Analiza el comportamiento anticoagulante de fucoidanos del alga Lessonia trabeculata, los cuales han sido sometidos a un proceso físico que permitirá obtener polisacáridos de menor tamaño, los que simularían el efecto de las heparinas de bajo peso molecular, para tal fin se consideran la evaluación de las características químicas de los metabolitos obtenidos así como su desempeño frente a pruebas de coagulación, para el estudio la inhibición de la generación de trombina. / Tesis

Introdução. Avaliar o conhecimento, de indivíduos em uso da terapia com anticoagulantes orais (TAO), é uma estratégia que profissionais da saúde podem utilizar para orientar o cuidado dispensado a estas pessoas. O uso de um instrumento psicometricamente válido e confiável é fundamental para garantir uma avaliação adequada. Objetivo. Construir e validar um instrumento para avaliar o conhecimento sobre a TAO. Método. Estudo metodológico e de corte transversal, que seguiu as seguintes etapas: elaboração dos itens, validação de face e conteúdo por um comitê de juízes, estudo piloto e aplicação do instrumento em uma amostra da população estudada. A amostra foi constituída de pacientes adultos, em uso de anticoagulantes orais antagonistas da vitamina K há, pelo menos, seis meses e entrevistados nas unidades de internação ou ambulatórios de três instituições públicas do interior do estado de São Paulo, no período de dezembro de 2013 a agosto de 2014. Participaram 50 indivíduos no estudo piloto e 500 na etapa de validação psicométrica do instrumento. A validação de construto foi verificada pela análise fatorial de informação plena e pela comparação da medida do conhecimento com variáveis associadas ao conhecimento da TAO (escolaridade e tempo de uso do medicamento). A consistência interna foi avaliada pelo teste de Kuder- Richardson (KR 20). O nível de significância adotado para os testes foi de 0,05. Resultados. Inicialmente o instrumento foi composto por 43 itens, entre eles itens de múltipla escolha e questões abertas. Após validação de face e conteúdo foram feitas modificações, dentre elas, a exclusão de questões abertas. A seguir realizado teste piloto, com a nova versão do instrumento denominada Avaliação do conhecimento em anticoagulação oral (IACACO), contendo 32 itens do tipo teste de múltipla escolha, dividido em dois módulos, o primeiro com 28 itens de conhecimentos gerais sobre a TAO (pontuação de 0 a 28) e o segundo, com 4 itens, específico para mulheres em idade fértil (pontuação de 0 a 4). A análise fatorial sugeriu um instrumento unidimensional. Ao avaliarmos o resultado da correlação entre as variáveis anos de estudo e conhecimento da TAO, constatamos correlação positiva e de forte intensidade entre as duas medidas (r = 0,61, p <=0,001). O valor da correlação entre as variáveis conhecimento e tempo de uso do ACO mostrou correlação positiva, mas de fraca intensidade (r = 0,21; p<= 0,001). O Coeficiente KR 20 de Kuder-Richardson foi de 0,86 para o módulo geral (28 itens) e para o instrumento com seus dois módulos (32 itens) foi de 0,85. Conclusão. As análises mostraram resultados favoráveis para o ICACO e trouxeram evidências de que o novo instrumento foi válido e confiável para avaliar o conhecimento dos pacientes em uso da TAO. Análises futuras da Teoria de Resposta ao Item poderão contribuir para a avaliação individual dos itens do IACACO. Não foi determinado ponto de corte para conhecimento suficiente ou não sobre a TAO, cabe ao profissional de saúde ou pesquisador determinar a melhor maneira de interpretar os resultados advindos da aplicação do instrumento. / Introduction. To evaluate the knowledge of individuals using oral anticoagulant therapy (OAT) is a strategy that health professionals can use to guide the care given to these people. The use of a valid and reliable psychometric instrument ensure a proper evaluation. Aim. To construct and validate an instrument to assess the knowledge of the OAT. Method. Methodological and cross-sectional study, which followed the following steps: preparation of items, face and content validation by a committee of judges, pilot study and application of the instrument in a sample of the population studied. The sample consisted of adult patients using oral anticoagulants antagonists vitamin K for at least six months and interviewed in unit cares for pacients and ambulatory clinics of three public institutions in the state of São Paulo, in December 2013 to August 2014. Attended 50 individuals in the pilot study and 500 in the psychometric validation of the instrument step. The construct validity was verified by factor analysis of full information and by comparing the measure of knowledge with variables associated with knowledge of the OAT. Internal consistency was estimated by Kuder- Richardson test (KR 20). The significance level for the tests was 0.05. Results. Initially, the instrument consisted of 43 items, including items of multiple choice and open questions. After validation of face and content changes were made, among them the exclusion of open questions. Following conducted pilot test with the new version of the called knowledge evaluation of oral anticoagulation instrument (KEOAI) containing 32 items of the type test of multiple choice, divided into two modules, the first with 28 items of general knowledge of the OAT ( score 0-28) and the second with 4 items, specific to women of childbearing age (score 0-4). Factor analysis suggested a one-dimensional instrument. When evaluating the results of the correlation between the variables years of study and knowledge of the OAT, we found a positive correlation and strong intensity between the two measurements (r = 0.61, p <=0,001). The value of the correlation between the variables knowledge and OAT usage time showed positive correlation, but low intensity (r = 0.21, p <= 0.001). The coefficient KR 20 Kuder- Richardson was 0.86 for the general module (28 items) and the instrument with its two modules (32 items) was 0.85. Conclusion. Analyses showed favorable results for KEOAI and brought evidence that the new instrument is valid and reliable for assessing the knowledge of patients using the OAT. Future analyzes of Item Response Theory can contribute to the evaluation of individual KEOAI items. It was determined cutoff point for sufficient knowledge or not on the OAT, it is up to the health professional or researcher to determine the best way to interpret the results from the application of the instrument.

Estudo exploratório, de delineamento longitudinal, com 81 pacientes em uso de anticoagulante oral e que foram avaliados durante internação e dois meses após a alta. Os objetivos foram acompanhar a evolução quanto á terapia de anticoagulação oral e adesão ao tratamento; comparar o estado geral de saúde e a presença de sintomas de ansiedade e depressão. Foram utilizados instrumentos específicos para avaliar adesão ao tratamento medicamentoso (Medida de Adesão aos Tratamentos), estado geral de saúde (Escala Visual Analógica) e presença de sintomas de ansiedade (HADS-Ansiedade) e depressão (HADS- Depressão). As análises estatísticas realizadas foram: Teste t de Student pareado para comparar as médias do estado geral de saúde e da HADS; Modelo Linear de Efeitos Mistos para analisar a associação entre estado geral de saúde, ansiedade, depressão e tempo de avaliação no estudo. O nível de significância adotado foi 0,05. Entre os participantes, 54,3% eram mulheres, com idade média de 59,5 anos e nível médio de instrução de 5,1 anos. A principal indicação clínica para uso do medicamento foi formação de trombos (34,6%), sendo a varfarina o anticoagulante oral mais utilizado (97,5%). Dois meses após a alta, todos os pacientes foram classificados como aderentes ao tratamento e 42% mantiveram o INR na faixa terapêutica. As diferenças entre as médias do estado geral de saúde, HADS-Ansiedade e HADS-Depressão durante a internação e dois meses após a alta não foram estatisticamente significantes (p=0,78; p=0,27 e p=0,40, respectivamente). Em relação á presença de ansiedade, quando associamos as duas variáveis de forma categórica, com e sem sintomas, e o tempo de avaliação, 38 (46,9%) pacientes foram classificados como \"sem sintomas\" de ansiedade e 22 (27,1%) \"com sintomas\", sendo esta associação estatisticamente significante (p<0,001). Para depressão, a maioria (55; 67,9%) foi classificada como \"sem sintomas\" e 11 (13,6%) \"com sintomas\", sendo tal associação estatisticamente significante (p<0,001). Ao analisarmos as médias do estado geral de saúde segundo tempo e grupo de sintomas, resultados estatisticamente significantes foram obtidos apenas quando comparamos os valores entre os grupos sem sintomas de depressão (M=80,5; D.P.=23,46) e com sintomas (M=62,5; D.P.=26,07) (p=0,021), dois meses após a alta e quando comparamos as médias do grupo com sintomas de depressão, na internação (M= 75,37; D.P.=25,02) e dois meses após a alta (M=62,5; D.P.=26,07) (p=0,046). Identificar o perfil clínico de pacientes em uso de anticoagulante oral, desde a internação até dois meses de seguimento ambulatorial; conhecer sua percepção sobre estado de saúde, presença de sintomas de ansiedade e de depressão e a adesão ao tratamento são ações importantes a serem consideradas no atendimento desses pacientes. Tais resultados poderão ser utilizados para nortear mudanças na organização do ambulatório de anticoagulação oral e no planejamento da assistência de enfermagem a tais pacientes. / This exploratory and longitudinal research involved 81 patients under oral anticoagulation treatment, who were evaluated during hospitalization and two months after discharge. The objectives were to follow the patients\' clinical evolution, considering the oral anticoagulation therapy and treatment adherence; and to compare the general health condition and the presence of anxiety and depression symptoms. Specific instruments were used to assess adherence to medication treatment (Treatment Adherence Measure), general health condition (visual analogue scale) and the presence of anxiety (HADS-Anxiety) and depression symptoms (HADS-depression). For the sake of statistical analysis, the following were applied: Student\'s paired t-test to compare the mean scores for the general health condition and HADS scores; the Linear Fixed Effects Model to analyze the association between general health condition, anxiety, depression and research moment. Significance was set at 0.05. Among the participants, 54.3% were women, with a mean age of 59.5 years and a mean education time of 5.1 years. The main clinical indication for medication use was the formation of thrombi (34.6%), with warfarin as the most used oral anticoagulant drug (97.5%). AT two months after discharge, all patients were classified as adherent to the treatment and 42% maintained their INR within the therapeutic range. The differences between the mean general health, HADS-Anxiety and HADS-Depression scores during hospitalization and two months after discharge were not statistically significant (p=0.78; p=0.27 and p=0.40, respectively). As regards the presence of anxiety, when the two variables are associated categorically, with and without symptoms, and the research moment, 38 (46.9%) patients were classified as \"without symptoms\" of anxiety and 22 (27.1%) \"with symptoms\", with a statistically significant association (p<0.001). As for depression, the majority (55; 67.9%) was classified as \"without symptoms\" and 11 (13.6%) \"with symptoms\", a statistically significant association (p<0.001). The analysis of the mean general health condition scores according to the research moment and group of symptoms only revealed statistically significant results when comparing the groups without (M=80.5; S.D.=23.46) and with symptoms (M=62.5; S.D.=26.07) (p=0.021) two months after the discharge and when comparing the mean scores for the group with depression symptoms during hospitalization (M= 75.37; S.D.=25.02) and two months after the discharge (M=62.5; S.D.=26.07) (p=0.046). Identifying the clinical profile of patients under oral anticoagulant therapy since hospitalization and after two months of outpatient monitoring and getting to know their perceived health condition, presence of anxiety and depression symptoms and treatment adherence are important actions for consideration in care delivery to these patients. These results can be used to guide changes in the organization of the oral anticoagulation outpatient clinic and in nursing care planning for these patients.

Rotas sintéticas foram empregadas no grupo funcional ligado ao carbono 4 da trans-hidroxi-L-prolina para a obtenção de quatro análogos de prolina com amino e guanido grupos nesta posição e isomeria espacial cis e trans. Adicionalmente, o aminoácido guanidino fenilalanina foi comparado com os análogos de prolina em todos os ensaios realizados. Entre os análogos de prolina sintetizados, o peptídeo contendo o aminoácido não natural com o grupo funcional guanido e isomeria trans apresentou a melhor atividade inibitória contra trombina. Entretanto, o peptídeo sintetizado com o aminoácido guanidino fenilalanina ainda demonstra ter uma melhor atividade inibitória em comparação com os análogos de prolina. / Synthetic routes were employed in the functional group attached to the carbon 4 of trans-4-hydroxy-L-proline to obtain four proline analogues with amino and guanido groups in this position and cis and trans spatial isomerism. Additionally, the amino acid guanidino phenylalanine was compared with the analogues of proline in all tests. Among the proline analogues synthesized, the peptide containing the unnatural amino acid functional group with guanido and trans isomerism showed the best inhibitory activity against thrombin. However, the peptide synthesized with the amino acid guanidino phenylalanine exhibits an even better inhibitory activity in comparison to proline analogues.

Estudo exploratório, de delineamento longitudinal, com 81 pacientes em uso de anticoagulante oral e que foram avaliados durante internação e dois meses após a alta. Os objetivos foram acompanhar a evolução quanto á terapia de anticoagulação oral e adesão ao tratamento; comparar o estado geral de saúde e a presença de sintomas de ansiedade e depressão. Foram utilizados instrumentos específicos para avaliar adesão ao tratamento medicamentoso (Medida de Adesão aos Tratamentos), estado geral de saúde (Escala Visual Analógica) e presença de sintomas de ansiedade (HADS-Ansiedade) e depressão (HADS- Depressão). As análises estatísticas realizadas foram: Teste t de Student pareado para comparar as médias do estado geral de saúde e da HADS; Modelo Linear de Efeitos Mistos para analisar a associação entre estado geral de saúde, ansiedade, depressão e tempo de avaliação no estudo. O nível de significância adotado foi 0,05. Entre os participantes, 54,3% eram mulheres, com idade média de 59,5 anos e nível médio de instrução de 5,1 anos. A principal indicação clínica para uso do medicamento foi formação de trombos (34,6%), sendo a varfarina o anticoagulante oral mais utilizado (97,5%). Dois meses após a alta, todos os pacientes foram classificados como aderentes ao tratamento e 42% mantiveram o INR na faixa terapêutica. As diferenças entre as médias do estado geral de saúde, HADS-Ansiedade e HADS-Depressão durante a internação e dois meses após a alta não foram estatisticamente significantes (p=0,78; p=0,27 e p=0,40, respectivamente). Em relação á presença de ansiedade, quando associamos as duas variáveis de forma categórica, com e sem sintomas, e o tempo de avaliação, 38 (46,9%) pacientes foram classificados como \"sem sintomas\" de ansiedade e 22 (27,1%) \"com sintomas\", sendo esta associação estatisticamente significante (p<0,001). Para depressão, a maioria (55; 67,9%) foi classificada como \"sem sintomas\" e 11 (13,6%) \"com sintomas\", sendo tal associação estatisticamente significante (p<0,001). Ao analisarmos as médias do estado geral de saúde segundo tempo e grupo de sintomas, resultados estatisticamente significantes foram obtidos apenas quando comparamos os valores entre os grupos sem sintomas de depressão (M=80,5; D.P.=23,46) e com sintomas (M=62,5; D.P.=26,07) (p=0,021), dois meses após a alta e quando comparamos as médias do grupo com sintomas de depressão, na internação (M= 75,37; D.P.=25,02) e dois meses após a alta (M=62,5; D.P.=26,07) (p=0,046). Identificar o perfil clínico de pacientes em uso de anticoagulante oral, desde a internação até dois meses de seguimento ambulatorial; conhecer sua percepção sobre estado de saúde, presença de sintomas de ansiedade e de depressão e a adesão ao tratamento são ações importantes a serem consideradas no atendimento desses pacientes. Tais resultados poderão ser utilizados para nortear mudanças na organização do ambulatório de anticoagulação oral e no planejamento da assistência de enfermagem a tais pacientes. / This exploratory and longitudinal research involved 81 patients under oral anticoagulation treatment, who were evaluated during hospitalization and two months after discharge. The objectives were to follow the patients\' clinical evolution, considering the oral anticoagulation therapy and treatment adherence; and to compare the general health condition and the presence of anxiety and depression symptoms. Specific instruments were used to assess adherence to medication treatment (Treatment Adherence Measure), general health condition (visual analogue scale) and the presence of anxiety (HADS-Anxiety) and depression symptoms (HADS-depression). For the sake of statistical analysis, the following were applied: Student\'s paired t-test to compare the mean scores for the general health condition and HADS scores; the Linear Fixed Effects Model to analyze the association between general health condition, anxiety, depression and research moment. Significance was set at 0.05. Among the participants, 54.3% were women, with a mean age of 59.5 years and a mean education time of 5.1 years. The main clinical indication for medication use was the formation of thrombi (34.6%), with warfarin as the most used oral anticoagulant drug (97.5%). AT two months after discharge, all patients were classified as adherent to the treatment and 42% maintained their INR within the therapeutic range. The differences between the mean general health, HADS-Anxiety and HADS-Depression scores during hospitalization and two months after discharge were not statistically significant (p=0.78; p=0.27 and p=0.40, respectively). As regards the presence of anxiety, when the two variables are associated categorically, with and without symptoms, and the research moment, 38 (46.9%) patients were classified as \"without symptoms\" of anxiety and 22 (27.1%) \"with symptoms\", with a statistically significant association (p<0.001). As for depression, the majority (55; 67.9%) was classified as \"without symptoms\" and 11 (13.6%) \"with symptoms\", a statistically significant association (p<0.001). The analysis of the mean general health condition scores according to the research moment and group of symptoms only revealed statistically significant results when comparing the groups without (M=80.5; S.D.=23.46) and with symptoms (M=62.5; S.D.=26.07) (p=0.021) two months after the discharge and when comparing the mean scores for the group with depression symptoms during hospitalization (M= 75.37; S.D.=25.02) and two months after the discharge (M=62.5; S.D.=26.07) (p=0.046). Identifying the clinical profile of patients under oral anticoagulant therapy since hospitalization and after two months of outpatient monitoring and getting to know their perceived health condition, presence of anxiety and depression symptoms and treatment adherence are important actions for consideration in care delivery to these patients. These results can be used to guide changes in the organization of the oral anticoagulation outpatient clinic and in nursing care planning for these patients.

Introdução. Avaliar o conhecimento, de indivíduos em uso da terapia com anticoagulantes orais (TAO), é uma estratégia que profissionais da saúde podem utilizar para orientar o cuidado dispensado a estas pessoas. O uso de um instrumento psicometricamente válido e confiável é fundamental para garantir uma avaliação adequada. Objetivo. Construir e validar um instrumento para avaliar o conhecimento sobre a TAO. Método. Estudo metodológico e de corte transversal, que seguiu as seguintes etapas: elaboração dos itens, validação de face e conteúdo por um comitê de juízes, estudo piloto e aplicação do instrumento em uma amostra da população estudada. A amostra foi constituída de pacientes adultos, em uso de anticoagulantes orais antagonistas da vitamina K há, pelo menos, seis meses e entrevistados nas unidades de internação ou ambulatórios de três instituições públicas do interior do estado de São Paulo, no período de dezembro de 2013 a agosto de 2014. Participaram 50 indivíduos no estudo piloto e 500 na etapa de validação psicométrica do instrumento. A validação de construto foi verificada pela análise fatorial de informação plena e pela comparação da medida do conhecimento com variáveis associadas ao conhecimento da TAO (escolaridade e tempo de uso do medicamento). A consistência interna foi avaliada pelo teste de Kuder- Richardson (KR 20). O nível de significância adotado para os testes foi de 0,05. Resultados. Inicialmente o instrumento foi composto por 43 itens, entre eles itens de múltipla escolha e questões abertas. Após validação de face e conteúdo foram feitas modificações, dentre elas, a exclusão de questões abertas. A seguir realizado teste piloto, com a nova versão do instrumento denominada Avaliação do conhecimento em anticoagulação oral (IACACO), contendo 32 itens do tipo teste de múltipla escolha, dividido em dois módulos, o primeiro com 28 itens de conhecimentos gerais sobre a TAO (pontuação de 0 a 28) e o segundo, com 4 itens, específico para mulheres em idade fértil (pontuação de 0 a 4). A análise fatorial sugeriu um instrumento unidimensional. Ao avaliarmos o resultado da correlação entre as variáveis anos de estudo e conhecimento da TAO, constatamos correlação positiva e de forte intensidade entre as duas medidas (r = 0,61, p <=0,001). O valor da correlação entre as variáveis conhecimento e tempo de uso do ACO mostrou correlação positiva, mas de fraca intensidade (r = 0,21; p<= 0,001). O Coeficiente KR 20 de Kuder-Richardson foi de 0,86 para o módulo geral (28 itens) e para o instrumento com seus dois módulos (32 itens) foi de 0,85. Conclusão. As análises mostraram resultados favoráveis para o ICACO e trouxeram evidências de que o novo instrumento foi válido e confiável para avaliar o conhecimento dos pacientes em uso da TAO. Análises futuras da Teoria de Resposta ao Item poderão contribuir para a avaliação individual dos itens do IACACO. Não foi determinado ponto de corte para conhecimento suficiente ou não sobre a TAO, cabe ao profissional de saúde ou pesquisador determinar a melhor maneira de interpretar os resultados advindos da aplicação do instrumento. / Introduction. To evaluate the knowledge of individuals using oral anticoagulant therapy (OAT) is a strategy that health professionals can use to guide the care given to these people. The use of a valid and reliable psychometric instrument ensure a proper evaluation. Aim. To construct and validate an instrument to assess the knowledge of the OAT. Method. Methodological and cross-sectional study, which followed the following steps: preparation of items, face and content validation by a committee of judges, pilot study and application of the instrument in a sample of the population studied. The sample consisted of adult patients using oral anticoagulants antagonists vitamin K for at least six months and interviewed in unit cares for pacients and ambulatory clinics of three public institutions in the state of São Paulo, in December 2013 to August 2014. Attended 50 individuals in the pilot study and 500 in the psychometric validation of the instrument step. The construct validity was verified by factor analysis of full information and by comparing the measure of knowledge with variables associated with knowledge of the OAT. Internal consistency was estimated by Kuder- Richardson test (KR 20). The significance level for the tests was 0.05. Results. Initially, the instrument consisted of 43 items, including items of multiple choice and open questions. After validation of face and content changes were made, among them the exclusion of open questions. Following conducted pilot test with the new version of the called knowledge evaluation of oral anticoagulation instrument (KEOAI) containing 32 items of the type test of multiple choice, divided into two modules, the first with 28 items of general knowledge of the OAT ( score 0-28) and the second with 4 items, specific to women of childbearing age (score 0-4). Factor analysis suggested a one-dimensional instrument. When evaluating the results of the correlation between the variables years of study and knowledge of the OAT, we found a positive correlation and strong intensity between the two measurements (r = 0.61, p <=0,001). The value of the correlation between the variables knowledge and OAT usage time showed positive correlation, but low intensity (r = 0.21, p <= 0.001). The coefficient KR 20 Kuder- Richardson was 0.86 for the general module (28 items) and the instrument with its two modules (32 items) was 0.85. Conclusion. Analyses showed favorable results for KEOAI and brought evidence that the new instrument is valid and reliable for assessing the knowledge of patients using the OAT. Future analyzes of Item Response Theory can contribute to the evaluation of individual KEOAI items. It was determined cutoff point for sufficient knowledge or not on the OAT, it is up to the health professional or researcher to determine the best way to interpret the results from the application of the instrument.

O carrapato Riphicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grandes prejuízos à pecuária. O principal método de controle baseia-se nos acaricidas. No entanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle alternativo. A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional presente em quase todas as células de animais. A secreção da CRT durante a alimentação pode estar relacionada a modulação da interação parasita hospedeiro. No presente estudo, as CRTs de R. microplus (rBmCRT) e do Haemophisalis longicornis (rHlCRT) foram expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia. As propriedades imunogênicas e antigênicas da BmCRT e HlCRT foram analisadas por diferentes métodos. In silico, foram comparandos os epítopos das CRTs pelo índice de Jamerson-Wolf, que mostrou 6 regiões com potenciais epítopos antigênicos diferentes entre as CRTs. Enquanto, a análise in silico, da rBmCRT e rHlCRT mostraram 6 regiões que podem interagir com a proteína C1q. In vitro, por Western blot, a rBmCRT, mas não a rHlCRT, foi reconhecida pelo soro de bovino infestado experimentalmente com R. microplus. Em Western blot de extrato de larvas, os soros do coelho imunizado com rBmCRT e bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT reconheceram a BmCRT, sugerindo que os anticorpos direcionados às proteínas recombinantes também reconhecem a proteína nativa BmCRT. Também a rBmCRT mostrou um efeito anticoagulante no teste de recalcificação plasmática. In vivo, a rBmCRT e rHlCRT induziram reações de hipersensibilidade cutânea imediata em bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT, mas não foi possível detectar alterações na análise histopatológica. Juntos, estes resultados sugerem, que a rBmCRT e rHlCRT são imunogênicas e pode ter funções imunomoduladoras sobre o sistema imune do hospedeiro, mas não suficiente para prevenir o desenvolvimento da imunidade humoral. / The tick Riphicephalus (Boophilus) microplus is a blood-sucking ectoparasite of bovines from tropical and subtropical regions, causing serious damages to the livestock production. The main method of control is based on the acaricides. However, the use of vaccines has been studied as a promising control method. The calretirulin (CRT) is a multifunctional protein present in almost all cells of animals. The secretion of CRT during feeding might be linked to the modulation of the parasite-host interaction. In the present study, recombinant CRTs of R. microplus (rBmCRT) and of Haemaphysalis longicornis (rHlCRT) were expressed in Escherichia coli and purified by ion exchange chromatography. The immunogenic and antigenic capacities of BmCRT e HlCRT were analyzed by different methods. In silico, were comparisons of the CRTs epitopes, identified by Jameson-Wolf antigenic index, indicates that there are three different regions between the tick CRTs. While, in silico analysis showed 6 regions in rBmCRT and in rHlCRT that could interact with C1q protein. In vitro, by Western blot, rBmCRT, but not rHlCRT, was recognized by the serum of bovine experimentally infested with R. microplus. In Western blot with extracts of larvae, the sera of a rabbit immunized with rBmCRT and bovines immunized with rBmCRT or rHlCRT recognized BmCRT; this suggests that antibodies directed to recombinant proteins also recognize native BmCRT. Also, the rBmCRT showed an anticoagulant effect in recalcification time. In vivo, the rBmCRT and rHlCRT induced reactions of immediate cutaneous hypersensitivity in bovines immunized with rBmCRT and rHlCRT, but it was not possible to detect alterations in histopathologic test. Together, these results suggest that the rBmCRT and rHlCRT are immunogenic and could have immunomodulatory functions on the immunity system of the host, but not enough to prevent the development of humoral immunity.

Etexilato de dabigatrana (DAB) é um pró-fármaco da dabigatrana disponível para administração oral. DAB é um inibidor direto da trombina, desenvolvido para prevenção de acidente vascular cerebral e embolia sistêmica em pacientes com fibrilação atrial e para a prevenção de eventos tromboembólicos em pacientes que se submeteram à cirurgia de artroplastia total de joelho e de quadril. Atualmente, não há métodos publicados para a análise qualitativa e quantitativa e estudos de estabilidade de DAB em cápsulas. Portanto, inicialmente, a caracterização da substância química de referência foi realizada por espectrometria de massas (EM), espectroscopia de absorção no infravermelho, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de 1H e calorimetria exploratória diferencial. Os métodos por cromatografia em camada delgada, CLAE utilizando detectores UV, CAD e EM foram usados para identificar o fármaco nas cápsulas. Na sequência, foram desenvolvidos métodos empregando a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta (CLAE-UV) e detector aerossol carregado (CLAECAD) para a quantificação de DAB em cápsulas. Os mesmos foram validados, avaliando-se parâmetros como especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez e limites de detecção e quantificação. Os métodos foram comparados estatisticamente por ANOVA e nenhuma diferença estatisticamente significante foi encontrada entre os mesmos. O estudo de estabilidade de DAB frente à degradação térmica foi investigado. Através dos métodos por CLAE-UV e CLAE-EM pode-se propor a identidade dos produtos de degradação formados, sem processo de isolamento ou purificação. Adicionalmente, a cinética de degradação do DAB e a citotoxicidade das amostras degradadas também foram estudadas. O estudo de cinética de degradação térmica apresentou cinética de primeira ordem (R2 = 0,9900). Além disso, nenhuma evidência de citotoxicidade in vitro em estudo utilizando células mononucleares humanas foi observada. Desse modo estabeleceram-se procedimentos que podem ser aplicados para aprimorar o controle de qualidade, contribuindo para assegurar a eficácia terapêutica de produtos à base de DAB. / Dabigatran etexilate (DAB) is an orally available prodrug of dabigatran. DAB is a direct thrombin inhibitor, developed for stroke and systemic embolism prevention in patients with atrial fibrillation and prevention of venous thromboembolic events in patients who have undergone elective total hip replacement or total knee replacement surgery. Currently, there are no methods published for the qualitative and quantitative analysis and stability study of DAB in capsules. Thus, initially, the characterization of the chemical reference substance was performed by mass spectrometry (MS), infrared spectroscopy, 1H nuclear magnetic resonance spectroscopy and differencial scanning calorimetry. The methods by thin-layer chromatography, LC using UV and CAD detector and LC-MS were used to identify the drug in capsule. High performance liquid chromatographic (LC) methods were developed for the assessment of dabigatran etexilate (DAB) in capsules with ultraviolet detector (LC-UV) and charged aerosol detector (LC-CAD). They were validated by evaluating parameters such as specificity, linearity, precision, accuracy, robustness and limits of detection and quantitation. The methods were compared statistically by ANOVA and no statistic difference was found between them. The stability study of DAB under thermal condition was investigated. The degradation products formed were analyzed by LC-UV and LC-MS methods and it’s identify could be suggested, without isolation or purification process. Additionally, the thermal degradation kinetic of DAB and the cytotoxicity of the degraded samples were also studied. The kinetics results could be best described as first-order process (R2 = 0.9900). No evidence of cytotoxicity in human mononuclear cell was observed for drugs degraded samples. So, procedures which can be applied to improve the quality control and contribute to ensure the therapeutic efficacy of products containing DAB.

O carrapato Riphicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grandes prejuízos à pecuária. O principal método de controle baseia-se nos acaricidas. No entanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle alternativo. A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional presente em quase todas as células de animais. A secreção da CRT durante a alimentação pode estar relacionada a modulação da interação parasita hospedeiro. No presente estudo, as CRTs de R. microplus (rBmCRT) e do Haemophisalis longicornis (rHlCRT) foram expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia. As propriedades imunogênicas e antigênicas da BmCRT e HlCRT foram analisadas por diferentes métodos. In silico, foram comparandos os epítopos das CRTs pelo índice de Jamerson-Wolf, que mostrou 6 regiões com potenciais epítopos antigênicos diferentes entre as CRTs. Enquanto, a análise in silico, da rBmCRT e rHlCRT mostraram 6 regiões que podem interagir com a proteína C1q. In vitro, por Western blot, a rBmCRT, mas não a rHlCRT, foi reconhecida pelo soro de bovino infestado experimentalmente com R. microplus. Em Western blot de extrato de larvas, os soros do coelho imunizado com rBmCRT e bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT reconheceram a BmCRT, sugerindo que os anticorpos direcionados às proteínas recombinantes também reconhecem a proteína nativa BmCRT. Também a rBmCRT mostrou um efeito anticoagulante no teste de recalcificação plasmática. In vivo, a rBmCRT e rHlCRT induziram reações de hipersensibilidade cutânea imediata em bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT, mas não foi possível detectar alterações na análise histopatológica. Juntos, estes resultados sugerem, que a rBmCRT e rHlCRT são imunogênicas e pode ter funções imunomoduladoras sobre o sistema imune do hospedeiro, mas não suficiente para prevenir o desenvolvimento da imunidade humoral. / The tick Riphicephalus (Boophilus) microplus is a blood-sucking ectoparasite of bovines from tropical and subtropical regions, causing serious damages to the livestock production. The main method of control is based on the acaricides. However, the use of vaccines has been studied as a promising control method. The calretirulin (CRT) is a multifunctional protein present in almost all cells of animals. The secretion of CRT during feeding might be linked to the modulation of the parasite-host interaction. In the present study, recombinant CRTs of R. microplus (rBmCRT) and of Haemaphysalis longicornis (rHlCRT) were expressed in Escherichia coli and purified by ion exchange chromatography. The immunogenic and antigenic capacities of BmCRT e HlCRT were analyzed by different methods. In silico, were comparisons of the CRTs epitopes, identified by Jameson-Wolf antigenic index, indicates that there are three different regions between the tick CRTs. While, in silico analysis showed 6 regions in rBmCRT and in rHlCRT that could interact with C1q protein. In vitro, by Western blot, rBmCRT, but not rHlCRT, was recognized by the serum of bovine experimentally infested with R. microplus. In Western blot with extracts of larvae, the sera of a rabbit immunized with rBmCRT and bovines immunized with rBmCRT or rHlCRT recognized BmCRT; this suggests that antibodies directed to recombinant proteins also recognize native BmCRT. Also, the rBmCRT showed an anticoagulant effect in recalcification time. In vivo, the rBmCRT and rHlCRT induced reactions of immediate cutaneous hypersensitivity in bovines immunized with rBmCRT and rHlCRT, but it was not possible to detect alterations in histopathologic test. Together, these results suggest that the rBmCRT and rHlCRT are immunogenic and could have immunomodulatory functions on the immunity system of the host, but not enough to prevent the development of humoral immunity.

O carrapato Riphicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito hematófago que infesta os rebanhos bovinos de regiões tropicais e subtropicais, causando grandes prejuízos à pecuária. O principal método de controle baseia-se nos acaricidas. No entanto, o uso de vacinas tem sido estudado como um método de controle alternativo. A calreticulina (CRT) é uma proteína multifuncional presente em quase todas as células de animais. A secreção da CRT durante a alimentação pode estar relacionada a modulação da interação parasita hospedeiro. No presente estudo, as CRTs de R. microplus (rBmCRT) e do Haemophisalis longicornis (rHlCRT) foram expressas em Escherichia coli e purificadas por cromatografia. As propriedades imunogênicas e antigênicas da BmCRT e HlCRT foram analisadas por diferentes métodos. In silico, foram comparandos os epítopos das CRTs pelo índice de Jamerson-Wolf, que mostrou 6 regiões com potenciais epítopos antigênicos diferentes entre as CRTs. Enquanto, a análise in silico, da rBmCRT e rHlCRT mostraram 6 regiões que podem interagir com a proteína C1q. In vitro, por Western blot, a rBmCRT, mas não a rHlCRT, foi reconhecida pelo soro de bovino infestado experimentalmente com R. microplus. Em Western blot de extrato de larvas, os soros do coelho imunizado com rBmCRT e bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT reconheceram a BmCRT, sugerindo que os anticorpos direcionados às proteínas recombinantes também reconhecem a proteína nativa BmCRT. Também a rBmCRT mostrou um efeito anticoagulante no teste de recalcificação plasmática. In vivo, a rBmCRT e rHlCRT induziram reações de hipersensibilidade cutânea imediata em bovinos imunizados com rBmCRT ou rHlCRT, mas não foi possível detectar alterações na análise histopatológica. Juntos, estes resultados sugerem, que a rBmCRT e rHlCRT são imunogênicas e pode ter funções imunomoduladoras sobre o sistema imune do hospedeiro, mas não suficiente para prevenir o desenvolvimento da imunidade humoral. / The tick Riphicephalus (Boophilus) microplus is a blood-sucking ectoparasite of bovines from tropical and subtropical regions, causing serious damages to the livestock production. The main method of control is based on the acaricides. However, the use of vaccines has been studied as a promising control method. The calretirulin (CRT) is a multifunctional protein present in almost all cells of animals. The secretion of CRT during feeding might be linked to the modulation of the parasite-host interaction. In the present study, recombinant CRTs of R. microplus (rBmCRT) and of Haemaphysalis longicornis (rHlCRT) were expressed in Escherichia coli and purified by ion exchange chromatography. The immunogenic and antigenic capacities of BmCRT e HlCRT were analyzed by different methods. In silico, were comparisons of the CRTs epitopes, identified by Jameson-Wolf antigenic index, indicates that there are three different regions between the tick CRTs. While, in silico analysis showed 6 regions in rBmCRT and in rHlCRT that could interact with C1q protein. In vitro, by Western blot, rBmCRT, but not rHlCRT, was recognized by the serum of bovine experimentally infested with R. microplus. In Western blot with extracts of larvae, the sera of a rabbit immunized with rBmCRT and bovines immunized with rBmCRT or rHlCRT recognized BmCRT; this suggests that antibodies directed to recombinant proteins also recognize native BmCRT. Also, the rBmCRT showed an anticoagulant effect in recalcification time. In vivo, the rBmCRT and rHlCRT induced reactions of immediate cutaneous hypersensitivity in bovines immunized with rBmCRT and rHlCRT, but it was not possible to detect alterations in histopathologic test. Together, these results suggest that the rBmCRT and rHlCRT are immunogenic and could have immunomodulatory functions on the immunity system of the host, but not enough to prevent the development of humoral immunity.