Šiuolaikinėje chemoterapijoje plačiai naudojami įvairūs chinonai. Pastaraisiais metais atkreiptas dėmesys į tai, kad chinonai, turintys aziridino grupes savo struktūroje yra labai toksiški piktybinėms ląstelėms. Šių junginių citotoksiškumo mechanizmai nėra pakankamai išanalizuoti. Šio darbo tikslas buvo ištirti skirtingų chinonų, tarp jų ir aziridino grupes turinčių, poveikį GLV – transformuotoms FLK ląstelėms. Tai yra avies embriono inkstų ląstelės, fibroblastų kilmės, transformuotos galvijų leukemijos virusu. Jos pasižymi vėžinėms ląstelėms būdingomis savybėmis: neribota proliferacija ir padidėjusiu prooksidantinių fermentų aktyvumu, kuris sąlygoja didesnį jautrumą chinonams, sukeliantiems oksidacinį stresą ir skatinantiems ląstelės žūtį. Gauti rezultatai parodė, kad chinonai, turintys savo struktūroje aziridino grupes (RH1 ir MeDZQ) yra toksiškesni FLK ląstelėms, negu chinonai, neturintys aziridino grupių (daunorubicinas ir durochinonas). Visų šių chinonų citotoksinį poveikį lemia kombinuotas mechanizmas: oksidacinis stresas, DT-diaforazės ir ksantinoksidazės veikla. Manoma, kad kai kurie aziridinilo grupes turintys chinonai gali būti labai perspektyviais priešvėžiniais vaistais. / Many of recently used chemotherapeutic agents have a quinoidal structure. It is supposed that the main mechanism of antitumour aziridinyl substituted benzoquinones is their two-electron reduction to alkylating products. However, other possible cytotoxicity mechanisms, e.g., oxidative stress, are studied insufficiently. The goal of our investigation was to analyse quinones influence to apoptosis in FLK (foetal lamb kidney fibroblasts) line, which posses increased prooxidant activities. The results show that quinones, which have aziridinyl substituents (RH1 and MeDZQ) are more cytotoxic than quinones without these substituents (daunorubicin and duroquinone). Cytotoxic effect of those quinones to cells is conditioned by combinative mechanism of oxidative stress, DT-diaforase and xantinoxidase action. It is supposed that aziridinyl substituted benzoquinones may be very perspective in antitumour treatment.

SANTRAUKA Kamieninių ląstelių apoptozę ar išgyvenimą sąlygojantys signaliniai keliai yra potencialus taikinys tobulinant kardiomioplastijos metodą. Šiame darbe, pagal specifinius baltymus - žymenis ir morfologinius požymius patvirtinome iš triušio raumens gautų ląstelių, pasižyminčių neribotu proliferaciniu potencialu in vitro, gebėjimą diferencijuotis miogenine linkme. Tyrėme ląstelių žūtį/išgyvenimą sąlygojančius mechanizmus, ląstelėms atsakant į genotoksinių medžiagų, bei fiziologinio apoptozės induktoriaus – azoto oksido donoro – NOC-18 poveikį. Nustatėme didesnį diferencijuotų ląstelių, palyginus jas su proliferuojančiomis, atsparumą minėtoms medžiagoms. Tyrimai parodė apsauginį ERK, JNK ir p38 MAP kinazių vaidmenį ląstelių diferencijuotų miogenine kryptimi apoptozėje. Buvo nustatytas JNK vaidmens pasikeitimas iš pro- į antiapoptotinį, priklausomai nuo ląstelių diferenciacijos stadijos ir ląstelių kontaktavimo trukmės. / SUMMARY Studies of muscle-derived stem cell death and survival mechanisms during their proliferation and differentiation Stem cell apoptosis/survival signaling pathways are potential gains in the development of cardiomyoplasty method. During this work, by specific myogenic protein and morphology there was demonstrated the myogenic origin of cells derived from rabbit muscle and their ability to differentiate into muscle cells. There were studied molecular mechanisms governing the death/survival pathways of primary myogenic cells in response to treatment with genotoxic drug cisplatin, daunorubicin and nitric oxide donor NOC-18. Differentiated cells appeared to be more resistant to the above subtances as compared to proliferating cells. The study has proved the protective role of ERK, JNK ir p38 MAP kinases in differentiated muscle stem cell apoptosis. There was observed a change of JNK function from pro- to antiapoptotic depending on cell differentiation stages and cell contact duration.

Sarkoidozė – lėtinė nežinomos etiologijos granulominė liga, dažniausiai pažeidžianti plaučius, pasireiškianti ląsteliniu imuniniu atsaku pažeistuose organuose. Ligos metu antigeno aktyvinti Th limfocitai veikiami IL-2 proliferuoja ir susikaupia plaučių alveolėse sukeldami T ląstelinį alveolitą. Bronchoalveolinio lavažo skystyje (BAL) didėja limfocitų skaičius ir CD4+/CD8+ T limfocitų santykis. Kartu su alveolitu formuojasi granulomos. Granulomos gali susiskaidyti spontaniškai arba išnykti tik po tam tikro gydymo, liga gali progresuoti išvešant fibroziniam audiniui. Sarkoidozės metu formuojantis granulomoms ir vykstant uždegimui reikšminga ne vien ląstelių proliferacija, bet ir jų programuota mirtis arba apoptozė. Fas antigenas (CD95), yra vienas iš apoptozę sukeliančių signalų perdavimo receptorių. Kadangi sarkoidozės etiologija yra nežinoma ir iki šiol nėra aiški ligos prognozė šio tyrimo tikslas buvo ištirti ligonių, sergančių plaučių sarkoidoze, proliferacinio (CD25) ir apoptozės inicijavimo (CD95) receptorių ekspresiją T limfocitų membranose, bronchoalveolinio lavažo skystyje ir periferiniame kraujyje. TYRIMOJI MEDŽIAGA buvo surinkta Vilniaus Universiteto ligoninės ,,Santariškių klinikos‘‘ Laboratorinės diagnostikos centro Imunologijos laboratorijoje. Ištirti 42 ligoniai, sergantys sarkoidoze: 19 moterų ir 23 vyrai nuo 23 iki 77 metų (amžiaus vidurkis – 38,8 ± 10,5 metų). Tiriamieji buvo suskirstyti į dvi grupės: sergantys aktyvia (n = 20) ir neaktyvia (n = 22)... [toliau žr. visą tekstą] / Sarcoidosis is a chronic granulomatous lung disease of unknown origin. The accumulation of activated CD4+ T cells at sites of inflammation represents an early stage in granuloma formation. Antigenic presentation stimulates T cells to proliferate via the production of interleukin IL-2. In the last few years evidence has arisen for dysregulation of apoptosis in a number of different pulmonary diseases. Mechanisms governing the normal resolution of inflammatory processes are poorly understood. CD95, also known as Fas antigen, has the ability to activate the cellular death program „apoptosis“, which can be critical for limiting an inflammatory response. This study aimed to investigate the apoptotic and proliferating markers of lung and peripheral blood T-lymphocytes. MATERIAL. The invesigation material was gathered in Vilnius University hospital „Santariškių klinikos“ in the Immunological laboratory. 45 patients with sarcoidosis (the average age was 38,8±10,5 years) were investigated. The patients were divided into two groups: the ones having an active form of sarcoidosis (n=20) and the others non-active form of sarcoidosis (n=22). In addition, 5 healthy volunteers participated in the invesigation. Lymphocyte analysis was performed using flow cytometric method. RESULTS. The percentage of lymphocytes expressing IL-2 receptor &#945; chain (CD25) in patients with sarcoidosis (active form (21.0±7,7%) and non-active form (16,0±8,2%)) in BAL fluid is higher (p<0,05) comparend with... [to full text]

Nuolat kintanti aplinka yra pagrindinis veiksnys, kontroliuojantis mikroorganizmų augimą ir vystymąsi. Evoliucijos eigoje organizmuose išsivystė signalinės sistemos, gebančios sujungti aplinkos signalus su ląstelės transkripcijos, transliacijos ir kt. procesais. Viena iš tokių universalių signalinių sistemų yra Ras/PKA signalinis kelias. Ši sistema leidžia mielių ląstelėms reaguoti į aplinkoje esančius maisto medžiagų šaltinius ir įvairius stresinius veiksnius. Vienas iš pagrindinių aplinkos signalų, įtakojančių ląstelių fiziologiją, yra aplinkos pH. Mielių ląstelėse į aplinkos pH reaguoja Rim101 signalinė sistema, kuri kartu su Ras/PKA reguliuoja tokius procesus kaip sporuliacija ir pseudohifinis augimas. Ekstraląstelinės terpės rūgštėjimas lemia viduląstelinį rūgštėjimą, o tai sukelia mielių ląstelėms stresą ir taip aktyvina Ras/PKA signalinį kelią. Streso poveikio pasekmė yra ląstelių augimo sulėtėjimas, gyvenimo trukmės trumpėjimas, augimo sustabdymas ar netgi žūtis. Pastaraisiais metais parodyta, kad būtent Ras/PKA signalinis kelias reguliuoja ląstelės senėjimo procesą kaip atsaką į aplinkos pH. Taigi mielių, kaip modelinio organizmo, panaudojimas žmogaus genų, reguliuojančių ląstelės senėjimą ir žūtį, tyrimuose vis plečiasi. Disertacinio darbo metu buvo įvertintas izogeninių mielių kamienų turinčių Ras/PKA signalinio kelio komponentų mutacijas augimas bei mitybinės terpės pH kitimas. Nustatyta, kad mutacijos Ras/PKA signalinio kelio komponentuose lemia skirtingą... [toliau žr. visą tekstą] / Constantly changing environment is the major factor controlling the growth and development of the microorganisms. For quick generation of the cell response, information about changes in the cell environment is rapidly transmitted to the inner molecules of the cell. During the course of evolution the cells have developed signaling systems that are able to combine extracellular signals with the inner processes, as transcription, translation etc. One of the universal signaling systems is Ras/PKA signal transduction pathway. This system helps cells recognize the nutrient sources present in the growth medium.Environmental pH is one of the main factors influencing the growth, physiology and differentiation of yeast. In Saccharomyces cerevisiae, response to pH is determined by the RIM101 pathway. Recently, it was shown, that Ras/PKA signal transduction pathway regulates cell aging as response to environmental pH. Many aging and apoptosis features are conserved between yeast and multicellular microorganisms, and this makes them perfect model organisms. Yeasts are also suitable also for acidosis related disease studies. Evaluation of the cell growth and medium acidification of isogenic strains containing mutation in the members of Ras/PKA signal transduction pathway was performed. Mutations in these genes cause changes in metabolic activity of the cell.Members of the Ras/PKA signal transduction pathway participate in regulation of cell viability and lifespan during the natural... [to full text]

Įvairios širdies ligos, kurių metu vyksta kardiomiocitų žuvimas, yra viena iš pagrindinių mirtingumo priežasčių visame pasaulyje. Regeneracinė ląstelių terapija, naudojant pirmines raumeninės kilmės ląsteles širdies ligų gydyme, sulaukia vis didesnio dėmesio. Dėl įvairių patologinių procesų, vykstančių pažeistame audinyje, didelė dalis transplantuotų ląstelių žūva. Todėl viskas, kas gali padėti transplantuotiems mioblastams išgyventi ir geriau prigyti, verta nuodugnesnių tyrimų. Šiame darbe buvo tirtas streso baltymo Hsp70 vaidmuo suaugusio triušio raumens kamieninių ląstelių įvairių viduląstelinių sistemų, atsakingų už ląstelių žuvimą ar išgyvenimą, reguliacijoje. Suaugusio triušio raumens kamieninės ląstelės buvo transfekuotos plazmide, turinčia hsp70 geną. Transfekuotų ląstelių padidėjusio atsparumo toksiniams poveikiams veikimo mechanizmai tirti lyginant jas su paprastomis kamieninėmis miogeninėmis ląstelėmis. Gauti rezultatai parodė, kad padidėjusi Hsp70 baltymo raiška apsaugo triušio raumens kamienines ląsteles nuo apoptozinio žuvimo po poveikio cheminėmis medžiagomis (naftazarinu, vandenilio peroksidu ir natrio prusidu) generuojančiomis reaktyvius deguonies darinius (ROS) ir sukeliančiomis oksidacinį stresą. Padidintas Hsp70 baltymo kiekis po poveikio osidacinį stresą indukuojančiomis medžiagomis keičia mitogenais aktyvinamos kinazės ERK 1,2, streso kinazės JNK trumpalaikį/pro-apoptozinį veikimą paprastose pirminėse miogeninėse ląstelėse į ilgalaikį/ani-apoptozinį... [toliau žr. visą tekstą] / Various heart diseases concomited with the death of cardiomyocytes is one of the major causes of death-rate. Regenerative stem cell therapy of damaged heart applying muscle-derived stem cells attains more and more attention. Patological environment in the damaged heart is major cause of death of newly transplanted muscle-derived stem cells. Therefore, everything increasing survival of transplanted myogenic cells is of research interest. This work has been designed to investigate role of stress protein Hsp70 in the regulation of intracellular systems responsible for the death or survival of primary myogenic cells. Rabbit muscle-derived stem cells were transfected with the plasmid carrying hsp70 gene. Various intracellular mechanisms responsible for the resistance of transfected cells have been investigated and compared with the regular non transfected primary myogenic cells. Our results show that Hsp70 protein protects rabbit muscle-derived stem cells from the toxic effect of compounds (naftazarin, hydrogen peroxide and sodium pruside) generating reactive oxigen species (ROS) and causing oxidative stress. Increased amount of intracellular Hsp70 protein converts transient/proapototic mode of action of ERK1,2 and JNK in regular primary myogenic cells to sustained/antiapoptotic action in transfected cells and significantly decreased total amount of JNK after the treatment with naftazatin. Transfected cells also showed sustained/anti-apoptotic mode of activation of transcription... [to full text]

Vienas iš būdų padėti pacientams, sergantiems kepenų navikais, yra lokalus naviko sunaikinimas radiodažnine abliacija. Pagrindine šio metodo problema išlieka aukštas naviko atkryčio dažnis. Disertacijos tikslas yra ištirti procesus, vykstančius radiodažnine abliacija paveiktame kepenų audinyje, išsiaiškinti šių procesų mechanizmus bei hipertermijos sąlygojamus pakitimus audinio, ląstelės ir subląsteliniame lygmenyje. Retrospektyviu tyrimu įvertintas pacientų, kuriems KMUK Chirurgijos klinikoje buvo atlikta kepenų navikų radiodažninė abliacija, navikų atkryčio dažnis, jo atsiradimo laikas ir veiksniai, galintys sąlygoti atkrytį. Eksperimentiškai įvertinti fizikiniai veiksniai, sąlygojantys šilumos plitimą kepenų audinyje, jų įtaka kepenų audinio pažeidimo mąstui ir tolygumui. Nustatyti morfologiniai ir biocheminiai pakitimai, vykstantys pereinamojoje kepenų audinio pažeidimo zonoje, bei šių pakitimų atsiradimo laikas. Ištirti pereinamosios kepenų audinio pažeidimo zonos hepatocitų mitochondrijų funkcijų pokyčiai ir apoptozės proceso vyksmui reikalingų energetinių resursų susidarymas, eksperimentiškai modeliuojant šios zonos temperatūrinius kitimus. Tyrimo naujumą lemia tai, kad darbe nustatyta jog apoptozės procesas pereinamoje radiodažninio pažeidimo zonoje gali būti nustatomas praėjus valandai po terminio pažeidimo. Eksperimentuose su hepatocitų mitochondrijomis nustatėme iki šiol neaprašytą neigiamą hipertermijos poveikį kepenų ląstelių mitochondrijų funkciniams rodikliams. / Radiofrequency ablation is one of the most widely accepted method for the local ablation of liver tumors. One of the negative aspects of this method is a high local recurrence rate, which is associated with the worse survival. The aim of the dissertation was to explore the processes in radiofrequency ablation affected liver tissue, ascertain the mechanisms of these processes and hyperthermia induced changes in the liver tissue, cells and subcellular level. The liver tumor recurrence rate, time and factors that could determine the recurrence were estimated using retrospective analysis of data. The physical parameters determining the spreading of the heat in liver tissue in experimental model and the influence of these parameters on extent and homogeneity of the damage were determined. The morphological and biochemical changes in the remote from the heat source zone were determined and the time of these changes was detected. The changes of liver cells mitochondria functions and the intracellular formation of energy resources necessary for these processes in subcellular level (apoptosis) were investigated simulating temperature changes in experimental model. The scientific novelty was governed by the data those support the activation of apoptotic pathway in the early period after exposure to hyperthermia. Our experimental study revealed yet unpublished data of the adverse effects of hyperthermia on the key functional parameters of the mitochondria.