Resumo: Muitos autores relataram uma significativa participacao do oxido nitrico (NO) no processo de proliferacao dos queratinocitos, porem com muitas divergencias. Para determinar o envolvimento do NO no processo de hiperproliferacao da epiderme in vivo, foram usados: um inibidor nao seletivo (LNAME) de oxido nitrico sintase (NOS); inibidores seletivos para iNOS e nNOS (AG e 7-NI, respectivamente); e um doador de NO (SNP). Os tratamentos foram aplicados topicamente, duas vezes por dia, na orelha de camundongos tratados pela multipla aplicacao de oleo de croton. A aplicacao do L-NAME foi capaz de diminuir o edema a partir do 1o dia de tratamento e SNP foi capaz de aumentar a formacao do edema de orelha a partir do 3o dia. Os resultados obtidos mostram que os tratamentos com AG e 7-NI nao foram capazes de alterar a formacao do edema. Ao final do tratamento, houve uma reducao no peso das orelhas nos grupos que receberam LNAME (16,9 } 4,8%), 7-NI (18,3 } 9,1%) e dexametasona (43,8 } 2,0%), enquanto a AG e SNP apresentaram aumento de peso, 24,9 } 5,7 e 22,0 } 9,2%, respectivamente, quando comparados ao grupo controle (24,3 } 1,4 mg). A analise histologica mostrou que todos os inibidores foram capazes de impedir o aumento na espessura da epiderme em 28,2 } 5,3% (L-NAME), 20,7 } 5,3% (AG) e 20,5 } 3,4% (7-NI), assim como a dexametasona (53,5 } 3,5%). Ja o SNP contribuiu para ampliar a espessura da epiderme em 35,6 } 5,7%. Resultados semelhantes foram observados na marcacao da proteina PCNA por imunohistoquimica, onde houve uma reducao no numero de celulas em proliferacao nos tratamentos com L-NAME (57,3 } 3,9 celulas/campo), AG (73,3 } 2,7 celulas/campo) e dexametasona (37,0 } 1,8 celulas/campo). No entanto, o tratamento com SNP (100,8 } 6,7 celulas/campo) promoveu uma maior proliferacao dos queratinocitos da epiderme. O tratamento com 7-NI nao mostrou nenhuma alteracao no numero de queratinocitos em proliferacao quando comparado ao grupo controle (87,1 } 6,8 celulas/campo). O tratamento com AG aumentou a atividade das enzimas Mieloperoxidase e N-acetil-ƒÀ-Dglucosaminidase, 52,8 } 23,9% e 16,35 } 6,3% respectivamente, indicando aumento na migracao de leucocitos polimorfonucleares e celulas mononucleares em comparacao ao grupo controle. A aplicacao do 7-NI reduziu apenas a migracao de celulas mononucleares em 14,6 } 6,1%, enquanto o tratamento com SNP eforcou a migracao de polimorfonucleares em 74,4 } 47,9%. Portanto, baseado nos resultados encontrados, sugerimos que o NO produzido principalmente pela isoforma iNOS, contando tambem com a contribuicao da isoforma nNOS, esta envolvido no controle da hiperproliferacao dos queratinocitos da epiderme na pele de camundongos. Alem disso, no modelo animal de inflamacao cronica cutanea por oleo de croton, o NO esta envolvido na exsudacao e migracao de leucocitos, com a provavel participacao de todas as tres isoformas da enzima.

LEITE, Ana Caroline Rocha de Melo. Estudo da participação do óxido nítrico na migração celular aguda na artrite e peritonite induzidas por zymosan ou lipopolissacarídeo em modelos experimentais. 2005. 70 f. Dissertação (Mestrado em farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-05T14:13:07Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_acrmleite.pdf: 373904 bytes, checksum: b4ba3e4959638053b435038e691d9ebc (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-07T11:35:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_acrmleite.pdf: 373904 bytes, checksum: b4ba3e4959638053b435038e691d9ebc (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-07T11:35:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_acrmleite.pdf: 373904 bytes, checksum: b4ba3e4959638053b435038e691d9ebc (MD5) Previous issue date: 2005 / Cell influx (CI) to synovium participates in physiopathology of rheumatoid arthritis (RA). There are controversies about the nitric oxide (NO) action in modulation of neutrophil influx to inflammatory sites, with NO decreasing or increasing it. This study investigated the effect of nitric oxide synthase (NOS) inhibitors on acute CI in animals submitted to arthritis or peritonitis induced by zymosan (ZyA or ZyP) or lipopolysaccharide (LPSA or LPSP), and the participation of leukotriene B4 (LTB4) and intercellular adhesion molecule -1 (ICAM-1). Rats Wistar received Zy (10-1000 micrograme) or LPS (1-10 micrograme) intraarticular (i.a.). Other groups received Zy (1 mg) or LPS (10 µg) intraperitoneal (i.p.). Wild or ICAM-1-deficient (ICAM-1-/-) mice received Zy (100 µg) i.a. or i.p. Animals were pre-treated (30 minutes before arthritis or peritonitis): in ZyA, rats received L-NAME (1-30 mg/kg; i.p. or 0.3-1 micromol; i.a), 1400W (1 mg/kg; i.p.) or Aminoguanidine (Amino) (50 mg/kg; i.p.). Mice received L-NAME (3-10 mg/kg;i.p.) or NG-nitro-L-arginine (Nitro) (50 mg/kg; i.p.). In ZyP, L-NAME (10-30 mg/kg; s.c. or i.p.) or 1400W (1 mg/kg; s.c.) was administrated in rats and mice received L-NAME (30 mg/kg; s.c.) or Nitro (50 mg/kg; s.c.). In LPSA, rats received L-NAME (10-30 mg/kg; i.p) and, in LPSP, they received L-NAME (30 mg/kg; s.c.). Controls received vehicle (NT groups). After sacrifice, CI was counted and LTB4 was measured in articular and peritoneal exudates. In ZyA (10-100 µg), L-NAME (1-3 mg) reduced CI (47.4 – 76.6%) as compared to NT animals (p<0.05). In ZyA (1mg), L-NAME (30 mg), 1400W (1mg) and Amino (50 mg) reduced CI (57.4%, 74.8% and 76.6%, respectively) (p<0.05). L-NAME (0.3 µmol) i.a. also reduced CI (85.3%) (p<0.05). Similarly, L-NAME (3-10 mg) or Nitro (50 mg) pre-treated mice showed a CI reduction (67.6%, 53.8% and 39.5%) (p<0.05). In contrast, in ZyP, L-NAME (10-30 mg) and 1400W (1 mg) increased CI (566.7%, 495.1% and 470.7%, respectively) in rats and L-NAME (30 mg) in mice (155.8%) (p<0.05). In mice, Nitro increased CI, but not significantly (p>0.05). L-NAME (10 mg) i.p. also increased CI (747.6%) (p<0.05). In LPSA, L-NAME (30 mg) decreased CI in two LPS doses (50.3% and 52.3%) (p<0.05). In LPSP, L-NAME (30 mg) increased the influx (53.4%) (p<0.05). NOS inhibitors didn’t change LTB4 levels. Arthritic pre-treated or not with Nitro ICAM-1-/- animals showed a CI reduction (57.8% or 32.1%)(p<0.05). In peritonitis, pre-treated or not with Nitro ICAM-1-/- showed a CI reduction (9.5% and 22.3%), but not significantly (p>0.05). NO, especially that produced by iNOS, reduces the acute CI in articulation while increases it in the peritoneum. This effect is independent of stimulus, species, route of administration and LTB4 liberation. Beyond, it involves resident and/or migrated cells. ICAM-1 appears to participate in CI in these models, especially in arthritis. Besides, NO modulates the expression of ICAM-1 in peritonitis. / O influxo celular (IC) à sinóvia participa na fisiopatologia da artrite reumatóide (AR). Há controvérsias sobre o papel do óxido nítrico (NO) na modulação do influxo de neutrófilos para sítios inflamatórios, seja reduzindo ou estimulando-o. Esse trabalho investigou o efeito de inibidores de óxido nítrico sintase (NOS) sobre o IC agudo em animais submetidos à artrite ou peritonite induzida por zymosan (AZy ou PZy) ou lipopolissacarídeo (ALPS ou PLPS), bem como a participação de leucotrieno B4 (LTB4) e da molécula de adesão intercelular -1 (ICAM-1). Ratos Wistar receberam 10-1000 micrograma de Zy ou 1-10 micrograma de LPS intra-articular (i.a.). Outros grupos receberam 1 mg de Zy ou 10 µg de LPS intraperitoneal (i.p.). Camundongos selvagens ou geneticamente manipulados (knock out) para ICAM-1 (ICAM-1-/-) receberam 100 µg de Zy i.a. ou i.p. Esquema dos pré-tratamentos (30 minutos antes da artrite ou peritonite): na AZy, L-NAME (1-30 mg/kg; i.p. ou 0,3-1 micromol; i.a), 1400W (1 mg/kg; i.p.) ou Aminoguanidina (Amino) (50 mg/kg; i.p.) em ratos e camundongos receberam L-NAME (3-10 mg/kg;i.p.) ou NG-nitro-L-arginia (Nitro) (50 mg/kg; i.p.). Na PZy, L-NAME (10-30 mg/kg; s.c. ou i.p.) ou 1400W (1 mg/kg; s.c.) foi administrado em ratos e camundongos receberam L-NAME (30 mg/kg; s.c.) ou Nitro (50 mg/kg; s.c.). Na ALPS, ratos receberam L-NAME (10-30 mg/kg; i.p) e, na PLPS, L-NAME (30 mg/kg; s.c.). Controles receberam veículo (grupos NT). Após o sacrifício, foram quantificados o IC e LTB4 nos lavados articulares e peritoneais. Na AZy (10-100 micrograma) em ratos, L-NAME (1-3 mg) reduziu o IC (47,4 - 76,6%), quando comparado aos animais NT (p<0,05). Na AZy 1mg, L-NAME (30 mg), 1400W (1 mg) e Amino (50 mg) diminuíram o IC (57,4%, 74,8% e 76,6%) (p<0,05). L-NAME (0,3 micromol) i.a. também reduziu o IC (85,3%) (p<0,05). Semelhante aos ratos, camundongos pré-tratados com L-NAME (3-10 mg) ou Nitro (50 mg) apresentaram diminuição do IC (67,6%, 53,8% e 39,5%) (p<0,05). Contrariamente, na PZy, L-NAME (10-30 mg) e 1400W (1 mg) aumentaram o IC (566,7%, 495,1% e 470,7%) em ratos e L-NAME (30 mg), em camundongos (155,8%) (p<0,05). Nesses, Nitro aumentou o IC, mas não significativamente (p>0,05). L-NAME (10 mg) i.p. também aumentou o IC (747,6%) (p<0,05). Na ALPS, L-NAME (30 mg) diminuiu o IC nas duas doses de LPS (50,3% e 52,3%) (p<0,05). Na PLPS, L-NAME (30 mg) aumentou o IC (53,4%) (p<0,05). Os inibidores de NOS não alteraram os níveis de LTB4. Animais ICAM-1-/- artríticos pré-tratados ou não com Nitro apresentaram redução do IC (57,8% ou 32,1%)(p<0,05). Nos ICAM-1-/- com peritonite pré-tratados ou não com Nitro, houve uma redução do IC (9,5% e 22,3%), mas não significativa (p>0,05). O NO, particularmente o produzido pela NOSi, reduz o IC agudo na articulação, enquanto que o incrementa no peritôneo. Esse efeito é independente do estímulo, da espécie, da via de administração e da liberação de LTB4, além de envolver células residentes e/ou migradas. ICAM-1 parece participar do IC nesses modelos, especialmente na artrite, com o NO modulando sua expressão na peritonite.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-29Bitstream added on 2014-06-13T20:16:43Z : No. of bitstreams: 1 jorjao_al_me_sjc.pdf: 320621 bytes, checksum: 5ee9ea49b097ea172952fd6818fa4169 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / De acordo com a literatura, o uso frequente de probióticos em humanos favorece a modulação do sistema imunológico, por mecanismos ainda não totalmente definidos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a capacidade de Lactobacillus rhamnosus ou seus produtos induzirem a liberação de mediadores pró e anti-inflamatórios (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 e óxido nítrico) por macrófagos de camundongo (RAW 264.7). Para tanto, foram realizadas 3 preparações do microrganismo: SpL: suspensão de bactérias vivas (5 x 107 UFC/mL), SpLA: suspensão de bactérias autoclavadas a 121ºC por 15 min (5 x 107 células/mL); e SnLA: sobrenadante da suspensão anterior (SpLA) após centrifugação. As células (macrófagos RAW 264.7) foram cultivadas (37ºC, 5% de CO2) em três diferentes situações: na presença de SpL, SpLA ou SnLA. Após 2 h e 30 min de cultivo, o meio de cultura foi trocado e as células foram cultivadas por mais 16 h. Em seguida, os sobrenadantes foram removidos e estocados em freezer (-80ºC) para posterior análise. Como controle positivo foi utilizado LPS de Escherichia coli (10 EU/mL) e como controle negativo solução fisiológica. A quantificação de citocinas foi realizada pelo teste imunoenzimático (ELISA) utilizando anticorpos específicos. A produção de óxido nítrico foi determinada indiretamente pela concentração de nitrito detectada pelo reagente de Griess. Os resultados foram analisados estatisticamente, pela análise de variância ANOVA, com nível de significância de 5%, e pelo teste de Tukey. As suspensões SpL e SpLA foram capazes de induzir produção significativamente superior de TNF-α, IL-6, IL-10 e óxido nítrico em relação ao controle negativo (p<0,05). SnLA também induziu aumento significativo na... / According to the literature, the frequent use of probiotics in humans favors the modulation of the immune system by mechanisms not yet fully defined. The aim of this study was to evaluate the ability of Lactobacillus rhamnosus or their products induce the release of proinflammatory mediators and anti-inflammatory (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 and nitric oxide) by mouse macrophages (RAW 264.7). To this end, there were three preparations of the microorganism: SPL: suspension of live bacteria (5 x 107 UFC/ mL), SPLA: bacteria suspension autoclaved at 121 ° C for 15 min (5 x 107 UFC / mL) and SnLA: supernatant (SPLA) after centrifugation. The cells (RAW 264.7 macrophages) were cultured (37 ° C, 5% CO2) in three different situations: in the SpL, SPLA or SnLA presence. After 2 h 30 min cultivation, the culture medium was changed and cells were cultured for more 16 h. Then, the supernatants were removed and stored in a freezer (-80 °C) for later analysis. As positive control was used Escherichia coli LPS (10 EU / mL) and physiological solution as negative control. Cytokine quantitation was performed by immunoenzymatic test (ELISA) using specific antibodies. The production of nitric oxide was indirectly determined by nitrite concentration detected by the Griess reagent. The results were statistically analyzed by ANOVA with a significance level of 5%, and Tukey test. SPL and SPLA suspensions were able to induce significantly higher production of TNF-α, IL-6, IL-10 and nitric oxide than the negative control (p <0.05). SnLA also induced a significant increase in the production of TNF-α, IL-10 and nitric oxide (p <0.05), however, did not induce significant production of IL-6 in relation to the negative control (p> 0.05). It was not observed production of IL-4 and IL-1β, by any of the suspensions analyzed. In relation to... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T13:51:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Medeiros_MartaValeria_M.pdf: 1855725 bytes, checksum: d90c8f1d02a93e53390ac5dda1bfec6d (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Neste trabalho, investigamos os efeitos do tratamento agudo e crônico com NID-nitro-L- arginina metil éster (L-NAME) e nitro-D-arginina metil éster (DNAME) sobre a resposta inflamatória (edema de pata, permeabilidade vascular e pleurisia) induzida pela carragenina em ratos. A administração subcutânea na região plantar (0.15-1.0 j.lmol/pata) ou endovenosa (35-100 j.lmol/kg) de L-NAME reduziu significativamente o edema de pata induzido por carragenina. O efeito inibitório do L-NAME foi revertido pela administração de iloprost (0.3 nmol/pata). D-NAME, nestas mesmas doses, não interferiu na resposta edematogênica induzida por carragenina. A administração endovenosa de L-NAME (100 j.lmol/kg) reduziu de maneira significativa o extravasamento de proteínas plasmáticas. Entretanto, quando o L-NAME foi injetado na pata (1.0 ~lmol/pata), não foi capaz de reduzir o extravasamento de proteínas. A injeção intrapleural (3 e 10 j.lmol/cavidade) ou endovenosa (35 e 100. ~lmol/kg) de L-NAME inibiu (p< 0.05) a migração leucocitária. D-NAME (em doses altas) não interferiu na migração leucocitária induzida por carragenina. A administração por via oral de L-NAME (aproximadamente 75 j.lmol/rato/dia), mas não D-NAME (mesma dose) diluídos em água por duas ou quatro semanas, produziu elevação significativa da pressão arterial dos animais. O tratamento com L-NAME (mesma dose), por duas ou quatro semanas, reduziu (p< 0.05) o edema de pata de rato, porém, não interferiu significativamente com o extravasamento de proteínas plasmáticas. A administração de iloprost (0.3 nmol/pata) reverteu significativamente a inibição causada pelo tratamento com L-NAME durante quatro semanas. Animais tratados com captopril por quatro semanas não apresentaram modificação significativa em relação a inibição causada pelo L-NAME. Animais 2K-1 C apresentaram resposta edematogênica significativamente maior do que animais controles normotensos, porém a inibição causada pelo tratamento crônico com L-NAME (duas ou quatro semanas) neste grupo de animais foi de magnitude similar ao seu grupo controle. A migração leucocitária e o volume de exudato induzidos por carragenina não foram alterados em animais tratados cronicamente com L-NAME por duas ou quatro semanas. Estes resultados indicam que o óxido nítrico modula a formação local de edema provavelmente por regular o fluxo sanguíneo local em vez de afetar diretamente a permeabilidade. Os resultados obtidos em pleurisia indicam que o óxido nítrico não modulá a migração celular no leito microcirculatório pleural do rato / Abstract: The effects of acute and chronic treatment with the nitric oxide (NO) synthase inhibitor N(J)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) and its inactive enantiomer N(J)-nitro-D-arginine methyl ester (D-NAME) on the inflammatory responses (rat paw oedema, vascular permeability and pleurisy) induced by carrageenin in rats have been investigated. Changes in the rat paw volume were measured with a hydroplethysmometer at 1, 2, 3 and 4 hours afier the injection of carrageenin. When recersary, L-NAME or D-NAME was administered subplantarly, intrapleurally or intravenously immediately before the injection of carrageenin. The subplantar (0.15':1.0 Ilmollpaw) or intravenous (10-100 Ilmol/kg) injection of L-NAME dose-dependently inhibited the carrageenin-induced paw oedema. The administration of D-NAME by either route (1 ~lmol/paw or 100 Ilmol/kg) had no effect on the foregoing oedema. The inhibition of paw oedema by L-NAME was significantly reversed by the local administration of the prostacyclin analogue iloprost (0.3 Ilmol/paw). The carrageenin-induced leucocyte migration into the pleural cavity was also dose-dependently inhibited by the intravenous (10-100 Ilmol/kg) or intrapleural (3-10 Ilmol/cavity) injection of L-NAME. D-NAME (1 Ilmol/paw or 350 Ilmol/kg) had no effect on leucocyte migration. Our results indicate that the inhibition of both paw oedema and cell migration caused by acute L-NAME treatment is subsequent to a reduction in local microvascular blood flow. Chronic inhibition of NO biosynthesis was achieved by including L-NAME in the drinking water to give an in take of approximately 75 Ilmol/ratlday for two and four weeks. Control animais received either tap water alone or the inactive enantiomer D-NAME. Since chronic NO inhibition increases blood pressure, we compared the resulting paw oedema with that produced in rats made hypertensive by occlusion of the left renal artery (2K-1 C). In a separate set of experiments, L-NAME-treated animais concomitantly received captopril (140 IlmollraUday) to prevent hypertension. Animais chronicaHy treated with L-NAME (but not D-NAME) for two or four weeks developed hypertension to the same extent as 2K-1C rats. Carrageenin-induced paw oedema was significantly reduced in rats chronicaHy treated with L-NAME, but not in those receiving 0NAME or in 2K-1C animais. The subplantar injection of iloprost significantly reversed the inhibition of paw oedema caused by L-NAME. Captopril (140 Ilmollrat day) lowered the high blood pressure levels induced by L-NAME (p< 0.05) but did not significantly affect the inhibition of paw oedema by L-NAME. No changes in vascular permeability, as assessed by Evans blue extravasation, were observed in L-NAME-treated animais. The chronic treatment with L-NAME for two or four weeks did n'ot inhibit carrageenin-induced leucocyte migration into the pleural cavity. It is concluded that although carrageenin-induced paw oedema is reduced in L-NAME-treated rats, this response reflects a decrease in local blood flow rather than an effect on vascular permeability. Furthermore, the chronic inhibition of biosynthesis does not affect vascular permeability and ceH migration in the pleurisy model / Mestrado / Mestre em Farmacologia

SILVA, F.O.N. Estudo cinético da reação dos complexos cis-[Ru(bpy)2ImN(NO)](PF6)3 e cis-[Ru(bpy)2SO3NO](PF6) com redutores biológicos . 2008. 137 f. Tese (Doutorado em Química Inorgânica) – Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by irlana araujo (irlanaaraujo@gmail.com) on 2011-11-28T17:56:21Z No. of bitstreams: 1 2008_tes Fr Silva.pdf: 2512548 bytes, checksum: cb7d6af84dcf1a12a6877cfa1fec5193 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2011-11-29T14:18:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_tes Fr Silva.pdf: 2512548 bytes, checksum: cb7d6af84dcf1a12a6877cfa1fec5193 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-29T14:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_tes Fr Silva.pdf: 2512548 bytes, checksum: cb7d6af84dcf1a12a6877cfa1fec5193 (MD5) Previous issue date: 2008-03-07 / The oxide nitric (NO) is a responsible endogenous species by dilation of the blood vessels, being also active in the brain and in other physiologic processes. Donors of NO are pathophysiologically active healthy substances that liberate spontaneously or they are metabolized. Sodium nitroprusside, Na2[Fe(CN)5NO].2H2O, is part of a class of compounds that liberate NO spontaneously and it is the only metallic compound used clinically. Associated problems with the use of nitroprusside include susceptibility the photolysis and oxidative action of the immune system, in which it leads to the liberation of cyanide. In this work it was accomplished the study and kinetic monitoring of the reaction of the compounds cis-[Ru(bpy)2LNO](PF6)n (L = imidazole and sulphite) with cysteine, glutathione, methionine and histidine, for the obtaining of kinetic and spectroscopic data that can contribute to the elucidation of your action mechanism. The kinetic results for the reaction of the nitrosyl complex with the cysteine and glutathione suggest that there is two intermediates formation: the first with absorption band in 450 nm is regarding the attack of the sulfur of the thiols and the nitric oxide. The second intermediate with characteristics band of absorption in 380 nm is due to the attack of the second molecule of the reducers to the formed adduct. The rate constants of the reaction with cysteine presented dependence regarding the pH. This occurs, probably, due to the deprotonated in the sulfur of the cisteína, facilitating the interaction of this thiol with the coordinated nitric oxide to the ruthenium (II). The reactions with methionine and histidine show that there are not the intermediates, due to the absence of the group SH in the amino acids. The monitoring accomplished with HPLC reveal the existence of the same mechanism among the compounds cis-[Ru(bpy)2SO3NO](PF6) and cis- [Ru(bpy)2ImN(NO)](PF6)3 with cysteine and glutathione. In the case of the interaction with methionine and histidine, occurs the decrease of the peak regarding the nitrosyl complex and the appearance of the peak attributed to the aqua complex. The obtained results with the NO sensor, of electron paramagnetic resonance and RMN, they showed that the nitric oxide is reduced and release in the complex without there is the formation of the nitrosothiol. Based on kinetic studies and in the spectrum of EPR, the reaction of the nitrosyl complex with cysteine and glutathione presents the following reduction scheme and liberation of the nitric oxide: / O óxido nítrico (NO) é uma espécie endógena responsável pela dilatação dos vasos sanguíneos, sendo também ativo no cérebro e em outros processos fisiológicos. Doadores de NO são substâncias farmacologicamente ativas que liberam espontaneamente ou são metabolizadas. Nitroprussiato de sódio, Na2[Fe(CN)5NO].2H2O, faz parte de uma classe de compostos que liberam NO espontaneamente e é o único complexo metálico usado clinicamente. Problemas associados com o uso de nitroprussiato incluem suscetibilidade a fotólise e ação oxidativa do sistema imune, no qual conduz à liberação de cianeto. Neste trabalho foi realizado o estudo e acompanhamento cinético da reação dos complexos cis-[Ru(bpy)2LNO](PF6)n (L = imidazol e sulfito) com cisteína, glutationa, metionina e histidina, para a obtenção de dados cinéticos e espectroscópicos que possam contribuir para a elucidação de seu mecanismo de ação. Os resultados cinéticos para a reação dos nitrosilo complexos com a cisteína e glutationa sugerem que há formação de dois intermediários: o primeiro com banda de absorção em 450 nm é referente ao ataque do enxofre dos tióis e o óxido nítrico. O segundo intermediário com banda de absorção características em 380 nm se deve ao ataque da segunda molécula dos redutores ao aduto formado. As constantes de velocidade da reação com cisteína apresentaram dependência com relação ao pH. Isto ocorre, provavelmente, devido à desprotonação no enxofre da cisteína, facilitando a interação deste tiól com o óxido nítrico coordenado ao rutênio (II).As reações com metionina e histidina mostram que não há o aparecimento dos intermediários, devido à ausência do grupo SH nos aminoácidos. O acompanhamento realizado com HPLC nos mostra a existência do mesmo mecanismo entre os complexos cis-[Ru(bpy)2SO3NO](PF6) e cis- [Ru(bpy)2ImN(NO)](PF6)3 com cisteína e glutationa. No caso da interação com metionina e histidina, ocorre à diminuição do pico referente aos nitrosilos complexos e o aparecimento do pico atribuído ao aqua complexo. Os resultados obtidos com o eletrodo seletivo de NO, de ressonância paramagnética de elétrons e RMN, mostraram que o óxido nítrico é reduzido e liberado nos complexo sem que haja a formação do nitrosotiól. Baseado em estudos cinéticos e no espectro de EPR, a reação dos nitrosilo complexos com cisteína e glutationa apresenta o seguinte esquema de redução e liberação do óxido nítrico:

Orientador : Janaína Menezes Zanoveli / Coorientador : Roberto Andreatini / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 29/09/2016 / Inclui referências : f. 57-62;64-76 / Área de concentração / Resumo: A ansiedade é altamente prevalente em indivíduos com diabetes, sendo que os tratamentos atuais não são totalmente eficazes no alívio dos sintomas de ansiedade e frequentemente pioram o quadro glicêmico. Tem sido sugerido que um aumento desregulado na produção de óxido nítrico (NO) pode contribuir com a fisiopatologia que associa ansiedade e diabetes. Portanto, o melhor entendimento desses mecanismos juntamente com a procura por tratamentos mais eficazes são extremamente urgentes. Assim, o presente estudo avaliou o efeito do tratamento crônico com o óleo de peixe (OP), uma fonte de ácidos graxos poli-insaturados ômega-3 (AGPI-?3) que tem mostrado efeitos benéficos sobre respostas emocionais, assim como o envolvimento da via nitrérgica nas respostas comportamentais relacionadas com a ansiedade em animais diabéticos. Para este fim, um tratamento prolongado (4 semanas) e preventivo com OP (0, 1 ou 3 g/kg; gavagem) foi realizado antes dos animais tornarem-se diabéticos por injeção de estreptozotocina (DBT; 60 mg/kg; i.p.) e o tratamento continuou até completar 8 semanas, quando os animais foram submetidos aos seguintes testes de ansiedade - labirinto em cruz elevado (LCE) e transição claro/escuro (TCE). A seguir, uma imunohistoquímica para óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) foi executada em regiões cerebrais relacionadas a ansiedade, como a amígdala (AMI), hipocampo (HIP; região CA3) e substância cinzenta periaquedutal dorsolateral (dlPAG). Por fim, para um melhor entendimento do envolvimento da via nitrérgica, animais DBT tratados com OP receberam antes dos testes de ansiedade uma injeção do precursor do NO L-arginina (200 mg/kg, i.p.) ou do inibidor da nNOS 7-NI (10 mg/kg, i.p.). Como esperado, os animais DBT tratados com veículo (VEI), quando comparado aos animais normoglicêmicos (NGL) tratados com VEI, mostraram uma resposta do tipo ansiosa mais pronunciada quando submetidos aos testes de ansiedade, a qual foi completamente prevenida pelo tratamento crônico com OP (3 g/kg; gavagem). Além disto, o tratamento foi capaz de prevenir o prejuízo da atividade locomotora e controlar os altos níveis de glicemia dos animais DBT. Em relação aos níveis de nNOS, o tratamento com OP também foi capaz de prevenir a expressão elevada de nNOS na AMI, HIP e dlPAG observados nos animais DBT tratados com VEI. Reforçando o envolvimento do NO no efeito tipo ansiol ítico, ambas as drogas administradas previamente (L-arginina e 7-NI) aboliram o efeito ansiolítico induzido pelo tratamento com OP. De modo geral, nossos dados suportam a hipótese de que uma desregulação na produção de NO em áreas encefálicas como AMI, HIP e dlPAG pode contribuir com mecanismos fisiopatológicos que associam a ansiedade e diabetes; e a prevenção da alteração na expressão de nNOS no encéfalo induzido por um tratamento preventivo prolongado com OP pode ser um mecanismo importante relacionado ao seu efeito do tipo ansiolítico. Palavras-chave: diabetes, ansiedade, óleo de peixe, óxido nítrico sintase neuronal, óxido nítrico. / Abstract: Anxiety is highly prevalent in individuals with diabetes, and current treatments are not totally effective in relieving anxiety symptoms and often impair the glucose control. An overproduction of nitric oxide (NO) may contribute with the pathophysiology that links anxiety and diabetes. Thus, the better understanding of the mechanisms involved along with the search for more effective treatments are extremely urgent. The present study evaluated the effect of preventive chronic treatment with fish oil (FO), a source of omega-3 polyunsaturated fatty acid (PUFA-?3), and the involvement of nitrergic pathway on behavioral responses related to anxiety in diabetic animals. For that, prolonged treatment (4 weeks) with FO (0, 1 or 3 g/kg; gavage) was performed before the animals become streptozotocin-diabetic rats (DBT; 60 mg/kg; i.p.) and the treatment continued until complete 8 weeks when animals were submitted to the following anxiety tests - elevated plus maze (EPM) and light/dark box (LDB). Next, an immunohystochemistry for neuronal NO synthase (nNOS) was performed in brain areas related to anxiety, lateral amygdala (AMY), hippocampus (CA3 region; HIP) and dorsolateral periaqueductal gray (dlPAG). Lastly, to better understand the involvement of the nitrergic pathway, DBT animals treated with FO received before the anxiety tests an injection of L-arginine (200 mg/kg, i.p.), a NO precursor, or 7-nitroindazole (10 mg/kg, i.p.), a nNOS inhibitor. As expected, DBT animals treated with vehicle (VEH), when compared to normoglycemic (NGL) animals treated with VEH, showed a more pronounced anxious-like response when tested in the anxiety tests, which was completely prevented by chronic FO (3g/kg; gavage) treatment. Moreover, this treatment was able to prevent the impairment on locomotor activity and control the high glycaemia levels from DBT animals. Interestingly, FO treatment was capable of preventing the high expression of nNOS in the AMY, HIP and dlPAG observed in VEH-treated DBT animals. Reinforcing the NO involvement in the anxiolytic-like effect, the previous treatment with both L-Arginine and 7-NI abolished the anxiolytic-like effect induced by FO treatment. Altogether, our data support the hypothesis that a dysregulation in the NO production in brain areas as AMY, HIP and dlPAG may contribute with the mechanisms that link anxiety and diabetes, and the prevention of changing in the brain nNOS expression induced by a preventive prolonged treatment with FO may be an important mechanism related to its anxiolytic-like effect. Keywords: diabetes, anxiety, fish oil, neuronal nitric oxide synthase, nitric oxide.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-27Bitstream added on 2014-06-13T19:22:46Z : No. of bitstreams: 1 000729611.pdf: 1074120 bytes, checksum: 01a15f0dd4775f078dccbc81da271357 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL – 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator... / The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin – 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin – 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin – 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ...

Este estudo foi realizado em ratos machos Wistar, nos quais foram investigados os efeitos do flavonóide quercetina sobre a hipertensão portal, o dano oxidativo, a atividade das enzimas antioxidantes, a produção de óxido nítrico avaliada por seus metabólitos: nitratos(NO3) e nitritos (NO2) em fígado e estômago. Analisou-se ainda a histologia do fígado e do estômago através das técnicas de hematoxilina/eosina e picrosirius. Foram estabelecidos 4 grupos experimentais: SO (sham-operated)-controle, no qual foi simulada a ligadura parcial de veia porta (LPVP); SO administrado com quercetina (Q); grupo com ligadura parcial de veia porta (LPVP) e o grupo LPVP Q que foi ligado e recebe quercetina. A Q foi administrada por via intraperitoneal (i.p.) na dose de 50 mg/Kg de peso corporal, 7 dias após a ligadura até ao 14º dia pós-operatório. No 15º dia, foi aferida a pressão portal (mmHg) constatando-se aumento significativo nos LPVP e diminuição significativa nos LPVP Q. Através da análise histológica dos tecidos hepáticos e do estômago, foi observado que, no estômago, os animais LPVP apresentaram sinais de edema e vasodilatação; enquanto que os LPVP Q mantiveram aspecto normal. Os resultados da lipoperoxidação (LPO), avaliada pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e quimiluminescência (QL), demonstraram redução próximo de 40% do grupo LPVP Q comparado com o grupo LPVP, sendo seus valores semelhantes aos valores dos SO, tanto no fígado como no estômago. Quanto às enzimas antioxidantes, foi observado, no estômago, aumento na atividade da Catalase (CAT) no grupo LPVP, enquanto que, no fígado, a atividade da SOD e CAT estão aumentadas no grupo LPVP Q. Na avaliação dos metabólitos do NO, observou-se que a relação nitratos e nitritos no estômago foi mais elevada nos LPVP, e que a quercetina diminuiu essa relação, apresentando valores semelhantes aos do grupo SO. No fígado, essa relação aumentou no grupo SO, sendo indiferenciada nos LPVP e LPVP Q. Esses resultados apontam que a Quercetina pode diminuir a pressão portal e, indiretamente, a circulação hiperdinâmica característica desse modelo experimental, reduzindo o dano oxidativo encontrado nos animais do grupo LPVP tanto no estômago como no fígado, incrementando a atividade das enzimas antioxidantes, protegendo-os. Assim, a partir dessas constatações, pode-se sugerir um efeito benéfico da quercetina neste protocolo experimental.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-18Bitstream added on 2014-06-13T19:54:56Z : No. of bitstreams: 1 000740236.pdf: 769429 bytes, checksum: af346b934aac5152c83dc4ed9c1f7d89 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os produtos naturais, incluindo aqueles derivados de plantas superiores, têm contribuído para o desenvolvimento da terapêutica moderna. Atualmente existe um interesse renovado na investigação de plantas medicinais como alternativa ao tratamento de doenças como câncer e inflamações crônicas. Qualea multiflora Mart (Q. multiflora) família Vochysiacea é uma planta utilizada na medicina popular no tratamento de úlceras, gastrites, amebíase, diarréia com sangue, cólicas intestinais e inflamações. O sistema imunológico é um notável sistema de defesa que evoluiu nos vertebrados para protegê-los de agentes agressores. Neste sistema, os macrófagos têm um papel central, pois são células capazes de secretar mais de cem produtos biologicamente ativos, entre esses, espécies reativas de nitrogênio e citocinas que atuam no contexto da resposta imunológica e/ou inflamatória. Neste trabalho, foram avaliadas as atividades antiinflamatória e antitumoral de uma fração terpenoídica e da substância b- sitosterol, isoladas a partir da planta Q. multiflora. Experimentos in vitro foram realizados para determinar as atividades destes componentes no sistema imune através de ensaios de determinação de citotoxicidade (MTT), óxido nítrico (NO), determinação do fator de transcrição NF-kB, das citocinas IL-1, IL-6, IL-12, TNF- e IL-10. Além disto, também foram realizados testes com o objetivo de avaliar a atividade antitumoral dos compostos testados frente às linhagens tumorais murinas LM3 e LP07. Os resultados mostraram intensa inibição da produção de NO e das citocinas IL-1, IL-12 e TNF- ; moderada inibição do fator de transcrição NF-kB pelos macrófagos peritoneais estimulados com a fração terpenoídica e com b-sitosterol. Por outro lado, não houve inibição da produção de IL-6. De maneira contrária às outras citocinas testadas, houve uma grande estimulação da produção da citocina pró-inflamatória IL-10,... / Natural products, including those derived from upper plants, have contributed to a large extent for the development of modern therapeutics. Lately, there is a renewed interest in the investigation of medicinal plants as an alternative for the treatment of diseases such as cancer and chronical inflammations. Qualea multiflora Mart (Vochysiacea) is a plant used in popular medicine for the treatment of ulcers, grastritis, amoebiesis, diarrhea with blood, intestinal colics and inflammations. The immune system is a remarkable defense mechanism that evolved in the vertebrate animals to protect them against pathogenic micro-organisms and cancer, among other functions. In this system, macrophages have a central role, since they are capable of secreting more than 100 biologically active products, among which, nitrogen reactive intermediaries and cytokines which act in the context of the immune and/or antiinflammatory response. In this work, it was evaluated the anti-inflammatory and anti-tumoral activities of a terpenoidic fraction and of the b-sitosterol substance, obtained from Q. multiflora. In vitro experiments were performed in order to determine the activities of those samples upon the immune system through assays for the determination of cytotoxicity (MTT), nitric oxide (NO), transcription factor NF-kB, and cytokines IL-1, IL-6, IL-10, IL-12 and TNF- . Furthermore, tests were also performed with tumoral lineages LM3 and LP07, in order to evaluate the antitumoral activites of those samples. The results evidenced intense inhibition of the production of NO and IL-1, IL-12 e TNF- ; moderate inhibition of transcripition factor NF-kB by the peritoneal murine macrophages when stimulated with the terpenoidic fraction and with the b-sitosterol substance. On the other hand, it was not inhibition of the IL-6 production. Inversely, there was a great stimulation of the production of anti-inflammatory cytokine IL-10, a desirable effect in anti- ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004-11-18Bitstream added on 2014-06-13T19:13:54Z : No. of bitstreams: 1 lopes_fcm_me_arafcf.pdf: 1215814 bytes, checksum: 2de6c465b975eaaa27d7ce7f25d86472 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The use of natural resources as treatment and healing for diseases is as old as the human species. However, most of all plant species were not investigated chemistry or biologically. Many plants used in the traditional medicine modulate the immunological response. The immune system is a remarkably adaptive defense system that has evolved in vertebrates to protect them from invading pathogenic microorganisms and cancer. Macrophages play an important role in this system because they are cells capable to secrete many biological active products such as reactive nitrogen and oxygen species and cytokines. In this work, methanolic extract and ethyl acetate fraction obtained from Alchornea triplinervia and Alchornea glandulosa were studied in the murine immune system using peritoneal macrophages cultures from Swiss mice. Cell viability assays were realized to assure the experimental development. Hydrogen peroxide (H2O2) and nitric oxide (NO) were determined by espectrophotometric procedures and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect tumor necrosis factor (TNF-α) The ability of methanolic extract and ethyl acetate fraction to stimulate or inhibit the murine immune system was evaluated. These plants didn't show immunostimulating properties, once liberation of H2O2, NO and TNF-α were not observed. However, extracts and fractions from both plants, strongly inhibited NO and H2O2 production induced by LPS and PMA, respectively. Production of TNF-α by LPS-stimulated macrophages was partially inhibited. The concentration of 15,62αg/mL from A. triplinervia methanolic extract (cellular viability > 95%) showed to inhibit 88,35% of H2O2, 52,54% of NO and 10,41% of TNF-α production. The ethyl acetate fraction of the same plant and concentration (cellular viability > 90%), inhibited 72,25% of H2O2, 47,80% of NO and 16,41% of TNF-α production. Regarding the A. glandulosa methanolic extract...(Complete abstract click electronic access below)