Thesis (M.S. in veterinary science)--Washington State University, August 2008. / Includes bibliographical references (p. 18-19).

Thesis (M.S.)--Auburn University, 2007. / Abstract. Vita. Includes bibliographic references (ℓ. 37-44)

Thesis (M.S. in veterinary science)--Washington State University, August 2009. / Title from PDF title page (viewed on Aug. 7, 2009). "Department of Veterinary Microbiology and Pathology." Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--Washington State University, May 2010. / Title from PDF title page (viewed on June 3, 2010). "College of Veterinary Medicine." Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--Washington State University, December 2008. / Title from PDF title page (viewed on Apr. 29, 2010). "College of Veterinary Medicine." Includes bibliographical references.

A anaplasmose bovina é uma das principais causas de perdas produtivas e mortes no Rio Grande do Sul em rebanhos bovinos. O Anaplasma marginale é o principal agente causador da enfermidade e provoca hipertermia, anemia, prostração, abortos e perdas produtivas nos animais acometidos. Tendo em vista o controle deste hemoparasita em uma propriedade leiteira localizada no município de Eldorado do Sul no Rio Grande do Sul, na qual a incidência da doença era alta, 473 animais foram imunizados com Anaplasma centrale na busca de desenvolvimento cruzado para Anaplasma marginale. No experimento foram verificadas que a incidência que normalmente era acima de 30% na propriedade passou para níveis inferires a 5%. No entanto, foram verificados abortos decorrentes da imunização, principalmente nos animais que possuíam menos de 90 dias de prenhes. Já o número de mortes globais na fazenda caiu consideravelmente tendo em vista que a principal causa de morte era a anaplasmose bovina. Dos animais inoculados com A. centrale em torno de 15% apresentaram sintomatologia clínica da enfermidade e precisaram ser tratados com oxitetraciclina no período entre 15 e 30 dias após a imunização. O custo com tratamento empregado na propriedade posterior à imunização caiu em torno de 85% o que provocou impacto significativo economicamente na propriedade. / Bovine anaplasmosis is a major cause of production losses and deaths in Rio Grande do Sul cattle herds. The Anaplasma is the main causative agent of cattle disease. It causes hyperthermia, anemia, prostration, abortions and reduces milk production in affected animals. In order to control this hemoparasite on a dairy farm located in the municipality of Eldorado do Sul in Rio Grande do Sul, where the disease incidence was high, 473 animals were immunized with Anaplasma centrale in the search for cross-protectiv immunity for Anaplasma marginale. The property anaplasmosis incidence, which usually was above 30%, became 5% after the immunization. However, abortions were observed resulting from innoculaition, especially in animals that had less than 90 days of pregnancy. The global number of deaths on the farm dropped considerably given that the main cause of death was the bovine anaplasmosis. 15% of animals inoculated with A. centrale showed clinical symptoms of the disease between 15 and 30 days after immunization and had to be treated with oxytetracycline . The amount of money spent with anaplasmosis treatment decay 85% after the immunization, which caused significant economic impact on the property.

A anaplasmose bovina é uma das principais causas de perdas produtivas e mortes no Rio Grande do Sul em rebanhos bovinos. O Anaplasma marginale é o principal agente causador da enfermidade e provoca hipertermia, anemia, prostração, abortos e perdas produtivas nos animais acometidos. Tendo em vista o controle deste hemoparasita em uma propriedade leiteira localizada no município de Eldorado do Sul no Rio Grande do Sul, na qual a incidência da doença era alta, 473 animais foram imunizados com Anaplasma centrale na busca de desenvolvimento cruzado para Anaplasma marginale. No experimento foram verificadas que a incidência que normalmente era acima de 30% na propriedade passou para níveis inferires a 5%. No entanto, foram verificados abortos decorrentes da imunização, principalmente nos animais que possuíam menos de 90 dias de prenhes. Já o número de mortes globais na fazenda caiu consideravelmente tendo em vista que a principal causa de morte era a anaplasmose bovina. Dos animais inoculados com A. centrale em torno de 15% apresentaram sintomatologia clínica da enfermidade e precisaram ser tratados com oxitetraciclina no período entre 15 e 30 dias após a imunização. O custo com tratamento empregado na propriedade posterior à imunização caiu em torno de 85% o que provocou impacto significativo economicamente na propriedade. / Bovine anaplasmosis is a major cause of production losses and deaths in Rio Grande do Sul cattle herds. The Anaplasma is the main causative agent of cattle disease. It causes hyperthermia, anemia, prostration, abortions and reduces milk production in affected animals. In order to control this hemoparasite on a dairy farm located in the municipality of Eldorado do Sul in Rio Grande do Sul, where the disease incidence was high, 473 animals were immunized with Anaplasma centrale in the search for cross-protectiv immunity for Anaplasma marginale. The property anaplasmosis incidence, which usually was above 30%, became 5% after the immunization. However, abortions were observed resulting from innoculaition, especially in animals that had less than 90 days of pregnancy. The global number of deaths on the farm dropped considerably given that the main cause of death was the bovine anaplasmosis. 15% of animals inoculated with A. centrale showed clinical symptoms of the disease between 15 and 30 days after immunization and had to be treated with oxytetracycline . The amount of money spent with anaplasmosis treatment decay 85% after the immunization, which caused significant economic impact on the property.

A anaplasmose bovina é uma das principais causas de perdas produtivas e mortes no Rio Grande do Sul em rebanhos bovinos. O Anaplasma marginale é o principal agente causador da enfermidade e provoca hipertermia, anemia, prostração, abortos e perdas produtivas nos animais acometidos. Tendo em vista o controle deste hemoparasita em uma propriedade leiteira localizada no município de Eldorado do Sul no Rio Grande do Sul, na qual a incidência da doença era alta, 473 animais foram imunizados com Anaplasma centrale na busca de desenvolvimento cruzado para Anaplasma marginale. No experimento foram verificadas que a incidência que normalmente era acima de 30% na propriedade passou para níveis inferires a 5%. No entanto, foram verificados abortos decorrentes da imunização, principalmente nos animais que possuíam menos de 90 dias de prenhes. Já o número de mortes globais na fazenda caiu consideravelmente tendo em vista que a principal causa de morte era a anaplasmose bovina. Dos animais inoculados com A. centrale em torno de 15% apresentaram sintomatologia clínica da enfermidade e precisaram ser tratados com oxitetraciclina no período entre 15 e 30 dias após a imunização. O custo com tratamento empregado na propriedade posterior à imunização caiu em torno de 85% o que provocou impacto significativo economicamente na propriedade. / Bovine anaplasmosis is a major cause of production losses and deaths in Rio Grande do Sul cattle herds. The Anaplasma is the main causative agent of cattle disease. It causes hyperthermia, anemia, prostration, abortions and reduces milk production in affected animals. In order to control this hemoparasite on a dairy farm located in the municipality of Eldorado do Sul in Rio Grande do Sul, where the disease incidence was high, 473 animals were immunized with Anaplasma centrale in the search for cross-protectiv immunity for Anaplasma marginale. The property anaplasmosis incidence, which usually was above 30%, became 5% after the immunization. However, abortions were observed resulting from innoculaition, especially in animals that had less than 90 days of pregnancy. The global number of deaths on the farm dropped considerably given that the main cause of death was the bovine anaplasmosis. 15% of animals inoculated with A. centrale showed clinical symptoms of the disease between 15 and 30 days after immunization and had to be treated with oxytetracycline . The amount of money spent with anaplasmosis treatment decay 85% after the immunization, which caused significant economic impact on the property.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-29T17:59:17Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Flábio Ribeiro de Araújo.pdf: 1589352 bytes, checksum: eef290e5cf5f5ad0b3942824ce7c94fd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T17:59:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Flábio Ribeiro de Araújo.pdf: 1589352 bytes, checksum: eef290e5cf5f5ad0b3942824ce7c94fd (MD5) / FUNDECT;CNPq / A anaplasmose é uma importante enfermidade de bovinos de áreas tropicais e subtropicais do mundo, causada pela riquétsia intra-eritrocítica Anaplasma marginale. A vacinação tem sido a forma mais econômica e eficiente de controlar a anaplasmose bovina. No entanto, os métodos de imunização tradicionais, que utilizam organismos provenientes de eritrócitos infectados, apresentam limitações em seu uso, razão pela qual, estudos para o descobrimento de novos imunógenos são necessários. Nos últimos anos, esses estudos têm se concentrado nas proteínas de membrana da riquétsia, sobretudo MSP1a e MSP2, as quais mostraram-se promissoras em ensaios de proteção com as proteínas nativas, utilizadas isoladamente. Este trabalho teve como objetivo geral testar a imunoproteção induzida pelas proteínas de membrana MSP1a e MSP2 recombinantes de A. marginale, associadas com adjuvante CpG ODN 2006, frente a desafio heterólogo e avaliar a resposta imune gerada pela imunização. Para tanto, diversas etapas experimentais foram executadas, desde a clonagem e expressão dos genes que codificam as duas proteínas, padronização dos testes de diagnóstico usados no estudo, imunização e desafio dos animais experimentais e acompanhamento das respostas imunes humoral e celular. Os ELISAS indiretos baseados em MSP1a e MSP2 recombinantes apresentaram sensibilidades de 99,0% e especificidades de 100% (para ambos os testes). A PCR para o gene msp5 da riquétsia detectou infecções ainda no período pré-patente, antes da conversão sorológica. Os bovinos da raça Aberdeen Angus foram imunizados três vezes com 200 μg de MSP2 e/ou MSP1a recombinantes (produzidas a partir do isolado Pernambuco – Zona da Mata), associadas com CpG ODN 2006 e alúmen. Posteriormente, foram desafiados com 3 x 107 eritrócitos infectados do isolado heterólogo de A. marginale (Mossoró - Rio Grande do Norte). Os animais experimentais apresentaram quadro clínico de anaplasmose (redução do volume globular, febre e riquetsemias detectáveis por distensões sangüíneas coradas). Não foram detectadas diferenças significativas entre os grupos imunizados e os controles (que receberam CpG ODN 2006 e alúmen ou alúmen isoladamente) quanto ao percentual de redução do volume globular, riquetsemias máximas e temperaturas retais máximas, indicando que as imunizações não foram protetoras. A despeito da significativa produção de IgG total contra MSP1a e MSP2, detectada no dia do desafio, os animais imunizados apresentaram produção significativa de 14 IgG2 apenas contra MSP1a. Não foi possível detectar resposta proliferativa de células mononucleares de sangue periférico, tanto no momento do desafio quanto após o pico das riquetsemias. Possivelmente, a ausência de proteção deveu-se a uma deficiente ou ausente estimulação de imunidade celular nos bovinos imunizados.

O patógeno intracelular Anaplasma marginale (Rickettsiales: Anaplasmataceae) é endêmico em muitas regiões tropicais e subtropicais do mundo. A infecção do bovino com A. marginale causa anaplasmose bovina, devido à replicação do microrganismo nos eritrócitos do hospedeiro, sendo responsável por consideráveis perdas econômicas à criação de gado. A transmissão de A. marginale para bovinos ocorre biologicamente por carrapatos ou mecanicamente por insetos hematófagos e instrumentos contaminados com sangue infectado. Uma cepa de A. centrale, naturalmente atenuada tem sido usada extensivamente para controle da anaplasmose bovina em diversas regiões do mundo. A vacina de A. centrale é produzida em bovinos esplenectomizados oriundos de áreas livres de carrapato, todavia uma contaminação acidental por A. marginale é um risco durante o processo de produção. Por este motivo, a produção da vacina deve ser avaliada, para garantir uma amostra de A. centrale livre de contaminação. Durante a fase aguda da doença, o diagnóstico é realizado pela observação de A. marginale por esfregaço sanguíneo, porém durante a fase crônica, este método não tem a sensibilidade necessária para detectar animais que portam níveis baixos de parasitemia. Sendo, o método de detecção molecular o mais indicado para detectar tanto anaplasmose aguda quanto crônica e diferenciar entre A. marginale e A. centrale. Deste modo, no presente trabalho um ensaio de PCR foi padronizado para detectar e diferenciar A. marginale de A. centrale em amostras de sangue bovino. Foram utilizados primers para o gene msp4 de Anaplasma sp. para a amplificação do material obtido a partir de uma extração de DNA de sangue congelado de bovinos experimentalmente infectados com A. centrale e A. marginale. A PCR se mostrou específica, sem amplificar o DNA de outros hemoparasitas. O teste se mostrou sensível para detectar a quantidade 0,25 pg para o DNA de A. centrale e 0,125 pg para detectar o DNA de A. marginale, mostrando-se útil para detectar animais à campo persistentemente infectados com A. marginale e vacinados com A. centrale, os quais foram indetectáveis pela microscopia óptica. Em resumo, a PCR é um teste mais sensível e específico que a microscopia óptica para detectar e diferenciar as espécies de A. centrale e A. marginale, mostrando-se útil para auxiliar no controle de qualidade durante a produção da vacina. / The intracellular pathogen Anaplasma marginale (Rickttsiales: Anaplasmataceae), is endemic in many tropical and subtropical regions of the world. Infection of cattle with A. marginale causes bovine anaplasmosis, due to replication of the microrganism inside the erythrocytes being responsible for considerable economic losses to livestock. The transmission of A. marginale to cattle occurs biologically by ticks or mechanically by blood sucking insects and instruments contaminated with infected blood. A strain of A. centrale, naturally attenuated, has been used extensively to control bovine anaplasmosis in various regions of the world. The vaccine with A. centrale is produced in splenectomized cattle from tick-free areas, however accidental contamination by A. marginale represents a risk during the production process. Therefore, production of the vaccine should be evaluated to ensure a sample of A. centrale free of contamination. During the acute phase of the disease, diagnosis is made by observing A. marginale by blood smear, but during the chronic phase, this method is not as sensitivity as required to detect animals that carry low levels of parasitemia. Being, the molecular detection method more appropriate for detecting both acute and chronic anaplasmosis and differentiate between A. centrale and A. marginale. Thus, in this study a PCR assay was standardized to detect and differentiate A. centrale and A. marginale in samples of bovine blood. Primers for msp4 gene of Anaplasma sp. were used for amplification of material obtained from a DNA extraction of frozen blood from bovines experimentally infected with A. centrale and A. marginale. The PCR showed to be specific, do not amplifying the DNA of other hemoparasites. The test was sensitive to detect the amount of 0.25 pg of DNA from A. centrale and 0.125 pg of DNA from A. marginale, proving to be useful for detecting field animals persistently infected with A. marginale and vaccinated with A. centrale, which were undetectable by optical microscopy. Briefly, PCR is a more sensitive and specific test than the optical microscopy analysis to detect and differentiate the species A. centrale and A. marginale showing to be useful to assist the quality control during the vaccine production.