Artemisia Sphaerocephala Krasch (ASK) polysaccharide, extracted from the outer layer of ASK seeds, it has attracted attention due to its reported bioactivities. In the present study, extraction and fractionation methods for ASKP were developed. Two different Mw fractions 60P (MW: 551 KDa) and 60S (MW: 39 KDa) were obtained using ammonium sulphate precipitation. The physicochemical properties, in terms of rheological properties, chemical compositions and surface activities, of both fractions were elucidated. Using high performance anion exchange chromatography (HPAEC), partial acid hydrolysis, methylation analysis, 1D & 2D NMR spectroscopy and MALDI-TOF-MS methods, the detailed structural features of 60P and 60S were obtained, which were confirmed to be arabino(glucurono)xylan and (galacto)glucomannan, respectively Using light scattering and HPSEC techniques, the conformational properties of 60P were investigated. 0.5 M NaOH solution exhibited better ability to eliminate aggregates of 60P compared to water, NaCl solution and urea solution. The molecule of 60P exhibited a random coil conformation and semi-flexible structure in 0.5 M NaOH solution. In addition, the dependence of conformation of 60P on the molecular weight was also revealed by HPSEC analysis. The computer modeling technique using RIS-Metropolis Monte Carlo (RMMC) method was also applied. The conformational properties of 60P with different T-GlcpA ratio and various distribution patterns (random, alternative and block) along the xylan chain were determined. Results indicated that: the more regular the side chain distribution, the more extended the structure. The conformational properties of 60S with different molecular weights and various ratios of O-acetyl group to mannose were also considered. Results indicated that the radius of gyration (Rg) demonstrated an increasing trend with Mw and the data was comparable with that obtained from HPSEC; the insertion of O-acetyl group increased the chain extension at low ratio while showing a decrease it at a high ratio. The present study provides fundamental information regarding the physicochemical properties, structural and conformational properties of polysaccharides from the seeds of Artemisia sphaerocephala Krasch (ASK). Such information is essential to the understanding of the structure-conformation- functionality relationships of ASKP, thus promotes their potential food and industry applications.

Thesis (Ph. D.)--Hong Kong University of Science and Technology, 2002. / Includes bibliographical references (leaves 152-169). Also available in electronic version. Access restricted to campus users.

Thesis (M.S.) -- Worcester Polytechnic Institute. / Keywords: Phytohormones. Includes bibliographical references (p.73-79).

Orientador: Edson Luis Maistro / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Resumo: O tratamento para combater a Malária, recomendado pela Organização Mundial da Saúde (OMS), é feito com medicamentos derivados da artemisinina (tais como o artesunato), o princípio ativo extraído da Artemisia annua. Com base nesta informação, foi avaliado neste projeto o potencial genotóxico da artemisinina (ATM) e do artesunato (ART) em células HepG2 (Human hepatocellular liver carcinoma cell line), in vitro, além da investigação do potencial genotóxico e/ou mutagênico do artesunato, em células de camundongos in vivo. Nestas análises foram utilizados o ensaio cometa e o teste de micronúcleo, para a verificação da genotoxicidade e mutagenicidade; nos ensaios in vitro, também foram realizados testes de citotoxicidade e análise da expressão dos genes SOD1 e Casp3. Nos ensaios in vivo, utilizando camundongos tratados com ART, foi verificado através do Ensaio Cometa que, nas células de sangue periférico, apenas a maior dose testada (2000mg/kg) foi genotóxica, quando comparada ao grupo controle negativo. Já nas células de fígado, as doses de 5mg, 50mg e 2000mg/kg mostraram-se genotóxicas, com p<0,05. Quanto à mutagenicidade, os tratamentos com ART nas doses de 50mg, 100mg e 2000mg/kg apresentaram aumento significativo no número de células micronucleadas em relação ao grupo controle. Nos testes in vitro, os resultados do ensaio cometa com a ATM e o ART mostraram um aumento significativo (p<0,001) no número de células com danos no DNA, em relação ao controle negativo, em todos os tratamentos e para ambas as substâncias, o que indica um efeito genotóxico da ATM e do ART. Já na análise da expressão gênica, houve um aumento na expressão de Caspase 3, nas células tratadas com as duas substâncias, porém, a expressão de SOD1 foi maior em células tratadas com ATM, enquanto nas células tratadas com o ART, houve uma diminuição na expressão deste gene.... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The treatment to combat malaria, recommended by the World Health Organization (WHO), is done with drugs artemisinin derivatives (such as artesunate), the active ingredient extracted from Artemisia annua. Based on this information, and the lack of data on genotoxicity of these compounds in mammalian cells, was evaluated in this project the genotoxic potential of artemisinin (ATM) and artesunate (ART) in HepG2 cells (Human Hepatocellular liver carcinoma cell line), in vitro as well as investigating the potential genotoxic and / or mutagenic of artesunate, in mice in vivo. In these tests we used the comet assay and micronucleus test, to check the genotoxicity and mutagenicity, in vitro assays were also performed cytotoxicity tests and analysis of genes expression SOD1 and Casp3. In vivo tests using mice treated with ART, was determined using the Comet assay that in peripheral blood cells, only the highest dose tested (2000mg/kg) was genotoxic when compared to negative control group. Already in the liver cells, doses of 5mg, 50mg and 2000mg/kg were shown to be genotoxic, p <0.05. For mutagenicity, treatment with ART in doses of 50mg, 100mg and 2000mg/kg showed a significant increase in the number of micronucleated cells in the control group. In vitro tests, the results of the comet assay with the ATM and ART showed a significant increase (p <0.001) in the number of cells with DNA damage, compared to negative control in all treatments and for both substances, the indicates that a genotoxic effect of ATM and ART. The analysis of gene expression, there was an increase in the expression of Caspase 3, in cells treated with both substances, however, the expression of SOD1 was higher in cells treated with ATM, whereas in cells treated with ART, there was a decrease in expression of this gene. Although the analysis of gene expression did not reach statistical significance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

CNPq / Artemisia annua L. é uma planta herbácea nativa da Ásia, muito utilizada como fonte de óleo essencial e artemisinina, uma lactona sesquiterpenica utilizada como princípio ativo antimalárico. Devido à grande demanda por esta molécula a busca pela melhoria da produção de A. annua é intensa. O objetivo deste estudo foi identificar a densidade de cultivo adequada para o maior rendimento de biomassa, artemisinina e óleo essencial, e a composição deste, além de comparar o desempenho produtivo de três variedades de A. annua para o cultivo na região Sudoeste do Paraná. Para isso, um experimento foi conduzido em delineamento de blocos ao acaso, com quatro repetições. Foram utilizadas três diferentes variedades de A. annua: Artemis F2, Artemis F1 e (2/39 x 5)x3M. Um segundo experimento foi conduzido com a variedade Artemis F2 em delineamento de blocos ao acaso, com três repetições. Os tratamentos utilizados foram: T1: 16.666 plantas ha-1, T2: 55.555 plantas ha-1, T3: 94.444 plantas ha-1 e T4: 133.333 plantas ha-1. Em pleno florescimento, o material vegetal dos dois experimentos foi colhido (aproximadamente 159 dias após o transplante) e seco até peso constante em estufa com circulação de ar a 35 ºC. A quantificação de artemisinina foi realizada por cromatografia em camada delgada com detecção por densitometria. A separação e quantificação das substâncias presentes no óleo essencial foram realizadas em cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chama e, a identificação das mesmas foi feita em cromatógrafo a gás acoplado a espectrômetro de massas. Os resultados foram submetidos à análise da variância e ao teste de Tukey a 5% de probabilidade do erro para as variáveis qualitativas e a regressão do quadro da análise da variância para os tratamentos quantitativos. Todas as variedades testadas apresentaram elevada produção de massa seca de parte aérea, massa seca de folhas, produção de artemisinina e óleo essencial por área não diferindo estatisticamente ente si. As variedades Artemis F2 e Artemis F1 apresentaram maior relação folha/caule entre as variedades testadas. As variedades Artemis F1 e (2/39 x 5)x3M apresentaram maior teor de óleo essencial na matéria seca de folhas sendo mais recomendadas para o cultivo na região Sudoeste do Paraná, para fins de produção de óleo essencial. Os principais constituintes encontrados no óleo essencial das três cultivares foram a cânfora (39,69%), 1,8 cineol (12,66%), mirceno (9,29%), γ-muuroleno (4,95%), trans-b-farneseno (4,02%), que juntos somam em média 70,61% do óleo essencial das variedades testadas. Alterações na densidade de plantio não tiveram influência significativa sobre os constituintes majoritários do óleo essencial de A. annua variedade Artemis F2. Para as diferentes densidades as maiores produções de biomassa de folhas, artemisinina, teor de artemisinina na massa seca de folhas e óleo essencial foram obtidas nas densidades de 93.966 plantas ha-1, 80.0,71 plantas ha-1, 81.969 plantas ha-1 e 91.272 plantas ha-1 respectivamente. O teor de óleo essencial na massa seca de folhas não foi alterado pela densidade de plantio. A alteração na densidade de plantio influenciou na produção de canfeno, α-copaeno, acetato de mirtenila, γ- terpineno. Em todas as densidades de plantio a cânfora foi o constituinte majoritário com níveis superiores a 39% indicando que A. annua é uma fonte alternativa para a produção desta substância. Os monoterpenos foram a classe de compostos mais abundantes no óleo essencial de A. annua com 59,03% da constituição química e 33,91% pertence à classe dos sesquiterpenos. / Artemisia annua L. is a herbaceous plant native from Asia which is much used as a source of essential oil and artemisinin, a sesquiterpene lactone used as antimalarial active principle. The search in the improvement regarding the production of A. annua is intense due to the high demand for this molecule. The aim of this study was to identify the suitable planting density for a higher yield of biomass, artemisinin and essential oil, and the composition of this, and also compare the performance of three varieties of A. annua for cultivation in the Southwest region of Paraná. In order to this, an experiment was conducted in a randomized block design with four replications. Three different varieties of A. annua were used: Artemis F2, and Artemis F1 (2/39 x 5)x3M. A second experiment was conducted with Artemis F2 variety in a randomized block design with three replications. The treatments were: T1: 16.666 plants ha-1, T2: 55.555 plants ha-1, T3: 94.444 plants ha-1 and T4: 133.333 plants ha-1. The plant material of both experiments was harvested at flowering (approximately 159 days after transplantation) and dried until a constant weight in an oven with air circulation at 35 ° C. The quantification of artemisinin was performed by thin-layer chromatography and detected by densitometry. The separation and quantification of substances present in the essential oil were performed by gas chromatography with a flame ionization detector and the identification of them was performed by gas chromatography coupled to a mass spectrometer. The results were submitted to analysis of variance and Tukey's test at 5% of failure probability for qualitative variables and the regression of the analysis of variance for quantitative treatments. All the tested varieties showed an increasing production in relation to the dry mass of the aerial part, dry mass of leaves, artemisinin and essential oil production per area and they did not differ statistically between themselves. The varieties of Artemis F1 and Artemis F2 had a higher leaf/stem ratio among the varieties tested. The varieties of Artemis F1 and (2/39 x 5)x3M showed a higher content of essential oil in the dry mass of leaves, and due to this they are recommended for cultivation in the Southwest region of Paraná, for the essential oil production. The main compounds found in essential oils from the three cultivars were camphor (39.69%), 1.8 cineole (12.66%), myrcene (9.29%), γ-muuroleno (4.95%), trans - β-farnesene (4.02%), which together totalize an average 70.61% of the essential oil of the varieties tested. Changes in the planting density had no significant influence on the major constituents regarding the essential oil of A. annua variety of Artemis F2. Concerning the different densities, the highest production of leaf biomass, artemisinin, artemisinin content in the dry mass of leaves and essential oil were obtained at densities of 93,966 plants ha-1, 80.0,71 plants ha-1, 81 969 plants ha-1 and 91,272 plants ha-1 respectively. The essential oil content in dry mass of leaves was not affected by the planting density. The alteration in planting density influenced the production of camphene, α-copaene, mirtenila acetate, γ-terpinene. Regarding all the planting densities, camphor was the major constituent with levels above 39% indicating that A. annua is an alternative source for the production of this substance. Monoterpenes were the most abundant class of compounds in essential oil of A. annua with 59.03% of the chemical constitution and 33.91% belong to the class of sesquiterpenes.

CNPq / Artemisia annua L. é uma planta herbácea nativa da Ásia, muito utilizada como fonte de óleo essencial e artemisinina, uma lactona sesquiterpenica utilizada como princípio ativo antimalárico. Devido à grande demanda por esta molécula a busca pela melhoria da produção de A. annua é intensa. O objetivo deste estudo foi identificar a densidade de cultivo adequada para o maior rendimento de biomassa, artemisinina e óleo essencial, e a composição deste, além de comparar o desempenho produtivo de três variedades de A. annua para o cultivo na região Sudoeste do Paraná. Para isso, um experimento foi conduzido em delineamento de blocos ao acaso, com quatro repetições. Foram utilizadas três diferentes variedades de A. annua: Artemis F2, Artemis F1 e (2/39 x 5)x3M. Um segundo experimento foi conduzido com a variedade Artemis F2 em delineamento de blocos ao acaso, com três repetições. Os tratamentos utilizados foram: T1: 16.666 plantas ha-1, T2: 55.555 plantas ha-1, T3: 94.444 plantas ha-1 e T4: 133.333 plantas ha-1. Em pleno florescimento, o material vegetal dos dois experimentos foi colhido (aproximadamente 159 dias após o transplante) e seco até peso constante em estufa com circulação de ar a 35 ºC. A quantificação de artemisinina foi realizada por cromatografia em camada delgada com detecção por densitometria. A separação e quantificação das substâncias presentes no óleo essencial foram realizadas em cromatógrafo gasoso com detector de ionização de chama e, a identificação das mesmas foi feita em cromatógrafo a gás acoplado a espectrômetro de massas. Os resultados foram submetidos à análise da variância e ao teste de Tukey a 5% de probabilidade do erro para as variáveis qualitativas e a regressão do quadro da análise da variância para os tratamentos quantitativos. Todas as variedades testadas apresentaram elevada produção de massa seca de parte aérea, massa seca de folhas, produção de artemisinina e óleo essencial por área não diferindo estatisticamente ente si. As variedades Artemis F2 e Artemis F1 apresentaram maior relação folha/caule entre as variedades testadas. As variedades Artemis F1 e (2/39 x 5)x3M apresentaram maior teor de óleo essencial na matéria seca de folhas sendo mais recomendadas para o cultivo na região Sudoeste do Paraná, para fins de produção de óleo essencial. Os principais constituintes encontrados no óleo essencial das três cultivares foram a cânfora (39,69%), 1,8 cineol (12,66%), mirceno (9,29%), γ-muuroleno (4,95%), trans-b-farneseno (4,02%), que juntos somam em média 70,61% do óleo essencial das variedades testadas. Alterações na densidade de plantio não tiveram influência significativa sobre os constituintes majoritários do óleo essencial de A. annua variedade Artemis F2. Para as diferentes densidades as maiores produções de biomassa de folhas, artemisinina, teor de artemisinina na massa seca de folhas e óleo essencial foram obtidas nas densidades de 93.966 plantas ha-1, 80.0,71 plantas ha-1, 81.969 plantas ha-1 e 91.272 plantas ha-1 respectivamente. O teor de óleo essencial na massa seca de folhas não foi alterado pela densidade de plantio. A alteração na densidade de plantio influenciou na produção de canfeno, α-copaeno, acetato de mirtenila, γ- terpineno. Em todas as densidades de plantio a cânfora foi o constituinte majoritário com níveis superiores a 39% indicando que A. annua é uma fonte alternativa para a produção desta substância. Os monoterpenos foram a classe de compostos mais abundantes no óleo essencial de A. annua com 59,03% da constituição química e 33,91% pertence à classe dos sesquiterpenos. / Artemisia annua L. is a herbaceous plant native from Asia which is much used as a source of essential oil and artemisinin, a sesquiterpene lactone used as antimalarial active principle. The search in the improvement regarding the production of A. annua is intense due to the high demand for this molecule. The aim of this study was to identify the suitable planting density for a higher yield of biomass, artemisinin and essential oil, and the composition of this, and also compare the performance of three varieties of A. annua for cultivation in the Southwest region of Paraná. In order to this, an experiment was conducted in a randomized block design with four replications. Three different varieties of A. annua were used: Artemis F2, and Artemis F1 (2/39 x 5)x3M. A second experiment was conducted with Artemis F2 variety in a randomized block design with three replications. The treatments were: T1: 16.666 plants ha-1, T2: 55.555 plants ha-1, T3: 94.444 plants ha-1 and T4: 133.333 plants ha-1. The plant material of both experiments was harvested at flowering (approximately 159 days after transplantation) and dried until a constant weight in an oven with air circulation at 35 ° C. The quantification of artemisinin was performed by thin-layer chromatography and detected by densitometry. The separation and quantification of substances present in the essential oil were performed by gas chromatography with a flame ionization detector and the identification of them was performed by gas chromatography coupled to a mass spectrometer. The results were submitted to analysis of variance and Tukey's test at 5% of failure probability for qualitative variables and the regression of the analysis of variance for quantitative treatments. All the tested varieties showed an increasing production in relation to the dry mass of the aerial part, dry mass of leaves, artemisinin and essential oil production per area and they did not differ statistically between themselves. The varieties of Artemis F1 and Artemis F2 had a higher leaf/stem ratio among the varieties tested. The varieties of Artemis F1 and (2/39 x 5)x3M showed a higher content of essential oil in the dry mass of leaves, and due to this they are recommended for cultivation in the Southwest region of Paraná, for the essential oil production. The main compounds found in essential oils from the three cultivars were camphor (39.69%), 1.8 cineole (12.66%), myrcene (9.29%), γ-muuroleno (4.95%), trans - β-farnesene (4.02%), which together totalize an average 70.61% of the essential oil of the varieties tested. Changes in the planting density had no significant influence on the major constituents regarding the essential oil of A. annua variety of Artemis F2. Concerning the different densities, the highest production of leaf biomass, artemisinin, artemisinin content in the dry mass of leaves and essential oil were obtained at densities of 93,966 plants ha-1, 80.0,71 plants ha-1, 81 969 plants ha-1 and 91,272 plants ha-1 respectively. The essential oil content in dry mass of leaves was not affected by the planting density. The alteration in planting density influenced the production of camphene, α-copaene, mirtenila acetate, γ-terpinene. Regarding all the planting densities, camphor was the major constituent with levels above 39% indicating that A. annua is an alternative source for the production of this substance. Monoterpenes were the most abundant class of compounds in essential oil of A. annua with 59.03% of the chemical constitution and 33.91% belong to the class of sesquiterpenes.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Ãlcera por pressÃo (UP) à uma lesÃo comum entre idosos e indivÃduos com mobilidade fÃsica prejudicada. Ela afeta a qualidade de vida dos indivÃduos e gera custos considerÃveis, uma vez que està se tornando um problema mundial crescente, devido ao envelhecimento da populaÃÃo. Ciclos de isquemia e reperfusÃo tÃm sido identificados como fatores causais primÃrios, mas existem outros fatores que influenciam a intensidade dos danos. Atualmente, nÃo existe um mÃtodo eficaz e de baixo custo para tratar esta condiÃÃo. O uso clÃnico da fumaÃa de Artemisia vulgaris (FAV) para o tratamento de lesÃes na pele de diversas origens està descrito na literatura. Entretanto à pouco documentado e atualmente nada foi descrito em modelos experimentais de ulcera por pressÃo a respeito da sua atividade cicatrizante, bem como o seu efeito tÃxico. Dessa forma objetivou-se investigar o perfil toxicolÃgico e o efeito cicatrizante da aplicaÃÃo tÃpica da fumaÃa de Artemisia vulgaris em modelo de Ãlcera por pressÃo em camundongos. Este trabalho foi aprovado pelo Comità de Ãtica (89/2011). Foi utilizado um modelo nÃo-invasivo de UP em camundongos Swiss machos, que consiste em 4 ciclos de isquemia e reperfusÃo atravÃs da colocaÃÃo de dois ÃmÃs na superfÃcie da pele dorsal. Cinco grupos experimentais foram testados: (1): com Ãlcera e sem tratamento, (2): com Ãlcera e FAV tÃpico, (3): com Ãlcera, FAV tÃpica e filme de poliuretano, (4): com Ãlcera e tratado com hidrogel e filme de poliuretano e (5) sem Ãlcera, e sem tratamento. A anÃlise foi realizada nos dias 5, 7, 14 e 21 apÃs a induÃÃo da Ãlcera. Foram avaliados parÃmetros macroscÃpicos de cicatrizaÃÃo atravÃs da escala EWAT (Experimental Wound Assessment Tool â Instrumento de avaliaÃÃo de ferida experimental), Ãrea da ferida e porcentagem de contraÃÃo. Nos parÃmetros microscÃpicos foram avaliados: a anÃlise histopatolÃgica, a espessura da camada de colÃgeno e densidade de colÃgeno na derme, a contagem de fibroblastos e fibrÃcitos e a mediÃÃo da espessura da epiderme. AvaliaÃÃo da imunomarcaÃÃo para NOSi e nitrotirosina e ensaio de malondialdeÃdo (MDA) foi realizado para investigar o stress oxidativo. Testes toxicolÃgicos com parÃmetros hematolÃgicos, bioquÃmicos, histopatolÃgicos e comportamentais foram realizados em animais tratados com FAV. Resultados: a FAV nÃo mostrou toxicidade nos parÃmetros avaliados. Em todos os resultados a FAV + filme transparente foi melhor do que a FAV. EWAT macroscÃpica e escores inflamatÃrios mostraram diferenÃas significativas entre o grupo tratado, FAV + filme de poliuretano e grupo controle (p <0,01). Ãrea contraÃÃo da ferida foi aumentada em no grupo FAV grupo + filme de poliuretano, por 99,62% (84,65% vs, controle), bem como a contagem de fibroblastos (112,7  7,9 vs 80,0  6,4; controle, p < 0,01) e densidade de colÃgeno (33,9%  6,6 vs 20,9  8,6%, controle, p <0,01). FAV + filme de poliuretano aumentou a espessura da epiderme (113,2  18,1 vs 52,1  8,9, controle p <0,01) e tambÃm a contagem do nÃmero de vasos sanguÃneo no tecido conjuntivo (142,3  15,1 vs 68, 5  8,6; controle, p <0,01). O nÃmero de cÃlulas marcadas para NOSi e nitrotirosina, foi reduzido no grupo FAV + filme de poliuretano (601,5  94,0 vs 95,7  2005,0, controle, NOSi e 666,0  142,4 vs 1877,2  133, 8; controle, nitrotirosina, p <0,01). O MDA tambÃm foi reduzido pelo tratamento com FAV + filme de poliuretano (0,08  0,03 vs 0,3  0,05; controle, p <0,05). ConcluÃmos que a aplicaÃÃo tÃpica da FAV nÃo produziu efeito tÃxico e acelerou a cicatrizaÃÃo de feridas possivelmente por propriedades antioxidantes. O uso do filme de poliuretano intensificou a aÃÃo da FAV. / Pressure ulcer (PU) is a common injury among elderly and subjects with impaired physical mobility. It affects the quality of life of individuals and generates considerable costs, since it is becoming a worldwide growing problem due to the aging of the population. Cycles of ischemia and reperfusion from pressure have been identified as primary causal factor but other factors influence the intensity of damage. Currently, there is no effective and inexpensive method to treat this condition. For this reason, we aimed to check whether the traditional indication of smoke from Artemisia vulgaris (SAV) really contributes to the wound healing process of the PU. This work was approved by Ethics Committee (89/2011). It was used a non-invasive model of PU in mice which consists of 4 cycles of ischemia and reperfusion by the placement of two magnets on the dorsal skin surface of mice. Five experimental groups were tested: negative control, with ulcer and without treatment; positive control, with ulcer and treated with hydrogel and transparent film; treated group 1, with ulcer and topical SAV, treated group 2, with ulcer and topical SAV and transparent film, and a group without ulcer and without treatment. The analysis was conducted on days 5, 7, 14 and 21 after ulcer induction. Macroscopic parameters of healing were assessed through the EWAT (Experimental Wound Assessment Tool). Wound area, percentage of contraction, histopathological analysis, collagen layer thickness and collagen density in the dermis, counting of fibroblasts and fibrocytes, measurement of epidermis thickness were also assessed. Evaluation of the immunostaining for iNOS and nitrotyrosine and malondialdehyde assay (MDA) was performed to investigate oxidative stress. Toxicological tests were conducted in treated animals and SAV showed no toxic effect. In all the results SAV+film treatment was better than SAV. Results: Macroscopic EWAT and inflammatory scores showed significant differences between SAV+film treated group and control group (p<0,01). Wound contraction area was enhanced in SAV+film group by 99,62% (vs 84,65%, control) as well as fibroblast count (112,7  7,9 vs 80,0  6,4; control, p<0,01) and collagen density (33,9%  6,6 vs 20,9%  8,6; control, p<0,01). Epidermal width was increased by SAV+film (113,2  18,1 vs 52,1  8,9; control p<0.01) and also the blood vessel counting in the conjunctive tissue (142,3  15,1 vs 68,5  8,6; control, p<0.01). The counting of iNOS and nitrotyrosine immunostained cells showed a reduction by SAV+film (601,5  94,0 vs 2005,0  95,7; control, iNOS and 666,0  142,4 vs 1877,2  133,8; control, nitrotyrosine, p<0.01). MDA assay showed also a reduction by SAV+film treatment (0,08  0,03 vs 0,3  0,05; control, p<0.05). In conclusion, SAV topical application promoted wound healing by anti-oxidant properties and by modulating the inflammatory process. The effect of SAV was enhanced when the wound area was covered by the transparent film after smoke application. In addition, this method showed no toxic effect and may be an effective and low cost alternative for PU healing treatment.

Orientador : Simone Liliane Kirszenzaft Shepherd / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T01:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_DanieladeArgollo_D.pdf: 13743066 bytes, checksum: b4c285d96ebd5478c86422fcc44e938a (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As plantas do gênero Artemisia se constituem numa rica fonte de sesquiterpenos, os quais têm recebido grande atenção dos pesquisadores devido a sua diversidade química e biológica. A contínua investigação da presença de compostos secundários de interesse bem como de protocolos eficientes para a viabilização e otimização da produção em larga escala dos mesmos são extremamente recomendados e necessários para a exploração desta rica fonte de novos agentes quimioterapêuticos e agriculturaís. A planta alvo deste estudo foi o florido CPQBA 2/39 x PL5 da espécie Artemisía annua, o qual foi obtido pelo programa de melhoramento genético da MEDIPLANT e do CPQBA. Com a finalidade de se manter algumas características desejáveis deste genótipo superior, tais como alta produção de biomassa e de artemisinina, um sesquiterpeno com ação antimalárica, o presente trabalho teve início a partir de um único explante meristemático, o qual foi excisado de uma única planta matriz do híbrido melhorado cultivada nos campos experimentais do CPQBA. Após o desenvolvimento do explante meristemático selecionado, este foi micropropagado até a obtenção de um banco de material homogêneo in vitro com número adequado de plantas sadias, as quais serviram como fontes de explantes para os experimentos posteriores. Foram desenvolvidas metodologias para a iniciação, estabelecimento e cultivo de raízes tanto normais como transformadas com duas cepas de Agrobacterium rhizogenes (15834 e 8196). A confirmação do caráter transgênico das raízes foi obtida por "Dot Blot", um método rápido e eficiente de triagem que permitiu uma análise molecular qualitativa. Estudos relacionados com a formação de calos e a morfogênese in vitro das raízes transformadas obtidas com ambas as cepas também foram realizados. Os extratos dos materiais vegetais foram analisados por cromatografia gasosa acoplado a um espectrômetro de massas (CGIEM) de acordo com metodologia analítica e de alta sensibilidade para detecção de terpenos que foi desenvolvida por pesquisadores do CPQBAlUNICAMP. Os extratos dos calos obtidos bem como das raízes transformadas e normais estabelecidas e cultivadas em diferentes meios de cultura e sobre diferentes condições fotoperiódicas foram analisados quimicamente para a avaliação de alguns terpenos de interesse, tais como: artemisinina e ácido artemisinínico, além de dois outros compostos com forte atividade antiulcerogênica: dihídro-epideoxí-artenuína B edeoxiartemisinína. Os resultados destas análises revelaram que nenhum dos terpenos mencionados estavam presentes nos extratos dos calos e das raízes transformadas analisadas. Os cromatogramas dos extratos das raízes normais cultivadas em meio MS líquido desprovido de fitorreguladores revelaram a presença do composto antiulcerogêníco dihídro-epideoxi artenuína B e de um outro composto ainda não identificado. Pelas características do padrão de ttacionamento do espectro obtido por CG/EM, podemos sugerir que este composto não identificado é também um terpeno, no entanto a confirmação desta hipótese deverá ser objetivo de trabalhos futuros. As condições fotoperiódícas de cultivo influenciaram na produção destes dois terpenos, sendo que a produção do composto não identificado foi inversamente proporcional à produÇão de dihídro-epideoxí-artenuína B, ou seja, sob condição de escuro contínuo, quando díhidro-epideoxi-artenuína B foi intensamente produzido, o composto não identificado foi detectado em pequenas proporções, e, sob fotoperíodo de 16 horas, o inverso ocorreu. A quantificação de dihídro-epideoxi-artenuína B por Cromatografia gasosa acoplado a um Detector de Ionização de Chamas (CG/DIC) revelou um aumento de aproximadamente cinco vezes na produção deste composto pelas raízes normais cultivadas sob condição de escuro contínuo em relação às raÍzes cultivadas na presença de 16 horas de luz. A presença de auxína no meio MS mantido sob condições de 16 horas de luz resultou em alta produção do composto não identificado pelas raizes normais, enquanto que a produção de dihidro-epideoxi-artenuína B não foi detectada nestas raízes através das metodologias empregadas. Os terpenos de interesse também foram estudados quanto as suas atividades antimicrobianas através de ensaios bioautográficos. Para os testes biológicos foram utilizados os seguintes microrganismos: Bacillus subtilis, Salmonella hoterasuis, Micrococcus luteus, Rhodococcus equi, Escherichía colí, Staphylococcus aureus, Candida albícans, Pseudomonas aeruginosa. Os resultados destes testes mostraram que nenhum dos terpenos de interesse apresentou atividade antifúngica com a linhagem de Ccmdida a/bicans. A atividade antibacteriana foi comprovada para artemisinina e para o ácido artemisinínico, com as linhagens das bactérias B. subitílís, R equí, S. aureus e E. coZi. O composto dihidro-epideoxi artenuína B apresentou atividade antibacteriana com as linhagens das bactérias B. subtil is, M luteus e S. aureus e o composto deoxiartemisinina com as linhagens B. subtilis, R equi, M luteus e S. aureus / Abstract: Plants of the Artemisia genera are a rich source of sesquíterpenes, whích have received great attentíon flOm researchers due to theírits bíologícal and chemícal diversíty. The continued investigation of the presence of secondary compounds is hígh1y recommended and necessary for the exploration of this rich source of new chemotherapeutic and agricultural agents. The plant targeted ín this study was the CPQBA 2/39 x PL5 hybrid of the A. annua specíes, obtaíned through the genetíc ímprovement plOgram of Jv1EDIPLANT and CPQBA. With the intent ofkeeping some ofthe desirable characteristícs ofthis superior genotype, such as high production of biomass and artemisinin, a sesquiterpene with antímalarial plOperties, the present study began with a síngle meristematíc explant, excísed from a síngle ímplOved hybrid matrix plant cultívated ín CPQBA's experimental fields. Afier the development of the selected meristematic explant, it was micropropagated until an in vitro homogenous material bank was obtained with a adequa te number of healthy plants, which served as explant sources for later experiments. Methodologies were developed for the estabIíshment and cultivation of roots, both normal and transformed wíth two straíns of Agrobacterium rhizogenes (15834 and 8196). The confirmation of the transgenic nature of the roots was obtained by the "Dot Blot" technique, a fast and efficient screening method that allows a qualitative molecular analysis. Studíes related to the formatíon of callus and the in vitro morphogenesís of the transformed lOots obtaíned wíth both straíns were also undertaken. The plant material extracts were I analyzed by Gasos Chrmatography acopladed to Spectrum Mass (GCIMS) according to the analytical methodology incorporating high sensitivity terpene detection developed by CPQBAlUNICAMP researchers. The callus extracts as weIl as the transformed and normal roots establíshed and cultívated ín different culture media under different photoperiodic condítions were chemicaIly analysed for evaluation of relevant terpenes, such as: artemisinin, artemisiníc acid, as well as two other compounds wíth strong antíulcerogenic actívity: dihydro-epideoxi-artenuin B and deoxiartemisinin. The analysis of results revealed that none of the afore mentíoned terpenes were present in the callus extracts or transformed roots. The chromatograms of the extracts taken úom normal roots cultivated in MS liquid medium deprived of phytoregulators revealed the presence of the antiulcerogenic compound dihydro epideoxi-artenuin B and another as yet unidentified compound. The characteristics of the mass fractíoning pattem observed on GC/MS suggest that this unidentífied compound is also a terpene, however confirmation of this hypothesis requises further studies. Photoperiod during cultívatíon ínfluenced the productíon of both these terpenes, wíth the productíon of the unidentified compound beíng inversely proporcional to the production of dihidro-epideoxi artenuin B. Under continuous darkness dihidro-epideoxi-artenuin B was intensely produced and the unidentified compound present in small proportions, whereas the inverse ocurred in a 16 hour photoperiod The quantificatíon of dihydro-epídeoxi-artenuin B by Gasos Chromatography acopladed to Flame Ionization Detector (CG/FID) revealed as approximately fivefold increase in the production of this compound by normal roots cultívated under continuous darkness compared to roots cultivated in the presence of 16 hour of light. The presence of auxin in the MS medium maintained under 16 hour of light resulted in substantial production of the unidentífied compound by normal roots, while the production of dihidro epideoxi-artenuin B was not detected in these roots by the methods employed. The relevant terpenes were also studied with regard to their antimicrobial properties through bíoautographic tests. For such tests the foIIowíng microorganisms were used: o....I Baci/lus subtilis, Salmonella choterasuis, Micrococcus luteus, Rhodococcus equi, Escheríchía colí, Staphylococcus aureus, Candída albícans, Pseudomonas aerugínosa. The results of these tests showed that none of the relevant terpenes presented antifungaI activíty wíth the Candida albicans líne. The antíbacterial activíty was confirmed for rtemisinin and artemisinic acid, using B. subti/is, R equi, S. aureus, and E. co/i Unes. The compound dihydro-epídeoxi-artenuin B showed antíbacterial actívity with the bacterial lines B. subítílis, M [uteus, and S. aureus and the compound deoxiertemisinin with the Unes B. subitilis, R. equi, M [uteus, and S. aureus / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal

Magister Pharmaceuticae - MPharm / Artemisia afra (A. afra) is traditionally used for a variety of ailments and contain flavonoids e.g. luteolin which may contribute to some of its activity. It is generally administered as a tea or decoction, and such liquid dosage forms present challenges as far as long term storage and stability are concerned, as well as sub-optimal oral bioavailability of actives they contain. Freeze dried aqueous extracts (FDAE) can alleviate such problems but may be hygroscopic and unstable. The use of modified forms of FDAE can counter the problem of hygroscopicity (e.g. use of alginate) and alleviate the issue of sub-optimal bioavailability of plant actives (e.g. polymethylmethacrylate). The objectives of this study, were to: (1) prepare the freeze dried aqueous extract (FDAE) and modified forms, which include alginate-extract beads (alginate-FDAE) and polymethylmethacrylate coated alginate matrix beads of herbal extract (PMMA-alginate-FDAE) of the FDAE of A. afra, (2) determine and compare the pharmaceutical characteristics of the above mentioned preparations of A. afra,(3) quantify and compare the total flavonoid and specifically luteolin levels of the different forms of A. afra,(4) evaluate and compare the release characteristics of FDAE of A. afra from the alginate-FDAE and PMMA-alginate-FDAE beads in gastrointestinal fluids and (5) determine the intestinal permeability of luteolin contained in selected modified Artemisia afra extract preparations. It was hypothesized that making the alginate beads and the polymethylmethacrylate coated alginate beads would make the FDAE less hygroscopic with a lower moisture content, that the rate of release of luteolin from A. afra FDAE into gastrointestinal fluids would be faster than from the modified forms, and that the effective gastrointestinal permeability of luteolin in the alginate-FDAE and PMMA-alginate-FDAE beads of A. afra is equal to that in FDAE. To realize these objectives, the FDAE was prepared by freeze drying the aqueous extract of the A. afra dried leaves, alginate-FDAE prepared by dispersing FDAE into 4% sodium alginate solution, then adding the resulting stock solution into a 2% calcium chloride solution and drying resulting beads and PMMA-alginate-FDAE prepared by a modified water-in-oil-in-water emulsion solvent evaporation method using water as an internal aqueous phase. Using pharmacopoeial methods and methods adapted from other workers the organoleptic and pharmaceutical characteristics were determined to compare the pharmaceutical quality of these preparations of A. afra. To identify and determine the levels of luteolin in the plant preparations, a validated HPLC assay was developed. Finally, the in situ perfused rat intestine model was used to determine the in vitro bioavailability, i.e. gastrointestinal permeability, of luteolin from solutions containing luteolin in pure form, FDAE, alginate-FDAE and PMMA-alginate-FDAE. The A. afra forms were obtained in moderate to good yields and FDAE was brown and hygroscopic in nature, the alginate beads dark brown free flowing and spherical in shape and the PMMA-alginate beads light brown in colour with rough edges. The A. afra plant forms on average contained 0.185 ± 0.24, 0.067 ± 0.014, 0.012 ± 0.071 μg/mg of free luteolin (n=3) in FDAE, alginate-FDAE and PMMA-alginate-FDAE respectively and 0.235 ± 0.026, 0.079 ± 0.093, 0.058 ± 0.082 μg/mg of total luteolin (n=3) in FDAE, alginate-FDAE and PMMAalginate- FDAE respectively. The Plumen values for intestinal uptake of luteolin were significantly higher from solutions of A. afra forms than the pure luteolin solution (i.e. Plumen values in the range of 0.02 - 0.035 cm/s for all plant forms vs Plumen values in the range of 0.010 - 0.014 cm/s for pure luteolin, t-test p = 0.0252). The permeability of luteolin in FDAE appeared to be slighter greater than that of the modified forms (Plumen values >0.03 cm/s for FDAE and Plumen values <0.03 cm/s for both modified forms). In summary, the results showed that, the modified A. afra forms; alginate-FDAE and PMMAalginate- FDAE were of acceptable pharmaceutical quality with luteolin better taken up in the plant forms than in its pure form. The A. afra forms prepared had similar rates of uptake (permeability) of free and total luteolin with the rates being highest for the FDAE. Collectively, these results indicate that alginate-FDAE and PMMA-alginate-FDAE bead forms should be suitable for use in a solid dosage form (e.g. tablet or capsule) of A. afra.

Orientador: Simone Liliane Kirszenzaft Shepherd / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T11:03:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pellegrino_AnaPaula_D.pdf: 6617098 bytes, checksum: 5e66717e28c080597cc20dc056067146 (MD5) Previous issue date: 2000 / Doutorado / Doutor em Biologia Vegetal