A lesão do nervo periférico resulta em dor neuropática persistente ou crônica, caracterizada por dor espontânea em queimação, acompanhada de alodinia e hiperalgesia. A ocorrência de alterações patológicas no sistema nervoso periférico e na medula espinal contribui para o desenvolvimento da dor neuropática. Estas alterações incluem descargas ectópicas nas fibras nervosas periféricas lesadas, as quais mantêm os impulsos nervosos aferentes para o sistema nervoso central. Várias substâncias sintetizadas e/ou liberadas durante o processo inflamatório tais como cininas, neuropeptídeos, citocinas, óxido nítrico, entre outros, assim como as alterações morfofuncionais celulares, podem interferir com a atividade dessas fibras. Estas alterações na homeostasia do indivíduo podem implicar em uma perda da qualidade de vida do paciente. Portanto, tais informações são essenciais para o auxílio de uma terapia analgésica eficiente e/ou preventiva. Assim, o presente projeto tem como objetivo compreender melhor a participação das isoformas neuronal e induzível em modelo de dor neuropática induzida pela lesão constritiva crônica do nervo isquiático de ratos. Para tanto, foi avaliada a sensibilidade dolorosa dos animais utilizando inibidor seletivo para NOS neuronal (nNOS) e induzível (iNOS), antes e após os testes comportamentais. Avaliamos também a distribuição das isoenzimas da NOS, na medula espinal e gânglios da raiz posterior, pelo método de imuno-histoquímica. Ainda, separadamente, analisou-se a síntese de nNOS e iNOS, pelo método de Western blot, e a presença de óxido nítrico utilizando marcador fluorescente DAF-2 (DA). Tais investigações poderão contribuir fornecendo base científica para o desenvolvimento de novos medicamentos e por elucidar alguns dos mecanismos de ação do óxido nítrico, envolvidos na dor neuropática, que é de difícil tratamento e de grande relevância clínica. / The peripheral nerve injury results in persistent or chronic neuropathic pain characterized by spontaneous burning pain accompanied by allodynia and hyperalgesia. The occurrence of pathological changes in the peripheral nervous system and spinal cord contributes to the development of neuropathic pain. These changes include ectopic discharges in damaged peripheral nerve fibers, which maintain the afferent nerve impulses to the central nervous system. Many substances synthesized and / or released during inflammation such as neuropeptides, cytokines, nitric oxide, among others, as well as cellular morphofunctional changes, may interfere with the activity of those fibers. These changes in the homeostasis of the individual can result in a loss of quality of life of the patient. Therefore, such information is essential for an effective analgesic therapy and / or preventive. The aims of this project are to better understand the involvement of neuronal and inducible isoforms in a model of neuropathic pain induced by chronic constriction injury in sciatic nerve of rats. We evaluated the pain sensitivity of animals using a selective inhibitor for neuronal (nNOS) and inducible (iNOS) NOS. We also evaluate the distribution of NOS isoenzymes in the spinal cord and dorsal root ganglia, by the method of immunohistochemistry. Separately, we analyzed the synthesis of iNOS and nNOS by Western blot assay, and the presence of nitric oxide using fluorescent probe DAF-2 (DA). Such research could contribute to providing scientific basis for the development of new drugs and to elucidate some of the mechanisms of action of NOS involved in neuropathic pain.

A lesão do nervo periférico resulta em dor neuropática persistente ou crônica, caracterizada por dor espontânea em queimação, acompanhada de alodinia e hiperalgesia. A ocorrência de alterações patológicas no sistema nervoso periférico e na medula espinal contribui para o desenvolvimento da dor neuropática. Estas alterações incluem descargas ectópicas nas fibras nervosas periféricas lesadas, as quais mantêm os impulsos nervosos aferentes para o sistema nervoso central. Várias substâncias sintetizadas e/ou liberadas durante o processo inflamatório tais como cininas, neuropeptídeos, citocinas, óxido nítrico, entre outros, assim como as alterações morfofuncionais celulares, podem interferir com a atividade dessas fibras. Estas alterações na homeostasia do indivíduo podem implicar em uma perda da qualidade de vida do paciente. Portanto, tais informações são essenciais para o auxílio de uma terapia analgésica eficiente e/ou preventiva. Assim, o presente projeto tem como objetivo compreender melhor a participação das isoformas neuronal e induzível em modelo de dor neuropática induzida pela lesão constritiva crônica do nervo isquiático de ratos. Para tanto, foi avaliada a sensibilidade dolorosa dos animais utilizando inibidor seletivo para NOS neuronal (nNOS) e induzível (iNOS), antes e após os testes comportamentais. Avaliamos também a distribuição das isoenzimas da NOS, na medula espinal e gânglios da raiz posterior, pelo método de imuno-histoquímica. Ainda, separadamente, analisou-se a síntese de nNOS e iNOS, pelo método de Western blot, e a presença de óxido nítrico utilizando marcador fluorescente DAF-2 (DA). Tais investigações poderão contribuir fornecendo base científica para o desenvolvimento de novos medicamentos e por elucidar alguns dos mecanismos de ação do óxido nítrico, envolvidos na dor neuropática, que é de difícil tratamento e de grande relevância clínica. / The peripheral nerve injury results in persistent or chronic neuropathic pain characterized by spontaneous burning pain accompanied by allodynia and hyperalgesia. The occurrence of pathological changes in the peripheral nervous system and spinal cord contributes to the development of neuropathic pain. These changes include ectopic discharges in damaged peripheral nerve fibers, which maintain the afferent nerve impulses to the central nervous system. Many substances synthesized and / or released during inflammation such as neuropeptides, cytokines, nitric oxide, among others, as well as cellular morphofunctional changes, may interfere with the activity of those fibers. These changes in the homeostasis of the individual can result in a loss of quality of life of the patient. Therefore, such information is essential for an effective analgesic therapy and / or preventive. The aims of this project are to better understand the involvement of neuronal and inducible isoforms in a model of neuropathic pain induced by chronic constriction injury in sciatic nerve of rats. We evaluated the pain sensitivity of animals using a selective inhibitor for neuronal (nNOS) and inducible (iNOS) NOS. We also evaluate the distribution of NOS isoenzymes in the spinal cord and dorsal root ganglia, by the method of immunohistochemistry. Separately, we analyzed the synthesis of iNOS and nNOS by Western blot assay, and the presence of nitric oxide using fluorescent probe DAF-2 (DA). Such research could contribute to providing scientific basis for the development of new drugs and to elucidate some of the mechanisms of action of NOS involved in neuropathic pain.

INTRODUÇÃO: O tratamento das doenças decorrentes das deficiências quantitativa ou qualitativa do surfactante pulmonar consiste na reposição exógena, porém, esta terapêutica é de alto custo devido, basicamente, à metodologia sofisticada de produção do surfactante e à necessidade de importação. Com o propósito de reduzir os custos deste tratamento, o Instituto Butantan, em São Paulo, Brasil, desenvolveu uma nova tecnologia de produção, que demanda menor custo, através da extração orgânica de macerado de pulmão de suínos acoplada à adsorção em um derivado de celulose (DEAE-celulose). MÉTODOS: Com o objetivo de testar a eficácia deste novo produto, 74 coelhos prematuros de 27 dias de gestação foram randomizados em três grupos de estudo, de acordo com o tipo de tratamento realizado: Grupo Controle (n = 28, sem tratamento), Grupo Butantan (n = 22, Surfactante Butantan 50 mg/kg) e Grupo Survanta (n = 24, Survanta® 50 mg/kg). Os animais foram submetidos à ventilação mecânica com freqüência respiratória de 60 ciclos/ minuto, pressão expiratória positiva final de zero, tempo inspiratório de 0,5 segundo e fração inspirada de oxigênio de 21%, durante 20 minutos. O volume-corrente foi ajustado manualmente em 8 ml/kg durante o período da ventilação e a pressão ventilatória (pressão inspiratória - pressão expiratória final positiva) atingida foi registrada através de um pletismógrafo a cada 5 minutos. A complacência dinâmica foi determinada pela relação entre o volume-corrente e a pressão ventilatória. Ao final da ventilação, os animais foram divididos em dois grupos, um para a realização da curva pressão-volume e o outro para o estudo histopatológico. A análise histopatológica foi realizada com a determinação do tamanho alveolar médio, através da estimativa do intercepto linear médio (Lm); e com o cálculo do índice de distorção (ID) que indica a heterogeneidade do parênquima pulmonar. RESULTADOS: O volume-corrente alvo de 8 ml/kg foi atingido nos três grupos de estudo. Quanto a pressão ventilatória, foi observado menores pressões nos animais dos grupos Survanta® e Butantan durante todo o período da ventilação em relação ao grupo Controle. Melhor complacência dinâmica foi observada, não havendo diferença significante entre os grupos Survanta® e Butantan. Em relação à curva pressão-volume, volumes pulmonares maiores foram observados nos grupos Butantan e Survanta® comparados aos do grupo Controle; houve, também, melhor estabilização dos volumes pulmonares na fase expiratória entre os animais dos grupos tratados em relação ao grupo Controle. A análise histopatológica mostrou maior quantidade de alvéolos normais e menor de alvéolos hiperdistendidos ou colapsados nos animais do grupo que recebeu o novo surfactante e o grupo Survanta. No grupo controle, além de apresentar mais alvéolos colapsados e hiperdistendidos, houve também maior ocorrência de áreas com edema alveolar e derrame de material hialino na luz alveolar em relação aos outros dois grupos. CONCLUSÕES: Baseado nos resultados acima, concluiu-se que a administração do novo surfactante, produzido a partir da extração orgânica acoplada à adsorção em derivado de celulose, uma tecnologia de menor custo desenvolvida no Brasil, leva a melhora significativa das propriedades mecânicas pulmonares e da histerese na curva pressão-volume, além de apresentar melhor aeração do parênquima pulmonar e de forma mais homogênea, em coelhos prematuros. Estes efeitos foram semelhantes aos produzidos com a administração de um surfactante disponível no mercado para o uso clínico rotineiro / INTRODUCTION: Pulmonary diseases related to quantitative or qualitative surfactant deficiency are well described, mainly in neonatology. The treatment with surfactant replacement is effective although costly, due to the complexity of surfactant production and imports costs. Aiming the reduction of the cost associated with this therapy, the Butantan Institute, São Paulo, Brazil, developed a new technology based in organic extraction coupled with adsorption on a cellulose derivative, resulting in lower final cost. METHODS: In order to test the in vivo efficacy of this new product, 27 days gestation preterm rabbits were randomized after tracheostomy into 3 study groups, according to the type of treatment received: Control Group (n = 28, no treatment), Butantan Group (n = 22, Butantan surfactant, 50 mg/kg) or Survanta Group (n = 24, Survanta® 50 mg/kg). Mechanical ventilation was initiated with respiratory rate, 60 cycles/min; positive end expiratory pressure, zero and inspiratory time, 0.5 sec; FiO2, 21%. Inspiratory pressure and tidal volume was continuosly evaluated using a pletismograph, and set according to the necessary in order to ventilate with a preset target tidal volume of 8 ml/kg. Respiratory parameters were recorded each five min until the end of ventilation, after 20 min. Ventilatory pressure was defined as inspiratory pressure - positive end expiratory pressure (cmH2O); dynamic compliance (DC) was calculated as DC = {[Tidal volume (ml) / (Body weight (g)/1000)] / ventilatory pressure (cmH2O)}. After the end of ventilation period the animals were divided into two groups: the first for PV curve evaluation and the second for histopathological analysis. The histopathological analysis was performed with determination of mean alveolar size, using mean linear intercept (Lm) and the distortion index, to evaluate the heterogeneity of pulmonary parenchyma. Statistical analysis was by ANOVA ONE WAY, with Student-Newman-Keuls as post hoc test. Significance level was set at p = 0.05. RESULTS: The target tidal volume was achieved in all groups. We found lower ventilatory pressures, higher dynamic compliances and pulmonary volumes in both surfactant treated groups compared to the Control group, with no difference between them. Butantan surfactant and Survanta resulted in increased Lm and lower alveoli asymmetry, as evaluated by distortion index. CONCLUSION: We conclude that the new surfactant produced by Butantan Institute resulted in improvement of lung mechanics and histhopatological findings similar to the obtained with a clinicaly available surfactant, with no differences between them

INTRODUÇÃO: O tratamento das doenças decorrentes das deficiências quantitativa ou qualitativa do surfactante pulmonar consiste na reposição exógena, porém, esta terapêutica é de alto custo devido, basicamente, à metodologia sofisticada de produção do surfactante e à necessidade de importação. Com o propósito de reduzir os custos deste tratamento, o Instituto Butantan, em São Paulo, Brasil, desenvolveu uma nova tecnologia de produção, que demanda menor custo, através da extração orgânica de macerado de pulmão de suínos acoplada à adsorção em um derivado de celulose (DEAE-celulose). MÉTODOS: Com o objetivo de testar a eficácia deste novo produto, 74 coelhos prematuros de 27 dias de gestação foram randomizados em três grupos de estudo, de acordo com o tipo de tratamento realizado: Grupo Controle (n = 28, sem tratamento), Grupo Butantan (n = 22, Surfactante Butantan 50 mg/kg) e Grupo Survanta (n = 24, Survanta® 50 mg/kg). Os animais foram submetidos à ventilação mecânica com freqüência respiratória de 60 ciclos/ minuto, pressão expiratória positiva final de zero, tempo inspiratório de 0,5 segundo e fração inspirada de oxigênio de 21%, durante 20 minutos. O volume-corrente foi ajustado manualmente em 8 ml/kg durante o período da ventilação e a pressão ventilatória (pressão inspiratória - pressão expiratória final positiva) atingida foi registrada através de um pletismógrafo a cada 5 minutos. A complacência dinâmica foi determinada pela relação entre o volume-corrente e a pressão ventilatória. Ao final da ventilação, os animais foram divididos em dois grupos, um para a realização da curva pressão-volume e o outro para o estudo histopatológico. A análise histopatológica foi realizada com a determinação do tamanho alveolar médio, através da estimativa do intercepto linear médio (Lm); e com o cálculo do índice de distorção (ID) que indica a heterogeneidade do parênquima pulmonar. RESULTADOS: O volume-corrente alvo de 8 ml/kg foi atingido nos três grupos de estudo. Quanto a pressão ventilatória, foi observado menores pressões nos animais dos grupos Survanta® e Butantan durante todo o período da ventilação em relação ao grupo Controle. Melhor complacência dinâmica foi observada, não havendo diferença significante entre os grupos Survanta® e Butantan. Em relação à curva pressão-volume, volumes pulmonares maiores foram observados nos grupos Butantan e Survanta® comparados aos do grupo Controle; houve, também, melhor estabilização dos volumes pulmonares na fase expiratória entre os animais dos grupos tratados em relação ao grupo Controle. A análise histopatológica mostrou maior quantidade de alvéolos normais e menor de alvéolos hiperdistendidos ou colapsados nos animais do grupo que recebeu o novo surfactante e o grupo Survanta. No grupo controle, além de apresentar mais alvéolos colapsados e hiperdistendidos, houve também maior ocorrência de áreas com edema alveolar e derrame de material hialino na luz alveolar em relação aos outros dois grupos. CONCLUSÕES: Baseado nos resultados acima, concluiu-se que a administração do novo surfactante, produzido a partir da extração orgânica acoplada à adsorção em derivado de celulose, uma tecnologia de menor custo desenvolvida no Brasil, leva a melhora significativa das propriedades mecânicas pulmonares e da histerese na curva pressão-volume, além de apresentar melhor aeração do parênquima pulmonar e de forma mais homogênea, em coelhos prematuros. Estes efeitos foram semelhantes aos produzidos com a administração de um surfactante disponível no mercado para o uso clínico rotineiro / INTRODUCTION: Pulmonary diseases related to quantitative or qualitative surfactant deficiency are well described, mainly in neonatology. The treatment with surfactant replacement is effective although costly, due to the complexity of surfactant production and imports costs. Aiming the reduction of the cost associated with this therapy, the Butantan Institute, São Paulo, Brazil, developed a new technology based in organic extraction coupled with adsorption on a cellulose derivative, resulting in lower final cost. METHODS: In order to test the in vivo efficacy of this new product, 27 days gestation preterm rabbits were randomized after tracheostomy into 3 study groups, according to the type of treatment received: Control Group (n = 28, no treatment), Butantan Group (n = 22, Butantan surfactant, 50 mg/kg) or Survanta Group (n = 24, Survanta® 50 mg/kg). Mechanical ventilation was initiated with respiratory rate, 60 cycles/min; positive end expiratory pressure, zero and inspiratory time, 0.5 sec; FiO2, 21%. Inspiratory pressure and tidal volume was continuosly evaluated using a pletismograph, and set according to the necessary in order to ventilate with a preset target tidal volume of 8 ml/kg. Respiratory parameters were recorded each five min until the end of ventilation, after 20 min. Ventilatory pressure was defined as inspiratory pressure - positive end expiratory pressure (cmH2O); dynamic compliance (DC) was calculated as DC = {[Tidal volume (ml) / (Body weight (g)/1000)] / ventilatory pressure (cmH2O)}. After the end of ventilation period the animals were divided into two groups: the first for PV curve evaluation and the second for histopathological analysis. The histopathological analysis was performed with determination of mean alveolar size, using mean linear intercept (Lm) and the distortion index, to evaluate the heterogeneity of pulmonary parenchyma. Statistical analysis was by ANOVA ONE WAY, with Student-Newman-Keuls as post hoc test. Significance level was set at p = 0.05. RESULTS: The target tidal volume was achieved in all groups. We found lower ventilatory pressures, higher dynamic compliances and pulmonary volumes in both surfactant treated groups compared to the Control group, with no difference between them. Butantan surfactant and Survanta resulted in increased Lm and lower alveoli asymmetry, as evaluated by distortion index. CONCLUSION: We conclude that the new surfactant produced by Butantan Institute resulted in improvement of lung mechanics and histhopatological findings similar to the obtained with a clinicaly available surfactant, with no differences between them

The purpose of this thesis was to develop methodology by which treatments for the cognitive impairments in Huntington's disease (HD) could be tested. As such, the thesis focused mainly on evaluating rats with quinolinic acid (QA) lesions of the striatum, as this manipulation mimics some aspects of the neural damage in Huntington's disease, to try to identify cognitive deficits of HD resulting from cell loss in the striatum. In the first part (Chapters 3-5), the role of the striatum in implicit memory was investigated. Chapter 3 compared the performance of rats and humans on a reaction time task that evaluated implicit memory by presenting visual stimuli with differing probabilities which change over time. Although rats made higher percentage of incorrect responses and late errors, both groups showed a similar pattern of reaction times. Chapter 4 investigated whether implicit memory (the computation of probabilities to predict the location of a stimulus) was affected by selective blockade of dopaminergic transmission at the D1 or D2 receptors by SCH-23390 and raclopride, respectively. Reaction times were slower with SCH-23390 and raclopride, but only SCH-23390 reduced errors to the least probable target location. Chapter 5 used the same task to evaluate implicit memory in rats with QA lesions of the dorsomedial striatum (DMS). Implicit memory was not affected by lesions of the DMS, which suggested that once a task that requires implicit memory has been learned, the DMS was not involved in sustaining the performance of the task. The second part of this thesis (Chapter 6), explored the contribution of the DMS in habit formation. DMS lesioned rats did not show habitual responding, and were not impaired in learning a new goal-directed behaviour. The third part (Chapters 7 and 8), investigated the role of the dorsal striatum in reversal learning, attentional set-formation, and set-shifting. Dorsal striatum lesioned rats were not impaired in reversal learning, but had a diminished shift-cost, which suggested that dorsal striatum lesions disrupted the formation of attentional sets. These results showed that although QA lesions of the dorsal striatum mimic some aspects of the neural damage in HD, they did not result in the same cognitive deficits observed in patients with HD, at least using the tasks presented in this thesis. However, other animal models of HD could be evaluated using the different tasks presented in this thesis to continue the search of a reliable animal model of HD in which treatments for the disease could be evaluated.