3-O-β-Dgalactopiranosídeo, quercetina-3-O-α-arabinopiranosídeo e amentoflavona) revelaram ação mutagênica da amentoflavona e indícios de mutagenicidade da quercetina arabinopiranosídeo. Nos ensaios imunológicos, verificou-se que os extratos de B.crassa e B.intermedia promoveram estímulo da liberação de NO por macrófagos de camundongos em níveis reduzidos, assim como a fração aquosa do extrato metanólico de B.crassa. A fração acetato de etila do extrato... / Considering the research of active new molecules, leaded by the traditional use of plants with therapeutic proposal, this paper tested the genotoxic effects and the activation of the immune system in two species of Byrsonima: Byrsonima crassa and Byrsonima intermedia. These are popular use species that belong to the Brazilian Cerrado, utilized by population to gastric dysfunctions and diarrheas. Many assays were done to give the characterization of mutagenicity of the extracts, through the Ames test (TA) using a line of genetic changed Salmonella typhimurium and the activation of the cellular response, using a culture of peritoneal macrophages from Swiss mice, to test the cell liberation of the Tumor Necrosis Factor-apha (TNF-a) and Nitric Oxide (NO), important modulators on the inflammation response. It was verified that only the methanolic extract of B.crassa presented positive mutagenic activity in the line TA98, with and without metabolic activation. Analyzing the watering and ethyl acetate portions, it was checked that the substance that probably is responsible by the mutagenic activity of the methanolic extract is present on the ethyl acetate portion. Assays achieved with isolated compounds from this portion - (+)-catechin, methyl galate, quercetin-3-O-ß-D-galactopyranoside, quercetin-3-O-a-Larabinopyranoside and amentoflavone - discovered mutagenic activity of amentoflavone and mutagenicity signals of quercetin-3-O-a-L-arabinopyranoside. On this immunologic assays, it was observed that the B.crassa and B.intermedia extracts did not promote the stimulation of leaving NO and TNF-a by macrophages of mouse, just live the watering portion from B.crassa methanolic extract. The ethyl acetate B.crassa portion presented stimulated and relevant activity to the liberation of NO and TNF-a. (Complete abstract, click electronic address below).

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-06-05T10:40:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-06-05T10:56:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T10:56:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-11-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lafoensia pacari A. St. Hil. (Lythraceae), popularly known in Brazil as “pacari”, is a species native of Cerrado. In folk medicine, the leaves and stem bark are used to treat cancer and as an anti-inflammatory and cicatrizant agent. Due to the wide use of this plant as a therapeutic resource, the present study evaluated the genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic, and anticytotoxic activities of the ethanolic extract from L. pacari stem bark and leaves using the Ames test and the mouse bone marrow micronucleus test. Our results demonstrated that the ethanolic extract from L. pacari leaves, presented no mutagenic activity in bacteria, but presented a mild genotoxicity in the highest concentration at 24 h in mice bone marrow cells. Exhibited moderate cytotoxic effect on bacteria and a mild cytotoxic action in the highest concentration by micronucleus test. The extract showed antimutagenic activity by Ames test and in the micronucleus test demonstrated antigenotoxic action in all concentrations at 24 h, and in the lowest concentration at 48 h. Showed anticytotoxic effect in all concentrations and times tested. In the evaluation of the genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic and anticytotoxic activities of the ethanolic extract from L. pacari stem bark, the results demonstrated that the extract exhibited no mutagenic activity in bacteria, however showed a mild genotoxicity in the highest concentration in mice. Exhibited moderate cytotoxic effect in bacteria and a mild cytotoxicity at 24 h by micronucleus test. Showed strong antimutagenic activity by Ames test, as well as antigenotoxic and anticytotoxic activities in the mouse bone marrow micronucleus test, demonstrating to be a strong protective agent against DNA damage. / Lafoensia pacari A. St-Hil, (Lythraceae) popularmente conhecida no Brasil como pacarí, é uma espécie nativa do Cerrado. Na medicina popular, suas folhas e casca do caule são utilizadas para tratar câncer, como um agente cicatrizante e antiinflamatório. Devido à grande utilização dessa planta como recurso terapêutico, o presente trabalho avaliou as atividades genotóxica, citotóxica, antigenotóxica e anticitotóxica do extrato etanólico das folhas e da casca do caule de L. pacari, utilizando o teste de mutagenicidade de Ames e o teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos. Nossos resultados demonstraram que o extrato etanólico das folhas de L. pacarí, não apresentou atividade mutagênica em bactérias, mas apresentou uma leve genotoxicidade na concentração mais elevada em células de medula óssea de camundongos no tempo de 24 h. Exibiu efeito citotóxico moderado em bactérias e uma leve ação citotóxica, na concentração mais elevada no teste de micronúcleo. O extrato apresentou atividade antimutagênica pelo teste de Ames e no teste do micronúcleo demonstrou ação antigenotóxica em todas as concentrações no tempo de 24 h e na concentração mais baixa no tempo de 48 h. Apresentou efeito anticitotóxico em todas as concentrações e tempos testados. Na avaliação das atividades genotóxica, citotóxica, antigenotóxica e anticitotóxica do extrato etanólico da casca do caule de L. pacarí os resultados provaram que este extrato não exibiu atividade mutagênica em bactérias, no entanto apresentou uma genotoxicidade fraca na maior concentração em camundongos. Exibiu um efeito citotóxico moderado em bactérias e uma leve citotoxicidade, somente no tempo de 24 h pelo teste de micronúcleo. Apresentou forte atividade antimutagênica pelo teste Ames, bem como atividade antigenotóxica e anticitotoxica no teste de micronúcleo em medula óssea de camundongos, demonstrando ser um forte agente protetor contra danos no DNA.

O teste de Salmonella/microssoma é um ensaio biológico amplamente utilizado para avaliar o potencial mutagênico de substâncias que podem colocar em risco a saúde humana e a qualidade ambiental. A variável resposta é constituída pela contagem do número de colônias revertentes em cada placa, entretanto geralmente há dois efeitos confundidos, o de toxicidade e o de mutagenicidade. Alguns modelos foram propostos para a análise dos dados desses experimentos, que nem sempre apresentam bons ajustes e não consideram explicitamente interações. Há, ainda, poucas plataformas computacionais disponíveis que integram todas essas propostas e forneçam critérios para a seleção adequada de um modelo. Além disso, geralmente é difícil comparar os efeitos de diferentes substâncias sobre as várias linhagens da bactéria, então medidas com interpretação biológica direta são necessárias. Neste trabalho, foram investigadas as propriedades dos preditores dos modelos tradicionais, bem como o comportamento das distribuições amostrais dos estimadores dos parâmetros desses modelos, na presença de diversos níveis de superdispersão. Também, foram realizados experimentos com as linhagens TA98 e TA100 da bactéria, expostas aos inseticidas, metabolizados e não-metabolizados, Fipronil e Tiametoxam, dois agroquímicos bastante utilizados no Brasil. Aos dados desses experimentos foram ajustados diversos modelos, tanto aqueles tradicionalmente utilizados, quanto novos modelos, alguns baseados na regressão de Skellam e outros com interações explícitas. Para tal, foi obtida uma nova classe de modelos chamada de modelos não-lineares vetoriais generalizados e foi desenvolvido um pacote computacional em linguagem R, intitulado \"ames\", para o ajuste, diagnóstico e seleção de modelos. Por fim, foram propostas medidas de interesse biológico, baseadas nos modelos selecionados, para avaliação de risco e do comprometimento do material genético e intervalos de confiança bootstrap paramétrico foram obtidos. Dentre os modelos tradicionais, aqueles cujas distribuições amostrais dos estimadores possuem melhor aproximação normal foram os de Bernstein, Breslow e Myers. Estes resultados forneceram um critério prático para a seleção de modelos, particularmente nas situações em que as medidas de AIC e de bondade de ajuste, os testes de razão de verossimilhanças e a análise de resíduos ou são pouco informativos ou simplesmente não podem ser aplicados. A partir dos modelos selecionados, pode-se concluir que a interação do fator de metabolização é significativa para a linhagem TA98 exposta ao Fipronil, tanto com relação aos efeitos tóxicos quanto aos efeitos mutagênicos; que o mecanismo de ação do Tiametoxam sobre a linhagem TA98 é completamente diferente quando o produto está metabolizado; e que, para a linhagem TA100, não houve efeito de metabolização considerando ambos os agroquímicos. Baseando-se nas medidas propostas, pode-se concluir que o Tiametoxam oferece os maiores riscos de contaminação residual, ainda que o Fipronil apresente os maiores índices de mutagenicidade. / The Salmonella/microsome test is a widely accepted biological assay used to evaluate the mutagenic potential of substances, which can compromise human health and environment quality. The response variable in such experiments is typically the total number of reverts per plate, which, in turn, is the result of the confounded effects of mutagenicity and toxicity. Despite of some statistical models have already been established in the literature, they do not always fit well and neither explicitly consider interaction terms. Besides, there is just a number of available software able to handle these different approaches, usually lacking of global performance and model selection criteria. Also, it is often a hard task to compare the effects of different chemicals over the several available strains to perform the assay, and, thus, direct measures of biological implications are required. In this work, the properties of the predictors in each traditional model were investigated, as well as the behavior of the sampling distributions of the parameter estimators of these models, in different levels of overdispersion. Also, experiments using TA98 and TA100 strains were perfomed, by exposition to two insecticides, namely Fipronil and Thiamethoxam, currently used in Brazil, each of them prior and after to a metabolization processes. Then, the traditional models, empirical regression models based on the Skellam distribution and also compound mechanistic-empirical models with explicit interaction terms were fitted to the data. In order to use a single fitting framework, a new class of models was presented, namely the vector generalized nonlinear models, and a R language package, entitled \"ames\", was developed for fitting, diagnosing and selection of models. Finally, some measures of biological interest were approached based on the selected models for the data, in the contexts of risk evaluation and of DNA damage cautioning. Confidence intervals for such measures were provided using bootstrap percentiles. Among the traditional models, the ones from Bernstein, Breslow and Myers were those whose sampling distributions presented the best normal approximations. These results provided a practical criterion for model selection, particularly in situations where measures as AIC and goodness of fit, likelihood ratio tests, and residual analysis are non informative or simply cannot be applied. From the final selected models, it was inferred that the interactions between the metabolization factor is significative for TA98 strain exposed to Fipronil, regarding both, mutagenic and toxic effects; that the dynamics between mutagenicity and toxicity are different when Thiamethoxam is metabolized compared to when it is not; and that there was no evidence to consider metabolization factor interactions for the TA100 strain data exposed to neither of the insecticides. By appling the referred measures of biological interest, it was concluded that the use of Thiamethoxam provides greater residual contamination risks and that Fipronil causes higher mutagenicity indices.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LucilaCME.pdf: 777399 bytes, checksum: 0872bb60e8e228e6574e4fe1b87a20f8 (MD5) Previous issue date: 2006-12-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The Pitimbu River is located at the oriental portion of the State of Rio Grande do Norte, including three importants cities named Maca?ba, Parnamirim e Natal. Although its high importance as a water source, which supplys great part of the South Zone of the Natal city, this river receives a large quantity of domestic and industrial waste water without treatment. The Pitimbu River headhas its river-head located in the city of Macaiba, goes through Parnamirim, then it flowing into at the Jiqui Lake in Natal. The aim of this study was to evaluate, qualitatively and quantitatively, the environmental quality of the Pitimbu River by genotoxicity bio-assays, which are important tools for genetics toxicological evaluation. In this work, five samples sites, distributed along the river, were used to collect water samples. Another point site, located near Jiqui lake, was used to collect drinkable water, which was treated by CAERN, the water treatment entreprise of Rio Grande do Norte. The following assays where used to evaluate the quality of these samples: Allium cepa assay; Comet assay; Micronuclei (MN) assay; and Ames test. For the Allium cepa assay, sixteen specimes where used for each water sample from the sample sites. In this assay both microscopic, like cytogenetic damage, and macroscopic aspects, as morphological variation were evaluated. Red blood cells from periferical blood of the Crenicichla menezesi native specie were used not only for the MN assay, but also for the Comet assay. These fishes were collected at different points on the Pitimbu River and the negative control was developed using fishes of the same species that were bring to the laboratory and maintained for 100 days in the optimal experimental conditions. For the Ames test, TA100, YG1042, TA98 and YG1041 strains were used in the directed method without metabolic activation. The results found by the Allium cepa assay showed that two water sample sites induced increase of mitotic index (IM). Additionally, compared to the control, all the water samples increased the chromossomal aberrations frequency and/or micronucleus. Among the sample sites, two also showed an abnormal growth rate in its root and two samples induced morphological alteration. With the MN test in red blood cells, a high frequence of MN was observed in tree sample. By comparing all the results obtained on the water sample points and with the negative control, a significant variation on the MN frequency was observed. Positive results were also observed for the same sample to water test by the Comet assay. These results allow concluding that the proposed specie Crenicichla menezesi has a good profile as a bio-indicator for the evaluation of environmental water quality and the MN and comet test can be usuful for in situ evaluation. By the Ames test, it was possible to detect the mutagenic activity on the waters from the Pitimbu River in different levels of mutagenicity. This result suggests that this river has several substances that induced changes directly to the DNA. The mechanisms involved to this phenomenon could be by both processes, by changing of the reading frame and by nucleotide substitution. These data set indicate the presence of mutagenic agents, which can represent in risk to biot and human beens / O rio Pitimbu localiza-se no litoral oriental do Estado do Rio Grande do Norte, mais precisamente na grande Natal, nos munic?pios de Maca?ba, Parnamirim e Natal. Embora se trate de um importante manancial, abastecendo parte da zona sul da capital do Estado, suas ?guas t?m sido alvo de dejetos industriais e dom?sticos, os quais n?o recebem tratamento adequado. O rio Pitimbu tem sua nascente situada no munic?pio de Maca?ba e des?gua na lagoa do Jiqu?, e parte em dire??o a praia de Pirangi, lan?ando suas ?guas no mar. O presente estudo teve como objetivo avaliar quantitativamente e qualitativamente a qualidade das ?guas do rio Pitimb?, atrav?s de bioensaios de genotoxicidade que s?o ferramentas de grande import?ncia nos estudos de gen?tica toxicol?gica. Neste trabalho foram coletadas amostras de ?gua de cinco pontos distribu?dos ao longo do rio e amostras da ?gua da lagoa do Jiqui ap?s tratamento feito pela CAERN (Companhia de ?guas e Esgotos do Rio Grande do Norte). Essas amostras foram analisadas atrav?s dos seguintes ensaios: teste de Allium cepa; o ensaio Cometa; o teste de Micron?cleo (MN); e o teste de Ames. Para realiza??o do teste em Allium cepa foram utilizados 16 indiv?duos para cada amostra testada, foram feitas an?lises dos aspectos microsc?picos (danos citogen?ticos) e macrosc?picos (varia??es morfol?gicas). Eritr?citos de sangue perif?rico da esp?cie nativa Crenicichla menezesi, foram utilizados tanto para execu??o do teste de MN como para o ensaio Cometa, os exemplares desta esp?cie foram coletados em diferentes pontos do rio Pitimbu e o controle negativo foi realizado com peixes da mesma esp?cie que foram trazidos para o laborat?rio e mantidos por 100 dias em condi??es ideais. Para execu??o do teste de Ames foram utilizadas as linhagens TA100, YG1042, TA98 e YG1041, sem ativa??o metab?lica, o qual foi realizado pelo m?todo direto. Os resultados obtidos no teste de Alium cepa monstraram que dois pontos de coleta de ?gua induziram altera??es no ?ndice mit?tico (?ndice de prolifera??o celular); al?m disso, todas as amostras de ?gua do rio induziram aumento na freq??ncia de aberra??es cromoss?micas e/ou de MN, em rela??o ao grupo controle. Dois dos pontos de coleta tamb?m apresentaram altera??o no crescimento da raiz e dois pontos produziram modifica??es morfol?gicas. Com o teste MN em eritr?citos uma alta freq??ncia de MN foi observada para tr?s amostras coletadas. Resultados positivos nas mesmas amostras teste tamb?m foram obtidos com o ensaio cometa. Estes resultados sugerem que a esp?cie Crenicichla menezesi pode ser considerado como um bom bioindicador para an?lise de qualidade ambiental e que os testes de MN e cometa s?o vi?veis para an?lise in situ. No teste de Ames, foi poss?vel detectar a presen?a de atividade mutag?nica nas ?guas do rio Pitimbu em diferentes n?veis de mutagenicidade, sugerindo a presen?a de compostos que agem de forma direta no DNA tanto por mudan?a do quadro de leitura quanto por substitui??o de pares de bases. Em conjunto os dados indicam a presen?a de agentes mutag?nicos, o que pode representar risco para a biota e os seres humanos

O teste de Salmonella/microssoma é um ensaio biológico amplamente utilizado para avaliar o potencial mutagênico de substâncias que podem colocar em risco a saúde humana e a qualidade ambiental. A variável resposta é constituída pela contagem do número de colônias revertentes em cada placa, entretanto geralmente há dois efeitos confundidos, o de toxicidade e o de mutagenicidade. Alguns modelos foram propostos para a análise dos dados desses experimentos, que nem sempre apresentam bons ajustes e não consideram explicitamente interações. Há, ainda, poucas plataformas computacionais disponíveis que integram todas essas propostas e forneçam critérios para a seleção adequada de um modelo. Além disso, geralmente é difícil comparar os efeitos de diferentes substâncias sobre as várias linhagens da bactéria, então medidas com interpretação biológica direta são necessárias. Neste trabalho, foram investigadas as propriedades dos preditores dos modelos tradicionais, bem como o comportamento das distribuições amostrais dos estimadores dos parâmetros desses modelos, na presença de diversos níveis de superdispersão. Também, foram realizados experimentos com as linhagens TA98 e TA100 da bactéria, expostas aos inseticidas, metabolizados e não-metabolizados, Fipronil e Tiametoxam, dois agroquímicos bastante utilizados no Brasil. Aos dados desses experimentos foram ajustados diversos modelos, tanto aqueles tradicionalmente utilizados, quanto novos modelos, alguns baseados na regressão de Skellam e outros com interações explícitas. Para tal, foi obtida uma nova classe de modelos chamada de modelos não-lineares vetoriais generalizados e foi desenvolvido um pacote computacional em linguagem R, intitulado \"ames\", para o ajuste, diagnóstico e seleção de modelos. Por fim, foram propostas medidas de interesse biológico, baseadas nos modelos selecionados, para avaliação de risco e do comprometimento do material genético e intervalos de confiança bootstrap paramétrico foram obtidos. Dentre os modelos tradicionais, aqueles cujas distribuições amostrais dos estimadores possuem melhor aproximação normal foram os de Bernstein, Breslow e Myers. Estes resultados forneceram um critério prático para a seleção de modelos, particularmente nas situações em que as medidas de AIC e de bondade de ajuste, os testes de razão de verossimilhanças e a análise de resíduos ou são pouco informativos ou simplesmente não podem ser aplicados. A partir dos modelos selecionados, pode-se concluir que a interação do fator de metabolização é significativa para a linhagem TA98 exposta ao Fipronil, tanto com relação aos efeitos tóxicos quanto aos efeitos mutagênicos; que o mecanismo de ação do Tiametoxam sobre a linhagem TA98 é completamente diferente quando o produto está metabolizado; e que, para a linhagem TA100, não houve efeito de metabolização considerando ambos os agroquímicos. Baseando-se nas medidas propostas, pode-se concluir que o Tiametoxam oferece os maiores riscos de contaminação residual, ainda que o Fipronil apresente os maiores índices de mutagenicidade. / The Salmonella/microsome test is a widely accepted biological assay used to evaluate the mutagenic potential of substances, which can compromise human health and environment quality. The response variable in such experiments is typically the total number of reverts per plate, which, in turn, is the result of the confounded effects of mutagenicity and toxicity. Despite of some statistical models have already been established in the literature, they do not always fit well and neither explicitly consider interaction terms. Besides, there is just a number of available software able to handle these different approaches, usually lacking of global performance and model selection criteria. Also, it is often a hard task to compare the effects of different chemicals over the several available strains to perform the assay, and, thus, direct measures of biological implications are required. In this work, the properties of the predictors in each traditional model were investigated, as well as the behavior of the sampling distributions of the parameter estimators of these models, in different levels of overdispersion. Also, experiments using TA98 and TA100 strains were perfomed, by exposition to two insecticides, namely Fipronil and Thiamethoxam, currently used in Brazil, each of them prior and after to a metabolization processes. Then, the traditional models, empirical regression models based on the Skellam distribution and also compound mechanistic-empirical models with explicit interaction terms were fitted to the data. In order to use a single fitting framework, a new class of models was presented, namely the vector generalized nonlinear models, and a R language package, entitled \"ames\", was developed for fitting, diagnosing and selection of models. Finally, some measures of biological interest were approached based on the selected models for the data, in the contexts of risk evaluation and of DNA damage cautioning. Confidence intervals for such measures were provided using bootstrap percentiles. Among the traditional models, the ones from Bernstein, Breslow and Myers were those whose sampling distributions presented the best normal approximations. These results provided a practical criterion for model selection, particularly in situations where measures as AIC and goodness of fit, likelihood ratio tests, and residual analysis are non informative or simply cannot be applied. From the final selected models, it was inferred that the interactions between the metabolization factor is significative for TA98 strain exposed to Fipronil, regarding both, mutagenic and toxic effects; that the dynamics between mutagenicity and toxicity are different when Thiamethoxam is metabolized compared to when it is not; and that there was no evidence to consider metabolization factor interactions for the TA100 strain data exposed to neither of the insecticides. By appling the referred measures of biological interest, it was concluded that the use of Thiamethoxam provides greater residual contamination risks and that Fipronil causes higher mutagenicity indices.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GivanilsonBO.pdf: 48546 bytes, checksum: 6d0b44024c65b7dfd816424f9804452d (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The groundwater represents the most important freshwater supply of planet. Dailly, in all world a great amount of toxic and genotoxic material reaches the aquatic systems, mainly the aquifers. The Barreiras aquifer through of five water wells is responsible for the supplying of Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN). All water wells are polluted with nitrate and some heavy metals, two of them were disabled. The genotoxicity of groundwater samples from Barreiras Aquifer in UFRN was assessed using the Allium cepa test, the Ames test and the Salmonella typhymurium microsuspension test (Kado test). For the Allium cepa test the influence of the groundwater samples collected on macroscopic (root length, colour and form) and microscopic (root tip mitotic index, chromosome aberrations and micronucleus) parameters was examined. All water samples caused a significant increase of the chromosome and mitotic aberration frequency and reduction on the rooth growth compared to negative control. Bridges and chromosome stickness were the most frequent kind of aberration in dividing cells. Furthermore, breaks were also observed. No significant increase in the number of micronuclei was found in relation to the negative controls. For Ames test were used the Salmonella typhymurium strains TA98 and TA100 without metabolic activation, applying the direct method. Prior to the Kado test, organic fractions from the water samples were obtained through XAD resin concentration. The mutagenicity organic extracts were evaluated by Kado test using TA98 and TA100 strains, in the absence and presence of S9 mix (metabolic activation). The concentrations of seven heavy metal ions were measured in water samples, but only Ni, Cu and Cr levels exceeded the permissible maximum concentration for the natural reservoirs. The results obtained for mutagenic activity using the Ames test were negative in all raw water samples analyzed. Positive results in XAD4 extracts of water samples were obtained for TA98 in the presence of S9 mix for two stations. Concentrations of heavy metals and nitrate can be correlated with the toxicity and genotoxicity of water analyzed. The mutagenic effect detected with TA98 strain suggested that organic compounds (after metabolization) are involved with the mutagenicity detected in the samples analyzed. The data set obtained in this work indicated the presence of at least two classes of mutagens: organic and inorganic compounds / As ?guas subterr?neas representam o suprimento mais importante de ?gua doce do planeta. Diariamente, em todo planeta, uma grande quantidade de material t?xico e genot?xico atingem os sistemas aqu?ticos, principalmente os aq??feros. O aq??fero Barreiras, atrav?s de cinco po?os, ? respons?vel pelo abastecimento da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN). Todos os po?os encontram-se contaminados com nitrato e alguns metais pesados. Dois deles foram desativados. A genotoxicidade das amostras das ?guas subterr?neas do aq??fero Barreiras na UFRN foi avaliada usando os teste Allium cepa, o teste de Ames e o teste de microsuspens?o com Salmonella typhimurium (Teste de kado). Para o teste Allium cepa a influ?ncia das amostras de ?gua subterr?neas coletadas nos par?metros macrosc?picos (crescimento, colora??o e forma da raiz), microsc?pico (?ndice mit?tico, aberra??es cromoss?micas e micron?cleo) foram examinadas. Todas as amostras de ?gua causaram aumento significante na freq??ncia de aberra??es cromoss?micas e mit?ticas e redu??o no crescimento das ra?zes comparando com o controle negativo. Pontes e cromossomos stickness foram os tipos de aberra??es mais freq?entes nas c?lulas em divis?o. Al?m disso, quebras de DNA tamb?m foram observadas. N?o foi encontrado aumento significante no n?mero de micron?cleos comparando com o controle negativo. Para execu??o do teste de Ames, aplicando o m?todo direto foram usadas ?s linhagens de Salmonella typhymurium TA98 e TA100 sem ativa??o metab?lica. As amostras de ?gua foram submetidas ao processo de concentra??o em resina XAD antes do teste de Kado. Extra??o org?nica foi realizada em colunas contendo resina XAD4 que absorve uma grande classe de compostos mutag?nicos. A mutagenicidade dos extratos org?nicos foi avaliada pelo teste de Kado usando as linhagens TA98 e TA100, na aus?ncia e na presen?a da fra??o S9 (ativa??o metab?lica). As concentra??es de sete metais pesados foram medidas nas amostras de ?gua, apenas os n?veis de Ni, Cu e Cr excederam os n?veis m?ximos de concentra??es permitidas para os reservat?rios naturais. Os resultados obtidos para a atividade mutag?nica usando o teste de Ames foi negativo em todas amostras de ?gua bruta analisadas. Resultados positivos com o extrato da resina XAD4 das amostras de ?gua foram obtidos para cepa TA98 na presen?a da fra??o S9 para duas amostras. Metais pesados e nitrato podem estar correlacionadas com a toxicidade e genotoxicidade observada nas amostras de ?gua analisadas. O efeito mutag?nico detectado com a linhagem TA98 sugere que compostos org?nicos (depois de metabolizados) causaram a mutagenicidade detectada nas amostras analisadas. Em conjunto, os dados obtidos neste trabalho indicam a presen?a de pelo menos duas classes de mut?genos: compostos org?nicos e inorg?nicos

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThiagoMC.pdf: 54368 bytes, checksum: 8e14c2b4d3fe392bf725d169831359dc (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / A contamina??o de reservat?rios de ?gua ? um dos principais problemas da atualidade. A Barragem Engenheiro Armando Ribeiro Gon?alves (EARG), (06?08 S; 37?07 W) localizada no estado do Rio Grande do Norte, ? a segunda maior barragem do nordeste brasileiro, respons?vel pelo abastecimento dom?stico de aproximadamente 415 mil habitantes do semi-?rido brasileiro. A ?gua da EARG ? captada por um sistema de adutoras, onde ? tratada e distribu?da para a popula??o. O presente trabalho teve o objetivo de avaliar o potencial genot?xico da ?gua da Barragem EARG. Para isso, foram realizados os testes cometa e micron?cleo com eritr?citos de til?pias (Oreochromis niloticus) capturadas nesse reservat?rio. Os testes Allium cepa e muta??o reversa com Salmonela typhimurium foram realizados com ?gua do reservat?rio antes e ap?s o tratamento. Al?m disso, an?lises quantitativa e qualitativa de cianobact?rias, assim como a quantifica??o das microcistinas produzidas pelas cianobact?rias presentes nesse reservat?rio foram realizados, apenas com amostras coletadas na barragem. Os resultados obtidos indicaram aumento significativo na freq??ncia de micron?cleos em eritr?citos de O. niloticus (p<0,05). A m?dia obtida foi de 2,38 ? 3,02 micron?cleos em mil c?lulas analisadas, enquanto que o controle negativo apresentou m?dia de 0,20 ? 0,41 micron?cleos. O ensaio cometa realizado com peixes da EARG foi analisado em uma escala crescente de danos (0 - 4), e mostrou resultados classificados nos n?veis 0, 1, 2 e 3, enquanto que o controle negativo apresentou resultados nos n?veis 0 e 1. Nos par?metros macrosc?picos avaliados no teste A. cepa n?o foi verificado altera??es estatisticamente significativas. Os par?metros microsc?picos indicaram diminui??o significativa no ?ndice mit?tico nos dois pontos estudados. Al?m disso, tamb?m foi detectado aumento na freq??ncia de met?fases e an?fases aberrantes em ambos os pontos, por?m estatisticamente significativo apenas na amostra sem tratamento para an?fases aberrantes. A freq??ncia de micron?cleos no teste A. cepa n?o foi significativo em rela??o ao controle negativo. Para o teste de muta??o reversa com S. typhimurium realizado com ?gua sem extra??o, os resultados n?o demonstraram mutagenicidade para ambos os pontos. Os resultados encontrados com os extratos das amostras coletadas em ambos os pontos apresentaram diferen?as estatisticamente significativa quando foi utilizada a fra??o S9 como ativador metab?lico. Para a ?gua n?o tratada, essas diferen?as foram encontradas apenas para a cepa TA98, enquanto que para a ?gua tratada, as duas linhagens apresentaram diferen?as significativas. A an?lise qualitativa de cianobact?rias demonstrou a exist?ncia de cianobact?rias potencialmente t?xicas tais como Planktothrix agardii, Cylindrospermopsis raciborskii e Microcystis panniformes. O ensaio de HPLC indicou a presen?a de 38,1 &#956;g/L de microcistinas na ?gua da EARG. O teste de muta??o reversa realizado com o extrato contendo microcistinas, n?o apresentou aumento na raz?o de mutagenicidade para TA100. O conjunto dos resultados obtidos no presente trabalho sugere que as ?guas da Barragem EARG podem conter agentes genot?xicos, capazes de alterar a informa??o gen?tica dos indiv?duos. Esses resultados indicam a necessidade de um programa de monitoramento e controle desses poluentes