Thèse de doctorat : Parasitologie : Paris 12 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

Rapport de recherche bibliographique de master professionnel 2e année : Réseaux d'information et document électronique : Villeurbanne, ENSSIB : 2003. / Texte intégral.

Thèse d'exercice : Pharmacie : Nantes : 2007. / Bibliogr.

Th. 3e cycle--Parasitol.--Paris 5, 1985. N°: 80.

Thèse de doctorat : Sciences du vivant. Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie : Strasbourg 1 : 2008. Thèse de doctorat : Sciences du vivant. Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie : Université d'Abomey-calavi : 2008. / Thèse soutenue en co-tutelle. Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. p. 227-252.

La malaria, endémique dans 91 pays tropicaux et sub-tropicaux, est l’une des maladies infectieuses les plus mortelles chez l’humain. Le fardeau de cette maladie porte principalement sur l’Afrique, qui compte plus de 90% des cas d’infections ainsi que des morts enregistrés, la majorité étant des enfants en bas âge. Des cinq espèces de parasites du genre Plasmodium qui peuvent causer la maladie chez l’humain, Plasmodium falciparum est de loin la plus mortelle et la plus étudiée. La résistance aux médicaments actuels et l’absence d’un vaccin préventif procurant une immunité de longue durée démontrent l’urgent besoin de trouver de nouvelles cibles thérapeutiques. Chez les cellules eucaryotes, l’identité des organites cellulaires est définie par les phosphoinositides, des composants mineurs des membranes cellulaires, et maintenue grâce aux kinases et aux phosphatases impliquées dans leur métabolisme. Les rôles de certaines phospholipides-kinases dans plusieurs étapes critiques du cycle de vie de Plasmodium ont récemment été découverts, toutefois, rien n’est connu quant aux fonctions des phosphoinositides phosphatases de cet organisme. Les travaux décrits ci-dessous présentent une première caractérisation d’une protéine homologue à la famille des phosphoinositides phosphatases SAC1. Les résultats montrent que cette protéine est exprimée durant tout le cycle érythrocytaire asexué et qu’elle se localise au réticulum endoplasmique ainsi que potentiellement à l’appareil de Golgi. L’étude de lignées conditionnelles et knockout suggèrent qu’un niveau minimal de la protéine est nécessaire pour la survie du parasite durant le cycle érythrocytaire. En somme, la combinaison des résultats obtenus laisse penser que cette protéine pourrait avoir une fonction dans le système de sécrétion du parasite P. falciparum et qu’elle pourrait donc constituer une cible thérapeutique intéressante pour le développement de nouveaux antimalariaux. / Malaria is endemic in 91 tropical and sub-tropical countries and is one of the deadliest infectious human diseases. Africa has the highest burden with more than 90% of cases and malaria deaths registered yearly, mostly in children under 5 years-old. Despite the fact that infection in human can be caused by five Plamsodium species, infection by Plasmodium falciparum is the most severe and therefore the most studied. Resistance to antimalarials and the absence of a preventive vaccine show the urgent need of new therapeutic targets. In eukaryotic cells, organelles identity is defined by phosphoinositides, minor membranes components, and maintained by the kinases and phosphatases involved in their metabolism. The fact that certain kinases have roles in critical steps of Plasmodium life cycle has recently been acknowledged. However, the roles of the phosphatases are still unknown. My work presents a first characterization of a putative phosphoinositide phosphatase of the SAC1 family. Results provided show that the protein is expressed throughout the asexual blood stages and that it localizes to endoplasmic reticulum and potentially to the Golgi apparatus. Studies on knockdown and knockout strains suggest that a minimal amount of the protein is required during the asexual blood stages. In summary, the combination of the results presented suggests that the protein has an important function in the parasite P. falciparum secretion system and therefore, may represent an interesting potential target for drug development.

La nécessité de garantir la qualité des médicaments antipaludiques disponibles sur le marché pharmaceutique d'Afrique subsaharienne est l'une des stratégies mises en œuvre pour réduire les taux élevés de morbidité et de mortalité liés au paludisme. L'objectif de ce travail de thèse était de proposer des méthodes de dosage par électrophorèse capillaire (EC) de combinaisons antipaludiques à base de sulfadoxine/pyriméthamine (SDX/PYR), artésunate/amodiaquine (AS/AQ) et artéméther/luméfantrine (AM/LUM) retenues dans le schéma thérapeutique ivoirien et commercialisées sous forme de comprimés.Cet objectif a été atteint en employant trois modes de séparation : l'électrophorèse capillaire de zone (CZE) pour SDX/PYR, la chromatographie électrocinétique micellaire (MEKC) pour AS/AQ et la chromatographie électrocinétique par microémulsion (MEEKC) pour AM/LUM. Les méthodes développées ont été validées selon les règles d'ICH et appliquées à des comprimés provenant d'officines ou vendues sur les marchés de rue en Côte d'Ivoire. Elles présentent une répétabilité satisfaisante (CV < 3%, n = 7 procédures analytiques). La méthode de CZE qui utilise un tampon pH 7 pour la séparation de SDX et PYR a donné des résultats de dosage concordants avec la méthode de chromatographie liquide décrite dans l'USP-NF. Sur les neuf formulations de comprimés analysées, une formulation prélevée dans le marché de rue s'est révélée sous-dosée en SDX. La méthode MEKC utilisant le dodécylsulfate de sodium (SDS) dans un tampon borate pH 9,2 a permis le dosage d'AS et AQ. L'application à l'analyse de quatre formulations issues de l'officine a donné des teneurs en AS et AQ conformes aux teneurs déclarées. Enfin, la microémulsion octane-butanol-SDS-tampon borate en MEEKC s'est révélée appropriée au dosage d'AM et LUM, molécule très hydrophobe. L'application à l'analyse de quatre formulations prélevées à l'officine a révélé des teneurs conformes aux teneurs déclarées et la présence dans une formulation d'un ingrédient non déclaré. Le potentiel de screening de cette méthode MEEKC, évalué sur 22 antipaludiques et la sulfaméthoxazole et la triméthoprime, a donné une résolution partielle ou totale pour 17 composés.L'EC peut être utilisée comme technique alternative à la chromatographie liquide pour le contrôle des antipaludiques retenus dans le schéma thérapeutique ivoirien. / The need to ensure the quality of antimalarials available on the pharmaceutical market in sub-Saharan Africa is one of the strategies implemented to reduce the high morbidity and mortality rates associated with malaria. The aim of this thesis was to propose capillary electrophoresis (CE) methods for the determination of combinations of antimalarials containing sulfadoxine/pyrimethamine (SDX/PYR), artesunate/amodiaquine (AS/AQ) and artemether/lumefantrine (AM/LUM) recommended in the Côte d'Ivoire therapeutic protocol and marketed as tablets.The objective was achieved by employing three separation modes: capillary zone electrophoresis (CZE) for SDX/PYR, micellar electrokinetic chromatography (MEKC) for AS/AQ and microemulsion electrokinetic chromatography (MEEKC) for AM/LUM. The developed methods were validated according to ICH rules and were applied to various tablet formulations bought in pharmacies or on the street-market in Côte d'Ivoire. The methods presented satisfactory repeatability values (CV <3%, n = 7 analytical procedures). CZE method used a buffer of pH 7 for the simultaneous separation of SDX and PYR and gave results that were compliant with the dosage by the liquid chromatography method described in the U.S. Pharmacopoeia. Of the nine tablet formulations analyzed, one formulation bought on the street-market had a low SDX content. An MEKC method using SDS in a borate buffer pH 9.2 allowed the determination of AS and AQ in bilayer tablets. Application to four commercial formulations with different dosages gave a content in good agreement with the declared content. Finally, butanol-octane-SDS-borate buffer microemulsion in MEEKC was found to be suitable for the determination of AM and LUM, a very hydrophobic compound. Application to four commercial tablet formulations gave a content in good agreement with the declared content and evidenced the presence in a formulation of an undeclared ingredient. The potential screening capacity of this MEEKC method was evaluated on 22 antimalarials and on sulfamethoxazole and trimethoprim. Partial or complete resolution of 17 compounds was obtained.CE can be used as an alternative technique to liquid chromatography for the control of antimalarial drugs recommended in the national therapeutic protocol against malaria.

Isolée d'une bactérie, Streptomyces alboniger, la puromycine est un nucléoside antibiotique naturel présentant une analogie structurale avec l'adénosine terminale de l'extrémité 3' de l'ARNt aminoacylé. Cette similarité confère à cette molécule la faculté de pouvoir s'insérer dans le site A (actif) du ribosome et d'inhiber la synthèse des protéines. Cependant, du fait de la formation d'un produit toxique lors de sa métabolisation, la puromycine n'a jamais été employée à des fins thérapeutiques chez l'homme. Néanmoins, utilisée en tant qu'outil synthétique, elle a largement contribué à une meilleure compréhension du mécanisme du transfert peptidique. Au travers de cette thèse, six analogues carbobicycliques (deux en série ribo et quatre en série 2'-désoxy), mimant de façon optimale les conformations extrêmes nord ou sud de la puromycine, ont été synthétisés puis testés dans le ribosome. Outre confirmer que la présence d'un groupement 2'-hydroxyle améliorait l'activité inhibitrice, ces expériences in vitro ont apporté une preuve que, dans le site actif, le déplacement de l'équilibre conformationnel du ribofuranose de l'adénosine terminale de l'ARNt aminoacylé - analogue structural de la puromycine - en faveur de son conformère nord pourrait être directement impliqué dans la catalyse ribosomale du transfert peptidique. Par ailleurs, un projet annexe sur le développement de nouveaux antipaludiques potentiels a permis la synthèse, en série xylo, de la puromycine et de son métabolite naturel le puromycine aminonucléoside. Ces composés ont été testés sur les souches 3D7 et Dd2 du parasite Plasmodium falciparum.

Les objectifs de ce travail étaient d’évaluer qualitativement et quantitativement l’effet d’antipaludiques « classiques » (primaquine, Malarone®, amino-4-quinoléines) et « d’avenir » (artésunate, ferroquine, seuls ou associés) sur les formes hépatiques et les stades sexués du parasite responsable de la transmission du paludisme. Le modèle expérimental comprend des souris swiss femelle infestées par Plasmodium yoelii et Anopheles stephensi comme moustique vecteur. L’action de la Malarone® (proguanil-atovaquuone) sur les stades hépatiques est quasi totale et plus importante que celle, incomplète, de la primaquine, de la ferroquine ou de l’artésunate. Si les molécules précédentes (ferroquine, artésunate), prescrites à doses subcuratives, entraînent souvent une augmentation de la gamétocytogénèse, elles altèrent certains stades de gamétocytes et inhibent statistiquement chez le moustique la formation d’oocystes et leur nombre et, par là même, interviennent négativement dans la transmission du parasite. / The objective of this study is to evaluate qualitatively and quantitatively the effect of "classic" (primaquine, Malarone®, amino-4-quinoline) and "future" (artesunate, ferroquine, alone or associated) antimalarials on the liver forms and sexual stages of the parasite responsible for malaria transmission. The experimental model was : swiss mouse female infected with Plasmodium yoelii and Anophelesstephensi as the vector. The action of Malarone® (proguanil-atovaquuone) on liver stages is almost complete and more than that, incomplete, primaquine, the ferroquine or artesunate. If the previous molecules (ferroquine, artesunate), prescribed at subcurative doses, often lead to an increase in gametocytogenesis, they alter certain stages of gametocytes and statistically inhibit the formation of oocysts in the mosquito; hence, their number involve negatively in the transmission of the parasite.

Nous nous sommes intéressés à l'activité antipaludique du bleu de méthylène (BM), qui fut la première molécule de synthèse utilisée dans le traitement des accès palustres. Nous avons montré que le BM est actif sur des souches cultivées de Plasmodium falciparum d'origines géographiques et de chloroquino-sensibilités différentes (CI50<10nM). Il est aussi actif sur le cycle sanguin de Plasmodium murin (DE50<15mg/Kg), mais pas sur la phase hépatique. Les stades érythrocytaires les plus sensibles sont les stades jeunes. Les associations avec les traitements classiques sont de type : antagoniste avec amodiaquine ; antagonisme-additif avec atovaquone, doxycycline, pyrimethamine ; additive-pas d'interaction avec artemether, chloroquine, mefloquine, primaquine et synergique avec la quinine. Nous avons montré par spectrométrie UV, CCM et spectrométrie de masse, qu'il n'y a pas de liaison entre le BM et l'hème. Nous avons également mis au point une nouvelle technique pour mesurer la transformation de l'hème par le glutathion et mesurer ainsi l'activité des drogues sur cette transformation.