Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_Ana_Raquel_Rheinheimer.pdf: 1213170 bytes, checksum: 2c8ffff0e9ba711e13537d3c2ff93282 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the action of entomopathogenic fungi and plant protection products used in alternative agroecological on nymphs of P. manihoti in cassava. The four upper leaves of cassava plants infested with nymphs of the mealybug P. manihoti application of treatments received in the lower surface of leaves on the nymphs, using a spray nozzle attached to an air compressor. After application, the plants were kept in semi-conditioned room (temperature 25 ± 5 º C and a photoperiod of 12h) and other insects on the leaves with the aid of prepared leaf cages per screen anti-aphids. The pesticides were evaluated by the insect mortality at 3, 5, 7 and 9 days after application. The mortality caused by strains of entomopathogenic fungi and commercial insecticides on nymphs was assessed daily for 10 days. For confirmation of death by the pathogen, the bodies were immersed in 70% alcohol and then in distilled water, transferred to Petri dishes and maintained at temperature (26 ± 1 ° C and a photoperiod of 14 hours). It was observed that all pesticides tested on nymphs proved efficient when the final assessment, however, differ in the mortality rate, and the products Pironim®, Lime sulfur®, Compostonat® and Plant Clean® presented the efficiency causing at least 50% mortality of nymphs of P. manihoti. Among isolates tested, only three were pathogenic to P. manihoti causing the corrected mortality varied from 15,2 to 28.5%, following 10 days of application. The other isolates tested showed low activity or were not pathogenic to Scale. The commercial biopesticides based on fungi were pathogenic to the nymphs of P. manihoti, causing mortality of 10 to 45.8%, and the best result was obtained with the product based on B. bassiana (Bovenat®) which provided 45.8% mortality confirmed / Este estudo teve como objetivo avaliar a ação de fungos entomopatogênicos e de produtos fitossanitários alternativos utilizados no sistema agroecológico de produção sobre ninfas de P. manihoti na cultura da mandioca. As quatro folhas apicais de plantas de mandioca infestadas com ninfas da cochonilha P. manihoti receberam aplicação dos tratamentos na face abaxial, sobre as ninfas, utilizando-se um micro pulverizador acoplado a um compressor de ar. Após a aplicação, as plantas foram mantidas em sala semi-climatizada (temperatura de 25 ± 5ºC e fotoperíodo de 12h) e os insetos mantidos nas folhas com auxílio de gaiolas. Os produtos fitossanitários foram avaliados através da mortalidade dos insetos aos 3, 5, 7 e 9 dias após a aplicação. A mortalidade causada pelos isolados de fungos entomopatogênicos e bioinseticidas comerciais sobre ninfas foi avaliada diariamente pelo período de 10 dias. Para confirmação da mortalidade pelo patógeno, os cadáveres foram imersos em solução de álcool 70% e posteriormente em água destilada, transferidos para placas de Petri e mantidas em câmara climatizada (26±1°C e fotoperíodo de 14 horas). Verificou-se que todos os produtos fitossanitários testados sobre as ninfas mostraram efeito ao final da última avaliação, no entanto, diferiram quanto a porcentagem de mortalidade, sendo que os produtos Pironim®, Calda fertilizante foliar®, Compostonat® e Planta Clean® apresentaram a maior mortalidade de ninfas de P. manihoti causando no mínimo 50%. Dentre os isolados testados, apenas três foram patogênicos à P. manihoti causando mortalidade corrigida que variou de 15,2 a 28,5%. Os demais isolados testados apresentaram baixa atividade ou não foram patogênicos à cochonilha. Os bioinseticidas comerciais à base de fungos foram patogênicos às ninfas de P. manihoti, causando mortalidade de 10 a 45,8%, sendo que o melhor resultado foi obtido com o produto à base de B. bassiana (Bovenat®) que proporcionou 45,8% de mortalidade confirmada

Orientador: Antonio Carlos Monteiro / Banca: Odair Aparecido Fernandes / Banca: Luis Garrigós Leite / Resumo: A broca da cana Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) é responsável por grandes prejuízos na cultura da cana-deaçúcar. O controle tem como alvo principal somente a fase de lagarta. No entanto, a eficiência pode ser maior atingindo fases do ciclo da praga mais expostas aos agentes de controle. O objetivo deste estudo foi avaliar a patogenicidade de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. para ovos, lagartas, pupas e adultos de D. saccharalis e avaliar, através da análise de parâmetros biológicos, os efeitos no ciclo de vida da praga. Ovos postos no período de 24 horas, lagartas com 15 dias de desenvolvimento, pupas recém formadas e adultos com 24 horas de vida foram inoculados com os fungos nas concentrações de 108, 107 e 106 conídios mL-1. A viabilidade dos ovos foi afetada significativamente no tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae, mas as lagartas sobreviventes não foram afetadas em nenhum outro parâmetro avaliado. M. anisopliae e B. bassiana causaram mortalidade de lagartas principalmente nas concentrações de 108 e 107 con. mL-1, enquanto a viabilidade pupal e o peso de pupas fêmeas formadas a partir de lagartas tratadas foram reduzidos apenas pelos tratamentos com 108 e 107 con. mL-1 de M. anisopliae, respectivamente. I. farinosa não se mostrou patogênico para as fases de ovo e lagarta de D. saccharalis. O tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae e B. bassiana produziu 52,0 e 42,0% de mortalidade de pupas, respectivamente, afetando também a viabilidade de pupas e a longevidade de adultos emergidos. A fecundidade destes adultos foi severamente afetada por I. farinosa na concentração 108 con. mL-1 e pelos outros fungos em todas as concentrações avaliadas. Verificou-se grande mortalidade de adultos tratados com todas as concentrações de M. anisopliae... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The sugarcane borer Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) is responsible for high losses in sugarcane. The larval stage is the main target of control. However, the efficiency can be higher by reaching different and more exposed stages with more exposure to the control agents. The aim of this study was to evaluate the pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. to eggs, larvae, pupae and adults of D. saccharalis and to evaluate the effects on pest lifecycle. Eggs with 24 hours, larvae with 15 days of development, newly formed pupae and adults with 24 hours of life were inoculated with fungi at concentrations of 108, 107 and 106 conidia mL-1. The eggs viability was significantly affected in the treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae, but the survival larvae were not affected in any of the analyzed parameters. M. anisopliae and B. bassiana caused larval mortality mainly at concentrations of 108 and 107 con. mL-1, while pupae viability and female pupal weight formed from treated larvae were reduced only by treatments with 108 and 107 con. mL-1 of M. anisopliae, respectively. I. farinosa wasn't pathogenic to eggs and larvae of D. saccharalis. The treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae and B. bassiana produced 52.0 and 42.0% pupae mortality respectively, also affecting the pupal viability and the longevity of adults. The fecundity of these adults was severely affected by I. farinosa in the concentration of 108 con. mL-1 and by other fungi in all evaluated concentrations. High mortality of treated adults with all concentrations of M. anisopliae and with 107 con. mL-1 was observed. The longevity and fecundity were not affected by the fungi, and the eggs viability laid by treated females was significantly reduced by treatment with 106 and 108 con. mL-1 of B. bassiana... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-15Bitstream added on 2014-06-13T19:14:44Z : No. of bitstreams: 1 simi_ld_me_jabo.pdf: 975668 bytes, checksum: a1a658ff0ef48ae2b0a2439f7cbf0bb3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A broca da cana Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) é responsável por grandes prejuízos na cultura da cana-deaçúcar. O controle tem como alvo principal somente a fase de lagarta. No entanto, a eficiência pode ser maior atingindo fases do ciclo da praga mais expostas aos agentes de controle. O objetivo deste estudo foi avaliar a patogenicidade de Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. e Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. para ovos, lagartas, pupas e adultos de D. saccharalis e avaliar, através da análise de parâmetros biológicos, os efeitos no ciclo de vida da praga. Ovos postos no período de 24 horas, lagartas com 15 dias de desenvolvimento, pupas recém formadas e adultos com 24 horas de vida foram inoculados com os fungos nas concentrações de 108, 107 e 106 conídios mL-1. A viabilidade dos ovos foi afetada significativamente no tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae, mas as lagartas sobreviventes não foram afetadas em nenhum outro parâmetro avaliado. M. anisopliae e B. bassiana causaram mortalidade de lagartas principalmente nas concentrações de 108 e 107 con. mL-1, enquanto a viabilidade pupal e o peso de pupas fêmeas formadas a partir de lagartas tratadas foram reduzidos apenas pelos tratamentos com 108 e 107 con. mL-1 de M. anisopliae, respectivamente. I. farinosa não se mostrou patogênico para as fases de ovo e lagarta de D. saccharalis. O tratamento com 108 con. mL-1 de M. anisopliae e B. bassiana produziu 52,0 e 42,0% de mortalidade de pupas, respectivamente, afetando também a viabilidade de pupas e a longevidade de adultos emergidos. A fecundidade destes adultos foi severamente afetada por I. farinosa na concentração 108 con. mL-1 e pelos outros fungos em todas as concentrações avaliadas. Verificou-se grande mortalidade de adultos tratados com todas as concentrações de M. anisopliae... / The sugarcane borer Diatraea saccharalis (Fabricius, 1794) (Lepidoptera: Crambidae) is responsible for high losses in sugarcane. The larval stage is the main target of control. However, the efficiency can be higher by reaching different and more exposed stages with more exposure to the control agents. The aim of this study was to evaluate the pathogenicity of Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok. Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. and Isaria farinosa (Holmsk.) Fr. to eggs, larvae, pupae and adults of D. saccharalis and to evaluate the effects on pest lifecycle. Eggs with 24 hours, larvae with 15 days of development, newly formed pupae and adults with 24 hours of life were inoculated with fungi at concentrations of 108, 107 and 106 conidia mL-1. The eggs viability was significantly affected in the treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae, but the survival larvae were not affected in any of the analyzed parameters. M. anisopliae and B. bassiana caused larval mortality mainly at concentrations of 108 and 107 con. mL-1, while pupae viability and female pupal weight formed from treated larvae were reduced only by treatments with 108 and 107 con. mL-1 of M. anisopliae, respectively. I. farinosa wasn´t pathogenic to eggs and larvae of D. saccharalis. The treatment with 108 con. mL-1 of M. anisopliae and B. bassiana produced 52.0 and 42.0% pupae mortality respectively, also affecting the pupal viability and the longevity of adults. The fecundity of these adults was severely affected by I. farinosa in the concentration of 108 con. mL-1 and by other fungi in all evaluated concentrations. High mortality of treated adults with all concentrations of M. anisopliae and with 107 con. mL-1 was observed. The longevity and fecundity were not affected by the fungi, and the eggs viability laid by treated females was significantly reduced by treatment with 106 and 108 con. mL-1 of B. bassiana... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:01:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RaimundoCSF_TESE.pdf: 5128355 bytes, checksum: 983c8be1a2dbc05edd6e91353e650c3b (MD5) Previous issue date: 2013-04-05 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / In this work a Plackett-Burman Design with 8 factors and 12 trials in 2 levels with 3 repetitions at the center point was used in order to investigate the influence of the concentration of chitosan, peptone, yeast extract, NaNO3, K2HPO4, KCl, MgSO4.7H2O and FeSO4 on chitosanase production by Metarhizium anisopliae. Runs were carried out using submerged discontinuous cultivation for enzyme production. The results of the Plackett & Burman Design showed that only two factors, chitosan concentration as well as FeSO4 had influence on chitosanolytic activity, while the increase in concentration of other factors not contributed significantly to the quitosanol?tica activity. Cultivation medium optimization for enzyme production was carried out using a Composite Central Design, with the most important factors for chitosanolytic activity (chitosan and FeSO4), in accordance with Plackett & Burman Design, and keeping the other nutrients in their minimum values. On this other design, it was taken the highest limit in Plackett & Burman Design as the lowest limit (-1) to FeSO4 factor. The results showed that the enzyme production was favoured by increasing the chitosan concentration and by decreasing FeSO4. Maximum production for chitosanolytic activity was about 70.0 U/L and was reached in only 18 h of fermentation, a result about twenty-eight times greater than a former study using the same microorganism (about 2.5 U/L at 48 h) / No presente trabalho utilizou-se um Planejamento Plackett & Burman, com 8 fatores e 12 ensaios em 2 n?veis e mais 3 repeti??es na condi??o do ponto central, para se investigar a influ?ncia das concentra??es de quitosana, peptona, extrato de levedura, NaNO3, K2HPO4, KCl, MgSO4.7H2O e FeSO4 na produ??o da enzima quitosanase por Metarhizium anisopliae. Os ensaios para produ??o da enzima foram realizados em cultivo descont?nuo submerso. Os resultados para o Planejamento Plackett & Burman mostraram que a atividade quitosanol?tica foi favorecida pelo aumento da concentra??o de substrato (quitosana) e de sulfato ferroso (FeSO4), enquanto que o aumento da concentra??o dos outros fatores n?o contribuiu de forma significativa para a atividade quitosanol?tica. A otimiza??o do meio de cultura para a produ??o da enzima foi realizado por meio de um Planejamento Composto Central, com os dois fatores que mais influenciaram a atividade quitosanol?tica (quitosana e FeSO4), conforme Planejamento Plackett & Burman, mantendo-se os outros nutrientes em seus valores m?nimos. Nesse planejamento, para o fator FeSO4, tomou-se o limite inferior (-1) como sendo o limite superior do Planejamento Plackett & Burman. Os resultados mostraram que a produ??o da enzima foi favorecida pelo aumento da concentra??o quitosana e pela diminui??o da concentra??o de FeSO4. A produ??o m?xima de atividade quitosanol?tica foi da ordem de 70,0 U/L e foi atingida em apenas 18 h de fermenta??o, resultado esse vinte e oito vezes maior aos obtidos anteriormente para o mesmo microrganismo que foi 2,5 U/L em 48h

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T11:21:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Antônio Rangel Machado - 2015.pdf: 4325578 bytes, checksum: 74553bf431f6100c4577eec10eec4143 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-28T11:25:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Antônio Rangel Machado - 2015.pdf: 4325578 bytes, checksum: 74553bf431f6100c4577eec10eec4143 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-28T11:25:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - João Antônio Rangel Machado - 2015.pdf: 4325578 bytes, checksum: 74553bf431f6100c4577eec10eec4143 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The susceptibility of cockroaches to infection with pathogenic fungi can be associated to the host species and their stage/instar. The high resistance of elder nymphs of Periplaneta americana, a synanthropic species in tropical and subtropical regions, against Metarhizium anisopliae is still poorly understood and can be connected to behavioral, physiological and mechanical mechanisms. Fourth and fifth instar nymphs (N4 or N5), treated topically with conidia, removed mechanically part of the conidia from the cuticle, antennae and legs, immediately after treatment and in the following days. A small number (< 5%) of the conidia on the cuticle germinated in the first 24 hours, and quantitative germination of the remaining conidia reached 80% within the next 7 days. In most of the treated nymphs, the fungus failed to reach the hemolymph during the 10 days of the test, and in the others, the number of hyphal bodies ranged from 500 to 8 x 107 per μL hemolymph. Few nymphs (30%) died within 10 days after inoculation, and M. anispoliae developed in 50% of the cadavers. The results confirmed the high resistance of elder P. americana nymphs to M. anisopliae and highlighted the importance of the early stages of the infection during the contact and insect invasion by the fungus. Subsocial behavior patterns and specific physiological factors in the cuticle, not elucidated in this study, are resistance key issues and need to be considered when developing mycoinsecticides for P. americana and other cockroach control. / A susceptibilidade de baratas à infecção com fungos entomopatogênicos parece ser ligada a espécie hospedeira e estágio/estádio. A resistência elevada de ninfas mais velhas de Periplaneta americana, uma espécie sinantrópica em regiões tropicais e subtropicais, para Metarhizium anisopliae ainda está pouco entendida e pode ser ligada a mecanismos comportamentais, mecânicos e fisiológicos. Ninfas de quarto e quinto ínstar (N4 ou N5) tratadas topicamente com conídios removeram mecanicamente parte dos conídios da cutícula com as antenas e patas imediatamente após tratamento e nos próximos dias. Um número reduzido (< 5%) dos conídios na cutícula germinou nas primeiras 24 horas, e a germinação quantitativa dos conídios restantes chegou até 80% nos próximos 7 dias. Na maioria das ninfas tratadas, o fungo não conseguiu chegar na hemolinfa durante os 10 dias do teste, e nas outras, o número de corpos hifais variou entre 500 e 8 x 107 por μl de hemolinfa. Poucas ninfas (30%) morreram até 10 dias após inoculação, e M. anispoliae desenvolveu em 50% dos cadáveres. Os resultados confirmaram a grande resistência de ninfas mais velhas de P. americana para M. anisopliae e ressaltaram a importância das fases iniciais da infecção durante o contato e invasão do inseto pelo fungo. Padrões de comportamento subsocial e fatores fisiológicos específicos na cutícula, não esclarecidos nesse estudo, são questões chave de resistência e precisam ser considerados no desenvolvimento de micoinseticidas para controle de P. americana e de outras baratas.

Formulações a base de dispersões oleosas de conídios aéreos de fungos entomopatogênicos apresentam diversas vantagens em comparação à aplicação de produtos não formulados; entretanto, a complexidade e a falta de compreensão dos fatores que influenciam a persistência desse tipo de formulação fazem com que ainda seja pouco utilizada. O efeito de diferentes níveis de secagem de conídios, tipo de óleo, métodos de extração, estabilidade de blastosporos, compatibilidade de surfactantes e adição de aditivos foram avaliados para o desenvolvimento de micopesticidas formulados em óleo. Os melhores resultados obtidos com os conídios em óleo foram avaliados quanto à proteção conferida à radiação UV e a eficiência das formulações na mortalidade de Tenebrio molitor. Zeolita foi a argila mais eficiente na manutenção da viabilidade de blastosporos de M. anisopliae e B. bassiana, e apesar de resultados promissores a estabilidade desses propágulos foi muito inferior a de conídios aéreos. Vinte surfactantes foram avaliados quanto a inocuidade aos conídios, em dois ensaios, culminando com a seleção dos quatro mais compatíveis, dois deles E5 e E7, avaliados nos experimentos posteriores demonstraram bom potencial para compor a formulação como agentes emulsionantes. Dois aditivos foram avaliados na formulação e respostas distintas foram observadas. O A1 foi altamente incompatível, enquanto diferentes concentrações de A2 (1, 3 e 5%) incrementaram a sobrevivência dos conídios em até sete vezes. As vantagens da presença do A2 ficaram evidentes também em combinações de óleo com os quatro emulsionantes selecionados. As dispersões oleosas proporcionaram sobrevivência até sete vezes superior para conídios expostos a radiação UV em relação a conídios não formulados e dois experimentos comprovaram que as formulações oleosas testadas foram mais eficientes no controle de insetos, com reduções de até 2,3 vezes no tempo de sobrevivência de insetos. Os 12 bioensaios com mais de 20.000 leituras de viabilidade descritos neste trabalho permitiram um melhor entendimento dos fatores críticos que afetam a vida de prateleira de conídios, e indicam procedimentos que podem ser utilizados para melhorar a estabilidade de micopesticidas formulados em óleo. / Oil-based formulations of aerial conidia of entomopatogenic fungi have several advantages compared to the use of unformulated products; however, the complexity and lack of understanding of the factors that influence the persistence of this type of formulation make it still not widely used. The effect of different levels of drying conidia, oil type, extraction methods, blastospores stability, compatibility of surfactants and addition of additives were evaluated for the development of a mycopesticide oil formulation. The best results obtained with aerial conidia were evaluated regarding the protection against UV radiation and the efficacy of the formulations to control Tenebrio molitor. Zeolita was the most compatible clay in maintaining the viability of blastospores of M. anisopliae and B. bassiana, and despite promising results in the stability, the shelf life of these propagules was much lower than aerial conidia. Twenty surfactants were evaluated for safety to conidia in two trials resulting in the selection of the four most compatible, two of them E5 and E8, were evaluated in subsequent experiments demonstrating good potential as emulsifiers in oil-based formulations. Two additives were evaluated in the formulation and distinct responses were observed. A1 was highly toxic to the fungi, while different concentrations of A2 increased the survival of the conidia up to seven times. The advantages of A2 were evident also in combinations of oil with the four selected emulsifiers. Oil-based formulation provided survival up to seven times higher for conidia exposed to simulated UV radiation compared to unformulated conidia, and two experiments showed that oil formulations were more efficient in the insect control, with reductions of up to 2.3 times on the survival time of insects. Twelve bioassays and over 20.000 viability readings described in this work, allowed a better understanding of the critical factors that affect the shelf-life of conidia, and indicate methods that can be used to improve the stability of mycopesticides in oil-based formulations.

O objetivo deste estudo foi caracterizar a diversidade de Metarhizium em um plantio de cana-de-açúcar e monitorar a eficácia e persistência do isolado ESALQ 1604 de M. anisopliae, após aplicação em campo, através de técnicas moleculares. Isolados foram recuperados de amostras de solo, raiz e cigarrinha-das-raízes infectadas de duas áreas de um canavial em Iracemápolis-SP, uma com aplicação do fungo (isolado ESALQ 5310) e colheita mecânica e outra sem aplicação e colheita manual antecedida por queimada. Os isolados de insetos foram recuperados de ninfas e adultos coletados 51, 42 e 1 dia (s) antes da aplicação do fungo e 7, 30, 60 e 90 dias após a aplicação. Isolados de solo e raiz foram obtidos 90 dias pré-aplicação do fungo e 30 e 90 dias pós-aplicação. A aplicação de M. anisopliae foi realizada em 09/01/15 com suspensão de 3,72x106 conídios viáveis/mL numa vazão de 150L/ha. Nas análises moleculares também foram incluídos 22 isolados provenientes das mesmas áreas coletados em 18/12/2012. A diversidade haplotípica de Metarhizium foi obtida pela genotipagem de 10 marcadores microssatélites para 213 isolados provenientes de amostras de solos, 22 de raízes e 73 de cigarrinha-das-raízes. A identificação específica dos fungos foi obtida pelo sequenciamento do gene 5\'-TEF de 57 isolados provenientes de solos, 6 de raízes e 14 de cigarrinha-das-raízes selecionados dentre os diferentes haplótipos gerados pelas análises dos marcadores microssatélites. Dentre os 310 isolados genotipados, foram obtidos 156 haplótipos do fungo, destes, 132 provenientes de isolados de solo, 17 de raízes e 20 de cigarrinha-das-raízes. A maior diversidade haplotípica foi encontrada nos solos h=0,989 e a menor em insetos h=0,779. A divergência genética entre isolados provenientes de insetos, solos e raízes foi significativa (&Phi;ST =0.303), sendo a maior proporção da variação dentro (69,6 %) do que entre (30,3 %) esses grupos. A mortalidade de cigarrinha-das-raízes por M. anisopliae antes da aplicação variou de 0 a 14,8% para ninfas e 7,3-18,1% para adultos. Sete dias após a aplicação, observou-se 50% de mortalidade confirmada de ninfas e 10,7% de adultos. O isolado aplicado em campo foi recuperado somente em cigarrinha-das-raízes e nas coletas 7, 30 e 60 dias pós-aplicação, compreendendo 50%, 50% e 70,5% de todos os insetos mortos por M. anisopliae, respectivamente. A população da praga reduziu após 90 dias e não foram observadas cigarrinhas infectadas nesta amostragem. No solo, foram encontradas as espécies M. robertsii (clados Mrob 1, Mrob 2 e Mrob 4), M. anisopliae (Mani 1 e Mani 2) e M. brunneum. Em raízes foram encontradas as espécies M. brunneum e M. anisopliae (Mani 2). Em adultos e ninfas de cigarrinha-das-raízes foram encontrados somente haplótipos de um único clado (Mani 2) de M. anisopliae, e o isolado ESALQ 5310 aplicado nos anos anteriores na área não foi recuperado. Os resultados obtidos neste trabalho revelam a grande diversidade haplotípica de Metarhizium spp. e o impacto das populações locais de M. anisopliae na regulação de cigarrinhas em cana-de-açúcar. / The aim of this study was to characterize the diversity of Metarhizium in a sugarcane plantation and to monitor the efficacy and persistence of the isolate ESALQ 1604 of M. anisopliae after field application, by molecular techniques. Isolates were recovered from samples of soil, root and infected spittlebugs of two areas in Iracemápolis-SP: one with application of the fungus (isolate ESALQ 5310) and mechanical harvesting and another without fungal application and manual harvest preceded by burning. The isolates from insects were recovered from nymphs and adults collected 51, 42 and 1 day (s) before application of the fungus and 7, 30, 60 and 90 days after application. Isolates of soil and root were obtained 90 days pre-application of the fungus and 30 and 90 days post-application. The application of M. anisopliae was carried out in 9/Jan/15 with suspension of 3,72 x 106 viable conidia/mL at a volume rate of 150 l/ha. In the molecular analyses, 22 isolates from the same areas collected in 18/12/2012 were also included. The haplotype diversity of Metarhizium was obtained by genotyping 10 microsatellite markers of 213 isolates from soil samples, 22 from roots and 73 from spittlebugs. The specific identification of fungi was obtained by sequencing the gene 5\'- TEF of 61 isolated from soil, 6 from root and 13 from spittlebug selected among the different haplotypes generated by analysis of microsatellite markers. Among 310 isolates genotyped, 156 haplotypes of the fungus were obtained, of these, 132 from soil isolates, 17 of root and 20 of spittlebug. The highest haplotype diversity was found in soil h=0.989 and the smallest in spittlebug h = 0.779. The genetic divergence among isolates from insect, soil and root was significant (&Phi;ST = 0.303), being the largest proportion of the variation within (69.6%) than among (30.3%) these groups. The mortality of spittlebugs by M. anisopliae before application ranged from 0 to 14.8% for nymphs and 7.3-18.1% for adults. Seven days after application, 50% of nymph mortality and 10.7% of adult mortality was observed. The isolate applied on the field was recovered only in spittlebugs and only 7, 30 and 60 days, post-application, and accounted for 50%, 50% and 70.5% of all insects killed by M. anisopliae, respectively. The pest population reduced after 90 days and no spittlebug infected was observed in this sample date. The species and clades found in isolates from soil were M. robertsii (clades Mrob 1, Mrob 2 and Mrob 4), M. anisopliae (Mani 1 and Mani 2) and M. brunneum. In roots the species found were M. brunneum and M. anisopliae (Mani 2). In adults and nymphs of spittlebug only haplotypes of a single clade (Mani 2) of M. anisopliae were found. The isolate ESALQ 5310 applied in previous years in the area was never recovered. The results obtained in this work revelead the great diversity of haplotype Metarhizium spp. and the impact of local populations of M. anisopliae on population regulation of spittlebugs in sugarcane.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-16T11:55:33Z No. of bitstreams: 2 Dissertação RenanLeles-2009.pdf: 2556894 bytes, checksum: be2adcc63b3f7ae1e5aa645d4cd4bbf2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-16T13:47:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação RenanLeles-2009.pdf: 2556894 bytes, checksum: be2adcc63b3f7ae1e5aa645d4cd4bbf2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-16T13:47:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação RenanLeles-2009.pdf: 2556894 bytes, checksum: be2adcc63b3f7ae1e5aa645d4cd4bbf2 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2009-05-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Aedes aegypti is the main vector of dengue fever in tropical and subtropical countries in the world. Due to the absence of a vaccine for dengue fever, the vector´s combat is fundamental fot the disease control. The spread of mosquito populations resistant to chemical insecticides shows the necessity to establish integrate vector control programs. Entomopathogenic fungi have potential for biological control of A. aegypti; however, only tow fungal species. Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana, have been stutied more intensely for this purpose. The present study evaluated the pathogenicity of nineteen fungal species of the Hypocreales order against A. aegypti adults, and investigated new methods for fungal application to control these mosquitoes and for detection and isolation of fungi and oomycetes from A. aegypti larvae and adults. The results clearly showed the potential of fungi, especially form the Metarhizium genus, for the combat of eggs and adult mosquitoes. The present study proposes a new pratical method for the detection and isolation of entomopathogenic fungi from infected mosquitoes collected in the field.</dcvalue><dcvalue element="description" qualifier="abstract" language="eng">Aedes aegypti is the main vector of dengue fever in tropical and subtropical countries in the world. Due to the absence of a vaccine for dengue fever, the vector´s combat is fundamental fot the disease control. The spread of mosquito populations resistant to chemical insecticides shows the necessity to establish integrate vector control programs. Entomopathogenic fungi have potential for biological control of A. aegypti; however, only tow fungal species. Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana, have been stutied more intensely for this purpose. The present study evaluated the pathogenicity of nineteen fungal species of the Hypocreales order against A. aegypti adults, and investigated new methods for fungal application to control these mosquitoes and for detection and isolation of fungi and oomycetes from A. aegypti larvae and adults. The results clearly showed the potential of fungi, especially form the Metarhizium genus, for the combat of eggs and adult mosquitoes. The present study proposes a new pratical method for the detection and isolation of entomopathogenic fungi from infected mosquitoes collected in the field. / O interesse em fungos entomopatogênicos para controle integrado de mosquitos é grande. Entretanto pouco se sabe sobre o efeito de fungos em adultos e transmissão de micoses em Aedes aegypti. No presente trabalho, estudaram-se, em condições de laboratório, a atividade adulticida e a propagação da infecção para ovos postos por fêmeas tratadas com três isolados de Paecilomyces spp, dois Isaria spp, um Penicillium sp e um Metarhizium anisopliae. Foram realizados dois experimentos: Com conídios secos de M. anisopliae IP 46 a 5x104 conídios/cm3 (Teste 1) e com conídios dos outros fungos formulados em óleo-água, a 10% do óleo, a 106 conídios/cm2 (Teste 2). As fêmeas foram alimentadas com sangue de camundongo em dias alternados e, para ambos os sexos, solução açucarada (5%) foi ofertada ad libitum. Os adultos foram mantidos a 25ºC, umidade relativa (UR) de 70% e fotofase de 12 h até 10 d póstratamento (p.t.). Indivíduos mortos e ovos postos foram retirados, contados e incubados em UR > 98% e 25ºC por 15 d. Os ovos foram em seguida submersos em água e a eclosão de larvas avaliada diariamente até 5 d para todos os testes. Primeiros ovos postos foram encontrados em até 48 horas após a primeira hematofagia das fêmeas. O número médio de ovos/fêmea/dia (o/f/d) no teste 1 foi de 2,5 e no teste 2 variou entre 0,15 (Paecilomyces carneus CG 525) e 1,3 o/f/d (Isaria fumoserosea CG 325). Apenas IP 46 formou hifas e novos conídios sobre ovos e reduziu significativamente a eclosão quantitativa de larvas (39,2%), comparado com o grupo controle (68,6%; t = 2,3; P = 0,04). Nos demais testes a eclosão foi acima de 40%. Primeiros adultos geralmente morreram a partir de 48 h p.t. e o maior número de mortos foi encontrado 2 a 4 d depois, independentemente do teste realizado. A maior mortalidade, 10 d p.t. foi 39% (IP 46), seguido por 28% (Isaria farinosa CG 195), 16,4% (Paecilomyces marquandii CG 190), 8% (Penicillium sp IP 182), 6,8% (P. carneus CG 525), 4,7% (Paecilomyces lilacinus CG 362) e 4,6% (I. fumoserosea CG 325). A mortalidade encontrada para os controles foi ≤ 12% no mesmo momento. Mosquitos tratados com CG 195, CG 525, IP 46, CG 325 e CG 190 tiveram desenvolvimento de fungo em cadáveres. Mosquitos mortos pertencentes aos grupos tratados com os isolados IP 182, CG362 e controle não tiveram desenvolvimento de micélio. Os resultados mostraram que, de acordo com o tipo de aplicação utilizada, fêmeas de A. aegypti contaminaram ovos e assim propagaram a micose. Tratamento com conídios secos levou a uma maior contaminação das fêmeas e assim também dos ovos postos, comparada com a aplicação indireta utilizada para os demais fungos, no qual provavelmente a contaminação ficou restrita às partes do corpo em contato com a superfície tratada. A mortalidade reduzida encontrada para todos os fungos e para ambas técnicas pode estar relacionada à umidade subotima na qual foram mantidos os mosquitos e também ao tempo curto de observação dos adultos póstratamento. Os fungos testados têm atividade reduzida em adultos de A. aegypti e fêmeas desse mosquito podem transmitir a micose durante a oviposição. Mais estudos precisam ser feitos para selecionar linhagens mais virulentas e entender melhor mecanismos de infecção e transmissão horizontal de fungos em A. aegypti.</dcvalue><dcvalue element="description" qualifier="resumo" language="por">O interesse em fungos entomopatogênicos para controle integrado de mosquitos é grande. Entretanto pouco se sabe sobre o efeito de fungos em adultos e transmissão de micoses em Aedes aegypti. No presente trabalho, estudaram-se, em condições de laboratório, a atividade adulticida e a propagação da infecção para ovos postos por fêmeas tratadas com três isolados de Paecilomyces spp, dois Isaria spp, um Penicillium sp e um Metarhizium anisopliae. Foram realizados dois experimentos: Com conídios secos de M. anisopliae IP 46 a 5x104 conídios/cm3 (Teste 1) e com conídios dos outros fungos formulados em óleo-água, a 10% do óleo, a 106 conídios/cm2 (Teste 2). As fêmeas foram alimentadas com sangue de camundongo em dias alternados e, para ambos os sexos, solução açucarada (5%) foi ofertada ad libitum. Os adultos foram mantidos a 25ºC, umidade relativa (UR) de 70% e fotofase de 12 h até 10 d póstratamento (p.t.). Indivíduos mortos e ovos postos foram retirados, contados e incubados em UR > 98% e 25ºC por 15 d. Os ovos foram em seguida submersos em água e a eclosão de larvas avaliada diariamente até 5 d para todos os testes. Primeiros ovos postos foram encontrados em até 48 horas após a primeira hematofagia das fêmeas. O número médio de ovos/fêmea/dia (o/f/d) no teste 1 foi de 2,5 e no teste 2 variou entre 0,15 (Paecilomyces carneus CG 525) e 1,3 o/f/d (Isaria fumoserosea CG 325). Apenas IP 46 formou hifas e novos conídios sobre ovos e reduziu significativamente a eclosão quantitativa de larvas (39,2%), comparado com o grupo controle (68,6%; t = 2,3; P = 0,04). Nos demais testes a eclosão foi acima de 40%. Primeiros adultos geralmente morreram a partir de 48 h p.t. e o maior número de mortos foi encontrado 2 a 4 d depois, independentemente do teste realizado. A maior mortalidade, 10 d p.t. foi 39% (IP 46), seguido por 28% (Isaria farinosa CG 195), 16,4% (Paecilomyces marquandii CG 190), 8% (Penicillium sp IP 182), 6,8% (P. carneus CG 525), 4,7% (Paecilomyces lilacinus CG 362) e 4,6% (I. fumoserosea CG 325). A mortalidade encontrada para os controles foi ≤ 12% no mesmo momento. Mosquitos tratados com CG 195, CG 525, IP 46, CG 325 e CG 190 tiveram desenvolvimento de fungo em cadáveres. Mosquitos mortos pertencentes aos grupos tratados com os isolados IP 182, CG362 e controle não tiveram desenvolvimento de micélio. Os resultados mostraram que, de acordo com o tipo de aplicação utilizada, fêmeas de A. aegypti contaminaram ovos e assim propagaram a micose. Tratamento com conídios secos levou a uma maior contaminação das fêmeas e assim também dos ovos postos, comparada com a aplicação indireta utilizada para os demais fungos, no qual provavelmente a contaminação ficou restrita às partes do corpo em contato com a superfície tratada. A mortalidade reduzida encontrada para todos os fungos e para ambas técnicas pode estar relacionada à umidade subotima na qual foram mantidos os mosquitos e também ao tempo curto de observação dos adultos póstratamento. Os fungos testados têm atividade reduzida em adultos de A. aegypti e fêmeas desse mosquito podem transmitir a micose durante a oviposição. Mais estudos precisam ser feitos para selecionar linhagens mais virulentas e entender melhor mecanismos de infecção e transmissão horizontal de fungos em A. aegypti

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:15:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Wendell Marcelo de Souza Perinotto.pdf: 801461 bytes, checksum: 1968d4da38ce1a3b31453946416d435c (MD5) Previous issue date: 2010-02-05 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Recent studies have indicated the possibility of difference in susceptibility between different populations of ticks, while undergoing treatment with entomopathogenic fungi. To assess whether this difference actually occurs, this study intents to verify the in vitro effect of fungi Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana on two distinct populations of Rhipicephalus (B.) microplus collected from different properties. Experiments were conducted on engorged females, eggs and larvae. To evaluate the effect of fungi female reproductive parameters were observed. In eggs, the hatch percentage was evaluated, and in larvae, the mortality rate was analyzed. Five groups were formed (108, 107 con?dia/ml of M. anisopliae; 108, 107 con?dia/ml of B. bassiana and control group) with 10 repetitions each. The specimens were immersed in one ml of the suspension for three minutes and the control group was exposed only to diluent. The results showed that the fungi were efficient, influencing all females s reproductive parameters of both properties. To verify the susceptibility of different populations statistical analysis were carried out comparing the treatments on females of different origins. The following parameters presented significant difference: periods of the pre oviposition, larvae hatch and egg production index. Furthermore, B. bassiana was more effective than M. anisopliae on engorged female. In the bioassay with eggs the hatch percentage ranged between 3.1 and 49.5% in one property and from 3.4 to 42.7% in another, but there was no significant difference between the two populations at this stage of R. (B.) microplus. At the bioassay with larvae the mortality percentage of larvae ranged from 91.8 to 98.7% in one and 71.0 to 94,0% in another property. Moreover, the average lethal time (LT 90) ranged from 19.52 to 27.51 days in one of the properties and 22.89 to 37.31 days in the other. Through these results, it can be concluded the entomopathogenic fungi used in this study are effective in controlling this tick species. However, different populations have variation in their susceptibility to B. bassiana and M.anisopliae. / Estudos recentes indicaram a possibilidade de diferen?a na susceptibilidade entre popula??es distintas de carrapatos, quando submetidos ao tratamento com fungos entomopatog?nicos. Para avaliar se ocorre realmente essa diferen?a, foi avaliada a a??o in vitro dos fungos M. anisopliae e B. bassiana sobre duas popula??es distintas de R. (B.) microplus, oriundas de diferentes propriedades. Foram realizados bioensaios sobre f?meas ingurgitadas, ovos e larvas. Para avaliar o efeito dos fungos sobre as f?meas observaram-se os par?metros reprodutivos. Para ovos analisou-se o percentual de eclos?o das larvas e sobre larvas analisaram-se o percentual de mortalidade e tempo m?dio letal. Foram formados cinco grupos por propriedade (108, 107 con?dios/ml de M. anisopliae; 108, 107 con?dios/ml de B. bassiana e controle) com 10 repeti??es cada. No tratamento, as esp?cimes foram imersas em um ml da suspens?o testada durante tr?s minutos e o grupo controle foi exposto apenas ao diluente. Os resultados obtidos demonstraram que os fungos influenciaram na maioria dos par?metros reprodutivos das f?meas de ambas as propriedades. Para verificar a susceptibilidade das popula??es distintas, foram realizadas an?lises estat?sticas comparando os tratamentos sobre as f?meas de diferentes origens. Pode-se observar que houve diferen?a significativa nos seguintes par?metros: per?odos de pr?-postura, per?odo de eclos?o das larvas e ?ndice de produ??o de ovos. Al?m disso, pode-se observar que o isolado Bb 986 de B. bassiana foi mais patog?nico do que o isolado Ma 959 de M. anisopliae sobre f?meas ingurgitadas, promovendo um percentual de controle de 49%. No bioensaio com ovos, a redu??o do percentual de eclos?o das larvas variou entre 3,1 a 49,5% em uma propriedade e 3,4 a 42,7% em outra, por?m n?o houve diferen?a significativa entre as duas popula??es nesta fase do R. (B.) microplus. No bioensaio com larvas o percentual de mortalidade das larvas variou de 91,8 a 98,7% em uma e 71,0 a 94,0% em outra propriedade. Al?m disso, o tempo m?dio letal (LT 90) foi de 19,52 a 27,51 dias em uma das propriedades e de 22, 89 a 37,31 dias na outra. Atrav?s destes resultados, pode-se concluir que os fungos entomopatog?nicos utilizados neste estudo s?o capazes de agir sobre esta esp?cie de carrapato. No entanto, popula??es distintas apresentam varia??o na sua susceptibilidade ? B. bassiana e M. anisopliae.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:05:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CristianeFA_TESE.pdf: 2715743 bytes, checksum: 62bfe71508cd021b46627368e67b663d (MD5) Previous issue date: 2010-01-18 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Chitosan is a natural polymer, biodegradable, nontoxic, high molecular weight derived from marine animals, insects and microorganisms. Oligomers of glucosamine (GlcN) and N-acetylglucosamine (GlcNAc) have interesting biological activities, including antitumor effects, antimicrobial activity, antioxidant and others. The alternative proposed by this work was to study the viability of producing chitooligosaccharides using a crude enzymes extract produced by the fungus Metarhizium anisopliae. Hydrolysis of chitosan was carried out at different times, from 10 to 60 minutes to produce chitooligosaccharides with detection and quantification performed by High Performace Liquid Chromatography (HPLC). The evaluation of cytotoxicity of chitosan oligomers was carried out in tumor cells (HepG2 and HeLa) and non-tumor (3T3). The cells were treated for 72 hours with the oligomers and cell viability investigated using the method of MTT. The production of chitosan oligomers was higher for 10 minutes of hydrolysis, with pentamers concentration of 0.15 mg/mL, but the hexamers, the molecules showing greater interest in biological properties, were observed only with 30 minutes of hydrolysis with a concentration of 0.004 mg/mL. A study to evaluate the biological activities of COS including cytotoxicity in tumor and normal cells and various tests in vitro antioxidant activity of pure chitosan oligomers and the mixture of oligomers produced by the crude enzyme was performed. Moreover, the compound with the highest cytotoxicity among the oligomers was pure glucosamine, with IC50 values of 0.30; 0.49; 0.44 mg/mL for HepG2 cells, HeLa and 3T3, respectively. Superoxide anion scavenging was the mainly antioxidant activity showed by the COS and oligomers. This activity was also depending on the oligomer composition in the chitosan hydrolysates. The oligomers produced by hydrolysis for 20 minutes was analyzed for the ability to inhibit tumor cells showing inhibition of proliferation only in HeLa cells, did not show any effect in HepG2 cells and fibroblast cells (3T3) / A quitosana ? um pol?mero natural, biodegrad?vel, n?o t?xico e de alta massa molecular obtido a partir de animais marinhos, insetos e microrganismos. Os olig?meros de glicosamina (GlcN) e N-acetilglicosamina (GlcNAc) t?m atividades biol?gicas interessantes, incluindo efeitos antitumorais, atividade antimicrobiana, antioxidante entre outras. A alternativa proposta por este trabalho foi estudar a viabilidade de produ??o de quitooligossacar?deos utilizando um extrato bruto de enzimas produzidas pelo fungo Metarhizium anisopliae. A hidr?lise da quitosana foi realizada em diferentes tempos, de 10 a 60 minutos para a produ??o de quitooligossacar?deos e a detec??o e quantifica??o foi realizado pela Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia. A avalia??o da citotoxicidade dos olig?meros de quitosana foi realizada em c?lulas tumorais (HepG2 e HeLa) e n?o tumoral (3T3). As c?lulas foram tratadas durante 72 horas com os olig?meros e a viabilidade celular foi feita usando o m?todo do MTT. A produ??o de olig?meros de quitosana teve maiores rendimentos durante 10 minutos de hidr?lise, os pent?meros apresentaram concentra??o de 0,15 mg/mL, por?m os hex?meros, que apresentam maior interesse pelas suas propriedades biol?gicas, s? foram detectados com 30 minutos de hidr?lise apresentando uma concentra??o de 0,004 mg/mL. Um estudo visando avaliar as atividades biol?gicas dos QCOS entre elas a citotoxicidade em c?lulas tumorais e normais e v?rios testes de atividade antioxidante in vitro entre olig?meros puros de quitosana e a mistura dos olig?meros produzidos pelo extrato bruto enzim?tico foi realizado. A glicosamina foi o composto com a maior toxicidade dentre os olig?meros puros, apresentando valores de IC50 0,30; 0,49; 0,44 mg/mL para c?lulas HepG2, HeLa e 3T3, respectivamente. O seq?estro do ?nion super?xido foi a principal atividade antioxidante mostrada pelos QCOS. Sendo que essa atividade tamb?m foi dependende da composi??o dos hidrolisados de quitosana. Os olig?meros produzidos por hidr?lise durante 20 minutos foram analisados quanto ? capacidade de inibir c?lulas tumorais mostrando inibi??o da prolifera??o apenas nas c?lulas HeLa, n?o apresentando nenhum efeito em c?lulas HepG2 e c?lulas de fibroblastos (3T3)