Tesis Presentada a la Universidad de Chile para optar al Grado de Doctor en Farmacología / El inflamasoma NLRP3 es un complejo multiproteico ampliamente estudiado en el sistema inmune. Las investigaciones realizadas se han centrado, especialmente en estos últimos años, en su participación en el inicio y desarrollo de enfermedades crónicas no transmisibles. Este complejo se compone de tres proteínas diferentes: NLRP3 (receptor intracelular), ASC (proteína adaptadora) y caspasa-1 (enzima), y posee la peculiaridad de que su activación está comandada por dos diferentes señales. La primera señal corresponde a patrones moleculares asociados a daño (DAMPS) o a patógenos (PAMPS) que generan la activación de receptores de reconocimiento de patrones (PRR) ubicados en la membrana plasmática, como los receptores de tipo Toll (TLR). La activación de estos receptores, induce la síntesis de la citoquina blanco de caspasa-1: pro-IL-1β. La segunda señal son moléculas muy específicas que generan, indirectamente, la activación de NLRP3, lo que conlleva el reclutamiento de ASC y pro-caspasa-1 y la activación de caspasa-1, quedando esta enzima lista para escindir su blanco: pro-IL-1β a IL-1β. Una vez activada IL-1β, es secretada hacia el medio extracelular. La activación del inflamasoma a nivel cardiaco es un hecho poco comprendido. Se ha establecido que los fibroblastos cardíacos (FC) serían las células que activarían su propio inflamasoma NLRP3 y secretarían IL-1β hacia el medio extracelular en modelos de daño cardiaco. No obstante, se desconocen señales propias del corazón que generen la activación del inflamasoma. En este trabajo se plantea que Angiotensina II (Ang II) sería una señal 2 de activación del inflamasoma en FC. Este planteamiento surgió debido a que los FC presentan receptores de Ang II, los que activados llevan a un aumento citosólico de la concentración de Ca2+ (proveniente desde el retículo), evento que ha sido relacionado con la activación de NLRP3 en células inmunes. La hipótesis de este trabajo de tesis establece que Angiotensina II a través de la vía transduccional AT1R/PLC/IP3R/Ca+2 activa el inflamasoma NLRP3 en fibroblastos cardiacos, conduciendo a la escisión y secreción de IL-1β. Mientras que los objetivos se resumen en, investigar si las proteínas del inflamasoma NLRP3 y pro-IL-1β son expresadas en FC, estudiar si Ang II activa al inflamasoma NLRP3, a través de la cascada transduccional AT1R/PLC/IP3R/Ca+2 y evaluar si Ang II induce la escisión y secreción de IL-1β hacia el medio extracelular. A partir de cultivos primarios de FC de rata neonata, se estableció que los FC expresan los componentes del inflamasoma, y que éstos no son inducidos por lipopolisacárido (LPS) 1 μg/mL (señal 1). Asimismo, se determinó que pro-IL-1β presenta niveles basales muy bajos y que su expresión es inducida por LPS de manera tiempo dependiente. Se realizaron tres metodologías distintas para demostrar que Ang II 1 μM activa el inflamasoma: 1) Por inmunocitoquímica se demostró que existe colocalización de NLRP3 y ASC al estimular los FC con Ang II; 2) Por cuantificación de la actividad de caspasa- 1, se demostró que Ang II estimula la actividad de caspasa-1 respecto de los controles y 3) Por cuantificación de la secreción de IL-1β por ELISA, se demostró que Ang II estimula la secreción de IL-1β hacia el medio extracelular. Para dilucidar la cascada de señalización responsable de activar el inflamasoma, se intervino utilizando los inhibidores Losartán, U73122 y 2-APB, y el quelante de Ca2+ BAPTA-AM. A partir los resultados obtenidos se demostró que Ang II induce la activación de inflamasoma a través de la señalización comprendida por el receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1), fosfolipasa C (PLC), receptor de inositol trifosfato (IP3R) y Ca2+. Adicionalmente, se demostró por silenciamiento génico de NLRP3 con siRNA y por el uso de un bloqueador irreversible de caspasa-1, YVAD, que el inflamasoma activado por Ang II sería el conformado por NLRP3 y caspasa-1. Finalmente, se pudo demostrar que la secreción de IL-1β inducida por Ang II, sería a través de un mecanismo no clásico de secreción de proteínas, donde estaría involucrado el transporte vesicular. Se concluyó que Ang II a través de la vía transduccional AT1R/PLC/IP3R/Ca+2 activaría el inflamasoma NLRP3 en FC, conduciendo a la secreción, por transporte vesicular, de IL-1β hacia el medio extracelular / The NLRP3 inflammasome is a multiprotein complex studied extensively in the immune system. The research has been carried out, especially in recent years, in its participation in the initiation and development of chronic non-communicable diseases. The NLRP3 inflammasome is consists of three different proteins: NLRP3 (intracellular receptor), ASC (adapter protein) and caspase-1 (enzyme), and has the peculiarity that its activation is commanded by two different signals. The first signal corresponds to damage associated molecular patterns (DAMPs) or pathogen (PAMPS) that generates the activation of pattern recognition receptor (PRR) located on the plasma membrane as Toll-like receptor (TLR). Activation of these receptors induces the synthesis of the target cytokine of caspase-1: pro- IL-1β. The second signals are very specific molecules that indirectly activate NLRP3, leading to the recruitment of ASC and pro-caspase-1 and activation of caspase-1, being this enzyme ready to cleave its target: pro-IL-β to IL-1β. Once activated IL-1β is secreted into the extracellular medium. Inflammasome activation at cardiac level is a little understood fact. It has been established that cardiac fibroblasts (CF) would activate its NLRP3 inflammasome and secrete IL-1β into the extracellular environment in models of heart damage. However, own heart signals that generate activation inflammasome are unknown. This study suggested that Ang II would be a signal 2 for the activation of the inflammasome in FC. This approach emerged because the CF express Ang II receptors, which lead to increase cytosolic Ca2 + concentration (coming from the reticle), a phenomenon that has been linked to the activation of NLRP3 in immune cells. The hypothesis of this thesis establishes that Angiotensin II through the signal transduction pathway AT1R/PLC/IP3R/Ca+2 activates the inflammasome NLRP3 in cardiac fibroblasts, leading to cleavage and secretion of IL-1β. While the objectives are summarized in, to investigate whether proteins inflammasome NLRP3 and pro-IL-1β are expressed in FC, to study whether Ang II activates the inflammasome NLRP3, through the signal transduction cascade AT1R/PLC/IP3R/Ca+2 and to evaluate whether Ang II induces excision and secretion of IL-1β into the extracellular environment. Previously, from primary cultures of neonatal rat CF, it was established that the CF express inflammasome components and that they are not induced by LPS (signal 1). It was also determined that pro-IL-1β has very low basal levels and that its expression is induced by LPS in a time-dependent manner. Three different methodologies to demonstrate that Ang II activates the inflammasome were performed.1) Immunocytochemistry showed that NLRP3 and ASC colocalizate after stimulating CF with Ang II. 2) Quantitation of caspase-1 activity was demonstrated that Ang II induces an increase in caspase-1 activity compared to controls. 3) Finally, the secretion of IL-1β was quantified by ELISA, demonstrating that Ang II induced IL-1β secretion to the extracellular medium. To elucidate the signaling pathway triggered by Ang II, the signaling was intervened using inhibitors: Losartan, U73122 and 2-APB; and the Ca2+ chelator BAPTA-AM. The results obtained demonstrated that Ang II induce the activation of the inflammasome through signaling conformed by the angiotensin II receptor type 1 (AT1), phospholipase C (PLC), inositol triphosphate receptor (IP 3 R) and Ca2+. Additionally, silencing NLRP3 with siRNA and using an irreversible inhibitor of caspase-1 YVAD, the inflammasome activated by Ang II is the conformed by NLRP3 and caspase-1. Finally, was demonstrated that the IL-1β secretion induced by Ang II, would be through a non-classical protein secretion mechanism, which would be involved the vesicular transport. We conclude that Ang II through the signal transduction pathway AT1R / PLC / IP3R / Ca+2 activates the NLRP3 inflammasome in CF, leading to the secretion of IL-1β by vesicular transport to the extracellular medium / Conicyt; Fondap; Fondecyt / 2017

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T19:38:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 262372.pdf: 1124134 bytes, checksum: d9aa69015b1a7db3d97d6d6af8598eb0 (MD5) / A sepse consiste em uma síndrome de resposta inflamatória sistêmica secundária à infecção. A angiotensina II além de ser um importante vasoconstritor liberado durante a sepse, também possui efeitos pró-inflamatórios. O tratamento de animais que tiveram a condição de sepse induzida através da cirurgia de ligadura e perfuração do ceco (CLP), com as doses de 0,25 mg/kg ou 15 mg/kg de losartan, um antagonista dos receptores AT1 de angiotensina, duas horas após a CLP, mostrou nas análises feitas 4 horas após o tratamento, que ambas as doses reduziram a inflamação nos animais sépticos. Nenhuma das doses alterou a hiporreatividade a fenilefrina. A maior dose causou queda da pressão arterial média (PAM) e piora da função renal. Por outro lado, análises feitas 22 horas após o tratamento mostraram que a menor dose não interferiu na PAM, melhorou a hiporreatividade aos agentes vasoconstritores fenilefrina e angiotensina II e permaneceu reduzindo a inflamação. Esta dose não alterou os níveis plasmáticos de creatinina, uréia e NOx que se encontravam elevados nos animais sépticos. A maior dose promoveu uma considerável queda da PAM dos animais e piora da hiporreatividade a fenilefrina e a angiotensina II. Como comparativo, o tratamento precoce dos animais sépticos com a dose de 0,25 mg/kg de enalapril (inibidor da enzima conversora de angiotensina) mostrou os mesmos resultados apresentados pelo losartan. A administração das duas doses de losartan, em momento tardio da sepse (8 horas após a CLP) com análises feitas 16 horas após o tratamento, mostrou que a dose baixa não melhorou e a maior dose permaneceu piorando a hiporreatividade a fenilefrina e a angiotensina II. Portanto, o tratamento precoce com uma baixa dose de losartan foi capaz de melhorar alguns parâmetros na sepse. Assim, uma interferência de forma adequada no sistema renina-angiotensina pode fornecer importantes ferramentas que auxiliem na compreensão e no tratamento da sepse.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2014-10-10T19:10:29Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÂO_ParticipaçãoReceptoresMas.pdf: 1299545 bytes, checksum: dbc917b243f1abb0590ed5476f4c4fb0 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-11-07T12:24:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÂO_ParticipaçãoReceptoresMas.pdf: 1299545 bytes, checksum: dbc917b243f1abb0590ed5476f4c4fb0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÂO_ParticipaçãoReceptoresMas.pdf: 1299545 bytes, checksum: dbc917b243f1abb0590ed5476f4c4fb0 (MD5) Previous issue date: 2014 / As ações da angiotensina II (ANG II) tanto renais quanto na indução da sede e do apetite ao sódio são bem conhecidas, porém, apesar de suas ações renais, pouco se sabe sobre as ações da angiotensina 1-7 (ANG 1-7) na regulação do equilíbrio hidroeletrolítico. Portanto, neste trabalho foi investigado um possível envolvimento dos receptores MAS da ANG 1-7 na regulação da sede e do apetite ao sódio (NaCl 1,8%). Para tanto, ratos Wistar (280g a 320g) foram anestesiados (50 mg/ kg de cetamina e 0,5 mg/ kg de xilasina.) e submetidos a uma cirurgia encefálica para implante de uma cânula de aço inoxidável no ventrículo lateral (VL). Após 5 dias de recuperação, os animais foram submetidos a um dos quatro protocolos descritos a seguir: privação hídrica de 24h; tratamento com furosemida 10 mg/kg /captopril 5 mg/kg (FURO/CAP); gavagem (administração intragástrica de NaCl 12%); ou depleção de sódio por 24 h (injeção sc de FURO 10 mg/kg + retirada da ração). Em todos os protocolos o rato recebeu injeção intracerebroventricular (icv) de diferentes concentrações (1,5; 3; 6 e 12 nmol/3μL) do antagonista do receptor MAS da ANG 1-7 (A779) ou PBS e 15 min depois, foram feitas as medidas de ingestão (água e/ou NaCl 1,8%) ao longo de 120 ou 240 min (teste da sede e/ou do apetite ao sódio) e 24 h. Os resultados foram expressos com média ± erro padrão da média. Para as análises estatísticas foi utilizada ANOVA de uma via ou de duas vias de medidas repetidas seguida do pós-teste Newman Keuls, sendo considerado significante para p < 0,05. O tratamento com A779 icv não afetou a ingestão de água e sódio induzida pela privação hídrica ou tratamento com FURO/CAP (protocolos que induzem tanto ingestão de água quanto de sódio), todavia A779 foi capaz de reduzir a ingestão de água induzida pela gavagem de NaCl 12% (desidratação intracelular: 3,1±1,4; 2,8±1,6; 3,3±1,0 vs. PBS: 9,3±2,3 ml/120 min, respectivamente para A779 de 3, 6, 12 nmol/3μL) e a ingestão de NaCl 1,8% induzida pela depleção de sódio por 24 h (desidratação extracelular: 2±1,2 vs. PBS: 7,0±1,8 mL/120 min para A779 na concentração de 3 nmol). Uma vez que é sabido que a ANG II tem um importante papel na sede e no apetite ao sódio, para se certificar da especificidade do A779, foi investigado se o A779 (6nmol/3μL) poderia interferir no efeito dipsogênico da ANG II e os resultados mostraram que a prévia administração de A779 não foi capaz de afetar a ingestão de água induzida pela ANG II (PBS + ANG II: 11,8±1,8 vs A779 + VIII ANG II: 10,7±1,7 mL/2h). Em relação à ingestão de 24 h, considerando todos os protocolos realizados, apenas no protocolo para se estudar a especificidade do A779, foi observado um aumento da ingestão de água (24 h), sendo que todos os tratamentos foram diferentes do grupo controle (PBS + salina). Considerando os resultados obtidos foi observado que o bloqueio dos receptores MAS reduziu a ingestão de água induzida por desidratação intracelular e a de sódio induzida pela desidratação extracelular, sugerindo um possível envolvimento da ANG 1-7 nestes comportamentos ingestivos. __________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The renal actions of angiotensin II (ANG) II and its involvement on thirst and sodium appetite are well known, however, despite its renal effects, little is known about the actions of angiotensin 1-7 (ANG 1-7), in the regulation of fluid and electrolyte balance. Therefore, in this study it was investigated a possible involvement of the MAS receptor of ANG 1-7- on thirst and sodium appetite (hypertonic solution of sodium chloride - 1.8% NaCl) regulation. For this purpose, Wistar rats (280g to 320g) were anesthetized (50 mg/kg ketamine and 0.5 mg/kg xylazine) and subjected to a brain surgery for implanting a stainless steel cannula into the lateral ventricle (LV). After 5 days of recovery, animals were subjected to one of the four protocols as followed described: 24h water deprivation; treatment with furosemide 10 mg/kg /captopril 5 mg/kg (FURO CAP); gavage (intragastric administration of 12% NaCl); or 24 h sodium depletion (sc injection of FURO 10 mg/kg + food removed). In all protocols the rat received intracerebroventricular (icv) injection of different concentrations concentrações (1,5; 3; 6 e 12 nmol/3μL) of MAS receptor antagonist of ANG 1-7 (A779) or PBS and 15 min later, the intake measures (water and / or NaCl 1.8%) were made during 120 or 240 min ( thirst and/or sodium appetite test) and 24 h. Results were expressed as mean ± standard error of the mean. For statistical analyzes it was used one-way or two-way repeated measures ANOVA followed by Newman Keuls post-test. It was considered statistically significant at p <0.05. Treatment with icv A779 did not affect water and sodium intakes induced by water deprivation or treatment with FURO /CAP (protocols that induce both water and sodium intake). On the other hand, A779 was able to reduce water intake induced by 12% NaCl gavage (intracellular dehydration: 3.1 ± 1.4, 2.8 ± 1.6, 3.3 ± 1.0 vs. PBS: 9.3 ± 2.3 ml/120 min, respectively, to 3, 6, 12 nmol/3μL of A779 ) and sodium depletion-induced sodium intake (extracellular dehydration: 2 ± 1.2 vs PBS: 7.0 ± 1.8 mL/120 min for 3 nmol of A779 ). Since it is known that ANG II plays an important role on thirst and sodium appetite, to ensure the specificity of A779, it was investigated if A779 (6nmol/3μL) could interfere on the dipsogenic effect of ANG II. The results showed that previous administration of A779 was not able to affect water intake induced by Ang II (PBS + ANG II: 11.8 ± 1.8 vs. A779 + ANG II: 10.7 ± 1.7 mL/2h). In relation to 24 h water and sodium intakes, considering all the protocols tested, only in the protocol to study the specificity of A779 it was observed an increase on water intake (24 h) in all treatments when compared to control group (PBS + saline). Considering the results, it was observed that the blockage of MAS receptors reduced water intake induced by intracellular dehydration and sodium intake induced by extracellular dehydration, suggesting a possible involvement of ANG 1-7 on these ingestive behaviors.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos y miofibroblastos cardiacos son elementos claves en el desarrollo del remodelado cardiaco después de un infarto agudo. Una regulación controlada del crecimiento de la población de fibroblastos y miofibroblastos es importante para una correcta cicatrización y mantención de la función cardiaca. Distintas evidencias muestran que los niveles de angiotensina II (Ang II) y del receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1R) aumentan después del infarto agudo al miocardio. Por esto, falta saber que funciones pueden ser reguladas por Ang II en estas células post-infarto al miocardio cuando se sobre expresan dichos receptores. Nuestro modelo experimental consideró la sobre expresión del AT1R en miofibroblastos cardiacos de ratas neonatas (MCN) mediante el uso de adenovirus y determinar si Ang II modifica su comportamiento celular y la secreción de proteínas de la matriz extracelular (MEC). Nuestros resultados mostraron que Ang II aumentó la adhesión de las células a proteínas de matriz, como colágeno y fibronectina, y también produjo un aumento en la capacidad contráctil de MCN. Ang II no modificó la proliferación y migración celular, sin embargo, al sobre expresar el receptor AT1, observamos que Ang II disminuyó la viabilidad celular, la cual ocurrió luego de 48 h de transducción, afectando la migración, proliferación, contracción y adhesión celular. Por otra parte, Ang II estimuló la secreción de proteínas de matriz, colágeno tipo I y fibronectina, aumentando su expresión al sobre expresar el AT1R en MCN. Además se observó que Ang II disminuyó la actividad de metaloproteinasa-2 (MMP-2) en MCN que sobre expresan el receptor AT1, resultado que junto con el anterior nos indica que se favorece la deposición de proteínas de matriz, aumentando la secreción y disminuyendo su degradación. Los resultados obtenidos muestran que Ang II a través del AT1R regula en el miofibroblasto la secreción de proteínas de matriz, disminuyendo su degradación, promoviendo la adhesión a proteínas de la MEC y aumentando la contracción de MCN, todas funciones que apuntan a la reparación del tejido cardiaco después de un infarto / Cardiac fibroblasts and myofibroblasts are key elements of the development of cardiac remodeling after myocardial infarction. A tight regulation of fibroblast and myofibroblast growth is important to a correct wound healing and to maintain cardiac function. Several lines of evidence have showed an increase in angiotensin II (Ang II) and AT1R levels after myocardial infarction. Thus angiotensin II may play a pivotal role in the regulation of number and function of theses cells. Our experimental model considered over-expressing AT1R in neonatal rat cardiac myofibroblats (MCN) using adenovirus and to evaluate whether Ang II modifies cell behavior and extracellular matrix (ECM) proteins secretion. Our results show that the stimulation with Ang II increased the adhesion of the cells to ECM proteins, as collagen and fibronectin, and also produced an increase in MCN's contractile capacity. Ang II did not modify proliferation and cellular migration; nevertheless, in MCN over-expressing AT1R, we observe that Ang II diminished cellular viability, which happened after 48 h of transduction, affecting the migration, proliferation, contraction and cellular adhesion. On the other hand, Ang II promoted the secretion of ECM proteins, collagen type I and fibronectin, increasing their expression in MCN over-expressing the AT1R. In addition we observed that Ang II diminished the activity of metalloproteinase-2 (MMP-2) in MCN that over-express the AT1 receptor, and this together with the previous result, indicates that the deposition of ECM proteins is favored, increasing the secretion and diminishing their degradation. The obtained results demonstrate that the myofibroblast is a key piece in wound healing after myocardial injury, and that Ang II regulates great part of this process, via AT1 receptor, increasing the secretion of ECM proteins and diminishing their degradation, promoting the adhesion to ECM proteins and increasing MCN's contraction, all functions that point at the repair of the cardiac tissue after a heart attack

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-21T18:27:39Z No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-08-19T13:22:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-19T13:22:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_JulianaOliveiradeToledoNóbrega.pdf: 2573059 bytes, checksum: 6910a36f8420ecb7db795151e7bbe6ef (MD5) / A angiotensina II, o princípio ativo do sistema renina-angiotensina (SRA), além de desempenhar um papel na regulação da pressão arterial (PA), mostra efeitos pró-inflamatórios importantes após estimulação do seu receptor de tipo 1 (AT1R). Além disso, a excitação do sistema simpático e seus produtos de catecolaminas também apresentam efeitos pró-inflamatórios atribuíveis às vias desencadeadas por receptores β1-adrenérgicos (β1-AR). Assim, aumentado atividades simpática e do SRA, muitas vezes presente em hipertensão e diabetes, sendo determinantes importantes da disfunção endotelial e complicações relativas a contribuição de mediadores imunes. O objetivo deste estudo consistiu em testar a hipótese de que a farmacoterapia anti-hipertensiva produz efeitos anti - inflamatórios na prática clínica, este estudo investigou os níveis séricos de mediadores pró-inflamatórios, especificamente IL-6 , TNF - α e IFN - γ, em resposta ao uso de antihipertensivos para o controle da pressão arterial (PA ). O estudo prospectivo envolveu 110 mulheres de 60 anos ou mais, hipertensas, residentes na comunidade do Distrito Federal e entorno, com distúrbios metabólicos diferentes, entre 2005 a 2009. A terapia medicamentosa de redução da pressão arterial de curto prazo foi realizada de acordo com as diretrizes brasileiras atuais sobre a hipertensão e os níveis de citocinas basais foram medidos antes e depois da intervenção. Os resultados encontrados e intervenções realizadas representam as práticas de gestão de hipertensão atuais no Brasil e que correspondeu a uma redução significativa nos níveis da PA sistólica e diastólica em uma análise de grupo inteiro, mesmo quando usuárias e não usuárias das classes medicamentosas mais comuns foram consideradas separadamente. Considerando todos os pacientes, a IL-6 e TNF- α mostrou uma diminuição significativa na concentração sérica (p < 0,01) no final do estudo, enquanto que o nível médio de IFN - γ não foi significativamente diferente dos valores da linha de base. Em análises separadas, apenas os usuários de antagonistas do sistema renina - angiotensina (SRA) e os usuários de diuréticos exibiram o mesmo tratamento significativo induzido por redução de IL – 6 e TNF - α sérica, observada em todo o grupo . Os resultados demonstraram que um tratamento anti-hipertensivo clinicamente guiado é eficaz em reverter o baixo grau de um estado pró-inflamatório de citocinas séricas encontrada em mulheres pós-menopausa e sugere benefícios extra cardíacos de diuréticos e antagonistas do SRA. ________________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tailored antihypertensive drug therapy prescribed to older women attenuates circulating levels of IL-6 and TNF-alpha. 2015. Angiotensin II, the active principle of the renin–angiotensin system (RAS), in addition to playing a role in the regulation of blood pressure (BP), shows key proinflammatory effects upon stimulation of its type 1 receptor (AT1R).1,2 Furthermore, sympathoexcitation and its catecholamine products also exhibit proinflammatory effects attributable to β1-adrenoceptor (β1-AR)-triggered pathways.3 Thus, enhanced sympathetic and RAS activities, often present in hypertension and diabetes, are important determinants of endothelial dysfunction and complications concerning the contribution of immune mediators. Objective: To test the hypothesis that antihypertensive drug therapy produces anti-inflammatory effects in clinical practice, this study investigated circulating levels of selected proinflammatory mediators (IL-6, TNF-α and IFN- γ) in response to multivariate drug directions for blood pressure (BP) control. Methods: Prospective study involving 110 hypertensive, community-dwelling older women with different metabolic disorders. A short-term BP-lowering drug therapy was conducted according to current Brazilian guidelines on hypertension, and basal cytokine levels were measured before and after intervention. Results: Interventions were found to represent current hypertension management practices in Brazil and corresponded to a significant reduction in systolic and diastolic BP levels in a whole-group analysis, as well as when users and non-users of the most common therapeutic classes were considered separately. Considering all patients, mean IL-6 and TNF-α levels showed a significant decrease in circulating concentration (p < 0.01) at endpoint, whereas mean IFN- γ level was not significantly different from baseline values. In separate analyses, only users of antagonists of the renin-angiotensin system (RAS) and users of diuretics exhibited the same significant treatment-induced reduction in serum IL-6 and TNF-α observed in the whole group. Conclusion: Our data demonstrates that a clinically guided antihypertensive treatment is effective in reversing the low-grade proinflammatory state of serum cytokines found in postmenopausal women and support extracardiac benefits from diuretics and RAS antagonists.

Orientador: Jose Francisco Figueiredo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T02:45:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Belline_Paula_D.pdf: 5802227 bytes, checksum: 5e741aa3b11f4fc27b7fe698e1c43b88 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: O Sistema Renina Angiotensina (SRA) é um mecanismo importante para a regulação da homeostase cardiovascular via balanço de sódio em indivíduos normais e hipertensos. Recentemente, diversos trabalhos têm comprovado a existência de um SRA local em diferentes tecidos, inclusive em células do Sistema Imunológico. Nosso estudo teve como objetivo analisar em cultura a ação de Angiotensina II (AlI) sobre algumas funções de macrófagos provenientes do peritôneo de camundongos (BALB/c e NOD - Diabéticos Não Obesos). Primeiramente, determinamos a curva dose-resposta de Angiotensina II (AII) com relação à atividade fagocitária nos períodos de 1 e 3 horas de tratamento. Verificamos que a dose de AII que estimulou a fagocitose foi 10-12 M. Para verificarmos a presença de receptores de AII, determinamos também uma curva dose-resposta do antagonista do receptor ATl, DuP 753, conhecido comercialmente como Losartan®. O protocolo com DuP 753 foi realizado na presença e ausência de AII. Nossos resultados mostraram que apesar de inibirmos a atividade fagocitária em diferentes concentrações de DuP, a maior inibição, tanto em animais normais quanto em animais diabéticos, foi com a dose de 1 O-6 M. Em seguida resolvemos avaliar o efeito citotóxico de DuP 753 para comprovarmos que seu efeito inibitório não foi causado por uma alteração da viabilidade celular. Realizamos 3 testes de citotoxicidade: MTT (Brometo de [3-( 4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5 difeniltetrazolio), análise do conteúdo de ácidos nucléicos (CAN) e a liberação de lactato desidrogenase (LDH). Os 3 testes comprovaram que DuP 753 nas concentrações utilizadas não exerceu efeito tóxico para macrófagos em cultura. Além da atividade fagocitária, analisamos também a produção do radical superóxido através da redução do ferricitocromo c. Nossos resultados demonstraram que a dose estimuladora de AII (10-12 M) e a dose inibitória de DuP (10-6 M) com relação à atividade fagocitária das células, não alteraram a produção do ânion superóxido. Isto mostra que a função fagocitária e a produção do radical superóxido são ativadas provavelmente por concentrações diferentes de AII. Finalmente demonstramos por imunofluorescência os tipos de receptores de AII presentes em macrófagos BALB/c e NOD. Verificamos a existência de receptores do tipo ATI e AT2 e que o tratamento das células com AII e DuP parece alterar o número destes receptores. Isto comprova a influência do SRA sobre a função fagocitária de uma das células do Sistema Imunológico / Abstract: The Renin Angiotensin System (RAS) is an important regulatory mechanism of cardiovascular homeostasis in normal and hypertensive subjects. Recently, several reports have been showed the existence of a local RAS in different cells and tissues, inclusive immunological cells. The aim of this study was evaluated in culture the effect of Angiotensin II (AII) on peritoneal mice macrophages (BALB/c and Non Obese Diabetic - NOD). The dose response curve of AII on phagocytic activity was determined during 1 and 3 hours of treatment and the stimulant dose of the phagocytosis was AII 10-12 M. To verify if this stimulus was obtained through AT1 receptor, the dose response curve of DuP 753 was determined. The protocol with DuP 753 was realized in the presence and absence of AII. The results showed that the inhibition of the phagocytic activity occurred in different concentrations of DuP, but the higher inhibition, in normal and diabetic animals, it was with 10-6 M. In order to evaluate the cytotoxic effect of DuP 753 and to show that the inhibition effect was not caused by an alteration of the cellular viability, were realized 3 cytotoxic assays: MTT reduction, analysis of nucleic acid content (NAC) and lactate dehydrogenase release (LDH). All assays indicated that cell viability was maintained afier treatment with DuP 753 in concentrations used. In addition of the phagocytic activity, the effect of AII and DuP 753 in production of superoxide anions was also investigate through the ferricytochrome c reduction. The results demonstrated that the phagocytic stimulant dose of AII (10-12 M) and the inhibition phagocytic dose of DuP (10-6 M) did not influence the superoxide production of macrophages. These results showed that the phagocytic function and superoxide production are probably activated by different concentrations of AII. Finally, an immunofluorescence study was performed in order to identify the type of AII receptors are present in BALB/c and NOD macrophages. The treatment of the cells with AII and DuP changed the immunoreactive of AT1 and AT2 receptors. This shows the influence of RAS on the function and metabolism of lmmunological Cell System / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Jose Antonio Rocha Gontijo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T15:37:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suedekum_ElenWhiteMateus_M.pdf: 8584327 bytes, checksum: 8f11b1956a8a970839181b78f49bb35b (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Alterações morfológicas e funcionais de diferentes sistemas e aparelhos e a hipertensão arterial têm sido demonstrados freqüentemente na evolução da diabetes mellitus. Dentre estas alterações funcionais, destacam-se aquelas manifestações relacionadas à modificação de manipulação tubular de sódio e do balanço hidrossalino. Pouco se conhece sobre o envolvimento da angiotensina 11 e da atividade neural nesta alteração, bem como da importância destas na modulação de uma resposta contra-reguladora durante a depleção volêmica induzida pela furosemida. O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do bloqueio de receptores A T1 da angiotensina II e da atividade neural renal sobre a pressão arterial e a manipulação tubular renal de sódio, após a administração aguda ou crônica de furosemida, na diabetes mel/itus experimental. Para a avaliação do papel dos receptores A T1 da angiotensina 11 e da atividade neural renal, comparamos oito grupos de animais: 1) controle; 2) controle tratado com losartan; 3) diabetes mellitus induzida por estreptozotocina, 4) diabetes mellitus induzida por estreptozotocina e tratado com losartan, 5) controle submetido à cirurgia simulada de denervação renal bilateral; 6) controle submetido à denervação renal bilateral, 7) diabetes mel/itus induzida por estreptozotocina e submetido à cirurgia simulada de denervação renal bilateral; e 8) diabetes mellitus induzida por estreptozotocina e submetido à denervação renal bilateral. A pressão arterial foi aferida semanalmente através do método de plestimografia de cauda e o estudo funcional renal foi estimado através dos clearances de creatinina endógeno e de lítio, em ratos Wistar-Hannover acordados em gaiolas metabólicas individuais. Nossos resultados mostram que: 1) uma progressiva elevação da pressão arterial ocorreu em animais diabéticos, que foi atenuada pela denervação renal bilateral; 2) losartan 10 mg/kg/dia reduz a pressão arterial em animais-controle; todavia, perde a sua eficácia hipotensora em animais diabéticos, após a administração crônica de furosemida; 3) a administração oral aguda de furosemida promoveu uma natriurese em animais-controle e diabéticos, por elevar a excreção de sódio em segmentos proximais e pós-proximais do néfron; 4) o tratamento crônico de furosemida promoveu uma significativa atenuação nesta resposta natriurética por promover uma queda na fração de excreção de sódio, principalmente em segmentos pós-proximais do néfron, associada também à queda da taxa de filtração glomerular em animais controles e diabéticos; 5) losartan atenua a resposta diurética induzida pela administração aguda e cônica de furosemida em animais diabéticos; 6) losartan não modificou a resposta natriurética observada principalmente em segmentos pós-proximais do néfron em animais controles; 7) o bloqueio de receptores A T1 da angiotensina causa elevação da taxa de filtração glomerular associada à queda da fração de excreção proximal de sódio em animais diabéticos; 8) a denervação renal bilateral atenuou a resposta natriurética à administração aguda de furosemida por reduzir a excreção de sódio em segmentos pós-proximais do néfron; 9) a denervação renal não aboliu a resposta natriurética induzi da por furosemida administrada cronicamente. Portanto, nosso estudo mostra que na diabetes mellitus ocorre uma elevação significativa da pressão arterial sistêmica, que é atenuada pela denervação renal bilateral, e sugere que mecanismos contra-regulatórios . à depleção do volume sangüíneo ocorrem independentemente da ação de angiotensina 11 e da atividade neural renal / Abstract: Functional and morphological modification of the different animal systems and apparatus, and arterial blood pressure has been demonstrated in the evolution of the diabetes mellitus. Among these dysfunctions, detach to these related to the modifications of sodium tubular handling and the hydro-saline homeostasis. The studies evaluating the evolving of angiotensin 11 and renal nerve activity in this pathophysiological situation are not wide at the moment, as well as the importance these in the modulation of a counter-regulatory answer during depletion's volume that was induce by furosemide. The objective of study was evaluate the influence of the blockade of the A T1 angiotensin receptors and of the renal nerve activity on the arterial blood pressure and sodium renal tubular handling, after acute and chronic administration of furosemide, in diabetes mellitus animal model induced by streptozotocin i. v administration in rats. To examine the role of AT1 angiotensin receptors and of the renal nerve activity, we compared eight groups of animais: 1) contol rats, 2) losartan treated rats; 3) streptozotocin-induced DM rats; 4) losartan treated streptozotocin-induced DM rats; 5) sham-operated rats; 6) denervated rats; 7) sham-operated streptozotocin-induced DM rats, e 8) denervated streptozotocininduced DM rats. The arterial blood pressure was measured weekly by tail plethysmography method and renal function test was estimated by lithium and creatinine clearance, in concious and unrestrained rats and individual metabolic cages. The results of present study demostrate that: 1) a progressive elevation of the arterial pressure occured in diabetic animais that is attenuaded by bilateral renal denervation; 2) losartan 10 mg/kg/day reduced the arterial pressure in controls animais; but it lose its efficacy in diabetic animais, after the chronic administration of furosemide; 3) the acute oral administration of furosemide promoted a natriurese, in controls and diabetic animais, by elevate the sodium excretion in proximal and post-proximal nefron segment.; 4) the chronic tratment of furosemide promoted a significant attenuation in this natriuretic response by induced a fali in sodium excretion fraction, mainly in post-proximal segment of nefron associated toa to the fali of the glomerular filtration rate in controls and diabetic animais. 5) losartan attenuate the diuretic response induced by acute and chronic of furosemide in diabetic animais; 6) losartan no modified the natriurese response observed principally in post-proximal segment of nefron in controls animais; 7) the blockade of A T1 receptors of angiotensin 11 causes an elevation of the glomerular filtration rate associated to the a fali of the sodium proximal excretion fraction in diabetic animal; 8) the bilateral renal denervation attenuated the natriuretic response to acute administration of furosemide by reduce the sodium excrection in post-proximal segment nefron; 9) the renal denervation no abolished a natriuretic response induced by chronic administration of furosemide. Therefore, our study demonstrate that in diabetes mellitus occurs a significant elevation of the systemic arterial pressure that is attenuated by bilateral renal denervation. And, it suggests that contra-regulatory mechanisms to the blood volume depletion occur independently of angiotensin 11 and renal nerve activity / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

O sistema renina-angiotensina (SRA) circulante é um sistema endócrino que promove a produção de angiotensina (Ang) II, a qual exerce seus efeitos pela interação com receptores específicos. O conceito clássico do SRA circulante está sendo modificado, pois tem sido demonstrada a existência de sistemas locais capazes de gerar angiotensinas de forma independente do SRA circulante em vários tecidos e órgãos. Trabalhos recentes sugerem a existência de alguns componentes do SRA em tecido gengival e fibroblastos gengivais de diferentes espécies. Porém, não são encontrados na literatura achados inequívocos sobre a presença de importantes componentes do SRA, tais como renina e angiotensinogênio, no tecido gengival de rato. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram: 1) estudar a expressão e localização de componentes do SRA no tecido gengival de rato e 2) estudar in vitro a funcionalidade do SRA local em homogenato de tecido gengival de rato quanto à formação de Ang II e outros peptídeos vasoativos a partir de precursores de Ang II. Transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RTPCR) foi utilizada para avaliar a expressão de RNAm. Análise imunohistoquímica foi utilizada para detecção e localização de renina no tecido gengival de rato. Um método fluorimétrico padronizado com o tripeptídeo Hipuril-Histidina-Leucina (Hip-His-Leu) foi usado para medir a atividade da ECA em homogenatos de tecido gengival de rato. A técnica de cromatografia líqüida de alto desempenho (HPLC) foi usada para analisar os produtos formados após a incubação de homogenatos de tecido gengival de rato com Ang I ou tetradecapeptídeo substrato de renina (TDP). RT-PCR revelou a expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio, ECA e receptores de Ang II (AT1a, AT1b e AT2) em tecido gengival; em fibroblastos cultivados de tecido gengival foi observada expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio e receptor AT1a. A técnica de imunohistoquímica demonstrou a existência de renina em vasos de tecido gengival de rato. Atividade da ECA foi detectada por meio do ensaio fluorimétrico (4,95±0,89 nmol His-Leu/g.min). Quando Ang I foi usada como substrato, análises de HPLC mostraram a formação de Ang 1-9 (0,576±0,128 nmol/mg.min), Ang II (0,066±0,008 nmol/mg.min) e Ang 1-7 (0,111±0,017 nmol/mg.min), enquanto que os mesmos peptídeos (0,139±0,031; 0,206±0,046 e 0,039±0,007 nmol/mg.min, respectivamente) e Ang I (0,973±0,139 nmol/mg.min) foram formados quando TDP foi usado como substrato. Adicionalmente, análises de HPLC revelaram a ausência de enzimas que degradam Ang II em homogenatos de tecido gengival de rato. Em conclusão, os resultados apresentados neste trabalho mostram claramente a existência de um SRA local em tecido gengival de rato, que é capaz de gerar Ang II e outros peptídeos vasoativos in vitro. Estudos adicionais são necessários para elucidar o papel deste sistema local no tecido gengival de rato. / Systemic renin-angiotensin system (RAS) promotes the plasmatic production of angiotensin (Ang) II, which acts through the interaction with specific receptors. The concept of this classic circulating RAS has been modified since there is growing evidence that local systems in various tissues and organs are capable of generating angiotensins independently of the circulating RAS. Recent works suggest the existence of some RAS components in the gingival tissue and cultured gingival fibroblasts of different species, but there is paucity of data in the literature regarding the unequivocal existence of crucial RAS components, such as renin and angiotensinogen, in the rat gingival tissue. Therefore, the aims of the present work were to: 1) study the expression and localization of RAS components in the rat gingival tissue and 2) evaluate the in vitro production of Ang II and other peptides catalyzed by rat gingival tissue homogenates incubated with different precursors of Ang II. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to assess mRNA expression. Immunohistochemical (IHC) analysis aimed to detect and localize renin in the rat gingival tissue. A standardized fluorimetric method with the tripeptide Hippuryl-Histidyl-Leucine (Hip-His-Leu) was used to measure tissue ACE activity in rat gingival tissue homogenates. High performance liquid chromatography (HLPC) was used to analyze the products formed after the incubation of rat gingival tissue homogenates with Ang I or tetradecapeptide renin substrate (TDP). RT-PCR revealed the mRNA expression for renin, angiotensinogen, ACE and Ang II receptors (AT1a, AT1b and AT2) in the rat gingival tissue; cultured gingival fibroblasts expressed renin, angiotensinogen and AT1a receptor. IHC demonstrated the existence of renin in vessels of the rat gingival tissue. ACE activity was detected by the fluorimetric assay (4.95±0.89 nmol His-Leu/g.min). When Ang I was used as the substrate, HPLC analyses showed the formation of Ang 1-9 (0.576±0.128 nmol/mg.min), Ang II (0.066±0.008 nmol/mg.min) and Ang 1-7 (0.111±0.017 nmol/mg.min) whereas these same peptides (0.139±0.031; 0.206±0.046 and 0.039±0.007 nmol/mg.min, respectively) and Ang I (0.973±0.139 nmol/mg.min) were formed when TDP was the substrate. Additionally, HPLC revealed absence of Ang II degrading enzymes in rat gingival tissue homogenates. In conclusion, the results presented here clearly show the existence of a local RAS in the rat gingival tissue, which is capable of generating Ang II and other vasoactive peptides in vitro. Further studies are required to elucidate the role of this system in the rat gingival tissue.

O sistema renina-angiotensina (SRA) circulante é um sistema endócrino que promove a produção de angiotensina (Ang) II, a qual exerce seus efeitos pela interação com receptores específicos. O conceito clássico do SRA circulante está sendo modificado, pois tem sido demonstrada a existência de sistemas locais capazes de gerar angiotensinas de forma independente do SRA circulante em vários tecidos e órgãos. Trabalhos recentes sugerem a existência de alguns componentes do SRA em tecido gengival e fibroblastos gengivais de diferentes espécies. Porém, não são encontrados na literatura achados inequívocos sobre a presença de importantes componentes do SRA, tais como renina e angiotensinogênio, no tecido gengival de rato. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram: 1) estudar a expressão e localização de componentes do SRA no tecido gengival de rato e 2) estudar in vitro a funcionalidade do SRA local em homogenato de tecido gengival de rato quanto à formação de Ang II e outros peptídeos vasoativos a partir de precursores de Ang II. Transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase (RTPCR) foi utilizada para avaliar a expressão de RNAm. Análise imunohistoquímica foi utilizada para detecção e localização de renina no tecido gengival de rato. Um método fluorimétrico padronizado com o tripeptídeo Hipuril-Histidina-Leucina (Hip-His-Leu) foi usado para medir a atividade da ECA em homogenatos de tecido gengival de rato. A técnica de cromatografia líqüida de alto desempenho (HPLC) foi usada para analisar os produtos formados após a incubação de homogenatos de tecido gengival de rato com Ang I ou tetradecapeptídeo substrato de renina (TDP). RT-PCR revelou a expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio, ECA e receptores de Ang II (AT1a, AT1b e AT2) em tecido gengival; em fibroblastos cultivados de tecido gengival foi observada expressão de RNAm para renina, angiotensinogênio e receptor AT1a. A técnica de imunohistoquímica demonstrou a existência de renina em vasos de tecido gengival de rato. Atividade da ECA foi detectada por meio do ensaio fluorimétrico (4,95±0,89 nmol His-Leu/g.min). Quando Ang I foi usada como substrato, análises de HPLC mostraram a formação de Ang 1-9 (0,576±0,128 nmol/mg.min), Ang II (0,066±0,008 nmol/mg.min) e Ang 1-7 (0,111±0,017 nmol/mg.min), enquanto que os mesmos peptídeos (0,139±0,031; 0,206±0,046 e 0,039±0,007 nmol/mg.min, respectivamente) e Ang I (0,973±0,139 nmol/mg.min) foram formados quando TDP foi usado como substrato. Adicionalmente, análises de HPLC revelaram a ausência de enzimas que degradam Ang II em homogenatos de tecido gengival de rato. Em conclusão, os resultados apresentados neste trabalho mostram claramente a existência de um SRA local em tecido gengival de rato, que é capaz de gerar Ang II e outros peptídeos vasoativos in vitro. Estudos adicionais são necessários para elucidar o papel deste sistema local no tecido gengival de rato. / Systemic renin-angiotensin system (RAS) promotes the plasmatic production of angiotensin (Ang) II, which acts through the interaction with specific receptors. The concept of this classic circulating RAS has been modified since there is growing evidence that local systems in various tissues and organs are capable of generating angiotensins independently of the circulating RAS. Recent works suggest the existence of some RAS components in the gingival tissue and cultured gingival fibroblasts of different species, but there is paucity of data in the literature regarding the unequivocal existence of crucial RAS components, such as renin and angiotensinogen, in the rat gingival tissue. Therefore, the aims of the present work were to: 1) study the expression and localization of RAS components in the rat gingival tissue and 2) evaluate the in vitro production of Ang II and other peptides catalyzed by rat gingival tissue homogenates incubated with different precursors of Ang II. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to assess mRNA expression. Immunohistochemical (IHC) analysis aimed to detect and localize renin in the rat gingival tissue. A standardized fluorimetric method with the tripeptide Hippuryl-Histidyl-Leucine (Hip-His-Leu) was used to measure tissue ACE activity in rat gingival tissue homogenates. High performance liquid chromatography (HLPC) was used to analyze the products formed after the incubation of rat gingival tissue homogenates with Ang I or tetradecapeptide renin substrate (TDP). RT-PCR revealed the mRNA expression for renin, angiotensinogen, ACE and Ang II receptors (AT1a, AT1b and AT2) in the rat gingival tissue; cultured gingival fibroblasts expressed renin, angiotensinogen and AT1a receptor. IHC demonstrated the existence of renin in vessels of the rat gingival tissue. ACE activity was detected by the fluorimetric assay (4.95±0.89 nmol His-Leu/g.min). When Ang I was used as the substrate, HPLC analyses showed the formation of Ang 1-9 (0.576±0.128 nmol/mg.min), Ang II (0.066±0.008 nmol/mg.min) and Ang 1-7 (0.111±0.017 nmol/mg.min) whereas these same peptides (0.139±0.031; 0.206±0.046 and 0.039±0.007 nmol/mg.min, respectively) and Ang I (0.973±0.139 nmol/mg.min) were formed when TDP was the substrate. Additionally, HPLC revealed absence of Ang II degrading enzymes in rat gingival tissue homogenates. In conclusion, the results presented here clearly show the existence of a local RAS in the rat gingival tissue, which is capable of generating Ang II and other vasoactive peptides in vitro. Further studies are required to elucidate the role of this system in the rat gingival tissue.

O objetivo deste estudo foi avaliar se a infusão de angiotensina II (ANG II) modulava a expressão do receptor B1 (RB1) de cininas em aorta (AO),arteríolas mesentéricas (AM) de ratos Wistar e também verificar a influência do RB1 na pressão arterial e reatividade desses vasos sanguíneos através do agonista de RB1, DABK. Os ratos receberam por 28 dias infusão de ANG II ou de ANG II e antagonista de RB1. O DABK induziu relaxamento dependente de endotélio e NO em anéis de AO de ratos ANG II. A infusão de ANG II causou hipertensão arterial, aumento da expressão de RNAm de RB1 em AO e AM, da expressão protéica de RB1 em AO e disfunção endotelial caracterizada por diminuída resposta á acetilcolina (ACH).O antagonista de B1R não interferiu no desenvolvimento de hipertensão e na disfunção endotelial causada, mas aumentou a sensibilidade da AO à ACH e a expressão de NO Sintase nos ratos ANG II. Esses resultados nos permitem sugerir que a ANG II e cininas podem atuar sinergicamente no desenvolvimento das alterações vasculares observadas nesse modelo de hipertensão arterial. / The aim of the present study was to evaluate whether the angiotensin II (ANG II) infusion modulates the kinin B1 receptor (B1R) mRNA, protein expression in aorta (AO) and mesenteric arterioles (MA) in Wistar rats. It was also verified the role of RB1 in the control of blood pressure and vascular reactivity using DABK a B1R agonist Rats were infused either with ANG II (400ng/Kg/min) or ANG II plus RB1antagonist(350ng/Kg/min) during 28 days.DABK induced endothelium-NO dependent relaxation in AO of ANG II rats. ANG II infusion caused hypertension, increased RB1 mRNA expression in AO and MA, protein expression in AO and caused endothelial dysfunction, characterized as a decreased maximal response to acetylcholine (ACH). The B1R antagonist did not interfere in the development of hypertension and endothelium dysfunction caused by ANG II, however, increased the sensitivity to ACH and NO synthase expression in AO of ANG II rats. Altogether, we may suggest that ANG II and kinins can act synergistically in the development of vascular changes in this model of hypertension.