PINHEIRO, L. F. Avaliação das alterações cromossômicas através das técnicas de citogenética clássica e molecular em pacientes com síndrome mielodisplásica. 2014. 84 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by PPG Patologia (pgpatol@ufc.br) on 2017-08-21T18:00:38Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_lfpinheiro.pdf: 1550266 bytes, checksum: 0349b422a08a35ea0b6833027a94ce7e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-22T12:05:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_lfpinheiro.pdf: 1550266 bytes, checksum: 0349b422a08a35ea0b6833027a94ce7e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-22T12:05:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_lfpinheiro.pdf: 1550266 bytes, checksum: 0349b422a08a35ea0b6833027a94ce7e (MD5) Previous issue date: 2014-07-18 / Myelodysplastic syndrome (MDS) represents a heterogeneous group of hematopoietic disorders, originated from a somatic mutation in stem cells.In patients with myelodysplastic syndromes, the chromosomal abnormalities confirm the clonality of the disease, identify peculiar biological and clinical entities, allow stratification of prognosis, predicting the likelihood of progression into acute myeloid leukemia and overall survival, and provide fundamental help not only in making a differential diagnosis, but also in introducing patients to innovative therapeutic options. This study was retrospective, aimed to evaluate the classical and molecular cytogenetic abnormalities in patients with myelodysplastic syndrome. The study of chromosomal abnormalities by G-banding was performed in 138 samples of patients with MDS. Chromosomal abnormalities at diagnosis were detected in 43/99 (43.4%) of the cases studied. Evaluated the effectiveness of the technique of fluorescence in situ hybridization for detection of the most common chromosomal abnormalities (-5/5q-, -7/7q-, +8,) in 30 patients with MDS who had a low mitotic index (≤ 10 metaphase) to conventional methodology. With the panel of FISH probes used, additional benefit was detected in two cases (6.6%). By associating the clinical laboratory variables with the karyotype, it was observed that patients whose karyotype was normal type, had higher survival (p <0.05) than those who had changed the type karyotype. Patients who belonged to the favorable cytogenetic risk group also had better survival rates compared to the other groups (p <0.05). The best strategy for genetic study of patients with MDS, in order to optimize the cost / benefit consists in the sequential application of the techniques of conventional and molecular cytogenetics, which should be seen as complementary in the genetic characterization of myelodysplastic syndromes. FISH, yet offering little extra, should be used in cases that do not show metaphase or low mitotic index / A Síndrome Mielodisplásica (SMD) é uma doença hematopoética heterogênea clonal, originada a partir de uma mutação somática nas células progenitoras hematopoeticas..Nos pacientes com SMD, as alterações cromossômicas permitem confirmar a clonalidade da doença, identificar categorias clínicas e biológicas específicas, estratificar os pacientes em categorias de prognóstico, prever a probabilidade de progressão para leucemia mielóide aguda e a sobrevida global e selecionar os pacientes que podem beneficiar-se de terapias inovadoras. O presente estudo, de caráter retrospectivo, teve como principal objetivo avaliar as alterações citogenéticas clássicas e moleculares em pacientes com síndrome mielodisplásica. O estudo das alterações cromossômicas foi realizado por bandamento G, em 138 amostras de pacientes portadores de SMD. Foram detectadas alterações cromossômicas, ao diagnóstico, em 43/99 (43,4%) dos casos estudados. Avaliamos a eficácia da técnica de hibridação in situ com fluorescência, na detecção das anomalias cromossómicas mais comuns (-5/5q-, -7/7q-, +8,) em 30 pacientes portadores de SMD que apresentavam baixo índice mitótico (≤ 10 metáfase) à metodologia convencional. Com o painel de sondas de FISH utilizado, foi detectado benefício adicional de 2 casos (6,6%). Ao associarmos as variáveis clínico laboratoriais com o cariótipo, observou-se que os pacientes cujo cariótipo era normal, obtiveram maior sobrevida (p < 0,05) em relação aqueles que apresentavam cariótipo alterado. Os pacientes que pertenciam ao grupo de risco citogenético favorável também apresentaram maior sobrevida em comparação aos demais grupos (p < 0,05). A melhor estratégia de estudo genético dos doentes com SMD, visando a optimização da relação custo/benefício, consiste na aplicação sequencial das técnicas de citogenética convencional e molecular, devendo estas ser encaradas como complementares na caracterização genética das síndromes mielodisplásicas. A FISH, ainda que ofereça pouco acréscimo, deve ser usada nos casos que não apresentem metáfase ou baixo índice mitótico

CASTRO, Cláudio César Monteiro de. Avaliação da função miocárdica de pacientes com Síndrome Mielodisplásica pelo ecocardiograma convencional com doppler e pelas novas técnicas de doppler tecidual e Speckle-tracking. 2012. 128 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:20:39Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_ccmonteirocastro.pdf: 1333207 bytes, checksum: 9860e0130f6660520558dd93c701e935 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:21:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_ccmonteirocastro.pdf: 1333207 bytes, checksum: 9860e0130f6660520558dd93c701e935 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:21:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_ccmonteirocastro.pdf: 1333207 bytes, checksum: 9860e0130f6660520558dd93c701e935 (MD5) Previous issue date: 2012 / Myelodysplastic syndrome is a clonal disorder of hematopoietic tissue highly prevalent on elderly Anemia is one of most striking feature of this disorder Patients with transfusional dependence have a poor prognosis Following complications related to the own illness cardiovascular complications are the leading cause of death New echocardiographic techniques such as Tissue Doppler and speckle-tracking may be useful on assessment of the myocardial function in these patients A group with 34 patients and 14 healthy controls matched by sex and age was subjected to conventional echocardiography Tissue Doppler and assessment of myocardial deformation (strain) Patients were divided between those with (13) or without (21) transfusional dependence and compared to controls In the group of transfusional dependence there were 10 subjects with iron overload (serum ferritin levels > 1.000 ng/mL) Those with transfusion dependence had bigger left systolic and diastolic ventricular volumes than controls (p = 0,047 and 0,039) The indexed left atrium volume was larger on those with transfusion dependence compared to controls (p = 0,003) The left ventricular diastolic function assessed by tissue and conventional Doppler (E/A and E/E’ ratios) was normal in the patient group and has not difference between them (p = 0,15 and 0,9) On the assessment of the systolic left ventricular function by ejection fraction and myocardial deformation (global longitudinal strain) there was no difference between groups or from reference values (p = 0,71 and 0,097) The interventricular septum thickness was larger in the group with serum ferritin > 1.000 ng/mL than patients with ferritin < 1.000 ng/mL (p = 0,012) The hemoglobin level but not ferritin showed linear correlation with the left volumes (atrium: r = -0,53 with p =0,013 / ventricle: r = -0,4 with p = 0,019) Our sample doesn’t show diastolic nor systolic global dysfunctions yet with new techniques of tissue Doppler and myocardial deformation (strain). Hemoglobin below 8 g/dL was an early marker of worst ventricular function in our patients with myelodysplastic syndrome / A Síndrome Mielodisplásica é uma hemopatia clonal de alta prevalência em idosos Anemia é uma característica marcante dessa doença Pacientes com dependência de suporte transfusional tem pior prognóstico Depois das complicações relacionadas à própria doença as complicações cardiovasculares são a principal causa de morte Novas técnicas ecocardiográficas como o Doppler tecidual e speckle-tracking podem ser úteis na análise da função cardíaca nesse grupo Neste estudo foi avaliado um grupo de 34 pacientes e 14 controles saudáveis emparelhados por sexo e idade sendo submetido à ecocardiograma convencional Doppler tecidual e avaliação da deformação miocárdica (strain) Os pacientes foram subdivididos entre dependentes (13) ou não de suporte transfusional (21) e comparados aos controles Dentre os 13 pacientes do grupo dependentes havia 10 com sobrecarga de ferro (ferritina >1.000 ng/mL) Os pacientes dependentes de suporte transfusional apresentaram maiores volumes diastólico e sistólico do ventrículo esquerdo em relação aos controles (p = 0,047 e 0,039) O volume do átrio esquerdo indexado foi maior no grupo de dependentes em relação ao grupo controle (p = 0,003) A função diastólica do ventrículo esquerdo (VE) por Doppler convencional e tecidual (razão E/A e razão E/E’) foi normal no grupo de pacientes e não apresentou diferença significante entre os grupos (p = 0,15 e 0,90) Na avaliação da função sistólica do VE por fração de ejeção e por deformação miocárdica (strain longitudinal global) não houve desvio da normalidade nem diferenças entre os grupos (p = 0,71 e 0,097) A espessura do septo interventricular foi maior nos pacientes com ferritina > 1.000 ng/mL (p = 0,012) O nível de hemoglobina mas não o de ferritina apresentou correlação com os volumes esquerdos (átrio: r = -0,53 e p = 0,013 / ventrículo: r = -0,4 e p = 0,019) Nossa amostra não apresentou disfunção global nem sistólica nem diastólica mesmo à análise por novas técnicas de ecocardiograma como Doppler tecidual e deformação miocárdica (strain) O nível de hemoglobina menor que 8 g/dL foi marcador precoce de pior função ventricular nos nossos pacientes com Síndrome Mielodisplásica

ROMERO, José Camilo Torres. Análise proteômica do plasma de pacientes portadores de síndrome mielodisplásica do tipo areb e arsa utilizando lectinas vegetais. 2016. 104 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-05-03T20:55:53Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-05-18T23:10:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-18T23:10:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_jctromero.pdf: 2418639 bytes, checksum: f9af8288a0c70314148c067bb2ed7ae5 (MD5) Previous issue date: 2016 / The myelodysplastic syndromes (Myelodysplastic Syndrome MDS) are diseases that occur when blood-producing cells are damaged bone marrow. This causes damage to one or moretypes of blood cells because its production is defective. MDS is considered a type of cancer and often end up being melodie acute leukemia (AML). The most common types of these syndromes are refractory anemia with ringed sideroblasts (ARSA) and anemia refractory with Excess Blasts (AREB). This study aimed to carry out the proteomic analysis of spinal cord serum of pediatric patients with any of the syndromes for the identification of proteins that are potential candidates for biological markers for evaluation, study and diagnosis of disease. The samples from ten patients with ARSA, tem with AREB and Ten healthy persons (control) were compared. These were subjected to immunodepletion, affinity chromatography with lectin galactose-linker selected by the anomeric recognition profile using chromatography in crosslinked hemicelulases, the selected lectins were subsequently immobilized in Sepharose 4B, the serum bone marrow samples were digested for subsequent analysis by mass spectrometry. The softwareExpressionE, based on protein expression levels, calculated the ratio between the selected groups, so 7 proteins have been identified as possible candidates for the biomarker syndromes. The overexpression of Vitronectin (VTN), fibrinogen (FGA), Pregnancy zone protein (PZP), Kininogen (KNG1) Immunoglobulin lambda chain (IGL), complement factor C4b (CB4) and Hemopexin (HPX) compared with the group control, seems to be an indicator of syndromes and were selected to form a panel of potential candidates for prognostic biomarkers. The only recognition by the frutalin to Clusterin (CLU) and Vitronectin in ARSA and Fibrinogen to AREB, do lectin a very useful tool to differentiate syndromes in proteomics studios. / As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) são doenças que ocorrem quando as células produtoras de sangue são danificadas na medula óssea e esses danos podem afetar um ou mais tipos de células sanguíneas. Os tipos mais comuns de SMD são a Anemia Refratariacom Sideroblastos em Anel (ARSA) e Anemia Refratariacom Excesso de Blastos (AREB). Este trabalho teve como objetivo realizar a análise proteômica do plasmamedular de pacientes com SMD tipo ARSA e AREB, visando àidentificação de proteínas que sejam potenciais candidatas a marcadores biológicos para avaliação, estudo e diagnóstico dessas doenças. Amostras de plasmade dez pacientes com ARSA, dez com AREB e dez indivíduos saudáveis (Controle) foram selecionadas para análise proteômica. Estas foram submetidas à imunodepleção, cromatografia de afinidade com lectina α-D-galactose-ligante de sementes de Artocarpus incisa imobilizada em SepharoseTM 4B, concentradas e digeridas para posterior análise por espectrometria de massas. O programa ExpressionE, baseado nos níveis de expressão das proteínas, calculou a razão entre os grupos selecionados. Foram identificadas 7 proteínas potenciais candidatas a biomarcadores, tais como a Vitronectina (VTN), Fibrinogênio (FGA), Pregnancy zone protein (PZP), Cininogênio (KNG1), Cadeia de Imunoglobulina Lambda (IGLL1), Factor do complemento Cb4 (Cb4) e Hemopexina (HPX), por estarem super expressas no grupo de pacientes com SMD, em ambos os tipos, ao se comparar com o grupo controle (indivíduos sadios). Estas foram selecionadas para formar um painel de proteínas candidatas biomarcadoresde diagnóstico da SMD. O reconhecimento único por parte da frutalina para Clusterina (CLU) e Vitronectina em ARSA e Fibrinogenio para AREB, torna essa lectina, uma ferramenta muito útil para diferenciar as SMD em estudos proteômicos.

LIMA, Diego Silva. Avaliação dos genes MLL, RB e TP53 em pacientes com síndrome mielodisplásica. 2011. 95 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:56:53Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-03T12:59:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_dslima.pdf: 4024143 bytes, checksum: 0a18d4cb329d542975fac3641f5bbd03 (MD5) Previous issue date: 2011 / Myelodysplastic syndromes (MDS) represent a heterogeneous group of clonal disorders affecting the hematopoietic pluripotent cell, characterized by low cell counts in peripheral blood, dysplasia in one or more cell lines, inefficient hematopoiesis and increased risk of progression to acute myeloid leukemia. Although the disease can affect patients of other age groups, they are more frequent in those with advanced age with an average 60 to 75 years at diagnosis. Chromosomal abnormalities are observed in approximately 50% of all cases of MDS and are related with clinical and morphological findings. The aim of this study was to determine, through the technique of FISH (fluorescence in situ hybridization), the frequency of changes involving the MLL, RB, and TP53 genes in patients with MDS and associate these changes with cytogenetic findings. The cases included in the study were selected in the ambulatory of SMD from University Hospital Walter Cantídio. Thirty three patients were selected, 17 had aged over 60 years. 52% of patients were classified, according to WHO criteria, as refractory cytopenia with dysplasia in multiple lineages (RCDM) and 61% stratified, according to IPSS, as intermediate risk 1 (INT-1). 78% of patients had abnormalities detected by cytogenetics, among them 31% had complex karyotypes (more than 3 changes per metaphase). 18% of patients had changes at least in one of the three genes valued in this study by FISH. Three patients showed alterations of TP53 gene, being detected in two patients (records 31 and 6) the deletion of a single allele or both alleles of the gene, respectively, and in the third (record 2), we detected amplification of TP53 gene, all this changes were not detected by classical cytogenetics, because it is a less sensitive technique. 6% of patients (records 7 and 22) had rearrangement of MLL gene. In the first case, FISH discarded the gene deletion alleged by cytogenetic, proving that it was present in the genome of the patient, but in a rearranged form, and in the second case cytogenetics failed to demonstrate rearrangement of the gene. For the RB gene, FISH identified only one patient (3%) with deletion of one allele of the gene, and this change was also not detected by classical cytogenetics. During evaluating the TP53 gene, FISH allowed identification of two patients (records 5 and 10) presenting at least six extra copies of chromosome 17, probably representing a small hyperdiploid clone partially detected in the first patient and not detected in the second . In the six patients who showed abnormalities of the genes analyzed, FISH has provided information that added, changed or confirmed the result previously given by classical cytogenetics, which are a major application of this technique due to its high sensitivity compared to the traditional method. / As síndromes mielodisplásicas (SMD) representam um grupo heterogêneo de doenças clonais que acometem a célula precursora hematopoética pluripotente, caracterizando-se por baixa contagem de células no sangue periférico, displasia em uma ou mais linhagens celulares, hematopoese ineficiente, além do risco aumentado de progressão para leucemia mielóide aguda. Embora a doença possa acometer pacientes de outras faixas etárias, é mais frequente naqueles com idade avançada, com média ao diagnóstico de 60 a 75 anos. As anormalidades cromossômicas são observadas em aproximadamente 50% de todos os casos de SMD, estando, em alguns casos, relacionadas com achados clínicos e morfológicos. O objetivo deste trabalho foi determinar, através da técnica de FISH (hibridização in situ por fluorescência), a frequência de alterações envolvendo os genes MLL, RB e TP53 em pacientes com SMD e associar estas alterações com os achados citogenéticos. Os casos inseridos no estudo foram oriundos do ambulatório de SMD do Hospital Universitário Walter Cantídio. Dos 33 pacientes selecionados, 17 pertenciam ao grupo com idade acima de 60 anos. 52% dos pacientes foram classificados, segundo a OMS, como citopenia refratária com displasia em múltiplas linhagens (CRDM) e 61% estratificados, segundo o IPSS, como de risco intermediário 1 (INT-1). Um total de 78% dos pacientes apresentaram alterações citogenéticas, dentre eles 31% possuíam cariótipos complexos (mais de 3 alterações por metáfase). A técnica de FISH permitiu identificar em 18% dos pacientes alterações envolvendo um dos três genes avaliados. Três pacientes apresentaram alteração do gene TP53, sendo detectada em dois deles (registros 31 e 6) a deleção de um único alelo ou de ambos os alelos do gene, respectivamente, e no terceiro (registro 2), detectou-se a amplificação do gene TP53, sendo estas alterações não visualizadas através da citogenética clássica, por se tratar de um técnica menos sensível. Detectou-se em 6% dos pacientes (registros 7 e 22) rearranjo do gene MLL, no primeiro a FISH descartou a suposta deleção do gene alegada pela citogenética, provando que o mesmo estava presente no genoma do paciente, porém de forma rearranjada e no segundo a citogenética não conseguiu demonstrar o rearranjo do gene. Quanto ao gene RB, a FISH permitiu identificar apenas um paciente (3%) com deleção de um dos alelos do gene, sendo esta alteração também não detectada pela citogenética clássica. A FISH possibilitou identificar, durante a avaliação do gene TP53, dois pacientes (registros 5 e 10) apresentando pelo menos 6 cópias extras do cromossomo 17, devendo essa alteração se tratar de um pequeno clone hiperdiplóide detectado parcialmente no primeiro paciente e não detectado no segundo. Nos seis pacientes que apresentaram alteração dos genes avaliados, a FISH proveu informações que adicionaram, confirmaram ou alteraram o resultado previamente emitido pela citogenética clássica, sendo estas uma das principais aplicações desta técnica devido sua alta sensibilidade quando comparada ao método clássico.

RIBEIRO JÚNIOR, Howard Lopes. Estudo dos genes relacionados a mecanismos de reparo em danos de DNA em síndrome mielodisplásica. 2013. 112 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-11T12:37:07Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_hlribeirojunior.pdf: 3080217 bytes, checksum: 33e1aea19b037659818fced9bb3a0a01 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-11T12:41:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_hlribeirojunior.pdf: 3080217 bytes, checksum: 33e1aea19b037659818fced9bb3a0a01 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-11T12:41:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_hlribeirojunior.pdf: 3080217 bytes, checksum: 33e1aea19b037659818fced9bb3a0a01 (MD5) Previous issue date: 2013 / Myelodysplastic Syndrome (MDS) is a group of diseases of clonal hematopoietic progenitor cells, characterized by cytopenia (s) peripheral (s), dysplasia of one or more myeloid cell lineages and increased risk for development of acute myeloid leukemia. MDS is considered a disease of older people, because approximately 80% of patients have more than 60 years at diagnosis. Are rare in children, being observed in less than 5% of hematologic malignancies that affect patients under 14 years of age. The pathogenesis of MDS involves DNA damage in hematopoietic stem cells probably affected by Double-Strand Break (DSB) in the process of Non-homologous end join (NHEJ) and homologous recombination (HR) repair mechanisms as key for ensuring genomic stability of cells trunk. This cohort study proposed evaluate the association between rs4793191, rs9567623 and rs1801320 polymorphisms of the BRCA1, BRCA2 and RAD5 genes, acting on the HR mechanism; the rs3835, rs2267437 and rs1805388 of the XRCC5, XRCC6 and LIG4, related with NHEJ mechanism and, finally, ATM rs228593 as molecular sensor damage in DSBs. This genotyping analysis was based on the methodology of PCR-RFLP, between bone marrow samples of 60 patients with MDS, from the University Hospital Walter Cantidio, and 82 peripheral blood samples of elderly healthy volunteers with approval in the CEP / HUWC under protocol No. 027.04.12. The MDS patients were diagnosed by examination of bone marrow and bone marrow cytogenetic analysis technique by G band. The genotypes studied polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium (p> 0.05), except for the rs1805388 polymorphism in LIG4 gene. Our results showed for the rs228593 polymorphism of the ATM gene association with low-risk MDS for genotype A /G (p = 0.008, OR 0.225, CI 0.075 to 0.680) with added association of genotype A/G with the clinical variables of cytopenia (p = 0.032, OR 5.250, CI 1.151 to 23.937), in the range of 0-1 in peripheral blood cytopenias, and with favorable prognosis in IPSS (p <0.001, OR 21.95, CI 29.791 to 16.185). For the rs2267437 polymorphism in the gene XRCC6 relate the mutant genotype C / C and G / G + G / G with variable marrow cellularity in the range of normocellular + hypercellular (p = 0.023, OR 5.556 CI 1.270 to 24.239). For the genotypes of rs3835 polymorphism of the XRCC5 gene identify the genotype A / G is highly associated with low-risk MDS (p <0.001, OR 0.100, CI 0.035 to 0.289). Additionally, for the rs1801320 polymorphism of the gene RAD51, we associate the mutant heterozygous genotype G/C with low-risk MDS (p = 0.053, OR 0.453, CI 0.203 to 1.009). For the same polymorphism, we associate the wild genotype G / G with variable age (p <0.001, OR 24.521, CI 64.033 to 93.907), in the range of greater than 60 years old, and with the variable cytopenia (0-1 cytopenias) (p <0.001, OR 16.099, CI 31.299 to 82.808). We did not obtain significant association between polymorphisms rs 4793191, rs9567623 and rs1805388 for the genes BRCA1, BRCA2 and LIG4, respectively, and clinical variables for patients with MDS. In this study we demonstrate that genes related to DSB are also related to the pathogenesis of MDS. These results support the importance of polymorphisms rs228592, rs3835, rs2267437 and rs1801320 in the ATM, XRCC5, XRCC6 and RAD51 genes, respectively, in the maintenance of genomic stability by promoting a better understanding of the genesis and etiology of myelodisplastic syndrome. / A Síndrome Mielodisplásica (SMD) é um grupo de doenças clonais das células progenitoras hematopoiéticas, caracterizadas por citopenia(s) periférica(s), displasia de uma ou mais linhagens celulares mielóides e aumento do risco de desenvolvimento de leucemia mielóide aguda. A SMD é considerada uma doença de pessoas idosas, pois aproximadamente 80% dos pacientes possuem mais de 60 anos ao diagnóstico. São raras na infância, sendo observadas em menos de 5% das neoplasias hematológicas que acometem pacientes com menos de 14 anos de idade. A patogênese da SMD envolve danos no DNA nas células tronco hematopoéticas acometido provavelmente pelos danos de fita dupla (DSB) no DNA tendo o processo de junções por extremidades não-homólogas (JENH) e recombinação homóloga como principais mecanismos de reparo necessários para garantir a estabilidade genômica das células-tronco. Este estudo de coorte propôs avaliar a associação dos polimorfismos BRCA1 rs4793191, BRCA2 rs9567623 e RAD51 rs1801320, atuantes no mecanismo de Recombinação Homóloga; o XRCC5 rs3835, XRCC6 rs2267437 e LIG4 rs1805388 relacionados ao mecanismo de Junções por Extremidades não-Homólogas e, por fim, o ATM rs228593, um sensor molecular ao dano em DSB. Esta análise de genotipagem baseou-se na metodologia de PCR-RFLP, entre amostras de medula óssea de 60 pacientes com SMD, oriundos do Hospital Universitário Walter Cantidio, e 82 amostras de sangue periférico de idosos voluntários sadios. Os pacientes com SMD foram diagnosticados de acordo com os critérios propostos pela Organização Mundial de Saúde. Os genótipos dos polimorfismos estudados encontravam-se em equilíbrio de Hardy-Weinberg (p>0,05), exceto o polimorfismo rs1805388 para o gene LIG4. Nossos resultados apresentaram para o polimorfismo rs228593 do gene ATM uma associação do genótipo heterozigoto A/G (p=0,008, OR 0,225, IC 0,075-0,680) com diminuição de risco para SMD adicionada com associação do genótipo A/G com as variáveis clínicas de citopenia (p=0,032, OR 5,250, IC 1,151-23,937), na faixa de 0-1 citopenias no sangue periférico, e com prognóstico favorável para o índice prognóstico do IPSS (p<0,001, OR 21,95, IC 29,791-16,185). Para o polimorfismo rs2267437 para o gene XRCC6 relacionamos o genótipo mutante C/G e C/G+G/G com a variável celularidade na medula óssea na faixa de normocelular + hipercelular (p=0,023, OR 5,556, IC 1,270-24,239). Para o polimorfismo rs3835 do gene XRCC5 identificamos que o genótipo A/G está altamente associado com a diminuição de risco para SMD (p<0,001, OR 0,100, IC 0,035-0,289). Para o polimorfismo rs1801320 do gene RAD51, associamos o genótipo heterozigoto mutante G/C com diminuição de risco para SMD (p=0,053, OR 0,453, IC 0,203-1,009). Adicionalmente, associamos o genótipo selvagem G/G com a variável idade (p<0,001, OR 24,521, IC 64,033-93,907), na faixa de maior que 60 anos de idade, e com a variável citopenia (0-1 citopenias) (p<0,001, OR 16,099, IC 31,299-82,808). Não obtivemos associação significante entre os polimorfismos rs 4793191, rs9567623 e rs1805388 para os genes BRCA1, BRCA2 e LIG4, respectivamente, e as variáveis clínicas para os pacientes com SMD. Neste estudo demonstramos que os genes relacionados a DSB são também relacionados à patogênese da SMD. Estes resultados suportam a importância dos polimorfismos rs228593, rs3835, rs2267437 e rs1801320 para os genes ATM, XRCC5, XRCC6 e o RAD51, respectivamente, na manutenção da estabilidade genômica promovendo um melhor entendimento da gênese e etiologia da Síndrome Mielodisplásica.

SOUZA, Geane Felix de. Relação do dano oxidativo, mutação do gene HFE e fator de necrose tumoral (TNF-α) com a sobrecarga de ferro transfusional em portadores de síndromes mielodisplásticas. 2013. 157 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-26T16:15:10Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_gfsouza.pdf: 2345893 bytes, checksum: da10784c528d2dfa3144460c705c10ae (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-26T16:17:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_gfsouza.pdf: 2345893 bytes, checksum: da10784c528d2dfa3144460c705c10ae (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T16:17:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_gfsouza.pdf: 2345893 bytes, checksum: da10784c528d2dfa3144460c705c10ae (MD5) Previous issue date: 2013 / Introduction: Myelodysplastic syndromes (MDS) are characterized by ineffective hematopoiesis and dysplasia in one or more cell lines, peripheral cytopenias and a variable risk of progression to acute leukemia. Anemia is present in 80 % of patients. Many develop transfusion dependence and iron overload (IOL), which leads to generation of reactive oxygen species (ROS). Oxidative stress, together with tumor necrosis factor alpha (TNF-α) have been implicated in the pathogenesis and evolution of MDS. Objective: To evaluate the relationship of iron status with oxidative damage, mutation of the HFE gene and the levels of TNF-α in patients with MDS, followed at the Hematology Unit of the Federal University of Ceará. Methods: 101 patients with MDS, 24 with and 77 without transfusional IOL were analyzed, from May 2010 to September 2011. The control group comprised 87 healthy individuals. The profile of iron was evaluated by classical techniques, oxidative damage by spectrophotometric methods and mutation of the HFE gene study by PCR – RFLP. Results: We observed a significant increase in malonaldehyde (MDA) and nitrite in patients with IOL when compared to the other groups (p< 0.0001). The MDA and nitrite were directly correlated with serum ferritin (FRT) (r = 0.3328, p= 0.0033, r=0.4255, p< 0.0001, respectively). There was a positive correlation between FRT and antioxidant enzymes, superoxide dismutase (SOD) (r =0.5957, p< 0.0001), catalase (CAT) (r =0.4064, p=0.0003) and glutathione peroxidase (GPx) (r=0.7313, p< 0.0001). In patients with IOL a significant increase of TNF-α was observed, which was directly correlated with FRT (r = 0.4165 p=0.0002). At least one mutation in the HFE gene was identified in 30.8 % of patients with MDS and in 5.75% of healthy controls, most heterozygous for H63D. Subjects with mutations in the HFE gene showed ferritin levels significantly higher than those without the mutation in all groups. All markers of oxidative stress were higher in patients with IOL, independent of HFE gene mutations. Conclusions: The disease presented later in males and with more severity criteria for worse outcome in the study population. The oxidative stress observed was related to iron overload and the HFE gene mutation did not constitute an additional factor. These data provide new information about the pathogenesis of this heterogeneous disease and may provide the basis for new therapeutic interventions. / Introdução: As síndromes mielodisplásticas (SMD) são caracterizadas por hematopoese ineficaz e displasia em uma ou mais linhagens celulares, citopenias periféricas e um risco variável de progressão para leucemia aguda. A anemia está presente em 80% dos pacientes. Muitos desenvolvem dependência transfusional e sobrecarga de ferro (SF), o que leva à geração de espécies reativas derivadas do oxigênio (EROs) e estresse oxidativo que, juntamente com o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) vêm sendo implicados na patogênese e evolução da SMD. Objetivo: Avaliar a relação do status do ferro com o dano oxidativo, a mutação do gene HFE e os níveis de TNFα em portadores de SMD, acompanhados no Serviço de Hematologia da Universidade Federal do Ceará. Casuística e métodos: Foram analisados 101 portadores de SMD, 24 com e 77 sem SF transfusional, no período de maio de 2010 a setembro 2011. Compuseram o grupo controle 87 idosos saudáveis. O perfil do ferro foi avaliado por técnicas clássicas, o dano oxidativo por métodos espectrofotométricos e o estudo genético por PCR-RFLP. Resultados: Aumento significativo do malonaldeído (MDA) e nitrito foi observado nos pacientes com SF quando comparados aos demais grupos (p<0.0001). O MDA e nitrito foram correlacionados diretamente com a ferritina sérica (FRT) (r=0.3328, p=0.0033; r=0.4255, p<0.0001, respectivamente). Houve correlação positiva entre FRT e as enzimas antioxidantes, superóxido dismutase (SOD) (r=0.5957, p<0.0001), catalase (CAT) (r=0.4064, p=0.0003) e glutationa peroxidase (GPx) (r=0.7313, p<0.0001). Nos pacientes com SF foi observado aumento significativo do TNF-α, que foi correlacionado diretamente com a FRT (r=0.4165 p=0.0002). Foi identificada pelo menos uma mutação do gene HFE em 30,8% dos portadores de SMD e em 5,75% dos idosos saudáveis, a maioria em heterozigose para H63D. Todos os indivíduos com a mutação no gene HFE apresentaram nível de ferritina significativamente superior àqueles sem a mutação, em todos os grupos. Todos os marcadores de estresse oxidativo foram superiores nos pacientes com SF, independente da mutação do gene HFE. Conclusões: A doença apresentou-se mais tardiamente no sexo masculino e com mais critérios de gravidade e de pior evolução na população estudada. O estresse oxidativo observado se relacionou com a sobrecarga de ferro, não constituindo a mutação do gene HFE um fator adicional. Esses dados trazem novas informações sobre a patogênese dessa doença tão heterogênea e podem constituir base para novas intervenções terapêuticas

Orientador: Irene Lorand-Metze / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T06:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_D.pdf: 5950588 bytes, checksum: d00f171d21ca1cf1430070e17e34ace6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Síndromes Mielodisplásicas (SMDs) são desordens clonais da célula precursora hematopoética pluripotencial caracterizadas por alterações na proliferação e maturação celulares e presença de apoptose medular excessiva. Alterações cariotípicas na mielodisplasia são comuns. Apesar dos critérios de diagnóstico estarem bem estabelecidos, o uso da citometia de fluxo (CF) no estudo desta doença tem sido muito explorado, pois desordens não-clonais (DNCs), que também apresentam citopenias periféricas, podem dificultar o diagnóstico. Populações eritroblástica, granulocítica, monocítica, linfóide e blástica em medula óssea (MO) de pacientes com SMD foram estudadas e comparadas à MO normal (doadores para transplante de MO) e às DNCs. Foram incluídos no estudo 32 casos de SMD (20 AR, 05 ARSA, 07 AREB), 11 controles normais e 10 pacientes com DNCs confirmadas. Selecionamos as populações celulares pelo dot plot CD45/side scatter (SSC). A análise quantitativa dos marcadores eritroblásticos CD71 e Glicoforina A (GlyA); granulocíticos e monocíticos CDllb, CD13, CDI6, CDI0 e CD64; linfóide CDI9, CD3, CD4, CD8 e CDI6; além do precursor CD34 e o pan leucocitário CD45, foi obtida através da intensidade média de fluorescência (IMF). A granularidade citoplasmática das células granulocíticas foi observada pela baixa IMF do SSC. Mielopoiese, presença de aberrações fenotípicas e o padrão maturacional também foram avaliados nestas células. Todos os pacientes com SMD tiveram algum tipo de alteração nas populações avaliadas pela CF. Os eritroblastos apresentaram perfil maturacional alterado em 20 casos (64,4%) e os monócitos em 22 (68,7%). Os granulócitos em 7 casos tiveram 1 anormalidade imunofenotípica, em 9 pacientes houve 2, em 9 casos 3 e em 2 pacientes 4 expressões anormais foram encontradas. O SSC esteve alterado em 7 casos (23%), os perfis do CDI6/CDl1b e CDI6/CD13 em 18 (56,2%) e 20 casos (66%), respectivamente, , o CD13 em 22 (73%), o CDllb em 17 (56%), , o CD16 em 11 (36%), o CD45 em 17 (56%), e por fim a deficiência do CDlO encontrada em 3 casos (10,3%). Assincronismo maturacional na população granulocítica foi encontrado enquanto nasDNCs a maturação granulocítica foi mantida. Os monócitos tiveram número aumentado tanto nos pacientes com SMD quanto nos com DNCs. A expressão do SSC, CD13 e CDl1b foram similares nos 3 grupos. CD64 esteve aumentado nos 2 grupos de pacientes enquanto o CD16 apenas na SMD. O CD45 esteve diminuído somente no grupo das DNCs. Os linfócitos B nos pacientes AREB tiveram uma diminuição intensa em relação aos outros subtipos FAR A maturação B está comprometida na SMD tanto numericamente quanto na expressão antigênica dos grupos de baixo e alto risco. Uma aberração fenotípica CD19+/cCD79a-foi encontrada nas células B na SMD mas não nos controles. As células T não tiveram alterações consideráveis. Os mieloblastos foram analisados nos dot plots CD16/CD11b e CD16/CD13 e CD34. Houve uma correlação entre a porcentagem de blastos visualizados pela morfologia (mielograma) com os do dot plot CD16/CD13 e número de células CD34 positivas, mas não com aqueles quantificados pelo dot plot CD16/CDllb. A técnica da CF pôde demonstrar presença de assincronismo maturacional, aberrações fenotípicas, granulopoiese alterada e utilidade na detecção de anormalidades imunofenotípicas na SMD. Além disso, possibilita monitorar a evolução da doença, observada pelo aumento de blastos na MO, e é capaz de diferenciar a SMD das citopenias periféricas não-clonais / Abstract: Myelodysplastic syndromes (MDSs) are characterized by abnormalities in proliferation, apoptosis and maturation of the hemopoietic cell lines. MDS is known by bone marrow (BM) celIs abnormalities identified by morphology. Although MDS diagnostic criteria are well established, flow cytometry (FCM) technique has been explored. Even so, non-clonal disorders that present periphera1 cytopenias such as MDS can difficult the diagnostic, mainly in MDS cases with normal karyotype. lnitially, we analyzed the erythroid, granulocytic and monocytic lineages maturation patterns, and the blastic population in BM from patients with MDS and compared them with normal BM (BM transplantation donors) and patients with pancytopenia due to non-clonal diseases (NCD). MDS are considered as hematopoietic myeloid stem celIs clonal disorders. However, accumulating evidence support that more immature stem celI, which has ability to differentiate into both myeloid and lymphoid celIs, could origin the disease. BM cell populations were separated in CD45/side scatter (SSC) plot. Staining intensity quantitative pattems assessment for CD45, CDI6, CD13, CDllb, CDIO, CD34 and CD64 were performed in 32 MDS BM cases and compared with 10 non-clonal diseases and 11 contrals. Granulocytic and monocyticabnormalities were identified per case and with 2 or more detected alterations. Antigenic expression pattems were determined during maturation. CDI6/CDI3, CD16/CDllb and CDIO/CD64plots were used for monitoring of granulocyte maturation and monocytic celIs, CD711GlyA for erythroblastic population and CD34+/SSC for blasts cells. Mostly MDS patients presented some kind of expression abnonnalities: 7 (23%) low SSC, 18 (56.2%) CD16/CDllb and 20 (66%) CDI6/CD13 abnonnal pattems, 1I (36%) CD16, 22 (73%) CD13, 17 (56%) CDllb, 17 (56%) CD45, 3 (10.3%) CDIO deficiency. Monocytes were increased in both MDS and NCD, but increase in expression of CDI6 occurred exclusively in MDS. The monocytes had similar expression in SSC, CD13 and CDllb among 3 groups. CD64 had increased in both patients groups but the CD45 was decreased more pronounciated in NCD. Asynchronous maturation was found in MDS patients, but was maintained in .NCD. Several abnormalities in CD71/Gly A expression were found in erythroblasts in MDS, but they were normal in NCD. Neither GlyA nor CD71 deficiency were observed in NCD. Myeloblastic celIs were analyzed in the CD16/CDllb and CDI6/CDI3 dot plots and CD34 expression. There was positive correlation between blasts percentage with CDI6/CD13 dot plot and absolut number of CD34 positive celIs, but not with those quantified by CDI6/CDllb dot plot. Ongoing the study, specific enumeration and characterization of CD34+/CDI9+ and CD34-/CDI9+ B-cell precursors and mature B-Iymphocytes was performed in all MDS cases by multiparameter FCM. Both quantitative and qualitative immunophenotypic abnormalities involving BM B-cells were shown in B population. CDI9+/cCD79a- phenotype asynchronous antigen expression was detected on CD34+ B-cell precursors but only when detectable levels of those precursos were shown in the MDS BM. There were not any considerable abnormalities for T lymphocytes. Abnormal B-cell maturation in MDS patients were shown by imunophenotypic evidences, and further investigations shall be used to undertand its nature. Concluding, FCM is an useful toei for differential diagnosis between donal and non-clonal disorders / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica

Orientadores : Irene Lorand-Metze, Carmen Silvia Passos Lima / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T16:54:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_Elisangela_M.pdf: 23459196 bytes, checksum: e3c3f69e1b6470bb9cfa7570a9a84ff0 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Síndromes mielodisplásicas (SMD) são um grupo heterogêneo de doenças clonais caracterizadas por citopenias periféricas persistentes de uma ou mais linhagens e com possibilidade para transformação leucêmica. Níveis aumentados de apoptose nas células precursoras hematopoéticas (células CD34l foram observados em pacientes com SMD de baixo risco (AR e ARSA), sugerindo esse mecanismo como o responsável pela hematopoes e ineficaz nessa doença. A Amifostina (AMF) é considerada um agente citoprotetor, com ação antioxidante, potente estimulador da hematopoese normal e supressor apoptótico nos precursores mielodisplásicos. Analisamos a expressão dos marcadores da apoptose, (Fas e FasL) nas células CD34+ em pacientes com SMD de baixo risco, submetidos ao tratamento com a AMF. Foram estudados 17 pacientes, sendo 11AR e 6 ARSA. A resposta terapêutica em relação ao nível da hemoglobina, ao número de neutrófilos e às plaquetas, aos critérios de inclusão e às respostas foi definida pelo protocolo de tratamento da AMF. Dos 17 pacientes tratados, 10 apresentaram critérios de resposta em pelo menos uma série do hemograma após 2 ciclos de AMF, os quais receberam mais 4 ciclos adicionais. Quatro pacientes (3 não respondedores e um respondedor) apresentaram evolução da SMD (aumento de blastos medulares) durante ou após o tratamento. As atipias celulares na medula óssea (MO) e o número de células CD34+ diminuíram nos pacientes respondedores após o ciclo 2. No grupo dos não respondedores não houve alterações significativas em nenhum desses parâmetros. Os pacientes que responderam à amifostina tinham, antes do tratamento, uma percentagem menor de expressão de Fas e FasL nas células CD34+ e de linfócitos na medula óssea em relação aos que não responderam. A percentagem de linfócitos aumentou ainda mais após o tratamento neste último grupo. Esse resultado sugere que, no grupo que não respondeu à amifostina o sistema imune pode estar impedindo a resposta ao tratamento. Esses resultados favorecem a hipótese de que a resposta à AMF é influenciada pela expressão dos marcadores apoptóticos e/ou pela percentagem de linfócitos na MO. A resposta à AMF não depende apenas da supressão apoptótica. Um seguimento maior de pacientes é necessário para observar a durabilidadede resposta / Abstract: Not informed. / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

MOTA, A. G. M. Avaliação dos níveis de interleucina-8 e ativação do fator de transcrição nuclear NF–KB em pacientes portadores de síndromes mielodisplásicas. 2016. 80 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:06Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T16:02:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_agmmota.pdf: 2291506 bytes, checksum: 85df5283bc0894a9480182650b0198db (MD5) Previous issue date: 2016-08-30 / The pathogenesis of myelodysplastic syndromes (MDS) is complex and multifactorial and depends on the interaction between hematopoietic cells and their microenvironment. The definite pathogenetic mechanisms are still not fully understood. Objectives: (a) To evaluate CXC chemokine ligand 8 (CXCL8 or IL-8) plasma levels and nuclear transcription factor kappa B activation (NF-kB) in patients with MDS and the possible associations with clinicopathologic variables. (b) To test possible correlation between IL-8 and NF-kB. Patients and methods: A total of 25 adults de novo MDS patients (4 RARS, 16 RCDM, 1 RAEB-I, 4 RAEB-II) were analyzed according to WHO classification and IPSS-R. Sex and age-matched healthy elderly volunteers were included as controls. IL-8 analysis was performed by Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay kit BD OptEIA and DNA binding activity of NF-kB p65 was measured using TransAM NF-kB p65 kits®. Results: MDS patients showed higher level of IL-8 when compared to controls(p=0,0068). Patients aged 75 and above also showed significant higher levels (p=0,0357). No significant associations were found between level of IL-8 and the variables analyzed. NF-kB activity was significantly elevated in MDS patients when compared to controls (p<0,0001) and higher in patients older than 75 years(p=0,0475). NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin (p=0,042) and higher percentage of blasts (p=0,0282). The study of correlation between IL8 and NF-kB showed a significant positive correlation (r=0.480; p=0.015). Discussion and conclusions: Many unraveled specific pathways involved in the complex pathophysiology of MDS have been recently described, including aberrations in cytokines and their signaling pathways. In this study elevated levels of IL-8 and NF-kB were demonstrated and an elevated NF-kB activity was significantly associated with higher serum ferritin and with blast excess, two markers of bad prognosis. A significant positive correlation between IL-8 and NF-kB was detected, corroborating the emerging concept of the important role of the niche and deregulated inflammatory signaling in MDS phenotype. The best comprehension of these mechanisms favors defining new targets for therapy. / A patogênese da síndrome mielodisplásica (SMD) é complexa e multifatorial e depende da interação entre células hematopoéticas e seu microambiente. Os mecanismos patogênicos envolvidos ainda não são totalmente compreendidos. Objetivos: (a) Avaliar níveis plasmáticos de interleucina-8 (CXCL8 ou IL-8) e a ativação do Fator Nuclear de Transcrição kappa B (NF-kB) em pacientes com SMD e as possíveis associações com variáveis clínico-patológicas. (b) Analisar possível correlação entre a IL-8 e NF-kB. Pacientes e métodos: Um total de 25 pacientes adultos portadores de SMD de novo (4 ARSA, 16 CRDM, 1 AREB-I, 4 AREB-II) foram analisados de acordo com a classificação da OMS e IPSS-R. Voluntários idosos saudáveis pareados por sexo e idade foram incluídos como controles. A análise da IL-8 foi realizada por reação imunoenzimática de acordo com o kit BD OptEIA e a ativação do NF-kB foi medida por quimioluminescência utilizando kit TransAM NF-kB p65. Resultados: Os pacientes com SMD apresentaram maior nível de IL-8 quando comparados aos controles (p=0,0068) e, dentre os pacientes, aqueles com 75 anos ou mais apresentaram níveis significativamente maiores (p=0,0357). Não foram encontradas associações significativas entre o nível de IL-8 e as variáveis analisadas. Nos pacientes com SMD, a ativação do NF-kB foi significativamente maior quando comparada aos controles (p<0,0001) e maior em pacientes com 75 anos ou mais (p=0,0475). Foi encontrada associação significativa entre a atividade de NF-kB e níveis elevados de ferritina sérica (p=0,042) e maior percentual de blastos (p=0,0282). O estudo da correlação entre IL8 e NF-kB mostrou uma correlação moderada, positiva e significativa (r = 0,480; p = 0,015). Discussão e conclusões: Estudos recentes sobre a fisiopatologia complexa da SMD incluem a desregulação de citocinas e suas vias de sinalização. Neste estudo, níveis significantemente elevados de IL-8 e NF-kB foram demonstrados e uma associação de maior ativação de NF-kB foi detectada em pacientes com sobrecarga de ferro e excesso de blastos, dois marcadores de pior prognóstico na doença. Uma correlação positiva entre IL-8 e NF-kB foi observada, corroborando o conceito emergente do papel relevante do microambiente e da sinalização inflamatória aberrante na patogênese da doença. A melhor compreensão desses mecanismos favorece a identificação de novos alvos terapêuticos.

DUARTE, F. B. Estudo molecular do gene TP53 e da expressão da proteína p53 nas características prognósticas de pacientes com síndrome mielodisplásica de baixo risco. 2016. 82 f. Tese (Doutorado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-26T17:13:43Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-10-26T17:13:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-26T17:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_fbduarte.pdf: 1545841 bytes, checksum: 5d8f0dd94203aa2a3a11afaa5c32fc96 (MD5) Previous issue date: 2016-10-11 / The Myelodysplastic Syndrome (MDS) comprises a heterogeneous group of clonal diseases with complex pathogenesis, involving several phases and factors. TP53 gene mutations have been involved in progenitor cell homeostasis alterations with an impact on relevant functions in the development of neoplasms, such as genomic integrity maintenance, cell cycle regulation, apoptosis and inflammatory response. The aim of the study was to investigate the impact of the p53 protein expression, TP53 gene mutations and the R72P polymorphism on patients with low-risk MDS, associating them with clinical markers and prognostic scores and their applicability as an additional criterion to support hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) indication. This is an analytical and prospective study involving 73 patients, of both genders, stratified as low risk, followed at the Outpatient Clinic of Walter Cantídio University Hospital (HUWC) from February 2012 to August 2016. The p53 protein expression was assessed by immunohistochemistry, whereas the mutations and the R72P polymorphism were analyzed by direct sequencing. The statistical analysis used the GraphPad Prism 5.0 software and the significance level was set at p <0.05. Of the 73 patients who participated in the study, 20 (27.4%) were positive for the p53 protein expression. In the group with p53 expression, there was a significant reduction in hemoglobin and hematocrit levels, with increased frequency of fibrosis, hypercellularity and CD34 positivity in megakaryocytes. Of the 73 patients, 35 were screened for mutations in the TP53 gene and R72P polymorphism. Two mutations were identified in the study population, with a frequency of 5.7%. A nonsense mutation was identified for the first time in MDS in a female patient and a missense mutation, not yet reported in the literature, in a male patient. As for the R72P polymorphism, there was a predominance of the G allele and the GG genotype. All patients with "heterozygous" (CG) genotype were males. There was no association between mutations, polymorphism genotypes and clinical and prognostic parameters. During the study follow-up, two patients had indication for hematopoietic stem cell transplantation. One of them was positive for p53 in 40% of granulocytic precursors and died six months after the diagnosis. The second, who was negative for p53 expression and TP53 mutation, was submitted to HSCT and is in a stable condition. The results showed that p53 expression can influence clinical evolution and is associated with poor prognosis even in low-risk patients, reflecting the complexity of MDS and providing subsidies for further studies aiming to clarify the impact of the TP53 gene and the protein expression on the disease origin, progression and its therapeutic management, including HSCT. / A Síndrome Mielodisplásica (SMD) compreende um conjunto heterogêneo de doenças clonais com a patogênese complexa, que envolve várias etapas e fatores. As mutações no gene TP53 têm sido implicadas em alterações na homeostase de células progenitoras, com impacto em funções relevantes no desenvolvimento de neoplasias, como manutenção da integridade genômica, regulação do ciclo celular, apoptose e resposta inflamatória. O objetivo do estudo foi investigar o impacto da expressão da proteína p53, mutações no gene TP53 e do polimorfismo R72P em pacientes com SMD de baixo risco associando-os aos marcadores clínicos e com escores prognósticos e a sua aplicabilidade como critério adicional para auxiliar a indicação do TCTH. Trata-se de um estudo analítico e prospectivo envolvendo 73 pacientes, de ambos os sexos estratificados como de baixo risco, em acompanhamento no ambulatório do Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC), no período de fevereiro de 2012 a agosto de 2016. A expressão da proteína p53 foi avaliada por imunohistoquímica, as mutações e o polimorfismo R72P foram analisados por sequenciamento direto. A análise estatística utilizou o programa GraphPad Prism 5.0 e considerou o nível de significância do p<0,05. Dos 73 pacientes que participaram do estudo, 20 (27,4%) foram positivos para a expressão da proteína p53. No grupo com expressão de p53 houve significativa redução dos níveis de hemoglobina e hematócrito com aumento da frequência de fibrose, hipercelularidade e positividade CD34 em megacariócitos. Dos 73 pacientes, 35 foram analisados quanto a pesquisa da mutação do TP53 e do polimorfismo R72P. Foram identificadas duas mutações na população em estudo, com uma frequência de 5,7%. Uma mutação nonsense foi identificada pela primeira vez na SMD, em um paciente do sexo feminino e uma mutação missense, ainda não descrita na literatura, em um paciente do sexo masculino. Quanto ao polimorfismo R72P, houve uma predominância do alelo G e do genótipo GG. Todos os pacientes com o genótipo “heterozigoto” (CG) foram do sexo masculino. Não houve associação entre as mutações, os genótipos do polimorfismo e as variáveis clínicas e de prognóstico. Durante o seguimento do estudo, dois pacientes apresentaram indicação para o transplante de células tronco hematopoiéticas. Um deles foi positivo para p53 em 40% dos precursores granulocíticos e foi a óbito seis meses após o diagnóstico. O segundo, negativo para a expressão de p53 e mutação TP53, foi submetido ao TCTH, e encontra-se estável. Os resultados mostraram que a expressão de p53 pode influenciar evolução clínica e está associada a pior prognóstico, mesmo em pacientes de baixo risco refletindo a complexidade da SMD e fornecendo subsídios para novos estudos, a fim de esclarecer o impacto do gene TP53 e da expressão da proteína na origem, na progressão da doença e na conduta terapêutica, incluindo o TCTH.