Orientadores: Iscia Teresinha Lopes Cendes, Vinicius D'Ávila Bitencourt Pascoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T15:13:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Matos_AlexandreHilarioBerenguerde_M.pdf: 2928972 bytes, checksum: d4db9f154891dd3379d9e02aacc7279f (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Wistar audiogenic rat (WAR) é um modelo genético de epilepsia de crises audiogênicas desencadeadas após alta intensidade de estimulação sonora. Outro modelo genético recentemente identificado é o da epilepsia generalizada com crises de ausência (GEAS). O objetivo do presente estudo foi caracterizar o perfil de expressão gênica destas duas cepas através de uma análise em larga escala. Para os estudos de expressão foi utilizada inicialmente a tecnologia de microarranjos seguida da validação dos resultados por técnica quantitativa de PCR em tempo real. Os resultados foram analisados em ambiente R, utilizando os pacotes AFFY e RankProd do bioconductor, utilizando o algoritmo MAS 5 os array foram normalizados e calculou-se a intensidade do sinal e a detecção (presença ou ausência de expressão). Após a detecção, os transcritos que estavam ausentes foram removidos. Para a análise estatística foi utilizado o teste RankProd, que é biologicamente projetado para testar e detectar genes diferencialmente expressos em experimentos de microarranjos. Foi utilizado um valor de p ? 0,01 e pfp ? 0,05, a fim de considerar os transcritos diferencialmente expressos. No geral, nossos resultados mostram uma assinatura molecular similar nos dois modelos de ratos genéticos analisados. Houve uma sobreposição na lista de genes diferencialmente expressos encontrados em ambos os modelos, quando comparado com controles. Além disso, descobrimos que duas importantes vias moleculares para epileptogênese: neurotransmissão GABAérgica e potencialização de longo prazo pós-sináptica NMDA-dependente, foram encontrados em ambos os modelos, quando combinamos os dados dos animais WAR e GEAS. No entanto, algumas diferenças nas vias de sinalização expressas nos dois modelos também foram identificadas. Portando os resultados mostram claramente a natureza heterogênea e complexa dos mecanismos moleculares envolvidos na epileptogênese / Abstract: Wistar audiogenic rat (WAR) is a genetic epilepsy model susceptible to audiogenic seizures, after high-intensity sound stimulation. Another genetic model we have recently identified is the generalized epilepsy with absence seizures (GEAS) rat. The aim of the present study was to characterize and compare the genetic profile of these two strains using gene expression analysis. Experiments were performed initially using microarray technology followed by quantitative real-time PCR. Results were analyzed in R environment using the Affy and RankProd packages from Bioconductor, using the algorithm MAS 5 we normalized the arrays and calculated the signal intensity and the detection (presence or absence of expression), after the detection, transcripts which were absent in all samples were removed. For statistical analysis we used the Rank Product test, which is biologically motivated and designed to test and detect differentially expressed genes in replicated microarray experiments. This is a simple non-parametric statistical method based on ranks of fold changes. We used a p-value ? 0.01 and a pfp ? 0.05 in order to consider a given transcript to be differentially expressed Overall, the results show a different molecular signature in the two genetic rat models analyzed, since different enriched gene ontology categories were found. However, there was some overlap in the list of genes differentially expressed found in both models when comparing to controls. In addition, we found that two important molecular pathways for epileptogenesis: GABAergic neurotransmission and: Neurophysiological process NMDA-dependent postsynaptic long-term potentiation in CA1 hippocampal neurons, were found to be present in both models when combining data from WAR and GEAS animals. In conclusion, our results clearly show the heterogeneous and intricate nature of the molecular mechanisms involved in epileptogenesis as well as the importance of studies looking at different regulatory pathways at once, in order to better appreciate this complexity / Mestrado / Neurociencias / Mestre em Ciências

Carcinoma da mama com apresentação bilateral é uma doença pouco avaliada na literatura, com raros trabalhos científicos que comparam os aspectos moleculares de ambos os tumores. No presente estudo, analisamos os tumores de 45 pacientes portadoras de carcinoma ductal invasivo bilateral em relação às expressões de claudinas-4 e 7, de E-caderina e de -catenina por meio de imunoistoquímica em TMA. Além desses marcadores, analisamos o estado dos receptores de estrógeno e de progesterona, bem como diversas características histopatológicas (grau histológico, nuclear, mitose, infiltrado, desmoplasia e necrose). A amostra foi caracterizado por média de idade de 52,4 anos e os tumores foram divididos em mama primário (MP) e mama secundário (MS). Não houve diferenças entre os dois grupos (MP e MS) nos marcadores testados, sendo que a expressão foi coincidente nas seguintes proporções: claudina-4 (83,8%, p=0,61), claudina-7 (82,2%, p=0,29), E-caderina (81%, p=0,48), -catenina (89,7%, p=0,48), receptor de estrogeno (66%, p=0.75) e receptor de progesterona (55%, p=0.99). Em relação aos aspectos morfológicos, grau histológico (SBR) II, infiltrado inflamatório discreto, necrose, desmoplasia moderada e índice mitótico (<10fm/10cga) foram coincidentes em 57,8%, 60%, 55,6%, 63,6% e 55,6%, respectivamente. Os presentes resultados nos permitem inferir que os tumores de apresentação bilateral são, em sua maioria, similares do ponto de vista morfológico e da expressão dos marcadores testados / Forty-five patients with invasive ductal carcinoma were evaluated for the expression of claudin-4, claudin-7, E-cadherin, and -catenin through tissue microarray (TMA) and immunohistochemistry (IHC) analysis. Besides these markers, estrogen (ER) and progesterone receptor (PR) status was analyzed, in addition to histopathologic characteristics, i.e., histologic grade, nuclear, mitoses, infiltrate, desmoplasia, and necrosis. Tumors were divided into primary breast (PB) and secondary breast (SB). The expression of claudin-4 and -7 was coincident in PB and SB in 83.78% and 82.22% respectively. The expression of -catenin and E-cadherin in PB and SB was coincident in 89.74% and 80.95% respectively. Estrogen receptor status was (+) in both breasts in 66%, while progesterone receptor status (+) was in 55%. The histological grade using the Nottingham-modified Scarff-Bloom-Richardson grading system (MSBR) showed mild infiltrate, necrosis (+), moderate desmoplasia and mitotic index (<10) was coincident in 57.77%, 60.00%, 55.55%, 63.63% and 55.55% respectively. The degree of agreement showed claudin-4 (p=0.61), claudin-7 (p=0.29), E-cadherin (p=0.48), and -catenin (p=0.48). The expression of claudin-4 and -7, E-cadherin and -catenin present a strong agreement between tumors, showing that bilateral tumors are not different. Histopathologic characteristics showed a lesser agreement between tumors

INTODUÇÃO: O carcinoma renal (CR) é uma doença agressiva, e sua incidência vem aumentando. A variante de células claras (CRCC) é a mais comum e apresenta comportamento biológico mais agressivo. Os recentes avanços no conhecimento da biologia molecular do tumor demonstram que a oncogênese dos diversos tipos histológicos é regida por mecanismos celulares diversos. Os modelos prognósticos atuais vêm procurando incorporar os recentes avanços da biologia molecular, com o intuito de melhorar sua capacidade de predizer a evolução e o desfecho destes pacientes. OBJETIVOS: Correlacionar a imunoexpressão dos marcadores selecionados com: 1) sobrevida global e, 2) com parâmetros prognósticos estabelecidos (estadio clínico TNM, tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman, invasão microvascular e invasão de gordura perirrenal) em portadores de CRCC não metastático. MÉTODOS: Neste estudo de coorte retrospectivo, avaliamos 99 pacientes portadores de CRCC não metastático, quanto à expressão imunoistoquímica das seguintes proteínas: CA-IX, EGF-R, Ki-67, p53, PTEN, VEGF e VEGF-R. Os parâmetros analisados foram: Sobrevida global, estadio TNM, tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman, invasão microvascular e invasão de gordura perirrenal. Utilizamos um tissue microarray construído exclusivamente para esta finalidade e realizamos a leitura da imunoexpressão por técnica digital utilizando o software Photoshop®. RESULTADOS: O tempo de seguimento médio foi de 7,9 anos. Com relação à sobrevida global, não observamos sua correlação com nenhum dos marcadores avaliados. Quanto à correlação da expressão dos marcadores com os parâmetros prognósticos convencionais, observamos que a expressão do EGF-R se correlacionou com estadio T (p= 0,049) e invasão da gordura perirrenal (p=0,020); e o VEGF-R se correlacionou com grau de Fuhrman (p=0,022) e invasão microvascular (p=0,005). Nos demais marcadores, não foi observada correlação significativa. CONCLUSÃO: Os fatores prognósticos moleculares EGF-R e VEGF-R apresentam-se como ferramentas úteis para avaliação do risco de prognóstico desfavorável em portadores de carcinoma renal de células claras não metastático / INTODUCTION: Renal cell carcinoma is an aggressive disease and its incidence is rising. The clear cell variant is the most common, and also the most aggressive. Recent advances in the understanding of the tumors molecular biology indicate that the oncogenesis of each histologic subtype is controlled by distinct cellular mechanisms. Current prognostic models are gradually incorporating the advances in molecular biology, in the hope to improve their predictive capacity. OBJECTIVES: To correlate the immunoexpression of selected markers with 1) overall survival, and 2) with established prognostic parameters (clinical TNM stage, tumor size, Fuhrman nuclear grade, microvascular invasion and perirenal fat invasion) in patients with non-metastatic ccRCC. METHODS: This is a retrospective cohort study, we evaluated 99 patients with non-metastatic clear cell renal cell carcinoma, as to the expression of the following proteins: CA-IX, EGF-R, Ki-67, p53, PTEN, VEGF e VEGF-R. The analyzed parameters where: overall survival, TNM stage, tumor size, Fuhrman nuclear grade, microvascular invasion, perirenal fat invasion. We utilized a custom built tissue microarray, and the immunoexpression was digitally quantified using the Photoshop® software. RESULTS: The mean follow-up time was 7,9 years. We found no correlation between the expression of the studied molecular markers and overall survival. As for the conventional prognostic parameters, we found the expression of EGF-R to correlate with T stage (p= 0,049) and perirenal fat invasion (p= 0,020), and VEGF-R to correlate with Fuhrman nuclear grade (p= 0,022) and microvascular invasion (p= 0,022). None of the other markers showed correlation with the studied parameters. CONCLUSIONS: The expression of EGF-R and VEGF-R may be useful tools in the prognostic evaluation of unfavorable risk in patients with non metastatic clear cell renal cell carcinoma

INTODUÇÃO: O carcinoma renal (CR) é uma doença agressiva, e sua incidência vem aumentando. A variante de células claras (CRCC) é a mais comum e apresenta comportamento biológico mais agressivo. Os recentes avanços no conhecimento da biologia molecular do tumor demonstram que a oncogênese dos diversos tipos histológicos é regida por mecanismos celulares diversos. Os modelos prognósticos atuais vêm procurando incorporar os recentes avanços da biologia molecular, com o intuito de melhorar sua capacidade de predizer a evolução e o desfecho destes pacientes. OBJETIVOS: Correlacionar a imunoexpressão dos marcadores selecionados com: 1) sobrevida global e, 2) com parâmetros prognósticos estabelecidos (estadio clínico TNM, tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman, invasão microvascular e invasão de gordura perirrenal) em portadores de CRCC não metastático. MÉTODOS: Neste estudo de coorte retrospectivo, avaliamos 99 pacientes portadores de CRCC não metastático, quanto à expressão imunoistoquímica das seguintes proteínas: CA-IX, EGF-R, Ki-67, p53, PTEN, VEGF e VEGF-R. Os parâmetros analisados foram: Sobrevida global, estadio TNM, tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman, invasão microvascular e invasão de gordura perirrenal. Utilizamos um tissue microarray construído exclusivamente para esta finalidade e realizamos a leitura da imunoexpressão por técnica digital utilizando o software Photoshop®. RESULTADOS: O tempo de seguimento médio foi de 7,9 anos. Com relação à sobrevida global, não observamos sua correlação com nenhum dos marcadores avaliados. Quanto à correlação da expressão dos marcadores com os parâmetros prognósticos convencionais, observamos que a expressão do EGF-R se correlacionou com estadio T (p= 0,049) e invasão da gordura perirrenal (p=0,020); e o VEGF-R se correlacionou com grau de Fuhrman (p=0,022) e invasão microvascular (p=0,005). Nos demais marcadores, não foi observada correlação significativa. CONCLUSÃO: Os fatores prognósticos moleculares EGF-R e VEGF-R apresentam-se como ferramentas úteis para avaliação do risco de prognóstico desfavorável em portadores de carcinoma renal de células claras não metastático / INTODUCTION: Renal cell carcinoma is an aggressive disease and its incidence is rising. The clear cell variant is the most common, and also the most aggressive. Recent advances in the understanding of the tumors molecular biology indicate that the oncogenesis of each histologic subtype is controlled by distinct cellular mechanisms. Current prognostic models are gradually incorporating the advances in molecular biology, in the hope to improve their predictive capacity. OBJECTIVES: To correlate the immunoexpression of selected markers with 1) overall survival, and 2) with established prognostic parameters (clinical TNM stage, tumor size, Fuhrman nuclear grade, microvascular invasion and perirenal fat invasion) in patients with non-metastatic ccRCC. METHODS: This is a retrospective cohort study, we evaluated 99 patients with non-metastatic clear cell renal cell carcinoma, as to the expression of the following proteins: CA-IX, EGF-R, Ki-67, p53, PTEN, VEGF e VEGF-R. The analyzed parameters where: overall survival, TNM stage, tumor size, Fuhrman nuclear grade, microvascular invasion, perirenal fat invasion. We utilized a custom built tissue microarray, and the immunoexpression was digitally quantified using the Photoshop® software. RESULTS: The mean follow-up time was 7,9 years. We found no correlation between the expression of the studied molecular markers and overall survival. As for the conventional prognostic parameters, we found the expression of EGF-R to correlate with T stage (p= 0,049) and perirenal fat invasion (p= 0,020), and VEGF-R to correlate with Fuhrman nuclear grade (p= 0,022) and microvascular invasion (p= 0,022). None of the other markers showed correlation with the studied parameters. CONCLUSIONS: The expression of EGF-R and VEGF-R may be useful tools in the prognostic evaluation of unfavorable risk in patients with non metastatic clear cell renal cell carcinoma

Carcinoma da mama com apresentação bilateral é uma doença pouco avaliada na literatura, com raros trabalhos científicos que comparam os aspectos moleculares de ambos os tumores. No presente estudo, analisamos os tumores de 45 pacientes portadoras de carcinoma ductal invasivo bilateral em relação às expressões de claudinas-4 e 7, de E-caderina e de -catenina por meio de imunoistoquímica em TMA. Além desses marcadores, analisamos o estado dos receptores de estrógeno e de progesterona, bem como diversas características histopatológicas (grau histológico, nuclear, mitose, infiltrado, desmoplasia e necrose). A amostra foi caracterizado por média de idade de 52,4 anos e os tumores foram divididos em mama primário (MP) e mama secundário (MS). Não houve diferenças entre os dois grupos (MP e MS) nos marcadores testados, sendo que a expressão foi coincidente nas seguintes proporções: claudina-4 (83,8%, p=0,61), claudina-7 (82,2%, p=0,29), E-caderina (81%, p=0,48), -catenina (89,7%, p=0,48), receptor de estrogeno (66%, p=0.75) e receptor de progesterona (55%, p=0.99). Em relação aos aspectos morfológicos, grau histológico (SBR) II, infiltrado inflamatório discreto, necrose, desmoplasia moderada e índice mitótico (<10fm/10cga) foram coincidentes em 57,8%, 60%, 55,6%, 63,6% e 55,6%, respectivamente. Os presentes resultados nos permitem inferir que os tumores de apresentação bilateral são, em sua maioria, similares do ponto de vista morfológico e da expressão dos marcadores testados / Forty-five patients with invasive ductal carcinoma were evaluated for the expression of claudin-4, claudin-7, E-cadherin, and -catenin through tissue microarray (TMA) and immunohistochemistry (IHC) analysis. Besides these markers, estrogen (ER) and progesterone receptor (PR) status was analyzed, in addition to histopathologic characteristics, i.e., histologic grade, nuclear, mitoses, infiltrate, desmoplasia, and necrosis. Tumors were divided into primary breast (PB) and secondary breast (SB). The expression of claudin-4 and -7 was coincident in PB and SB in 83.78% and 82.22% respectively. The expression of -catenin and E-cadherin in PB and SB was coincident in 89.74% and 80.95% respectively. Estrogen receptor status was (+) in both breasts in 66%, while progesterone receptor status (+) was in 55%. The histological grade using the Nottingham-modified Scarff-Bloom-Richardson grading system (MSBR) showed mild infiltrate, necrosis (+), moderate desmoplasia and mitotic index (<10) was coincident in 57.77%, 60.00%, 55.55%, 63.63% and 55.55% respectively. The degree of agreement showed claudin-4 (p=0.61), claudin-7 (p=0.29), E-cadherin (p=0.48), and -catenin (p=0.48). The expression of claudin-4 and -7, E-cadherin and -catenin present a strong agreement between tumors, showing that bilateral tumors are not different. Histopathologic characteristics showed a lesser agreement between tumors

Orientador: Sara Teresinha Olalla Saad / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-18T22:22:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Baratti_MarianaOzello_D.pdf: 9890862 bytes, checksum: f7eb8503519cc264f616a79dc48baf4f (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: As síndromes mielodisplásicas (SMDs) constituem um grupo heterogêneo de desordens hematopoéticas, caracterizadas por exibirem hematopoese ineficaz com evidências de displasia da medula óssea resultando em citopenias no sangue periférico. Tecnologia de microarranjo tem permitido o refinado mapeamento da atividade transcricional do genoma humano. RNAs não codificadores (ncRNAs) transcritos de regiões intrônicas de genes conhecidos estão envolvidos em vários processos relacionados com controle transcricional e pós-transcricional da expressão gênica, interações com cromatinas, modificação de histonas e também estão se tornando evidentes em vários tipos de cânceres. Caracterização de ncRNAs em células progenitoras e células estromais de pacientes com SMD representa uma estratégia aparentemente importante para o entendimento da regulação gênica nesta doença. Neste estudo, o perfil de expressão gênica de células CD34+ e estromais de pacientes com SMD do subgrupo anemia refratária com sideroblastos em anel (ARSA) foi comparado com o de indivíduos saudáveis, usando oligoarranjos de 44 kilobases contendo íntrons e éxons, o qual incluiu sequências para genes codificadores, RNAs sense e antisense totalmente e parcialmente intrônicos. Em células CD34+ de pacientes com SMD-ARSA, 216 genes foram diferencialmente expressos (q-value ? 0,01) em comparação com indivíduos saudáveis, dos quais 65 (30%) eram transcritos não codificadores. O gene DMT1, um transportador de ferro, foi encontrado hiperexpresso em células CD34+ de SMD-ARSA. Em medula óssea total de 34 pacientes, a expressão foi mais evidente no subgrupo de pacientes com SMD de baixo risco/INT-1. Ensaios de imuno-histoquímica corroboram os dados encontrados na análise de expressão gênica e demonstram que DMT1 se encontra mais expresso nas células eritroblásticas. A hiperexpressão de DMT1 pode estar relacionada com o homeostase do ferro anormal nas SMDs. Em células estromais de SMD-ARSA, 12 genes foram diferencialmente expressos (q-value ? 0,05) em comparação com indivíduos saudáveis, dos quais 3 (25%) eram transcritos não codificadores. O gene SEMA3A, um membro secretado da família das semaforinas, foi encontrado hiperexpresso em células estromais de SMD-ARSA e na medula óssea total de 34 pacientes; sua hiperexpressão foi mais evidente em pacientes com SMD de alto risco/INT-2 e em pacientes com leucemia mieloide aguda (n=19). Ensaios funcionais demonstraram que SEMA3A está envolvido com aumento da adesão, diminuição da diferenciação e apoptose de células leucêmicas cocultivadas com células estromais HS27 hiperexpressando SEMA3A e age de maneira parácrina sobre as células precursoras. Pela primeira vez, o perfil diferencial de ncRNA em células CD34+ e células estromais entre SMD-ARSA e indivíduos saudáveis foi demonstrado, sugerindo que ncRNA pode ter um importante papel durante o desenvolvimento das síndromes mielodisplásicas / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDS) are a group heterogeneous of hematological disorders characterized by ineffective hematopoiesis with morphological evidence of marrow cell dysplasia resulting in peripheral blood cytopenia. Microarray technology has permitted a refined high-throughput mapping of the transcriptional activity in the human genome. Noncoding-RNAs (ncRNAs) transcribed from intronic regions of genes are involved in a number of processes related to post-transcriptional control of gene expression, and chromatins interaction, and histone modification and they are becoming evident in several cancers. Characterization of ncRNAs in progenitor cells and stromal cells of MDS patients could be strategic for understanding gene expression regulation in this disease. In this study, gene expression profiles of CD34+ and stromal cells of MDS patients with refractory anemia with ringed sideroblasts (RARS) subgroup were compared those of healthy individuals, using 44 kilobases combined introns and exons oligoarrays, which included probes for protein-coding genes, for sense and antisense strands of totally and partially intronic noncoding RNAs. In CD34+ cells of MDS-RARS patients, 216 genes were significantly differentially expressed (q-value ? 0.01) in comparison to healthy individuals, of which 65 (30%) were noncoding transcripts. The DMT1 gene, an iron-transporter, was found up-regulated in CD34+ cells of MDS-RARS. In the total bone marrow of 34 patients, the expression of DMT1 was more evident in the subgroup of low risk/INT-1 MDS patients. The immunohistochemistry assay confirms the data obtained in the gene expression assay and show that DMT1 is more expressed in erythroid cells. The higher expression of DMT1 can be related with abnormal iron homeostasis in MDS. In stromal cells of MDS-RARS, 12 genes were significantly differentially expressed (q-value ? 0.05) in comparison to healthy individuals, of which 3 (25%) were noncoding transcripts. The SEMA3A gene, a secreted member of the semaphorins family, was found up-regulated in stromal cells of MDS-RARS and in the total bone marrow of 34 patients; further, the higher expression was more evident in high risk/ INT-2 subgroup of MDS patients and acute myeloid leukemia patients (n = 19). Functional assays demonstrated that SEMA3A is related to adhesion increase, differentiation decrease, and apoptosis of leukemia cells cocultivated with HS27 stromal cells higher expressing SEMA3A, also acting in a paracrine fashion in the precursors cells. These results demonstrated, for the first time, in CD34+ cells and stromal cells the differential ncRNA expression profile between MDSRARS and healthy individuals, suggesting that ncRNAs may play an important role during the development of myelodysplastic syndromes / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientador: Pablo Agustin Vargas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-20T06:52:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_FelipePaiva_M.pdf: 2031852 bytes, checksum: 891d082818e43f0fa54efa8553fba38c (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Tumores de glândulas salivares correspondem à cerca de 3 a 6% de todos os tumores de cabeça e pescoço, apresentando uma ampla variação quanto à freqüência dos diferentes tipos histológicos e seus respectivos cursos clínicos. Desta forma, a determinação de novos marcadores moleculares que estejam relacionados com o comportamento biológico destas neoplasias se faz necessário e o uso da técnica de tissue microarray (TMA) ou micro-arranjo tecidual representa uma ferramenta altamente eficaz para a identificação destes marcadores. Sendo assim, o objetivo do presente estudo é avaliar as características clinicopatológicas de 493 neoplasias de glândulas salivares e descrever os princípios técnicos de construção de blocos de micro-arranjo tecidual, assim como suas vantagens e desvantagens para o estudo destes tumores. Para isto, os prontuários de um centro de patologia médica e de um centro de patologia oral compreendidos entre os anos de 2001 e 2011 foram revisados e os dados clinico patológicos coletados, enquanto que a construção dos blocos de TMA foi realizada por meio de equipamento manual de arranjo tecidual em matriz, onde três áreas tumorais representativas foram selecionadas e incluídas no bloco receptor. Após a obtenção dos resultados, foi observado que o adenoma pleomórfico e o carcinoma mucoepidermóide representaram as neoplasias benigna e maligna de glândulas salivares mais freqüentes e após a construção de 12 blocos de TMA foi possível obter boa representatividade utilizando-se cilindros de 1,0, 2,0 ou 3,0 mm, especialmente em neoplasias sólidas. Portanto, a distribuição dos tumores de glândulas salivares na amostra estudada está de acordo com os achados relatados anteriormente na literatura e a técnica de TMA apresenta-se como uma metodologia de alto rendimento e baixo custo no estudo de tumores de glândulas salivares / Abstract: Salivary gland tumors account for 3 to 6% of the head and neck tumors, with a broad variation in the incidence of their different histological subtypes and their respective clinical courses. For this reason, the determination of new molecular markers truly associated to the biological behavior of these neoplasias becomes necessary and the use of tissue microarray (TMA) technique represents a high-throughput laboratory tool for identifying such markers. The aim of the present study is to evaluate the clinic-pathological features of 493 salivary gland neoplasias and to describe the technical principles for construction of TMA blocks, as well as their advantages and disadvantages regarding the study of salivary gland tumors. For this, medical charts of a general pathology service and of an oral pathology service from 2001 to 2011 were reviewed and the clinic-pathological data acquired, whereas TMA blocks were constructed using a manual tissue arrayer by selecting three representative neoplastic areas to be included in the recipient block. Following the acquisition of the results, it was observed that pleomorphic adenoma and mucoepidermoid carcinoma represented the most frequent benign and malignant neoplasias, respectively, and that after the building of 12 TMA blocks it was possible to obtain high representative cores by using 1.0, 2.0 and 3.0 mm cylinders, especially in solid neoplasias. Hence, the distribution of salivary gland tumors in the sample studied is in agreement with the findings reported previously in the literature and the TMA technique presents as a high-throughput and low-cost methodology in salivary gland tumors study / Mestrado / Patologia / Mestre em Estomatopatologia

A via AKT/PI3K apresenta-se geralmente alterada nos diversos tipos de cânceres humanos e a alteração dos componentes desta via ocorre através da ativação de oncogenes ou inativação de genes supressores tumorais levando a transformações celulares que podem promover a tumorigênese. No câncer de mama a via AKT/PI3K pode ser ativada por Erb-B2, receptores dos fatores de crescimento de insulina (IGF), receptores de estrógeno e perda da expressão do gene PTEN. mTOR (proteína alvo da rapamicina em mamíferos) é uma serina treonina quinase, membro da via AKT/PI3K que se encontra envolvida em múltiplas funções biológicas como controle da tradução, transcrição, degradação protéica e biogênese ribossomal. A ativação desta proteína resulta na fosforilação e ativação de seus principais substratos 4EBP1 e S6K1, requeridos para a biossíntese ribossomal e tradução de RNAms importantes para controle e progressão no ciclo celular. A rapamicina é uma droga com propriedades fungicidas, imunossupressoras e anticancerígenas que atua na inibição de mTOR afetando a expressão de genes envolvidos no metabolismo e síntese protéica. No nosso estudo avaliamos os elementos da via do AKT através de análise imunoistoquímica em fatias de tumores mantidos em cultura de órgão antes e depois do tratamento com rapamicina. A cultura de órgão mantém uma interação entre o epitélio mamário e estroma podendo-se preservar o microambiente que reconstitui o comportamento da célula tumoral. Nesta análise imunoistoquímica observamos uma diminuição significativa de 4EBP1 nas fatias dos tumores tratados com rapamicina em relação aos casos controles. Além disso, fizemos uma avaliação da mudança no perfil da expressão gênica nestas fatias tumorais sub-divididas em Erb-B2 positivos e negativos através da análise por microarray e observamos que a maioria dos genes afetados estavam envolvidos com as funções de transcrição e tradução celulares. Para confirmarmos os resultados obtidos por microarray fizemos uma análise por RT-PCR dos genes WWOX, EXT1 e GTF2E2 em amostras independentes e escolhidos aleatoriamente, conseguindo validá-los em 60% dos casos. Conclusão: A cultura de órgão representa um método simples para determinação dos efeitos da rapamicina. Utilizamos uma estratégia de análise do perfil gênico e novas proteínas que poderiam servir como possíveis marcadores de resposta aos inibidores da proteína mTOR foram identificadas / The AKT/ PI3K pathway are frequently disturbed in many human cancers and the alteration of the components of this pathway occurs through activation of oncogenes or inactivation of tumor suppresors leading to cellular transformation that can promove tumorigenesis. In breast cancer the AKT/PI3K pathway can be activated by ERb-B2, the insulin like growth factor (IGF), estrogen receptors and PTEN loss. mTOR (mammalian target of rapamycin) is a serine threonine kinase, member of the AKT/PI3K pathway, which is involved in multiple biologic functions such as transcription, translation, protein degradation and ribosome biogenesis. The activation of this protein results in phosphorilation and activation of S6K1 and 4EBP1, two downstream signaling elements that are required for ribosomal biosynthesis and mRNAs translation, which is important for cell cycle control and progression. Rapamycin is a potent fungicide, immunossupressive and anticancer agent that inhibits mTOR affecting the expression of genes involved in metabolism and protein synthesis. In the present study we examined some elements of AKT pathway by immunohistochemistry analysis in samples of breast cancer mantained in organ culture before and after treatment with rapamycin. The organ culture maintain an interaction between the mammary epithelium and stroma preserving the micro-environment and restoring the tumor cell behavior. In this immunohistochemistry analysis we noticed a significative decrease of 4EBP1 in the samples of tumors treated with rapamycin compared with the control cases. Besides this, we determined the variation of gene expression profile through microarray analysis in these samples subdivided in positive and negative Erb-B2 and we have identified that most part of the affected genes were mainly involved in cellular transcription and translation.To confirm the results obtained through microarray technique, we have performed the RT-PCR analysis of WWOX, EXT1, GTF2E2 genes and we were able to validate them in 60% of our cases. Conclusion: The organ culture represents a simple method to determine the effects of rapamycin. Using a strategic analysis of the gene profile, news proteins that possibly could be used as markers to the mTOR inhibitors were identifyied

OBJETIVO: Identificar os genes diferencialmente expressos entre os leiomiomas uterinos de pacientes em idade reprodutiva, tratadas ou não com análogo do GnRH e confirmar os resultados obtidos para genes selecionados por técnica de PCR em tempo real. PACIENTES E MÉTODOS: Foi colhida amostra do maior nódulo de leiomioma uterino de 89 pacientes negras, idade entre 20 e 45 anos, com indicação cirúrgica de miomectomia. Dessas, 38 receberam análogo do GnRH previamente a cirurgia (Grupo A) e 51 foram submetidas a cirurgia sem tratamento prévio (Grupo B). Dentro de cada grupo foram selecionadas 10 pacientes nulíparas, com maior nódulo acima de 3,0 cm, volume uterino acima de 300 cc. e amostras colhidas na fase lútea no Grupo B. INTERVENÇÃO: 5 amostras de cada grupo foram analisadas por técnica de microarray e posteriormente genes diferencialmente expressos foram analisados por técnica de PCR em tempo real em 10 pacientes de cada grupo. RESULTADOS: Do total de 47.000 seqüências da plataforma Affymetrix, representando em torno de 38.500 genes humanos já caracterizados, resultou na expressão diferencial de 174 genes, sendo 70 super-expressos (33 com função conhecida) e 104 subexpressos (65 com função conhecida) em amostras do Grupo A (Tratado) comparativamente ao Grupo B (Não-Tratado). Os genes super-expressos CYR 61, EGR 1 e SULF 2 e o sub-expresso, WIF 1 foram confirmados por PCR em tempo real, enquanto o gene HMGN1 não teve confirmação da sua super-expressão após PCR em tempo real. CONCLUSÕES: Há alteração da expressão gênica de leiomioma uterino de mulheres submetidas a tratamento com análogo de GnRH em relação às não tratadas. O número de genes sub-expressos é o dobro dos super-expressos e 80% das alterações detectadas pela técnica de microarray foram confirmadas por PCR em tempo real. / OBJECTIVE: To identify the genes differentially expressed between the uterine leiomyomas of patients in reproductive age, treat or not treated with GnRH analogue and confirm the results for genes selected by real time PCR. METHODS: It was harvested sample of the largest lump of uterine leiomyoma of 89 black patients, aged between 20 and 45 years, with details of surgical miomectomia. Of these, 38 patients received GnRH analogue prior to surgery (Group A) and 51 were undergoing surgery without prior treatment (Group B). Within each group were selected 10 patients nulliparous, with higher nodule over 3.0 cm, uterine volume over 300 cc. and samples taken during lutea in Group B. INTERVENTION: 5 samples from each group were analyzed by microarray, and then differentially expressed genes were analyzed by real time PCR on 10 patients in each group. RESULTS: Of the 47,000 sequences of the platform used, representing around 38,500 human genes already characterized, resulted in differential expression of 174 genes, with 70 genes up regulated (33 genes with known function) and 104 down regulated (65 genes with known function) in samples of Group A (Treaty) compared to Group B (Non-Treaty). The up regulated genes CYR 61, EGR 1 and SULF 2 and down regulated, WIF 1 were confirmed by real time PCR , while the gene HMGN1 had no confirmation of expression after real-time PCR. CONCLUSIONS: There is change in the gene expression of uterine leiomyoma of women undergoing treatment with GnRH analogue regarding women not treated. The number of genes underexpressed genes is double the down regulated and 80% of the changes detected by microarray were confirmed by real time PCR.

OBJETIVO: Identificar os genes diferencialmente expressos entre os leiomiomas uterinos de pacientes em idade reprodutiva, tratadas ou não com análogo do GnRH e confirmar os resultados obtidos para genes selecionados por técnica de PCR em tempo real. PACIENTES E MÉTODOS: Foi colhida amostra do maior nódulo de leiomioma uterino de 89 pacientes negras, idade entre 20 e 45 anos, com indicação cirúrgica de miomectomia. Dessas, 38 receberam análogo do GnRH previamente a cirurgia (Grupo A) e 51 foram submetidas a cirurgia sem tratamento prévio (Grupo B). Dentro de cada grupo foram selecionadas 10 pacientes nulíparas, com maior nódulo acima de 3,0 cm, volume uterino acima de 300 cc. e amostras colhidas na fase lútea no Grupo B. INTERVENÇÃO: 5 amostras de cada grupo foram analisadas por técnica de microarray e posteriormente genes diferencialmente expressos foram analisados por técnica de PCR em tempo real em 10 pacientes de cada grupo. RESULTADOS: Do total de 47.000 seqüências da plataforma Affymetrix, representando em torno de 38.500 genes humanos já caracterizados, resultou na expressão diferencial de 174 genes, sendo 70 super-expressos (33 com função conhecida) e 104 subexpressos (65 com função conhecida) em amostras do Grupo A (Tratado) comparativamente ao Grupo B (Não-Tratado). Os genes super-expressos CYR 61, EGR 1 e SULF 2 e o sub-expresso, WIF 1 foram confirmados por PCR em tempo real, enquanto o gene HMGN1 não teve confirmação da sua super-expressão após PCR em tempo real. CONCLUSÕES: Há alteração da expressão gênica de leiomioma uterino de mulheres submetidas a tratamento com análogo de GnRH em relação às não tratadas. O número de genes sub-expressos é o dobro dos super-expressos e 80% das alterações detectadas pela técnica de microarray foram confirmadas por PCR em tempo real. / OBJECTIVE: To identify the genes differentially expressed between the uterine leiomyomas of patients in reproductive age, treat or not treated with GnRH analogue and confirm the results for genes selected by real time PCR. METHODS: It was harvested sample of the largest lump of uterine leiomyoma of 89 black patients, aged between 20 and 45 years, with details of surgical miomectomia. Of these, 38 patients received GnRH analogue prior to surgery (Group A) and 51 were undergoing surgery without prior treatment (Group B). Within each group were selected 10 patients nulliparous, with higher nodule over 3.0 cm, uterine volume over 300 cc. and samples taken during lutea in Group B. INTERVENTION: 5 samples from each group were analyzed by microarray, and then differentially expressed genes were analyzed by real time PCR on 10 patients in each group. RESULTS: Of the 47,000 sequences of the platform used, representing around 38,500 human genes already characterized, resulted in differential expression of 174 genes, with 70 genes up regulated (33 genes with known function) and 104 down regulated (65 genes with known function) in samples of Group A (Treaty) compared to Group B (Non-Treaty). The up regulated genes CYR 61, EGR 1 and SULF 2 and down regulated, WIF 1 were confirmed by real time PCR , while the gene HMGN1 had no confirmation of expression after real-time PCR. CONCLUSIONS: There is change in the gene expression of uterine leiomyoma of women undergoing treatment with GnRH analogue regarding women not treated. The number of genes underexpressed genes is double the down regulated and 80% of the changes detected by microarray were confirmed by real time PCR.