INTRODUCCION: El lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad autoinmune que se caracteriza por la producción de numerosos autoanticuerpos. Recientemente, se ha descrito un nuevo grupo denominado anticuerpos antifosfolípido (AAF), cuyo estudio ha despertado un gran interés por sus implicaciones clínicas y patogenéticas. Los AAF son un grupo heterogéneo de autoanticuerpos adquiridos de forma espontánea, que van dirigidos contra estructuras fosfolipídicas de las membranas celulares.La detección de los AAF se efectúa mediante diversas técnicas. Las más clásicas son las pruebas coagulométricas, que detectan un tipo de AAF denominado anticoagulante lúpico (AL). Otro método indirecto consiste en la detección de una serología luética falsamente positiva (SlFP) mediante técnicas reagínicas. Más recientemente se han descrito técnicas para la detección directa de AAF (RIA, ELISA) que han permitido la identificación de anticuerpos contra fosfolípidos específicos. De todos ellos, el anticoagulante lúpico (AL) y los anticuerpos anticardiolipina (ACL), son los que han merecido un mayor interés por parte de los investigadores. A pesar de los artículos publicados sobre el LES y los AAF, existen numerosas cuestiones controvertidas por resolver, entre las que destacan: a) la mayoría de los estudios determinan el AL o los ACL y raramente ambos a la vez, por lo que disponemos de poca evidencia sobre qué "test" es el más eficaz. Además, no todos los pacientes con AL tienen ACL y viceversa; b) No existe acuerdo sobre que prueba es la más adecuada para la detección del AL; y c) recientemente se han descrito otros ELISAs que detectan otros AAF como los antifosfatidilserina, etc., cuya importancia no esta bien definida.OBJETIVOS:En base a estas premisas hemos desarrollado esta Tesis cuyos objetivos son: 1) determinar la incidencia del anticoagulante lúpico en el LES, en base al empleo de una amplia batería de pruebas coagulométricas, a fin de valorar la utilidad de cada una de ellas; 2) desarrollar una técnica deELISA para determinar el anticoagulante lúpico, que fuera sencilla y reproducible; 3) determinar la incidencia de los anticuerpos anti-cardiolipina por ELISA, junto con otros AAF, como los anti-fosfatidilserina (AFS), antifosfatidil-inositol (AFI) y los anti-ácido fosfatidico (AFA); y 5) valorar la relación los diferentes AAF determinados en este estudio con la presencia de diversas manifestaciones clínicas y/o analíticas, a fin de comprobar si definen algún subgrupo específico.PACIENTES Y MÉTODO:Durante un periodo de dos años hemos estudiado de forma prospectiva un grupo de 92 pacientes (84 M y 8 V) afectos de LES en base a los criterios de la ARA (1982). En todos los casos se les ha determinado varios parámetros inmunológicos (ANA, ENA, complemento, etc.). El AL ha sido evaluado por diversas pruebas coagulométricas y hemos empleado varios ELISAs para determinar los ACL, AFS, AFA y AFI. Por último, hemos desarrollado un ELISA que emplea una tromboplastina comercial como antígeno para la determinación del AL.RESULTADOS:Las características de la serie son similares a las descritas en la literatura en relación a edad, sexo y manifestaciones clínicas. En 29p (32%) detectamos un AL, las pruebas coagulométricas más sensibles para su detección fueron el tiempo del veneno de víbora de Rusell diluido y el tiempo de inhibición de la tromboplastina tisular diluida. Hemos desarrollado un ELISA para detectar el AL con una tromboplastina comercial como antígeno que permite una adecuada detección del mismo y que tiene una buena correlación con las pruebas coagulométricas. Los anticuerpos antitromboplastina (ATP) tienen una incidencia en este estudio del 35%. La incidencia de los otros AAF por ELISA en el LES es alta, entre los que destaca los ACL (37%) y los AFS (32%). Al emplear el análisis multivariado para analizar la relación entre el AL y los diferentes AAF por ELISA, incluidos los ATP, observamos que estos eran los que tenían la mejor correlación (p<0.001).Al evaluar la relación entre los AAF y las manifestaciones clínicas y/o analíticas en el LES obtuvimos los siguientes resultados: - Un 8% de los pacientes tuvieron trombosis diversas. En el análisis univariado el AL y el isotipo IgG de los ATP, ACL y AFS tenían una asociación significativa, que era más intensa en aquellos pacientes con títulos más altos de AAF. Al aplicar el análisis multivariado el AL mostraba la mejor correlación (P=0.002), la trombocitopenia estuvo presente en un 20% de los casos, asimismo el AL y el isotipo IgG de los ATP, ACL y AFS tenían una asociación significativa, que era más intensa en aquellos pacientes con títulos más altos de AAF. En el análisis multivariado los ATP-IgG mostraban la mejor correlación (p<0,000).- Durante el tiempo del estudio ninguna paciente tuvo un aborto, aunque en 17 casos (20%) tenían antecedentes de uno o más abortos previos.- Encontramos una asociación significativa con el AL y los ATP-IgG. Otras asociaciones significativas se establecieron entre la anemia hemolítica y la neutropenia con los ATP y ACL, en ambos casos con el isotipo IgM.- No encontramos relación entre los AAF y la actividad de la enfermedad, nefropatía, afección del sistema nervioso central distinta de la vascular y ninguno de los parámetros inmunológicos estudiados.CONCLUSIONES: Las principales conclusiones de esta tesis las podemos resumir en los siguientes puntos:1. La incidencia de los AAF en el LES es alta, destacando el AL y los ATP, ACL y AFS. Los coeficientes de variación de las diferentes pruebas empleadas demuestran que son técnicas reproducibles aplicable a series amplias de pacientes.2. La técnica de ELISA con tromboplastina como antígeno permite una fácil y rápida detección del AL, lo que la ofrece como una alternativa válida a las pruebas coagulométricas.3. Los AAF definen un subgrupo de pacientes con LES que se caracterizan fundamentalmente por una elevada incidencia de trombosis, abortos y trombocitopenia. / At present there are many assays to detect APA in patients with SlE but only few prospective studies evaluating the relationship between several clinical features and these tests have been reported. OBJECTIVE: To analyze the phospholipid reactivity patterns, clinical and immunological characteristics of a series of 92 patients with SlE. METHODS: Eighty four females and 8 males with SLE (ARA revised criteria) were included in the study. The APA isotypes were determined by ELISA using cardiolipin (Cl), thromboplastin (TP), phosphatidic acid (PA) I phosphatidyljnositol (PI) and phosphatidylseryne (PS). Lupus anticoagulant (LAC) was evaluated by several coagulation assays. RESULTS: Twenty nine patients (32%) were positive for LAC; 32p(35%) for TP; 34p (37%) for Cl; 29p (32%) for PS; 26p (28%) for PA; 22p (24l) for PI. All phospholipids showed a good correlation with lAC, although this was higher for TP, and if these results are confirmed by others authors, this assay could became an alternative to coagulative tests to detect lAC. A significant statistical correlation was found between thrombosis and lAC, IgG-TP and IgG-CL. Thrombocytopenia was correlated with lAC, IgG-TP, IgG-Cl and IgG-PS. In addition, correlation was also found between the 19M isotypes of TP and Cl with hemolytic anemia and neutropenia. No correlation was found with disease activity, neurologic involvement (other than thrombotic events), treatment and any other clinical or immunological features (DNA and ENA antibodies, complement, etc.). CONCLUSIONS: Our results confirms that lAC and ELISA share a similar phospholipid reactivity. The most sensitive assays to detect APA were lAC, TP and Cl antibodies. These assays really define a subset of SlE patients mainly characterized by thrombotic events, thrombocytopenia and hemolytic anemia and neutropenia.

Si bien algunos tipos de cáncer están experimentando un descenso en su incidencia (cáncer gástrico, cáncer de cuello uterino), se conocen hasta el momento más de cien tipos diferentes de neoplasias malignas y el porcentaje global de las mismas en la población va en aumento.Fundamentalmente son seis los problemas que la medicina debe de resolver frente al cáncer: a) identificar la causa(s); b) erradicación de la misma(s); c) identificación de los factores e individuos de alto riesgo para cada tipo de neoplasia; d) intensificación de los programas de diagnóstico precoz, especialmente en los grupos de alto riesgo; e) hallar los métodos adecuados para valorar la inmunocompetencia del huésped frente al cáncer y para incrementar la respuesta orgánica frente al mismo; f) desarrollar los programas adecuados destinados tanto a profesionales como al público en general en relación con los problemas que presenta el paciente canceroso, a fin de mejorar la calidad de la supervivencia en los enfermos neoplásicos avanzados y en aquellos en los que el tratamiento de su enfermedad requirió la amputación de alguna parte de su organismo.La participación del sistema inmunitario en la relación huésped-neoplasia parece ser hoy un hecho firmemente establecido. Así, KEAST (1970) señala que "posiblemente están apareciendo de forma constante en el cuerpo humano células potencialmente malignas que son reconocidas como tales y eliminadas; sólo cuando inciden factores ambientales secundarios o con el declive de la función inmunitaria del organismo, pueden estas células desarrollarse en forma tumoral a pesar de la inmunidad".Existen una serie de hechos experimentales que apoyan una participación de la inmunidad en el proceso canceroso y datos clínicos sobre la existencia de reacciones inmunológicas a tumores humanos. Por otra parte, especialmente para tumores de experimentación animal pero también en diversos tipos de neoplasias humanas, se demuestra que la transformación maligna de las células conlleva la derepresión de unos antígenos denominados "tumor asociados o tumor específicos" que se localizan en la superficie celular y que en algunos casos es posible hallarlos también en las células del embrión humano.Frente a la posibilidad de que existan estos antígenos tumorales, cabe preguntarse: ¿Presenta el enfermo una respuesta inmune de defensa frente al tumor?, ¿Influyen esas reacciones inmunológicas en la historia natural de la neoplasia?,¿ Podemos intervenir potenciando la respuesta inmunitaria?Si ello se comprueba ser cierto podríamos tener las bases inmunológicas para: 1º) el diagnóstico de las neoplasias mediante reacciones antígeno-anticuerpo o por detección de antígenos tumorales específicos; 2º) hacer un pronóstico del enfermo canceroso mediante el estudio de su status inmunológico; 3º) instaurar una inmunoterapia.Teniendo en cuenta el importante papel que juegan las neoplasias ginecológicas en la mortalidad por cáncer en la mujer, y de lo dicho hasta aquí y del interés que ha despertado en nosotros el posible papel de la inmunidad en el cáncer, se desprenden el motivo y la intencionalidad de esta tesis cuyos objetivos pretenden ser los siguientes:1) Hacer una valoración del estado inmunitario de la paciente con cáncer ginecológico y con ello relacionar:a) La respuesta inmunitaria y el pronóstico de la enfermedad.b) La respuesta inmunitaria con el estadío clínico de la neoplasia.c) La respuesta inmunitaria y la evolución post-tratamiento en las pacientes en que proceda.d) La respuesta inmunitaria con la localización de la neoplasia.e) La respuesta inmunitaria con el tipo histológico.2) Detectar la presencia en el plasma de la paciente cancerosa de macromoléculas de origen tumoral (neo-antígenos), lo que puede permitirnos:a) Valorar la eficacia y radicalidad de la terapéutica empleada en cada caso.b) "Monitorizar" los efectos de la misma constituyendo una ayuda en la detección precoz de metástasis y recidivas y progresión de la neoplasia.c) Reevaluar el tratamiento empleado.

El procesamiento y la presentación de antígenos es un mecanismo clave en el desarrollo de la respuesta inmunitaria. En el presente trabajo, se ha estudiado la regulación de los genes tap1 y lmp2. Estos genes codifican proteínas cuyas funciones son vitales para la presentación antigénica de proteínas endógenas a través del MHC de clase I. La proteína lmp2 forma parte de un complejo multiproteico conocido como proteosoma, cuya función es la degradación de proteínas citosólicas dando lugar a la formación de péptidos. La proteína tap1 está implicada en el transporte de los péptidos al interior retículo endoplasmático, para su posterior carga en las moléculas de histocompatibilidad de clase I. Ambas proteínas son codificadas por genes que comparten una misma región promotora en sentidos opuestos.Los resultados confirman que la inducción de la expresión de los genes murinos tap1 y lmp2 mediada por el IFN-gamma tiene lugar en células de diferentes linajes y ocurre entre una y tres horas post-activación. El análisis de otros estímulos inductores de la expresión de tap1 y lmp2 demostró patrones de expresión diferentes del obtenido con el IFN-gamma. El LPS induce la expresión de tap1 y lmp2 a las seis horas de activación y el TNF-alfa a las 24 horas. En nuestros experimentos, observamos, en macrófagos derivados de médula ósea mantenidos en medio de cultivo en ausencia de suero (situación de estrés), una inducción de la expresión de los genes tap1 y lmp2. Esta inducción tiene lugar aproximadamente a las 24 horas del estímulo, siguiendo un patrón de inducción semejante al observado tras la activación con el TNF-alfa.Utilizando cicloheximida, un inhibidor de la síntesis proteica, se comprobó que la inducción de tap1 y lmp2 por el IFN-gamma no es dependiente de la síntesis proteica. Los tránscritos de ARN son altamente estables, ya que sus niveles no decaen de forma rápida en presencia de actinomicina D, que actúa bloqueando la transcripción. La elevada estabilidad de los ARNm indica que el IFN-gamma no modifica la vida media del ARN, sino que actúa a nivel de la transcripción de los dos genes.Se determinó utilizando ratones knock out para STAT1 que este factor de transcripción está implicado en la señal de transducción por el IFN-gamma, el LPS y el TNF-alfa. Sin embargo, la expresión de tap1 y lmp2 inducida por el IFN-alfa/beta es independiente de STAT1. Las cajas reguladoras GAS e IRF-1 son esenciales en la inducción de la expresión de tap1 y lmp2 mediada por el IFN-gamma. En cambio, sólo la caja GAS está implicada en la inducción de ambos genes por el LPS. Finalmente, las cajas IRF-1 y NF&#61547;B son esenciales en el caso de la activación mediada por el TNF-alfa.Los estímulos inhibidores TGF-beta y los glucocorticoides, inhiben la expresión de los genes tap1 y lmp2 inducida por el IFN-&#61543;. Nuestros resultados demuestran también que la expresión de PU.1 en los fibroblastos murinos, mediante la transfección de un vector de expresión que codifica para esta proteína, inhibe la expresión de los genes tap1 y lmp2 inducida por IFN-gamma. Posiblemente, debido a la localización de una caja PU.1 dentro de la caja GAS, el factor de transcripción PU.1 puede afectar a la transcripción de los ARNm para tap1 y lmp2 En resumen, en este trabajo hemos determinado la regulación de los genes tap1 y lmp2 implicados en la presentación antigénica a través de las moléculas del MHC de clase I. Existen citocinas que son capaces de inducir mientras que otras inhiben la expresión de tap1 y lmp2. Las vías de señalización comparten elementos comunes como STAT1, así como regiones promotoras implicadas en la regulación génica.

Desde el descubrimiento del antígeno Australia (Ag Au; Ag SH; Ag HB; Ag HBS) por BLUMBERG y cols., dicho antígeno ha sido exhaustivamente estudiado en patología. Su relación con la hepatitis vírica tipo B está fuera de toda duda, pero además el antígeno Australia (Ag Au) puede hallarse en otras enfermedades, algunas de las cuales, como el síndrome de Down, lepra lepromatosa, insuficiencia renal crónica tratada con diálisis y leucemias, parecen dotadas de una especial afinidad para adquirir dicho antígeno. La presencia del Ag Au en tales procesos estaría en relación con anomalías de la inmunidad celular, transfusiones o con hospitalizaciones prolongadas. La enfermedad de Hodgkin, por su parte, ha experimentado en los últimos años profundos avances, pasándose de lo que podría calificarse como de «era pesimista de la enfermedad de Hodgkin» a otra, mucho más optimista, en la que se vislumbra la posibilidad de su curación, aunque ello se acompañe de un coste tóxico y complicaciones nada desdeñables. SUTNICK y cols. fueron los primeros en mencionar la asociación del Ag Au con la enfermedad de Hodgkin (E.H.), y sugirieron una correlación entre la antigenemía y el antecedente de transfusiones sanguíneas. GRANGE y cols., del Hospital Saint Louis, en un grupo seleccionado de pacientes con E.H. sugirieron la relación entre la positividad del Ag Au y el efecto inmunosupresor de algunos tratamientos. En este trabajo presentamos la experiencia actual del Grupo de Estudios sobre la Enfermedad de Hodgkin del Hospital Saint Louis, sobre el significado del Ag Au en la E.H. analizada y puesta al día durante la estancia del autor en aquel centro. Nuestros objetivos han sido: 1. Averiguar la frecuencia real del Ag Au en la E.H. tratada y sin tratar. 2. Comprobar si la positividad del Ag Au en la E.H. es fugaz o persistente.3. Relacionar la positividad del Ag Au con las características clínicas, histológicas, evolutivas e inmunológícas de la E.H. 4. Comprobar la traducción clínica, biológica e histológica del Ag Au en la E.H., sobre todo en el sentido de determinar sí a las complicaciones ya conocidas de la E.H. habrá que añadir la infección crónica por el virus de la hepatitis B y, eventualmente, una hepatitis crónica persistente o alguna otra forma de daño hepático.

L'adenocarcinoma pancreàtic és una neoplàsia amb mal pronòstic per la que no existeixen marcadors específics. En aquesta tesi s'han estudiat possibles alteracions de les estructures glucídiques de la ribonucleasa pancreàtica humana (RNasa 1) de sèrum amb l'objectiu de determinar el seu ús diagnòstic. S'han descrit les estructures glucídiques de la RNasa 1 sèrica i de línies cel·lulars endotelials, i s'ha observat un increment en la proporció d'estructures biantenàries amb Fc en la RNasa 1 sèrica de pacients amb càncer de pàncreas, fet que podria ser d'utilitat diagnòstica. També, donada la gran similitud entre les estructures glucídiques descrites per la RNasa 1 sèrica i per l'endotelial, l'origen de la RNasa 1 sèrica sembla ser principalment endotelial. La RNasa 1 també s'ha avaluat per electroforesi bidimensional i s'ha establert una correlació entre el contingut d'àcid siàlic i el seu pI, fet que pot ajudar a la interpretació dels mapes bidimensionals d'altres glicoproteïnes. / Pancreatic adenocarcinoma has one of the highest mortality rates of all neoplasias and it has no specific markers. In this work, possible alterations in the glycan structures of human pancreatic ribonuclease (RNase 1) present in serum are investigated with the aim of determining its diagnostic utility. Serum and endothelial RNase 1 glycan structures have been described and an increase of biantennary structures with Fc in serum RNasen 1 from pancreatic cancer patients could be observed, what can be of diagnosis utility. Also, due to the high similarity between serum RNase 1 and endothelial RNase 1 glycan structures, it was concluded that endothelium can be the main producer of serum RNase 1. RNase 1 was also evaluated by two-dimensional electrophoresis and a correlation between the sialic acid content and the observed pI decrease could be establish, what may be very significant for understanding and interpreting two-dimensional maps from other glycoproteins.