A soja é uma das espécies cultivadas de maior importância econômica para o Brasil, atualmente o segundo maior produtor mundial deste grão. Contudo, doenças causadas por fungos são um dos principais problemas enfrentados pelos produtores de soja, o que leva a grandes perdas. Uma das alternativas para superar este problema é a utilização de cultivares com resistência genética. Com este objetivo, foram realizados quatro experimentos independentes de transformação genética de soja, em que o gene chit1, que codifica uma quitinase, enzima capaz de degradar paredes fúngicas, foi transferido para culturas embriogênicas, através da metodologia de biobalística. O gene marcador hpt, que confere resistência ao antibiótico higromicina, também foi utilizado. Em três dos experimentos realizados, uma nova metodologia foi testada, em que sequências desnecessárias, presentes nos vetores de transformação, não são colocadas na planta, e sim apenas os cassetes gênicos, contendo regiões regulatórias e codificadoras. No 1° Experimento realizado, foram obtidas plantas transgênicas transformadas com plasmídeos, mas estas não produziram sementes. No 2° Experimento, foi obtida uma linhagem transgênica, oriunda da transformação com plasmídeos. Foi confirmada a presença e a expressão do gene de quitinase em uma planta T0. Esta planta gerou uma progênie de 16 plântulas. Destas, 10 foram analisadas por PCR e foi confirmada a transmissão do transgene marcador para seis plantas T1. Análises moleculares complementares são necessárias para a determinação do padrão de herança dos transgenes. Como resultado do 3º Experimento realizado, foram obtidos 3.298 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (2.804 oriundos da transformação com plasmídeos e 494 da transformação com cassetes) e 2.286 para a cultivar IAS (759 com plasmídeos e 1.527 com cassetes). Do 4º Experimento realizado, foram obtidos 1.339 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (1.312 oriundos da transformação com plasmídeos e 27 da transformação com cassetes) e 1.035 para a cultivar IAS5 (851 com plasmídeos e 184 com cassetes). Mesmo considerando a possibilidade de alguns dos embriões obtidos serem escapes à seleção, a resistência ao antibiótico é um forte indício de transformação estável. Já foram obtidos embriões germinados oriundos da transformação com cassetes, resultantes dos 3° e 4° Experimentos. Com a condição transgênica comprovada, será realizada uma comparação dos padrões de integração gerados por transformação com plasmídeos e cassetes gênicos. / Soybean is one of the most important crops in Brazil, which is nowadays the second world largest producer. However, injuries caused by fungus are one of the main problems faced by the producers, causing great losses. One of the possibilities to deal with this problem is the utilization of cultivars with genetic resistance. With this goal, four independent soybean transformation experiments were performed. A chitinase gene, chit1, which can break fungal cell walls, was transferred to soybean embryogenic cultures, through the use of biolistic. The selection marker gene hpt, which confers hygromycin resistance, was also transferred to the embryos. In three of the performed experiments, a new methodology was tested, where unnecessary sequences, that are part of the transformation vectors, were not introduced into the plant, but only the gene cassettes, which contain regulatory and coding sequences. In the first experiment, transgenic plants were obtained, but they left no progeny. In the second experiment, one transgenic line was obtained from the plasmid transformation. The presence and expression of the chitinase gene in one T0 plant was confirmed. 16 T1 plantlets were obtained. 10 were analyzed by PCR, and the transmission of the marker gene to six T1 plants was confirmed. Further molecular analyses are necessary in order to determine the inheritance pattern of the transgenes. As a result of the 3rd Experiment, 3.298 histodifferentiated embryos of the cultivar Bragg were obtained (2.804 from the plasmid transformation and 494 from the gene cassettes transformation) and 2.286 of the cultivar IAS (759 from the plasmid transformation and 1.527 from the gene cassettes transformation). From the 4th Experiment, 1.339 histodifferentiated embryos were obtained for cultivar Bragg (1.312 from the plasmid transformation and 27 from the cassettes) and 1.035 for IAS (851 from the plasmid transformation and 184 from the cassettes). Even considering the possibility that some of the embryos obtained may have escaped selection, the hygromycin resistance is a great indication of stable transformation. Plants transformed, resulting from the 3rd and 4th experiments, were already obtained with the minimal cassettes. Once their transgenic nature is proved, the patterns of integration of plasmid transformed plants and cassette transformed plants will be compared.

Metarhizium anisopliae é um fungo entomopatogênico usado como agente de controle biológico devido a sua capacidade de infectar mais de 300 espécies de artrópodes. É um organismo muito utilizado como modelo de estudo de interação patógeno-hospedeiro sendo um dos focos de estudo a descrição de genes envolvidos no processo de infecção pela construção de mutantes funcionais. Esse processo pode ser facilitado pelo uso da metodologia do sistema CRISPR/Cas9 para manipulação genômica, que foi derivada do sistema imune adaptativo de procariotos que vem demonstrando potencial tecnológico em edição genética de eucariotos pela incorporação de protoespaçadores (sequencias oriundas de bacteriófagos ou plasmídeos invasores) em seus loci. CRISPR e a proteína associada à CRISPR (Cas) formam uma endonuclease guiada (Cas9) a qual tem como alvo o sítio específico do DNA invasor, provocando a clivagem da dupla fita do DNA alvo em uma sequência específica. Muitos estudos realizados pela edição gênica têm sido desenvolvidos em diferentes organismos por meio da sua adaptação em eucariotos. Com o objetivo de melhorar a eficiência na geração de mutantes em em M. anisopliae, o sistema CRISPR/Cas9 e um sistema de RNAi foram usados a fim de desenvolver novas ferramentas. As metodologias CRISPR/Cas9 e RNAi foram desenvolvidas para ter como alvo o gene reporter gfp da linhagem M. anisopliae E6 GFP+. Para realizar a edição genômica em M. anisopliae, foram gerados, por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, fungos transgênicos estáveis que expressam a endonuclease Cas9 códon-otimizada para fungos filamentosos. Oligonucleotídeos foram projetados para ter como alvo quatro regiões diferentes na sequencia do gene gfp com o auxílio da ferramenta CRISPR RGEN tool com o objetivo de evitar o pareamento aleatório. O vetor binário utilizado foi o plasmídeo pPZP com o promotor U6-1 para a expressão do RNA guia. Para a metodologia de RNA interferente foi reproduzido o knockdown do gene repórter gfp por meio de agrotransformação do vetor pPZP::SUR::DP que contém um sistema de dois promotores em direções opostas (dual promoter Pdgp e Ptrpc) e um cassette de expressão com o gene marcador sur (resistência a sulfoniluréia) para a seleção dos transformantes. Foram clonados 420 pares de bases do gene gfp entre os promotores gerando o plasmídeo pPZP::SUR::DP::GFP. O desenvolvimento dessas duas metodologias se mostra viável para análise funcional de genes de M. anisopliae. / Metarhizium anisopliae is an entomopathogenic fungus used as a biological control agent due to its capacity to infect more than three hundred species of arthropods. It is broadly used as a model to the development of host-pathogen interaction studies, including the study of the description of the involved genes in the infection process by the construction of functional mutants. This process may be facilitated by the use of the CRISPR/Cas9 methodology to genomic manipulation, which was derived from the immune adaptive system in prokaryotes and has demonstrated technological potential in genetic of eukaryotes edition through the activity of incorporation of protospacers (sequences arising from bacteriophages or plasmids invaders) in their loci. CRISPR and CRISPR associated protein (Cas) code a guided nuclease (Cas9) that targets a specific site of the invading DNA leading to breakage of double-stranded target DNA in a specific sequence. Multiple gene editing studies have been developed in different organisms including its adaptation to eukaryotes. In order to improve the efficiency of the generation of mutants in M. anisopliae, CRISPR/Cas9 system and a RNAi system were used in order to develop new tools. Both CRISPR/Cas9 and RNAi methodologies were developed having as a target the gfp gene from M. anisopliae E6 GFP+ strain. To perform genome editing in M. anisopliae, stable transgenic fungi that express fungal codon-optimized Cas9 were generated by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Oligonucleotides were designed to target four different regions along the gfp gene by using the CRISPR RGEN tool in order to avoid off-targets. The binary vector was the pPZP plasmid with the U6-1 to RNAi expression. For RNAi analysis, gene knockdown were developed by agrotransformation with a suitable plasmid (pPZP::SUR::DP) containing dual promoters with opposite directions (Pdgp and Ptrpc) and a cassette for the expression of the selective marker (gene sur, conferring sulfonylurea resistance) for the selection of transformants. The 420 bp gfp sequence was cloned between promoters, obtaining thus the plasmid pPZP::SUR::DP::GFP. The development of these two techniques proves itself viable for functional analysis of M. anisopliae genes.

A soja é uma das espécies cultivadas de maior importância econômica para o Brasil, atualmente o segundo maior produtor mundial deste grão. Contudo, doenças causadas por fungos são um dos principais problemas enfrentados pelos produtores de soja, o que leva a grandes perdas. Uma das alternativas para superar este problema é a utilização de cultivares com resistência genética. Com este objetivo, foram realizados quatro experimentos independentes de transformação genética de soja, em que o gene chit1, que codifica uma quitinase, enzima capaz de degradar paredes fúngicas, foi transferido para culturas embriogênicas, através da metodologia de biobalística. O gene marcador hpt, que confere resistência ao antibiótico higromicina, também foi utilizado. Em três dos experimentos realizados, uma nova metodologia foi testada, em que sequências desnecessárias, presentes nos vetores de transformação, não são colocadas na planta, e sim apenas os cassetes gênicos, contendo regiões regulatórias e codificadoras. No 1° Experimento realizado, foram obtidas plantas transgênicas transformadas com plasmídeos, mas estas não produziram sementes. No 2° Experimento, foi obtida uma linhagem transgênica, oriunda da transformação com plasmídeos. Foi confirmada a presença e a expressão do gene de quitinase em uma planta T0. Esta planta gerou uma progênie de 16 plântulas. Destas, 10 foram analisadas por PCR e foi confirmada a transmissão do transgene marcador para seis plantas T1. Análises moleculares complementares são necessárias para a determinação do padrão de herança dos transgenes. Como resultado do 3º Experimento realizado, foram obtidos 3.298 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (2.804 oriundos da transformação com plasmídeos e 494 da transformação com cassetes) e 2.286 para a cultivar IAS (759 com plasmídeos e 1.527 com cassetes). Do 4º Experimento realizado, foram obtidos 1.339 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (1.312 oriundos da transformação com plasmídeos e 27 da transformação com cassetes) e 1.035 para a cultivar IAS5 (851 com plasmídeos e 184 com cassetes). Mesmo considerando a possibilidade de alguns dos embriões obtidos serem escapes à seleção, a resistência ao antibiótico é um forte indício de transformação estável. Já foram obtidos embriões germinados oriundos da transformação com cassetes, resultantes dos 3° e 4° Experimentos. Com a condição transgênica comprovada, será realizada uma comparação dos padrões de integração gerados por transformação com plasmídeos e cassetes gênicos. / Soybean is one of the most important crops in Brazil, which is nowadays the second world largest producer. However, injuries caused by fungus are one of the main problems faced by the producers, causing great losses. One of the possibilities to deal with this problem is the utilization of cultivars with genetic resistance. With this goal, four independent soybean transformation experiments were performed. A chitinase gene, chit1, which can break fungal cell walls, was transferred to soybean embryogenic cultures, through the use of biolistic. The selection marker gene hpt, which confers hygromycin resistance, was also transferred to the embryos. In three of the performed experiments, a new methodology was tested, where unnecessary sequences, that are part of the transformation vectors, were not introduced into the plant, but only the gene cassettes, which contain regulatory and coding sequences. In the first experiment, transgenic plants were obtained, but they left no progeny. In the second experiment, one transgenic line was obtained from the plasmid transformation. The presence and expression of the chitinase gene in one T0 plant was confirmed. 16 T1 plantlets were obtained. 10 were analyzed by PCR, and the transmission of the marker gene to six T1 plants was confirmed. Further molecular analyses are necessary in order to determine the inheritance pattern of the transgenes. As a result of the 3rd Experiment, 3.298 histodifferentiated embryos of the cultivar Bragg were obtained (2.804 from the plasmid transformation and 494 from the gene cassettes transformation) and 2.286 of the cultivar IAS (759 from the plasmid transformation and 1.527 from the gene cassettes transformation). From the 4th Experiment, 1.339 histodifferentiated embryos were obtained for cultivar Bragg (1.312 from the plasmid transformation and 27 from the cassettes) and 1.035 for IAS (851 from the plasmid transformation and 184 from the cassettes). Even considering the possibility that some of the embryos obtained may have escaped selection, the hygromycin resistance is a great indication of stable transformation. Plants transformed, resulting from the 3rd and 4th experiments, were already obtained with the minimal cassettes. Once their transgenic nature is proved, the patterns of integration of plasmid transformed plants and cassette transformed plants will be compared.

Metarhizium anisopliae é um fungo entomopatogênico usado como agente de controle biológico devido a sua capacidade de infectar mais de 300 espécies de artrópodes. É um organismo muito utilizado como modelo de estudo de interação patógeno-hospedeiro sendo um dos focos de estudo a descrição de genes envolvidos no processo de infecção pela construção de mutantes funcionais. Esse processo pode ser facilitado pelo uso da metodologia do sistema CRISPR/Cas9 para manipulação genômica, que foi derivada do sistema imune adaptativo de procariotos que vem demonstrando potencial tecnológico em edição genética de eucariotos pela incorporação de protoespaçadores (sequencias oriundas de bacteriófagos ou plasmídeos invasores) em seus loci. CRISPR e a proteína associada à CRISPR (Cas) formam uma endonuclease guiada (Cas9) a qual tem como alvo o sítio específico do DNA invasor, provocando a clivagem da dupla fita do DNA alvo em uma sequência específica. Muitos estudos realizados pela edição gênica têm sido desenvolvidos em diferentes organismos por meio da sua adaptação em eucariotos. Com o objetivo de melhorar a eficiência na geração de mutantes em em M. anisopliae, o sistema CRISPR/Cas9 e um sistema de RNAi foram usados a fim de desenvolver novas ferramentas. As metodologias CRISPR/Cas9 e RNAi foram desenvolvidas para ter como alvo o gene reporter gfp da linhagem M. anisopliae E6 GFP+. Para realizar a edição genômica em M. anisopliae, foram gerados, por transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, fungos transgênicos estáveis que expressam a endonuclease Cas9 códon-otimizada para fungos filamentosos. Oligonucleotídeos foram projetados para ter como alvo quatro regiões diferentes na sequencia do gene gfp com o auxílio da ferramenta CRISPR RGEN tool com o objetivo de evitar o pareamento aleatório. O vetor binário utilizado foi o plasmídeo pPZP com o promotor U6-1 para a expressão do RNA guia. Para a metodologia de RNA interferente foi reproduzido o knockdown do gene repórter gfp por meio de agrotransformação do vetor pPZP::SUR::DP que contém um sistema de dois promotores em direções opostas (dual promoter Pdgp e Ptrpc) e um cassette de expressão com o gene marcador sur (resistência a sulfoniluréia) para a seleção dos transformantes. Foram clonados 420 pares de bases do gene gfp entre os promotores gerando o plasmídeo pPZP::SUR::DP::GFP. O desenvolvimento dessas duas metodologias se mostra viável para análise funcional de genes de M. anisopliae. / Metarhizium anisopliae is an entomopathogenic fungus used as a biological control agent due to its capacity to infect more than three hundred species of arthropods. It is broadly used as a model to the development of host-pathogen interaction studies, including the study of the description of the involved genes in the infection process by the construction of functional mutants. This process may be facilitated by the use of the CRISPR/Cas9 methodology to genomic manipulation, which was derived from the immune adaptive system in prokaryotes and has demonstrated technological potential in genetic of eukaryotes edition through the activity of incorporation of protospacers (sequences arising from bacteriophages or plasmids invaders) in their loci. CRISPR and CRISPR associated protein (Cas) code a guided nuclease (Cas9) that targets a specific site of the invading DNA leading to breakage of double-stranded target DNA in a specific sequence. Multiple gene editing studies have been developed in different organisms including its adaptation to eukaryotes. In order to improve the efficiency of the generation of mutants in M. anisopliae, CRISPR/Cas9 system and a RNAi system were used in order to develop new tools. Both CRISPR/Cas9 and RNAi methodologies were developed having as a target the gfp gene from M. anisopliae E6 GFP+ strain. To perform genome editing in M. anisopliae, stable transgenic fungi that express fungal codon-optimized Cas9 were generated by Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Oligonucleotides were designed to target four different regions along the gfp gene by using the CRISPR RGEN tool in order to avoid off-targets. The binary vector was the pPZP plasmid with the U6-1 to RNAi expression. For RNAi analysis, gene knockdown were developed by agrotransformation with a suitable plasmid (pPZP::SUR::DP) containing dual promoters with opposite directions (Pdgp and Ptrpc) and a cassette for the expression of the selective marker (gene sur, conferring sulfonylurea resistance) for the selection of transformants. The 420 bp gfp sequence was cloned between promoters, obtaining thus the plasmid pPZP::SUR::DP::GFP. The development of these two techniques proves itself viable for functional analysis of M. anisopliae genes.

A soja é uma das espécies cultivadas de maior importância econômica para o Brasil, atualmente o segundo maior produtor mundial deste grão. Contudo, doenças causadas por fungos são um dos principais problemas enfrentados pelos produtores de soja, o que leva a grandes perdas. Uma das alternativas para superar este problema é a utilização de cultivares com resistência genética. Com este objetivo, foram realizados quatro experimentos independentes de transformação genética de soja, em que o gene chit1, que codifica uma quitinase, enzima capaz de degradar paredes fúngicas, foi transferido para culturas embriogênicas, através da metodologia de biobalística. O gene marcador hpt, que confere resistência ao antibiótico higromicina, também foi utilizado. Em três dos experimentos realizados, uma nova metodologia foi testada, em que sequências desnecessárias, presentes nos vetores de transformação, não são colocadas na planta, e sim apenas os cassetes gênicos, contendo regiões regulatórias e codificadoras. No 1° Experimento realizado, foram obtidas plantas transgênicas transformadas com plasmídeos, mas estas não produziram sementes. No 2° Experimento, foi obtida uma linhagem transgênica, oriunda da transformação com plasmídeos. Foi confirmada a presença e a expressão do gene de quitinase em uma planta T0. Esta planta gerou uma progênie de 16 plântulas. Destas, 10 foram analisadas por PCR e foi confirmada a transmissão do transgene marcador para seis plantas T1. Análises moleculares complementares são necessárias para a determinação do padrão de herança dos transgenes. Como resultado do 3º Experimento realizado, foram obtidos 3.298 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (2.804 oriundos da transformação com plasmídeos e 494 da transformação com cassetes) e 2.286 para a cultivar IAS (759 com plasmídeos e 1.527 com cassetes). Do 4º Experimento realizado, foram obtidos 1.339 embriões histodiferenciados da cultivar Bragg (1.312 oriundos da transformação com plasmídeos e 27 da transformação com cassetes) e 1.035 para a cultivar IAS5 (851 com plasmídeos e 184 com cassetes). Mesmo considerando a possibilidade de alguns dos embriões obtidos serem escapes à seleção, a resistência ao antibiótico é um forte indício de transformação estável. Já foram obtidos embriões germinados oriundos da transformação com cassetes, resultantes dos 3° e 4° Experimentos. Com a condição transgênica comprovada, será realizada uma comparação dos padrões de integração gerados por transformação com plasmídeos e cassetes gênicos. / Soybean is one of the most important crops in Brazil, which is nowadays the second world largest producer. However, injuries caused by fungus are one of the main problems faced by the producers, causing great losses. One of the possibilities to deal with this problem is the utilization of cultivars with genetic resistance. With this goal, four independent soybean transformation experiments were performed. A chitinase gene, chit1, which can break fungal cell walls, was transferred to soybean embryogenic cultures, through the use of biolistic. The selection marker gene hpt, which confers hygromycin resistance, was also transferred to the embryos. In three of the performed experiments, a new methodology was tested, where unnecessary sequences, that are part of the transformation vectors, were not introduced into the plant, but only the gene cassettes, which contain regulatory and coding sequences. In the first experiment, transgenic plants were obtained, but they left no progeny. In the second experiment, one transgenic line was obtained from the plasmid transformation. The presence and expression of the chitinase gene in one T0 plant was confirmed. 16 T1 plantlets were obtained. 10 were analyzed by PCR, and the transmission of the marker gene to six T1 plants was confirmed. Further molecular analyses are necessary in order to determine the inheritance pattern of the transgenes. As a result of the 3rd Experiment, 3.298 histodifferentiated embryos of the cultivar Bragg were obtained (2.804 from the plasmid transformation and 494 from the gene cassettes transformation) and 2.286 of the cultivar IAS (759 from the plasmid transformation and 1.527 from the gene cassettes transformation). From the 4th Experiment, 1.339 histodifferentiated embryos were obtained for cultivar Bragg (1.312 from the plasmid transformation and 27 from the cassettes) and 1.035 for IAS (851 from the plasmid transformation and 184 from the cassettes). Even considering the possibility that some of the embryos obtained may have escaped selection, the hygromycin resistance is a great indication of stable transformation. Plants transformed, resulting from the 3rd and 4th experiments, were already obtained with the minimal cassettes. Once their transgenic nature is proved, the patterns of integration of plasmid transformed plants and cassette transformed plants will be compared.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T11:56:16Z No. of bitstreams: 2 TESE Ana Paula de Almeida.pdf: 2200179 bytes, checksum: 4dcc526cd8f5268cf18fe96d57c8245b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T11:56:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Ana Paula de Almeida.pdf: 2200179 bytes, checksum: 4dcc526cd8f5268cf18fe96d57c8245b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar, porém as condições ambientais favorecem o aparecimento de pragas, dentre elas, Diatraea saccharalis, conhecida como broca da cana. Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de um óleo adjuvante emulsionável e de extratos de Indigofera suffruticosa e de Myrciaria cauliflora sobre Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana, bem como a patogenicidade de formulações a D. saccharalis. Foram utilizadas as linhagens M. anisopliae PL43, M. anisopliae IBCB425, B. bassiana ESALQ447 e B. bassiana ARSEF1398. O efeito fungitóxico foi avaliado por meio da incorporação de Veget’oil® e dos extratos vegetais das folhas e sementes de Indigofera suffruticosa e dos frutos de Myrciaria cauliflora ao Batata-Dextrose-Ágar (BDA) em diferentes concentrações. O grupo controle foi estava isento de óleo e extrato. Foram analisados os parâmetros biológicos: crescimento vegetativo, produção e germinação de conídios. Os efeitos do armazenamento das formulações (fungo + óleo) foram avaliados levando em consideração o percentual de germinação dos conídios formulados, em dois ambientes (25 ± 1ºC e -7 ± 1ºC). As larvas de D. saccharalis, do 3º estágio, foram imersas em suspensões contendo conídios fúngicos, formulação e extratos vegetais. O grupo controle foi inoculado com água destilada autoclavada e óleo. Os bioensaios foram realizados em cinco repetições e observados diariamente, por 10 dias. Veget’oil é compatível com B. bassiana ESALQ447, moderadamente tóxico para M. anisopliae PL43 e IBCB425 e tóxico para B. bassiana ARSEF1398, na menor concentração. Os fungos formulados permaneceram viáveis por até 90 dias, a 25 ± 1ºC. Os conídios formulados estocados a -7 ± 1ºC permaneceram viáveis por 11 meses. Todas as linhagens testadas foram patogênicas a D. saccharalis. A formulação em óleo mais eficiente foi a de Beauveria bassiana ESALQ447 que causou mortalidade de 74% das larvas. Os extratos vegetais analisados são compatíveis com os fungos e sua associação resultou num maior número de insetos mortos (96%) para M. anisopliae IBCB425 e 94% para M. anisopliae PL43 ambos com o extrato das sementes de I. suffruticosa. O extrato dos frutos de M cauliflora associado a B. bassiana ESALQ447 matou 84% das larvas. O extrato das folhas de I. suffruticosa foi o menos eficiente, atingindo 70% de mortalidade, somente quando associado à formulação. Os resultados demonstram o potencial das formulações e associação dos fungos com os extratos vegetais, que constituem uma alternativa viável para o controle de D. saccharalis.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:06:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4606_1.pdf: 2797398 bytes, checksum: 355dad44f5907334afd2460eb1b0f9c5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Zaprionus indianus foi introduzida no Brasil de forma acidental, provavelmente pelo comércio mundial de frutas. Devido às condições ambientais favoráveis e a ausência de inimigos naturais, vêm se espalhando por todo o país, infestando figos e frutos nativos, causando prejuízos à fruticultura. Uma alternativa de controle dessa mosca é a utilização de fungos entomopatogênicos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a infectividade de Metarhizium anisopliae sobre larvas e adultos de Z. indianus. As larvas foram imersas e os adultos foram pulverizados com suspensões de 104 a 108 conídios/mL. Foram analisados os parâmetros biológicos: período de pré-pupa, estágio pupal, ritmo de emergência, percentual de emergência e mortalidade de adultos. O período de pré-pupa e o estágio pupal de Z. indianus não sofreram alterações significativas em relação ao grupo controle (1,3 e 5,9 dias, respectivamente); o percentual de emergência de adultos foi significativamente reduzido, menor que 3%, na concentração de 108 conídios/mL. Após nove dias de infecção, 98% dos adultos morreram, na concentração mais elevada. A CL50 foi 1,64x105 conídios/mL e 1,94x104 conídios/mL para M. anisopliae URM3349 e URM4403, respectivamente. O TL50 foi de quatro a seis dias com 108 conídios/mL. Metarhizium anisopliae reisolado de Z. indianus não apresentou alterações morfológicas, mas o diâmetro da colônia foi maior do que antes da passagem pelo inseto, alcançando 6,76 cm. De acordo com os resultados obtidos, as duas linhagens de M. anisopliae testadas apresentaram ação patogênica contra Z. indianus indicando assim sua potencialidade para o controle biológico desse inseto

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:55:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5258_1.pdf: 1125831 bytes, checksum: ae5f7e49f764595752ed692e03bc4886 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Foram analisadas duas linhagens de Metarhizium anisopliae quanto à patogenicidade sobre insetos adultos de Callosobruchus maculatus utilizando as concentrações 108 a 104 conídios/mL-1, sendo a virulência determinada pelo percentual de mortalidade, decorridos dos doze dias de observação. Os isolados mostraram-se altamente patogênicas, provocando mortalidade superior a 50% da população de insetos já no terceiro dia após a inoculação. Os isolados de Metarhizium anisopliae var. anisopliae URM3349, e M. anisopliae var. acridum URM4412 foram agressivas ao inseto-alvo, tendo o isolado de M. anisopliae var. anisopliae URM3349 comportamento mais agressivo, sugerindo sua utilização em programas de controle biológico do caruncho do caupi. Foi avaliado, in vitro, o efeito fungitóxico de produtos fitossanitários utilizados em culturas de feijão, sobre o crescimento vegetativo e a conidiogênese nas linhagens de M. anisopliae. Independentemente do inseticida utilizado, o isolado M. anisopliae var. anisopliae URM3349, foi a que apresentou maior taxa de crescimento, enquanto o isolado M. anisopliae var. acridum URM4412 apresentou maior efeito inibitório no crescimento micelial. A compatibilidade dos isolados de M. anisopliae variou amplamente dentro de cada linhagem e entre os inseticidas estudados, sendo Quimióleo (azadiractina) o produto que apresentou o maior efeito fungitóxico e M. anisopliae var. acridum URM 4412 o fungo mais sensível ao efeito dos defensivos agrícolas. As linhagens, em associação aos inseticidas utilizados, podem ser recomendadas para o Manejo Integrado de Praga do Caupi

Orientador: Ricardo Antonio Polanczyk / Resumo: A lagarta do algodão, Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) é uma das mais importantes pragas da agricultura mundial. Os danos causados por essa espécie ocorrem desde a emergência da planta. O uso desordenado de produtos químicos para controlar essas lagartas acelerou o desenvolvimento de resistência e têm causado efeitos adversos aos inimigos naturais, tornando-se uma grande preocupação ambiental. Diante disso, a busca por medidas alternativas que visam diminuir esses impactos aumenta. Agente de controle microbiano é considerada uma alternativa eficiente e segura, especialmente o uso de fungos entomopatogênicos. As principais espécies de fungos entomopatogênicos utilizadas são Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, essas têm sido utilizadas para controlar insetos pragas de várias ordens, e a variabilidade genética presente nesses microrganismos é muito alta, possibilitando estudos de seleção de isolados fúngicos para o desenvolvimento de formulações eficientes em condições de laboratório e campo. Assim, o objetivo desse trabalho foi selecionar isolados dos fungos entomopatogênicos B. bassiana e M. anisopliae para controle de H. armigera em condições de laboratório e campo (persistência) considerando os efeitos letais e subletais. Nos primeiros bioensaios utilizou-se 23 isolados, sendo 10 isolados de M. anisopliae e 13 de B. bassiana avaliando a interação das lagartas e os isolados fúngicos. Para isso foram confeccionadas tabelas de vida e realizados te... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cotton caterpillar, Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) is one of the most important pests in world agriculture for attacking several species of plants of economic importance. The damage caused by this species occurs since the emergence of the plant. The disordered use of chemicals to control these caterpillars has accelerated the development of resistance and has caused adverse effects to natural enemies, becoming a major environmental concern. Therefore, the search for alternative measures to reduce these impacts increases. Microbial control agent is considered an efficient and safe alternative, especially the use of entomopathogenic fungi. The main species of entomopathogenic fungi used are Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, these have been used to control insect pests of various orders, and the genetic variability present in these microorganisms is very high, enabling studies on the selection of fungal isolates for the development of efficient formulations under laboratory and field conditions. Thus, the objective of this work was to select isolates of the entomopathogenic fungi B. bassiana and M. anisopliae to control H. armigera in laboratory and field conditions (persistence) considering the lethal and sublethal effects. In the first bioassays, 23 isolates were used, 10 of which were M. anisopliae and 13 of B. bassiana, evaluating the interaction of caterpillars and fungal isolates. For that, life tables were made and tests of mortali... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Michele Potrich.pdf: 1335420 bytes, checksum: 217a9f67e1aa12bbdd6752f37c6601d2 (MD5) Previous issue date: 2006-03-17 / This work s objective was to associate strategies and control methods, aiming to minimize the damage caused by Sitophilus spp., in as much as it is considered the main pest insect in stored corn. Thus, corn cultivars resistant and susceptible to Sitophilus spp. attack were chosen through tests with chance of choice, to verify the feeding preference, and without chance of choice (confinement), where the insect s biology was analyzed, as well as the damage caused to the grains and the weight loss. Isolates of entomopathogenic fungi were selected through pathogenicity evaluations and lethal concentration, vegetative growth, conidia production in petri dishes, rice and in corpses. The susceptible and resistant C were associated to the selected isolates, and these were inoculated in the cultivars before and after the Sitophilus spp. infestation. It was verified that the cultivars CD 3121 presented resistence, increasing the duration of the egg-adult cicle, diminishing the number of emerged insects and diminishing the weight loss of the grains, and showed non-preference to feeding by Sitophilus spp., while cultivar CD 307 presented susceptibility and feeding preference to this insect. It was verified that all tested isolates were pathogenic to Sitophilus spp. Nevertheless, they differed about virulence, when 7 isolates caused at least 80% of confirmed mortality of this insect. Among these, the 3 that presented higher accumulated mortality at the 5th day after inoculation were selected: Unioeste 4, Unioeste 39 and Esalq 643. However, just isolates Unioeste 4 and Esalq 643 were selected to be associated to the cultivars, because they presented the best results on the realized tests. Analising the association between the isolates and the cultivars, higher control of Sitophilus spp. was verified, independent of the grain treatment strategy. The association caused an increase in the duration of the duration of the egg-adult duration, decrease of the number of emerged insects, decrese of damaged grains percentage and decrese of weight loss, for both cultivars CD 3121 and CD 307, and for both isolates. On the other hand, the isolates association with cultivars CD 3121 standed out for the control of Sitophilus spp., and the averages presented by this cultivar were more expressive / Este trabalho teve como objetivo associar estratégias e métodos de controle visando minimizar os danos provocados por Sitophilus spp., visto que este inseto é considerado o principal inseto-praga de milho armazenado. Assim, cultivares de milho resistentes e suscetíveis ao ataque de Sitophilus spp. foram selecionados através de testes com chance de escolha, para verificar a preferência alimentar, e sem chance de escolha (confinamento), onde a biologia do inseto foi analisada, bem como os danos ocasionados nos grãos e a perda de peso. Isolados de fungos entomopatogênicos foram selecionados através de avaliações de patogenicidade e comparação da virulência, determinação da concentração letal, crescimento vegetativo, produção de conídios em placa-de-Petri, produção de conídios em arroz e produção de conídios em cadáver. O cultivar suscetível e o cultivar resistente foram associados aos isolados selecionados, sendo que estes foram inoculados nos cultivares previa e posteriormente à infestação por Sitophilus spp. Verificou-se que o cultivar CD 3121 apresentou resistência, aumentando a duração do ciclo ovo-adulto, diminuindo o número de insetos emergidos e diminuindo a perda de peso dos grãos, e não-preferência para alimentação por Sitophilus spp., enquanto o cultivar CD 307 apresentou suscetibilidade e preferência alimentar para este inseto. Verificou-se que todos os isolados testados foram patogênicos a Sitophilus spp., no entanto, diferiram quanto à virulência, sendo que 7 isolados causaram no mínimo 80% de mortalidade confirmada neste inseto. Dentre estes, os 3 que apresentaram maior mortalidade acumulada, ao 5o dia após a inoculação foram selecionados, sendo Unioeste 4, Unioeste 39 e Esalq 643, no entanto, apenas os isolados Unioeste 4 e Esalq 643 foram selecionados para associação com os cultivares, pois apresentaram os melhores resultados nos testes realizados. Analisando a associação entre os isolados e os cultivares, verificou-se maior controle de Sitophilus spp., independente da estratégia de tratamento dos grãos, sendo que a associação causou um aumento na duração do ciclo ovo-adulto, diminuição no número de insetos emergidos, diminuição na porcentagem de grãos danificados e diminuição na perda de peso, tanto para o cultivar CD 3121, quanto para o cultivar CD 307, e para ambos isolados. Contudo, a associação dos isolados com o cultivar CD 3121 destacou-se para controle de Sitophilus spp., sendo que as médias apresentadas por este cultivar foram mais expressivas