Introdução: P. aeruginosa é o principal agente causador de infecção hospitalar sendo a primeira causa de pneumonia nosocomial em hospitais brasileiros. Os carbapenêmicos são geralmente o tratamento empírico de escolha para infecções graves causadas por esta bactéria. Entretanto, seu uso tem sido limitado pelas elevadas taxas de resistência entre os isolados de P. aeruginosa principalmente os produtores de metalo-β-lactamases (Mβla). Objetivos: Caracterizar e avaliar a produção de metalo-β-lactamase em amostras de Pseudomonas aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem em dois hospitais universitários de Porto Alegre. Métodos: O método de disco difusão padronizado pelo NCCLS foi utilizado para avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos. Um teste de aproximação de discos utilizando ceftazidima com ácido 2-mercaptopropiônico foi utilizado para triagem de amostras produtoras de Mβla. A fita de Etest combinada imipenem com EDTA também foi utilizada como teste fenotípico. Os resultados destes dois testes foram comparados à PCR para pesquisa dos genes blaSPM-1, blaIMP-1 e blaVIM-2 .Os isolados produtores de Mβla foram submetidos a tipagem molecular pela técnica de macrorestrição de DNA seguida de pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). O perfil de hidrólise para o imipenem foi avaliado nas amostras produtoras de Mβla através da variação de absorção medida a 298 nm. Resultados: Dos 92 isolados clínicos analisados, 33 foram positivos no teste de aproximação de discos. Destes, 18 foram produtores de SPM-1 e 5 de IMP-1. Todas as amostras produtoras de SPM-1 apresentaram razão de IP/IPI na fita combinada ≥ 8. Os 18 isolados de SPM-1 foram classificados como um único padrão de PFGE que foi o predominante. Seis isolados pertenciam a um segundo padrão de PFGE, sendo que cinco destes eram IMP-1. O perfil de hidrólise mostrou que os isolados produtores de SPM-1 degradam mais efetivamente o imipenem quando comparado aos produtores de IMP-1 e aos não produtores de Mβla. Conclusões: Há uma alta prevalência de Mβla entre isolados de P. aeruginosa resistentes a imipenem e/ou ceftazidima. O gene SPM-1 é o elemento genético mais prevalente entre as amostras de P. aeruginosa Mβla positivas e a disseminação clonal têm contribuído para os elevados níveis de resistência aos carbapenêmicos entre os isolados de P. aeruginosa nos hospitais deste estudo.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-29Bitstream added on 2014-06-13T19:47:06Z : No. of bitstreams: 1 carraschi_sp_me_jabo.pdf: 1614331 bytes, checksum: 288620069238ff5c63f403a56576fa26 (MD5) / Um dos problemas da aqüicultura é a ocorrência freqüente de infecções por parasitos e bactérias, principalmente em sistemas de criação intensiva. Entre os antibióticos, a oxitetraciclina (OTC) e o florfenicol (FFC) são os mais usados para tratar infecções causadas por bactérias em peixes. Os objetivos foram estimar a concentração letal 50% (CL50;48h) da OTC (Terramicina®) e do FFC (Aquaflor®) para o pacu (Piaractus mesopotamicus), classificar a OTC e o FFC pelo risco de intoxicação ambiental; determinar a dose eficaz de OTC e de FFC administrada na ração para o controle da infecção por Aeromonas hydrophila em pacu; avaliar o efeito da diluição da OTC e do FFC nas variáveis de qualidade de água durante os testes de toxicidade e durante o tratamento e avaliar as alterações histopatológicas após o tratamento com OTC e FFC. Para os testes de toxicidade aguda os animais (peso entre 0,5 e 1,0 g) foram expostos a 7,0; 7,5; 8,0 e 8,5 mgL-1 de OTC ou a 600,0; 700,0; 800,0; 900,0 e 1000,0 mgL-1 de FFC e um tratamento controle. A OTC e o FFC foram classificados pela toxicidade aguda e pelo risco ambiental de acordo com as classes de valores de CL50;48h. Para o tratamento de infecção induzida por A. hydrophila (3.0 x108 bactéria.mL-1), foram realizados dois testes, um com OTC (110,0; 140,0 e 170,0 mg.Kg-1) e outro com FFC (5,0; 10,0 e 15,0 mg.Kg-1). Os tratamentos foram três concentrações de cada antibiótico, um controle sem infecção e um com infecção. Para análise histopatológica foram coletados fragmentos de brânquia, fígado, rim e pele dos peixes após o tratamento com os antibióticos. As variáveis de qualidade de água registradas diariamente foram pH, temperatura, condutividade elétrica e concentração de oxigênio dissolvido, nos testes de toxicidade aguda e durante os testes de concentrações curativas. Nos testes de toxicidade aguda, a CL50;48h... / One of the main problems of modern aquaculture is the occurrence of infection of farmed fish by parasites and bacteria, especially in intensive systems. Among the antibiotics, the oxytetracycline (OTC) and the florfenicol (FFC) are the most commonly used to treat infections caused by bacteria in fishes. The objective was to estimate the 50% lethal concentration (LC50, 48h) of OTC (Terramycin®) and of the FFC (AQUAFLOR®) for the pacu (P. mesopotamicus), classify the OTC and FFC of according the assessment risk and to determine the effective concentration of OTC and of FFC administered in feed for control of Aeromona hydrophila in pacu; to evaluate the effect of dilution of OTC and of the FFC in variables in water quality during toxicity tests and for treatment and to evaluate the histopathological changes after treatment with OTC and FFC. For acute toxicity tests the animals (weighing between 0.5 and 1.0 g) were exposed to 7.0, 7.5, 8.0 and 8.5 mg.L-1 OTC or 600.0, 700 , 0, 800.0, 900.0 and 1000.0 mg.L-1 of FFC and a control treatment. The OTC and the FFC were classified for acute toxicity and for environmental risk of according with the ranking of value of LC 50;48h. For the treatment of A. hydrophila induced by experimental infection (3.0 x108 bactéria.mL-1), were carried out two tests, one with OTC (110.0, 140.0 and 170.0 mg.Kg-1) and another with FFC (5.0; 10.0 and 15.0 mg.Kg-1). The treatments included three concentration of antibiotic, a control without infection and a with infections. For histopathological analysis were collected gill tissue, liver, kidney and skin of fish after the treatment of bacterial diseases with antibiotics. The water quality variables were recorded daily pH, temperature, electrical conductivity and dissolved oxygen in acute toxicity tests and during treatment. In tests of acute toxicity, the LC50;48h estimated of OTC for pacu was... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:02:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2846.pdf: 2305406 bytes, checksum: bdcfa4a73d44c510ec83c2cb9347cfaf (MD5) Previous issue date: 2009-12-11 / The need for new and useful compounds to provide assistance and relief in all aspects of human condition is ever-growing. Drug resistance in bacteria, the appearance of life-threatening viruses, and the increase in the incidence of fungal infections in the world s population all underscore our inadequacy to cope with these medical problems. Endophytic microorganisms that colonize internal tissues of plants without causing any negative effects are relatively unstudied as potential sources of novel natural products for medical and commercial exploitation. The Streptomycetes provide nearly 80% of all the world s antibiotics produced. The aim of this work was to investigate the Brazilian tropical savannah tree Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) in São Carlos, in order to isolate the endophytic microorganisms associated with the plant, separating and purifying the bioactives substances produced by the endophytic microorganism. The bioactivity of S. tubercidicus against pathogenic microorganisms was analyzed. The obtained results point out the antagonistic potential of the endophytic isolated against microorganisms of interest in Public Health. The brute extract fresh produced by S. tubercidicus RND-C it presented antimicrobial potential maximum of 200 UA.mL-1 against Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923 after 48 h of cultivation; The bioactive substances produced by S. tubercidicus were submitted to different thermal and enzymatic treatments and pH variation to be determined the nature of the bioactive compounds. After it being submitted to enzymatic treatment with amylase and pepsin, the concentrated extract stayed bioactive, suggesting the lipidic and no-prothein nature of the bioactive substances. Already the active compounds against E. coli suggests the presence of a substance of glycidic and lipidic nature, due to resistance to the action of the enzyme invertase and lipase, respectively, suggesting that the substances contained in the brute extract of S. tubercidicus RND-C against E.coli can be a ´glycolipid. The concentrated extract stayed active biologically when exposed to lower (-20 and -80 ºC) and high (100 and 121 ºC) temperatures, suggesting that the bioactive compounds produced are not subject to spontaneous degradation. The extract stayed active against E. coli in acidity conditions (pH, 2,0 - 5,0) and it also presented bioactivity in pH 7,0 and 8,0. In conditions of high alkalinity (pH 9,0) bioactivity was not detected. Already against S. aureus, the extract stayed assets in the strip of pH 7,0. In conditions of acidity and alkalinity the bioactive substances produced by S. tubercidicus were inactivated. The molar mass of the substances was esteemed in minor than 3,0KDa. The bioactive molecules contained in the concentrated extract produced by S. tubercidicus RNC-C were purified and separated by bio monitoring analyzes, suggesting the presence of two different substances. The evaluation of the separation using a hight performance liquid chromatography (HPLC), suggests the existence of two different substances produced by S. tubercidicus, one being active against S. aureus and the other one active against E.coli and S. aureus. In the separation by using reverse-phase chromatography (Sep-Pak), were obtained four fractions (St. 1, St. 2, St. 3 and St. 4). The fractions St. 2 and St. 4 presented antimicrobial activity against bacteria and they were purified separately by Sephadex LH-20 Gel permeation chromatography obtaining the fractions St. 2-A; St. 2- B; St. 4-A and St. 4-B. The fractions St. 2-B was activity against S. aureus. Already the fractions St. 4-B was activity against S. aureus and E. coli. These results suggest the presence of two different substances. This work intends to contribute for understanding the interactions of endophitic and plants besides opening new perspectives on the biotechnological potential of the endophitics microorganisms of plants. The investigation of new composed assets biologically starting from microorganisms brings important contributions for the discovery of new drugs. / O aumento da incidência de doenças bacterianas, virais e fúngicas enfatiza a necessidade de investigar a produção microbiana de novos compostos bioativos. Microrganismos endofíticos que colonizam tecidos internos de plantas são relativamente pouco estudados como fontes potenciais de novos produtos naturais para a exploração médica e comercial. O gênero Streptomyces tem grande importância industrial devido à capacidade de produzir muitos metabólitos secundários, respondendo por 80% dos antibióticos utilizados atualmente. Com base neste contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar Streptomyces spp., endofítico de plantas do Cerrado, da região de São Carlos, SP, separando e purificando as substâncias bioativas produzidas pelo isolado. O endofítico Streptomyces tubercidicus foi isolado de Solanum lycocarpum St. Hill (Lobeira) relatando, pela primeira vez, o endofitismo da bactéria isolada a partir de vegetação de Cerrado de São Carlos. A bioatividade de S. tubercidicus foi avaliada e os resultados obtidos ressaltam o potencial antagônico do endofítico isolado contra microrganismos de interesse em Saúde Pública, se constituindo em uma fonte promissora para a pesquisa de novos compostos bioativos. O extrato bruto fresco produzido por S. tubercidicus RND-C apresentou potencial antimicrobiano máximo de 200 UA.mL-1 contra Escherichia coli ATCC 25922 e Staphylococcus aureus ATCC 25923 após 48 h de cultivo; As substâncias bioativas produzidas por S. tubercidicus foram submetidas a diferentes tratamentos térmicos, enzimáticos e variação de pH para determinação da natureza dos compostos bioativos. Após ter sido submetido a tratamento enzimático com amilase e pepsina, o extrato concentrado manteve-se bioativo, sugerindo a natureza lipídica e nãoproteinácea das substâncias bioativas. Já o composto ativo contra E. coli sugere a presença de substância de natureza glicídica e lípidica, devido a resistência à ação da enzima invertase e lipase, respectivamente, sugerindo que as substâncias contidas no extrato bruto de S. tubercidicus RND-C contra E.coli pode ser um glicolipídio. O extrato concentrado manteve-se biologicamente ativo quando exposto a baixas (-20 e -80 ºC) e elevadas (100 e 121 ºC) temperaturas, sugerindo que os compostos bioativos produzidos não são sujeitos a degradação espontânea. O extrato manteve-se ativo contra E. coli em condições de acidez (pH, 2,0 5,0) e também apresentou bioatividade em pH 7,0 e 8,0. Em condições de alta alcalinidade (pH 9,0) não detectou-se bioatividade. Já contra S. aureus, o extrato manteve-se ativo apenas na faixa de pH 7,0. Em condições de acidez e acalinidade as substâncias bioativas produzidas por S. tubercidicus foram inativadas. A massa molar dos compostos bioativos produzidos por S. tubercidicus RND-C foram estimadas em menor que 3,0 kDa. As moléculas bioativas contidas no extrato concentrado produzidas por S. tubercidicus RND-C foram purificadas por separação biomonitorada, sugerindo a presença de duas substâncias diferentes. A avaliação da separação usando cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) sugere a existência de duas substâncias diferentes produzidas por S. tubercidicus, sendo duas ativas contra S. aureus e a outra ativa contra E.coli e S. aureus. Na separação por cromatografia em coluna pré-empacotada de fase reversa do tipo Sep-Pak, foram obtidas quatro frações (St. 1, St. 2, St. 3 e St. 4). As frações St. 2 e St. 4 apresentaram atividade antimicrobiana contra bactérias e foram purificadas separadamente por cromatografia de permeação em gel de Sephadex LH-20 obtendo as frações St. 2-A; St. 2-B; St. 4-A e St. 4-B. A fração St. 2-B foi ativa contra S. aureus. Já a fração St. 4-B foi ativa contra S. aureus e E. coli. Estes resultados sugerem a presença de duas substâncias diferentes. Este trabalho pretende contribuir para a compreensão das interações endófitos/plantas além de abrir novas perspectivas sobre o potencial biotecnológico dos microrganismos endofíticos de plantas. A investigação de novos compostos biologicamente ativos a partir de microrganismos traz importantes contribuições para a descoberta de novas drogas.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2477.pdf: 853103 bytes, checksum: cf8d502909db7590755b118f3a0c49b5 (MD5) Previous issue date: 2008-08-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / A great deal of microbiological and genetic research in the pharmaceutical industry is directed towards the development of effective strategies in the handling of microorganisms seeking the production of antibiotics that already known. In the process of obtaining clavulanic acid (CA) from Streptomyces clavuligerus, it is necessary to implement a system of strain conservation to maintain the capacity of microorganisms. Therefore, the purpose of this study was to test different preservation strategies of spores and vegetative cells of S. clavuligerus ATCC 27064 in order to ensure optimum conditions for the production of CA. Eight sets of vegetative cells stored in cryotubes were prepared, and they were evaluated for 12 months according to the number of growth stages (one or two 24-hour stages), the influence of the mycelium washing stage (washed or not), and the concentration of the cryoprotective agents (glycerol 10 or 20% v/v). Two sets of spores stored in cryotubes were also evaluated according to the concentration of cryoprotective agents. All cultures were performed in a rotating table incubator using the culture medium ISP1 for reactivation and complex medium for the production of CA. Morphology, cell growth, and the production of CA were evaluated in all cultures. The major findings were that the conservation of spores with 10% glycerol (E-10) allowed a more viable condition that the E-20 during the 360 days of storage, and the loss of CA production after 360 days was 18% but the condition E-20 was 50%. CL1-20 and CL2-20 were the best preservation conditions (more stable) for vegetative cells stored in cryotubes. Regarding the production of CA obtained, the maximum value was 1300 mg.L-1 at 144 h in the CNL 2-20 preservation condition. / Muitas pesquisas microbiológicas e genéticas na indústria farmacêutica são direcionadas para o desenvolvimento de estratégias eficazes na manipulação de microrganismos, visando à produção de antibióticos conhecidos. No processo de obtenção de ácido clavulânico (AC) a partir de Streptomyces clavuligerus faz necessário à implementação de um sistema de conservação da linhagem para manter a capacidade do microrganismo em questão. Baseado neste propósito o objetivo deste trabalho foi testar diferentes estratégias de preservação nas formas de esporos e células vegetativas de S. clavuligerus ATCC 27064 para garantir condições ótimas de produção de AC. Foram preparados 8 conjuntos de criotubos de células vegetativas e avaliados durante 12 meses em relação ao número de etapas de crescimento (uma ou duas etapas de 24 horas), à influência da etapa de lavagem do micélio (lavados ou não) e a concentração do agente crioprotetor (glicerol 10 ou 20% v/v). Dois conjuntos de criotubos de esporos também foram avaliados em relação à concentração do agente crioprotetor. Todos os cultivos foram realizados em mesa incubadora rotativa utilizando-se o meio de cultura ISP1 para reativação e, meio complexo para produção de AC. Avaliou-se em todos os cultivos a morfologia, o crescimento celular, e a produção de AC. Como resultados principais obteve-se que à conservação de esporos com 10% de glicerol permitiu uma viabilidade maior que a condição E-20 durante os 360 dias de armazenamento, sendo que a perda de produção de AC após 360 dias foi de 18% em comparação com a condição E-20 que foi de 50%. As formas de preservação CL1-20 e CL2-20 foram as melhores condições de preservação (mais estável) entre os criotubos preservados na forma de células vegetativas. Em relação às produções de AC obtidas, o valor máximo alcançado foi de 1300 mg.L-1 em 144 h, no modo de preservação CNL 2-20.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:55:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DoutRMRGA.pdf: 2980067 bytes, checksum: 99b0c61acbd88a69a219fe18747afa23 (MD5) Previous issue date: 2003-10-02 / Universidade Federal de Minas Gerais / Clavulanic acid (CA), a beta-lactam antibiotic, has been known for its commercial and therapeutic importance. This antibiotic is produced by an actinomicete, Streptomyces clavuligerus, and has a combined use with penicillins, acting as inhibitor of beta-lactamase enzymes. Due this importance, some studies on clavulanic acid production has been developed at DEQ-UFSCar. As a natural consequence of these studies and the global knowledge of this process it was necessary to develop a work studying clavulanic acid purification. The adsorption process was chosen to be studied as the process of clavulanic acid recovery and purification. In the present work a continuous adsorption process for clavulanic acid purification was proposed. This process utilized two stirred tanks (CSTR) with recycle of the adsorbent material. The adsorbent chosen to this process was the ion exchange resin Amberlite IRA 400 in the chloride cycle. First, it was necessary to study the adsorption and desorption kinetics and the clavulanic acid equilibrium isotherms in that resin to investigate the influence of temperature, pH and clavulanic acid initial concentration. The degradation rate of clavulanic acid in basic and acidic solutions is very high; high temperatures also increase the degradation rate. Consequently, studies on clavulanic acid degradation were carried out in the same temperature and pH conditions of the kinetics studies. A mathematical model was proposed to describe the adsorption and desorption processes and the kinetics and transport parameters were determined. The continuous process was also mathematically modeled to obtain preliminary data to carry out the clavulanic acid continuous experiments. The parameters utilized in the continuous adsorption process were optimized by response surface analysis to maximize yield and concentration and purification factors. Experiments of the continuous adsorption process were carried out in some different conditions. The continuous process like proposed was operationally viable, but the concentration and purification factors obtained were lesser than those obtained in fixedbed experiments. / O ácido clavulânico (AC), um antibiótico beta-lactâmico, vem se destacando por sua importância terapêutica e comercial. Esse antibiótico é produzido por um actinomiceto, Streptomyces clavuligerus, e tem seu uso combinado com penicilinas, agindo como inibidor das enzimas beta-lactamases. Devido a esta importância, alguns trabalhos sobre o estudo da produção de ácido clavulânico vêm sendo desenvolvidos no DEQ-UFSCar. Como seqüência natural desses trabalhos, tornou-se necessário o desenvolvimento de um trabalho sobre purificação de ácido clavulânico. Dentre os processos de recuperação de antibióticos destaca-se o processo de adsorção. No presente trabalho foi proposto o estudo do processo contínuo de purificação de ácido clavulânico por adsorção, utilizando para tal dois reatores de mistura (CSTR) com reciclo de resina. O adsorvente escolhido para esse processo foi a resina de troca iônica Amberlite IRA 400 no ciclo cloreto. Inicialmente foi necessário fazer um estudo cinético de adsorção e dessorção e das isotermas de equilíbrio do AC nessa resina, investigando a influência de fatores como concentração inicial de AC, temperatura e pH. A velocidade de degradação do ácido clavulânico é bastante alta principalmente em regiões básicas e ácidas; temperaturas altas também aumentam a velocidade de degradação deste composto. Portanto, foi necessária a realização de um estudo de degradação nas condições de temperatura e pH utilizadas no estudo cinético de adsorção. O processo de adsorção e dessorção em batelada pôde ser simulado através de um modelo matemático, obtendo-se os parâmetros cinéticos e de transporte envolvidos na adsorção. Uma modelagem matemática para o processo contínuo também foi proposta visando a obtenção de dados preliminares para realização de experimentos contínuos de adsorção de AC. Os parâmetros utilizados no processo contínuo foram otimizados através da análise por superfície de resposta de forma a maximizar o rendimento e os fatores de concentração e purificação. Os ensaios do processo de adsorção contínua foram realizados. Esse processo mostrou-se operacionalmente viável apesar de se obter fatores de concentração e purificação menores que aqueles obtidos no processo em leito fixo.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:56:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3555.pdf: 1699743 bytes, checksum: 904682132e92da8e0f2a959f695b6bfe (MD5) Previous issue date: 2011-03-01 / Universidade Federal de Minas Gerais / The cephamycin C (CefC) is a beta-lactam antibiotic produced from submerged and aerated cultures of Streptomyces clavuligerus. Acts as inhibitor of cell wall formation of Gram-negative bacteria and is resistant to the hydrolytic action of betalactamases enzymes. The literature presents few scientific results published regarding the purification of CefC, and the information is restricted to international patents. The first results regarding the production and purification of CefC are being released by the research group in Biochemical Engineering from the DEQ/UFSCar, in national and international conferences. Thus, given the importance of CefC, indispensable researches are needed particularly regarding the process of extraction and purification. In this work kinetics and equilibrium mathematical models were proposed to the adsorption of CefC on StreamLine QX-L ion exchange resin. Through experimental batch assays, the effects of pH (2.8, 4.7 and 6.8) and temperature (13°C, 20°C and 30°C) were studied, analyzing the intrinsic parameters calculated by nonlinear regression. The CARE model was adopted for continuous process and material balances were performed at each control surface. These balance equations were generated considering the models proposed in the batch tests. The general objective of this work is the simulation and optimization of the continuous process, applied to CefC. The simulations were carried both in transient and permanent modes. Steady state was optimized on performance parameters concentration factor (CF), purification factor (PF), efficiency (η) and productivity (σ), taking the system flows as independent variables. The numeric method adopted was the Sequential Quadratic Programing (SQP). It was found that the StreamLine QX-L resin adsorbs CefC around 0.25 mg/g, although higher values can be achieved with higher initial concentrations at pH 4.7. The best condition found was at pH 6.8 at 30°C, since it provides a reasonable maximum adsorption capacity without substantial affinity adsorbent-adsorbate loss. The batch models proposed agree with the tendency observed experimentally and the continuous process was simulated and optimized in the best condition. The calculations showed that it is possible to concentrate the CefC and operate the system in high yields, although these events do not occur concurrently. / A cefamicina C (CefC) é um antibiótico beta-lactâmico produzido a partir de cultivos submersos e aerados de Streptomyces clavuligerus. Age como inibidor da formação da parede celular de bactérias Gram-negativas, além de ser resistente à ação hidrolítica de enzimas beta-lactamases. A literatura apresenta poucos resultados científicos publicados a respeito da purificação da CefC, sendo que as informações são restritas às patentes internacionais. Os primeiros resultados a respeito da produção e purificação da CefC estão sendo divulgados pelo grupo de pesquisa em Engenharia Bioquímica do DEQ/UFSCar, em congressos nacionais e internacionais. Sendo assim, devido à importância da CefC, entende-se que são imprescindíveis pesquisas referentes à obtenção deste antibiótico, particularmente a respeito do processo de extração e purificação. Neste trabalho foram propostos modelos matemáticos de cinética e equilíbrio da adsorção da CefC na resina de troca iônica StreamLine QX-L. Através de ensaios experimentais em batelada foi verificada a influência do pH (2,8; 4,7 e 6,8) e da temperatura (13°C, 20°C e 30°C) sobre o sistema, analisando os parâmetros intrínsecos calculados por regressão não-linear. O modelo CARE (Continuous Adsorption Recycle Extraction) de processo contínuo foi adotado e balanços de massa foram efetuados em cada fronteira pertinente. Tais equações de balanço foram geradas considerando os modelos propostos nos ensaios em batelada, sendo que o objetivo geral do trabalho é simular e otimizar o processo contínuo, aplicado à CefC. As simulações foram conduzidas tanto em regime transiente quanto no permanente. O estado estacionário foi otimizado nos parâmetros de desempenho fator de concentração (FC), fator de purificação (FP), rendimento (η) e produtividade (σ), tomando as vazões do sistema como variáveis independentes. O método numérico empregado foi a Programação Seqüencial Quadrática. Foi verificado que a resina StreamLine QX-L adsorve a CefC em torno de 0,25 mg/g, sendo que maiores valores podem ser alcançados com maiores concentrações iniciais em pH 4,7. A melhor condição encontrada foi em pH 6,8 à 30°C, pois forneceu uma capacidade máxima de adsorção razoável sem perda substancial de afinidade adsorventeadsorbato. Os modelos propostos em batelada concordaram com a tendência observada experimentalmente e o processo contínuo foi simulado e otimizado na melhor condição. Os cálculos mostraram que é possível concentrar a CefC e operar o sistema em altos rendimentos, embora esses fatos não ocorram concomitantemente.

Introduction: The evolution of antibiotics changed the prognosis of surgical site infections (SSI), however its indiscriminate use throughout the years lead to antimicrobial resistance. The rational use of antibiotics makes the treatment of infections more efficient, increases patient’s quality of life and helps the hospital save money. Goal: The study analyzed the use of antibiotic prophylaxis in elective surgeries performed in a large hospital located in southern Santa Catarina. Methods: A prospective cross-sectional study to analyze the administration of antibiotic prophylaxis. When there was normal distribution of the results, Pearson’s chi-squared test and Student’s t-test were used. When there was abnormal distribution, Spearman’s correlation test or Mann-Whitney U test was used. Results: The study analyzed 1,156 surgeries performed between June and November of 2014. 54% of the surgeries were orthopedic, 32% gastrointestinal, 7,8% plastic surgeries and 6,2% cardiac. Among all the surgeries, 68,5% had no indication of prophylaxis, 78,4% were considered clean with no indication of prophylaxis, 41% of the patients didn’t receive the proper dose of antibiotic according to their weight, 75% of the surgeries the antibiotic was administrated outside the 30-minute pre incision and in 47% of the surgeries prophylaxis went beyond 24 hours. Antibiotics were administrated and SSI still appeared in 24 (68,6%) out of 35 surgeries. Conclusion: It was concluded that there were inadequacies in the administration of antibiotics in all stages of the process. The non-conformities in the administration suggest a low adherence to compliance with existing protocols and the protocols of the institution must be accompanied by CCIH and clinical hospital pharmacy. / Submitted by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T17:41:37Z No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Alexandre da Silva.pdf: 868424 bytes, checksum: 61107d372d11f9c1e27f8e053f416db3 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Alexandre da Silva.pdf: 822671 bytes, checksum: 176c06f754b2929646f7573fdbed503a (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandre Pedron Martins (alexandre.martins8@unisul.br) on 2017-05-05T17:42:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Alexandre da Silva.pdf: 868424 bytes, checksum: 61107d372d11f9c1e27f8e053f416db3 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Alexandre da Silva.pdf: 822671 bytes, checksum: 176c06f754b2929646f7573fdbed503a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T17:42:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação de Ciências da Saúde - Alexandre da Silva.pdf: 868424 bytes, checksum: 61107d372d11f9c1e27f8e053f416db3 (MD5) Contrato de cessão de direitos autorais - Alexandre da Silva.pdf: 822671 bytes, checksum: 176c06f754b2929646f7573fdbed503a (MD5) Previous issue date: 2016 / Introdução: O desenvolvimento dos antibióticos modificou o prognóstico das infecções de sítio cirúrgico, porém o uso indiscriminado durante os anos levou a resistência microbiana. A utilização racional promove eficiência no tratamento de infecções, qualidade de vida para os pacientes e economia para o hospital. Objetivo: O estudo avaliou o uso de antibioticoprofilaxia nas cirurgias eletivas realizadas em um hospital de grande porte localizado na região sul de Santa Catarina. Métodos: Estudo transversal prospectivo para avaliar a administração de antibioticoprofilaxia. Foi aplicado teste de qui-quadrado de Pearson e teste t de Student quando houve distribuição normal nos resultados. Nas distribuições anormais, foram aplicados teste de correlação de Spearman ou teste U de Mann-Witmann. Resultados: O estudo avaliou 1156 cirurgias entre Junho e Novembro de 2014. Foram 54% de cirurgias ortopédicas, 32% gastrointestinais, 7,8% cirurgias plásticas e 6,2% de cirurgias cardíacas. Dentre o total, 68,5% não tinham indicação de profilaxia, 78,4% foram consideradas limpas e não havia indicação de profilaxia, 41% das cirurgias não receberam a dose conforme o peso dos pacientes, em 75% a administração de antibiótico ocorreu fora dos 30 minutos pré-incisão e que, 47% a profilaxia foi além de 24 horas. No índice geral relacionados com ISC, dentre 35 cirurgias, 24 (68,6%) foram administrados antibióticos e mesmo assim desenvolveram ISC. Conclusão: Conclui-se que houve inadequações na administração de antibióticos em todas as etapas do processo. As inconformidades na administração sugerem uma baixa adesão ao cumprimento dos protocolos existentes e que a instituição de protocolos deve ser acompanhada pela CCIH e farmácia clínica do hospital.

Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: María Segunda Aurora Prado / Banca: Taís Maria Bauab / Resumo: A ceftriaxona sódica é um agente antimicrobiano β-lactâmico de uso parenteral, pertencente ao grupo das cefalosporinas de terceira geração. Foi produzida pelo Laboratório Roche, Suíça, sob a sigla RO 13-9904. Possui maior atividade contra bacilos Gram-negativos aeróbios e é utilizada no tratamento de escolha de meningite causada por bactérias Gram-negativas e outras multi-resistentes da família Enterobacteraceae, não é absorvida por via oral, apresenta meia-vida de 7-8 horas e pode ser injetada a cada 24 horas. A ceftriaxona sódica, assim como outras cefalosporinas, age inibindo a síntese de parede celular bacteriana é altamente estável à maioria das β-lactamases, tanto cefalosporinases quanto penicilinases destes micro-organismos. Apesar de ser uma substância altamente estudada e pesquisada com relação à sua atividade antimicrobiana, farmacocinética, farmacodinânica, estabilidade, métodos analíticos em fluidos biológicos, há poucos estudos na literatura em relação ao desenvolvimento de metodologia analítica para quantificação desta cefalosporina, pó para preparação injetável. Neste trabalho foram desenvolvidos métodos para análise qualitativa e quantitativa do pó de ceftriaxona sódica para preparações injetáveis. Para análise qualitativa estudaram-se os métodos por espectrofotometria nas regiões do infravermelho e ultravioleta, e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), possibilitando a identificação da amostra. Para quantificação do fármaco em preparação injetável validaram-se os métodos: (1) espectrofotometria na região do UV a 241 nm com faixa de concentração 10,0 a 20,0 µg/mL, utilizando água como solvente, com exatidão de 101,28% e teor de 100,38%; (2) doseamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ceftriaxone sodium is a β-lactam antimicrobial agent for parenteral use, belonging to the group of third-generation cephalosporins. It was produced by Roche, Switzerland, under the code RO 13-9904. It has greater activity against Gram-negative aerobic and is used in the treatment of choice for meningitis caused by Gram-negative bacteria and other multi-resistant Enterobacteraceae family, is not absorbed orally, has a half-life of 7-8 hours and can be injected every 24 hours. Ceftriaxone sodium, such as other cephalosporins, acts by inhibiting cell wall synthesis is highly stable to most β-lactamases, both penicillinase and cephalosporinases from these microorganisms. Despite being a substance is highly studied and researched in relation to its antimicrobial activity, pharmacokinetics, pharmacodinamics, stability, analytical methods in biological fluids, there are few studies in the literature regarding the development of analytical methodology for this order cephalosporins analysis time, cost, feasibility and ease of implementation of the method. In this work we developed methods for qualitative and quantitative analysis for ceftriaxone sodium. For qualitative analysis spectrophotometry in the infrared and ultraviolet regions and high performance liquid chromatography (HPLC) were studied to enabling the identification of the sample. Three methods were validated to quantitative ceftriaxone sodium: (1) UV spectrophotometry at 241 nm with a concentration range from 10.0 to 20.0 µg/mL using water as solvent, with an accuracy of 101.28% and content of 100.38%, (2) microbiological assay, agar diffusion method in the concentration... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: João Ruggiero Neto / Banca: Carlos José Leopoldo Constantino / Banca: Renata Danielle Adati / Banca: Jorge Chahine / Banca: Eloi da Silva Feitosa / Resumo: Peptídeos antimicrobianos agem diretamente na matriz lipídica da membrana celular perturbando o empacotamento lipídico, criando tensões elásticas e desequilíbrio de massa, que são relaxados pela formação de poros ou defeitos que dão origem ao processo lítico. Polybia-MP1, ou simplesmente MP1, com sequência de aminoácidos IDWKKLLDAAKQIL-NH2, extraído da vespa nativa Polybia paulista, é um exemplo destes peptídeos. Além de potente atividade antimicrobiana ele inibe a proliferação celular em culturas de células de câncer de próstata e bexiga. Este efeito inibitório acredita-se ser devido à presença simultânea de aminofosfolipídios fosfatidilserina (PS) e fosfatidiletanolamina (PE) nas monocamadas externas das membranas destas células. Investigação da atividade lítica em vesículas unilamelares gigantes (GUVs) revelaram que o peptídeo induziu a formação de regiões fluorescentes densas que foram atribuídas à agregação peptídeo/lipídio ou então à segregação lipídica. A atividade permeabilizadora do MP1 foi também fortemente modulada quando as GUVs continham frações de aminofosfolipídios PS e PE. Foi observado que a permeabilidade induzida pelo MP1 aumentou dramaticamente para vesículas de PC/PE/PS (7:1:2) permitindo influxo de moléculas de 10 kDa. Esta tese investigou a habilidade do MP1 em perturbar o empacotamento lipídico usando monocamadas lipídicas como modelo de membrana. Foram utilizados três fosfolipídios: PC, PE e PS contendo duas cadeias acíclicas. Isotermas de compressão foram obtidas usando cuba de Langmuir conjugadas com microscópios de fluorescência e de ângulo de Brewster. Por meio de isotermas de compressão de filme lipídico foram investigadas a preferência do peptídeo pelas fases lipídicas e seu efeito na coexistência de fases e nas alterações induzidas na forma, tamanho e número de domínios sólidos. Utilizando cadeias acíclicas derivadas de ácidos mirístico e... / Abstract: Antimicrobial peptides act directly on the lipid matrix of the cell membrane by perturbing the lipid packing, creating elastic stresses and mass imbalance, that are relieved by the formation of pores or defects resulting in the lytic activity. Polybia MP1, or shortly MP1, with aminoacid sequence IDWKKLLDAAKQIL-NH2, extracted from the native wasp Polybia paulista is an example of these peptides. Beyond a potent antibacterial activity, it inhibits cell proliferation in prostate and bladder cancer cell cultures. This inhibitory effect is believed to be due to the simultaneous presence of aminophospholipids: phosphatidylserine (PS) and phosphatidylethanolamine (PE) on the outer leaflet of these cell membranes. Investigations of MP1 lytic activity in giant unilamellar vesicles (GUVs) revealed that the peptide induced some dense fluorescent regions on the vesicles that were interpreted as being due to peptide/lipid aggregation or to lipid segregation. The MP1 permeabilizing activity was also strongly modulated when fractions of aminophospholipids PS and PE were present in the lipid composition of these GUVs. It was observed that the permeability induced by MP1 increased dramatically for vesicles of PC/PE/PS (7:1:2) allowing influx of up to 10 kDa molecules. This thesis investigated the ability of MP1 in disturbing lipid packing using lipid monolayers as model membranes. Three diacylated phospholipids: PC, PE and PS were used. Compression isotherms obtained with Langmuir trough in conjunction with fluorescence and Brewster angle microscopies were used to investigate preferences of the peptide for lipid phases and its effects on the phase coexistence and on the changes of the shape, size and number of solid domains. Using diacyl chains derived from myristic and palmitic acids attached to PC, PE and PS polar heads it was possible to explore the role played by head groups and effect of the acyl chain lengths on the impact of the peptide in lipid ... / Doutor

Orientador: José Roberto Ruggiero / Coorientador: Marcia Perez dos Santos Cabrera / Banca: Antonio Caliri / Banca: Luis Paulo Barbour Scott / Banca: Sabrina Thais Broggio Costa / Banca: Leandro Cristante de Oliveira / Resumo: Muitos peptídeos extraídos de plantas e secreções de animais exibem um amplo espectro de atividade antimicrobiana contra bactérias gram-positivas, negativas, fungos e parasitas. Devido a essa característica e ao crescente aumento da resistência dos microrganismos patogênicos às formas de tratamento convencionais, especula-se a utilização destes peptídeos como possíveis novos fármacos. Por isso, várias técnicas experimentais e teóricas que fazem uso de sistemas miméticos do ambiente membranar têm sido utilizadas para se estudar os mecanismos de ação desta classe de peptídeos. No presente trabalho, utilizam-se simulações por Dinâmica Molecular com o intuito de investigar a influência de algumas características de interação peptídeo-peptídeo e peptídeo-membrana sobre a eficiência biológica de Protonectinas e Jeleínas. Protonectina e Protonectina 1-6 são peptídeos antimicrobianos, o primeiro apresenta atividade hemolítica, de degranulação de mastócitos e quimiotática, enquanto o segundo apresenta somente a atividade quimiotática. Dados experimentais indicam que a associação destes dois peptídeos (proporção 1:1) gera uma forma de estrutura supramolecular agregada e também aumenta as atividades hemolíticas e de degranulação de mastócitos, enquanto a atividade quimiotática decresce acentuadamente, ou seja, em associação eles apresentam um comportamento mais acentuado de interação com membranas. Tendo em vista estes resultados, especulam-se, neste trabalho, quais as interações entre Protonectina/Protonectina 1-6 (mistura) que estariam associadas à formação de tal estrutura agregada e quais as implicações desta estrutura no mecanismo de interação com membrana. Os resultados das simulações em água e micela de SDS para estes peptídeos indicam que há a tendência de agregação entre Protonectinas puras e Protonectina/Protonectina 1-6, e que esta ocorre por meio de ligações por ... / Abstract: Many peptides extracted from plants and animal secretions exhibit a broad spectrum of antimicrobial activity against bacteria gram-negative, gram-positive, fungi and parasites. Due this characteristic and the increasing resistance of pathogenic microorganisms to conventional forms of treatment, it is speculated the use of these peptides as potential new drugs. Therefore, various experimental and theoretical techniques that make use of membrane mimetic systems have been used to study the mechanisms of action of this class of peptides. In this work, we use molecular dynamics simulations to understand the influence of some characteristics of interaction peptide-peptide and peptide-membrane on biological efficiency of the Protonectins and Jelleines. Protonectin and Protonectin 1-6 are antimicrobial peptides, the first shows hemolytic activity, mast cell degranulation and chemotaxis, while the second presents chemotactic activity. Experimental data indicate that the association between those two peptides (1:1) generates a supramolecular aggregate structure and also increases the hemolytic and mast cell degranulation activities, while the chemotactic activity decreases, i.e., in combination they exhibit accentuated behavior of the interaction with membranes. Based on these results in this work, we speculate, which the interactions between Protonectin/Protonectin 1-6 (mixture) that would be associated with the formation of aggregate structure and the implications of this structure in the interaction with membrane mechanism. The results of the simulations in water and SDS micelle for these peptides indicate that there is a tendency of aggregation between pure Protonectins and Protonectin/Protonectin 1-6, and that this occurs through intermittent hydrogen bonds. Furthermore, it was found that the electrostatic interactions between the mixture of peptides is less favorable than for the pure Protonectins, influencing the distance between the ... / Doutor