Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-06-01Bitstream added on 2014-06-13T18:51:18Z : No. of bitstreams: 1 giocondo_mp_me_arafcf.pdf: 1362305 bytes, checksum: 5d252e88df73be4c96290a8a2c37f546 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Diversos estudos buscam identificar compostos com atividade seletiva para celulas tumorais e que possuam mecanismo de acao para desencadear a apoptose. Dentre as substancias isoladas de Cryptocarya sp, algumas estirilpironas, como a goniotalamina, apresentam atividade antiproliferativa e apoptogenica em diferentes linhagens celulares. No presente estudo, foram avaliadas as atividades citotoxica e pro-apoptotica da estirilpirona (criptomoscatona D2) isolada de Cryptocarya mandioccana, em linhagens celulares de carcinoma cervical humano infectada por HPV (HeLa e SiHa), nao infectada (C33A) e fibroblasto pulmonar humano transformado pelo SV-40 (MRC-5). A atividade citotoxica foi avaliada pelo ensaio do MTT e a apoptose foi avaliada, respectivamente, pelos ensaios de anexina V e a expressao de bak/bcl-2, por citometria de fluxo. Para o ensaio do MTT, as celulas foram tratadas com estirilpirona (criptomoscatona D2) nas concentracoes de 15, 30, 60 e 90-ÊM por 6, 24 e 48 horas e por 6 horas com periodo de recuperacao de 24, 48 e 72 horas pos tratamento. Para os ensaios de apoptose, as celulas foram tratadas por 6 horas e periodo de recuperacao de 24, 48 e 72 horas. O tratamento com a estirilpirona (criptomoscatona D2) ocasionou elevada citotoxicidade dose-resposta e tempo-resposta em HeLa, SiHa, C33A e MRC-5. Embora nao haja diferenca estatisticamente significativa de citotoxicidade entre as linhagens, aparentemente a citotoxicidade foi maior em HeLa e C33A (tratamento de 24 e 48 horas) que em MRC-5 e SiHa. Ainda, no periodo de recuperacao, HeLa e SiHa aparentemente restabelecem sua capacidade proliferativa, que e diretamente proporcional ao tempo de recuperacao, enquanto o mesmo comportamento nao e observado em C33A. Ao avaliar a expressao de duas proteinas da via intrinseca de apoptose (bcl-2 e bak), nao foi observada modulacao dessa expressao entre as linhagens celulares, nas diferentes tempos de recuperação pos-tratamento. / Several attempts have been made to identify chemical compounds with selective cytotoxicity against cancer cells and apoptosis trigger activity. Among the substances isolated from Cryptocarya sp, some styrylpyrones, such as goniothalamine, demonstrate antiproliferative and apoptotic activity in abroad human cell lines. In the present study, we evaluated the antiproliferative and apoptotic activities of the styrylpyrone (cryptomoschatone D2) isolated from Cryptocarya mandioccana in HPV-infected (HeLa and SiHa) and non-infected (C33A) human cervical carcinoma cell lines, and in human lung's fibroblast immortalized with SV-40 (MRC-5). The antiproliferative activity was evaluated by the MTT assay and the apoptotic activity was investigated by measuring the expression levels of annexin V and bak/bcl-2 by flow cytometry. In the MTT assay, cells were treated with styrylpyrone (cryptomoschatone D2) at a 15, 30, 60 or 90ìM concentration for 6, 24 or 48 hours as well as for 6 hours followed by a recovery posttreatment period of 24, 48 or 72 hours. In the apoptotic assays, cells were treated for 6 hours followed by a recovery posttreatment period of 24, 48 or 72 hours. High cytotoxicity (dose-response and time-response) was observed in HeLa, SiHa, C33A and MRC-5 cell lines. Although the styrylpyrone cytotoxicity was not significantly different among the cell lines tested, the citotoxicity was apparently higher in HeLa and C33A than MRC-5 and SiHa in the case of treatments for 24 or 48 hours. Moreover, HeLa and SiHa were able to recover their prolifetative status, which were directly proportional to the posttreatment recovery time. On the other hand, C33A did not demonstrate a similar posttreatment recovery. Despite the posttreatment recovery time, the expression of the apoptotic proteins bcl-2 and bak seems not to be modulated by the treatment.

Submitted by Eduarda Figueiredo (eduarda.ffigueiredo@ufpe.br) on 2015-03-13T15:17:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Isabella_Macário_PPGCB..pdf: 6388985 bytes, checksum: 6a3fd45291a73e75d7f24cad53932d31 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Isabella_Macário_PPGCB..pdf: 6388985 bytes, checksum: 6a3fd45291a73e75d7f24cad53932d31 (MD5) Previous issue date: 2012-09 / CNPq e PROPESQ / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T19:54:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-IsabellaMacárioCavalcanti.pdf: 6443769 bytes, checksum: 35aa6520fbd61ba6ff2cc345144b62e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-IsabellaMacárioCavalcanti.pdf: 6443769 bytes, checksum: 35aa6520fbd61ba6ff2cc345144b62e9 (MD5) Previous issue date: 2012-09 / CNPQ; PROPESQ - UFPE / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T14:37:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Isabella Macário.pdf: 3015806 bytes, checksum: 63e6ff18236b7e7305ce748227c373b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:37:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Isabella Macário.pdf: 3015806 bytes, checksum: 63e6ff18236b7e7305ce748227c373b9 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq PROPESQ-UFPE / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Dinoflagelados foram os primeiros microorganismos reconhecidos como fonte primária de certos metabólitos, também conhecidos como ficotoxinas. Em geral são compostos não protéicos, de baixo peso molecular (250-3500 Da), apresentam estruturas químicas e modos de ação bem diferenciados. Envolvidos em florações, mortandade de peixes e intoxicações de seres humanos, devido ao consumo de mariscos contaminados, tornaram alvo de diversas pesquisas. Atividade antifúngica, hemolítica e citotoxicidade contra células tumorais são alguns exemplos da variedade de compostos e modos de ação que podemos encontrar. Como exemplo do potencial de aplicação, a pectenotoxina é candidata a agente quimioterápico e a maitotoxina é um estimulante da síntese e secreção do fator de crescimento. Em alguns casos, estudos com compostos de dinoflagelados alcançam níveis de patente. O risco à saúde pública e as perdas econômicas causadas pelas florações levaram ao estudo do ciclo de vida e interações ecológicas, taxonomia e aspectos moleculares das microalgas envolvidas nesses eventos. Também levou a criação de programas de monitoramento que levam em consideração observações ambientais, amostras de fitoplâncton, mariscos ou peixes, análise das amostras, avaliação e divulgação dos resultados e planos de ação em caso de eventos tóxicos. Considerando os estudos já realizados com dinoflagelados, estudamos algumas espécies isoladas do litoral norte do Estado de São Paulo sob aspectos biológicos, moleculares, químicos e monitoramento. A abordagem biológica revelou a presença de compostos capazes de inibir a proliferação celular e de alterar de alguma forma o citoesqueleto das células tumorais T47D nos extratos polares de A. fraterculus, P. gracile e P. mexicanum. Observamos também um possível potencial genotóxico das espécies A. fraterculus e P. gracile. Os aspectos moleculares, biológicos e químicos foram utilizados como ferramenta para o estudo de uma espécie de Ostreopsis cf ovata. A biologia molecular associada a morfologia nos levou a identificar duas cepas, mostrando que são geneticamente idênticas entre si e entre os espécimes isolados do Rio de Janeiro e Mediterrâneo e diferente daqueles de origem asiática, contribuindo para a compreensão da taxonomia, biogeografia e filogenia deste gênero. Ambas as cepas mostraram atividade hemolítica, mas as frações obtidas por cromatografia líquida de alta eficiência não tiveram a hemólise inibida por ouabaína. A análise por espectrometria de massa também não foi conclusiva devido à falta de padrão da toxina estudada. Portanto, sugerimos que os compostos hemolíticos presentes nas amostras sejam distintos da palitoxina e de seus análogos. No entanto, analisando os cromatogramas de espectrometria de massa, verificamos que a atividade biológica encontrada para as nossas amostras estão relacionadas a um conjunto de compostos. O programa de monitoramento piloto na maricultura da Praia da Cocanha em Caraguatatuba, litoral Norte do Estado de São Paulo foi realizado durante um ano. As análises de toxinas paralisantes (PSP) em bioensaios com camundongos e espectrometria de massa não detectaram toxinas nos mexilhões em concentrações que poderiam provocar intoxicação ao homem. Mas confirmamos o alerta quanto à presença de espécies potencialmente tóxicas no ambiente durante o período de estudo. Os aspectos abordados mostram como os compostos produzidos por dinoflagelados podem interferir de alguma forma na vida humana. Por um lado encontramos as finalidades farmacológicas na busca de novas drogas por outro o risco à saúde através do consumo de mariscos contaminados. Em ambos os casos, a continuidade das pesquisas trará muitos benefícios ao Homem. / Dinoflagellates were the firs microorganisms recognized as a primary source of certain metabolites, also known as phycotoxins. In general, compounds are non proteic, with low molecular weight (250-3500 Da), and have different chemical structures and modes of action. Frequently involved in algal blooms, killing fish and poisoning of humans due to consumption of contaminated seafood, they became the target of several researchers. Antifungal, hemolytic and cytotoxic activities against tumor cells are representative of the variety and modes of action that can be found. As examples of potential applications, the pectenotoxin is considered promising candidate for cancer chemotherapy; and the maitotoxin is described as stimulant of the synthesis and secretion of growth factor. In some cases, dinoflagellates compounds reached patent levels. The need to protect human health and fisheries industry led to studies of life cycle, ecologic interactions and taxonomic and molecular aspects of microalgae involved in harmful blooms. These events led to the establishment of monitoring programs to detect phytotoxins and toxic microalgae in mariculture farms worldwide. Based on researches carried out with others dinoflagellate, we studied some species isolated in the North coast of the state of São Paulo, on biological, molecular, chemical and monitoring aspects. Biologic assays indicated the presence of compounds in the dinoflagellates extracts that are able to inhibit cell proliferation and to induce changes in T47D cells cytoskeleton. We suggest a genotoxic potential for the compounds in the polar extracts of A. fraterculus and P. gracile. Biologic, molecular and chemical aspects were used to study two strains of Ostreopsis cf ovata. Molecular biology showed that both are genetically identical to O. ovata isolated from the Mediterranean Sea and Rio de Janeiro, but different from O. ovata collected in Asian waters. This result allowed a better understanding of genetic diversity and the recognition of more reliable (stable) morphological characters. Using mouse erythrocytes assay, hemolytic activity was detected in both strains of O. cf ovata. However, the hemolytic component was not inhibited by ouabain. Analyses by mass spectrometry of polar extract were inconclusive due to the lack of toxins standards. Therefore, we suggest that the compounds in the samples are distinct from palytoxin. Mass spectrometry results indicate that the biological activity of our samples can be related to several substances. The monitoring program in the mussel farm at Cocanha Beach, Caraguatatuba, was carried during one year. Mouse bioassays for paralytic shellfish poisoning toxins (PSP) performed in mussels showed that concentrations were below regulatory levels for human consumption. These low levels of PSPs were also confirmed by mass spectrometry. However, potentially toxic species were detected, and a long-term monitoring program is proposed and highly recommended. Research shows that compounds produced by dinoflagellates can interfere in human life both in positive and negative ways. On one side is the search for new drugs for pharmacological purposes; on the other hand the health risk represented by the consumption of contaminated seafood. In both cases, the continuity of the research will bring many benefits to humans.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JoannaACB_DISSERT.pdf: 760093 bytes, checksum: e2f8232a65c0fabe80fea62def8d0058 (MD5) Previous issue date: 2012-03-28 / The antioxidant activity of aqueous extracts of five edible tropical fruits (Spondias lutea, Hancornia speciosa, Spondias purpurea, Manilkara zapota and Averrhoa carambola) was investigated using different methods. The amount of phenolic compounds was determined by the Folin-Ciocalteu reagent. The M. zapota had Total Antioxidant Capacity (TAC) higher than the other fruits. Extracts showed neither reducing power nor iron chelation (between 0.01 and 2.0 mg/mL). H. speciosa exhibited the highest superoxide scavenging activity (80%, 0.5 mg/mL). However, at high concentrations (8.0 mg/mL) only A. carambola, S. purpurea and S. lutea scavenging 100% of radicals formed. M. zapota and S. purpurea had higher phenolic compound levels and greater OH radical scavenging activity (92 %, 2.0 mg/mL). Antiproliferative activity was assessed with 3T3 fibroblasts and cervical tumor cells (HeLa). The most potent extract was S. purpurea (0.5 mg/mL), which inhibited HeLa cell proliferation by 52%. The most fruits showed antioxidant and antiproliferative properties, characterizing them as functional foods. / A atividade antioxidante de extratos aquosos de cinco frutas tropicais (Spondias lutea, Hancornia speciosa, Spondias purp?rea, Manilkara zapota e Averrhoa carambola) foi investigada por diferentes m?todos. A quantidade de compostos fen?licos foi determinada pelo uso do reagente Folin-Ciocalteu. O extrato da fruta M. zapota apresentou Capacidade Antioxidante Total (CAT) superior aos demais extratos. As frutas estudadas n?o apresentaram nem poder redutor nem quela??o f?rrica (de 0,01 a 2,0 mg/mL). A H. speciosa apresentou alta atividade seq?estradora do radical super?xido (80% a 0,5 mg/mL) e na concentra??o de 8,0 mg/mL a A. carambola, a S. purp?rea e a S. lutea seq?estraram 100% dos radicais formados. A M. zapota e a S. purpurea apresentaram maior teor de compostos fen?licos e maior atividade sequestradora do radical hidroxila (92 % a 2,0 mg/mL). A atividade antiproliferativa foi avaliada em c?lulas de fibroblastos de rato (3T3) e em c?lulas tumorais de colo de ?tero humano (HeLa). O extrato mais potente foi o de S. purpurea (0,5 mg/mL) que inibiu em 60% da prolifera??o das c?lulas HeLa. A maioria das frutas apresentaram propriedade antioxidante e antiproliferativa o que possibilta maiores investiga??es sobre um poss?vel car?ter funcional.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-04-02T15:02:41Z No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-04-05T13:08:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-05T13:08:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AdrianaMarinaESilvaParente_DISSERT.pdf: 1386035 bytes, checksum: 87910526a122893f94a9f3045c8c9c4f (MD5) Previous issue date: 2017-11-28 / Tityus stigmurus corresponde ? esp?cie de escorpi?o predominante na regi?o Nordeste do Brasil, sendo considerado um dos principais causadores de acidentes escorpi?nicos. Na pe?onha do T. stigmurus, que ? composta de uma mistura complexa de mol?culas de alta e baixa massa molecular, foi identificado e caracterizado um pept?deo antimicrobiano denominado Stigmurina (FFSLIPSLVGGLISAFK-NH2). Pept?deos antimicrobianos s?o pequenas mol?culas consideradas a primeira linha de defesa contra micro-organismos, apresentando amplo espectro de a??o antimicrobiana. A literatura reporta tamb?m a atividade desses pept?deos contra c?lulas cancer?genas. Sequ?ncias nativas de pept?deos bioativos como prot?tipo para a obten??o de novas mol?culas t?m sido utilizadas com o intuito de potencializar a sua atividade e reduzir a toxicidade. Nesse contexto, realizou-se a caracteriza??o estrutural in silico e por dicro?smo circular, bem como a avalia??o da atividade antimicrobiana, antiparasit?ria, antiproliferativa e hemol?tica de dois pept?deos an?logos obtidos ? partir da Stigmurina, denominados StigA3 e StigA4. A an?lise da conforma??o tridimensional in silico do StigA3 e StigA4 demonstrou uma estrutura helicoidal, sendo este resultado confirmado por dicro?smo circular. O aumento da carga superficial e do momento hidrof?bico de ambos os pept?deos an?logos quando comparado com a Stigmurina resultaram na potencializa??o da atividade antimicrobiana e antiparasit?ria. Os pept?deos StigA3 e StigA4 apresentaram a??o antiproliferativa semelhante ao pept?deo nativo, com exce??o para a c?lula normal, para qual os pept?deos an?logos se mostraram menos t?xicos. Portanto, estes resultados indicam uma potencial aplica??o terap?utica destes pept?deos an?logos, demonstrando a efici?ncia do desenho racional de f?rmacos para a obten??o de novos agentes antiproliferativos e anti-infecciosos. / Tityus stigmurus it?s the predominant scorpion specie in Northeast region from Brazil, it?s considered one of the main cause of scorpion accidents in this region. In T. stigmurus venom, which is a complex mixture of high and low molecular mass molecules, was identified an antimicrobial peptide denominated Stigmurin. Antimicrobial peptides are small molecules considered the first line of defense against microorganisms, they show broad spectrum action. Many authors have proved that these peptides can also be effective on cancerous cells. Mutation in these molecules sequence has been held aiming the increase in the activity maintaining its low toxicity. Therefore, it is proposed the characterization of the structure in silico and by circular dichroism, as well the antimicrobial, antiparasitic, anti-proliferative and hemolytic activities of two analog peptides from Stigmurin, denominated StigA3 and StigA4. We performed an in silico analysis for these peptides, where we were able to observe ?-helix structure, which was confirmed by circular dichroism. We were also able to find that the analog peptides net charge and hydrophobic moment were higher than Sitgmurin?s, which can explain the increase in antimicrobial and antiparasitic activity. The peptides StigA3 e StigA4 showed activity on cancerous cells similiar to the native peptide, except when tested on a normal cell we were able to find that they?re less toxic. Therefore, these results indicate a potential biotechnological application for the analogs peptides, even as prototype to new therapeutic agents.

Dinoflagelados foram os primeiros microorganismos reconhecidos como fonte primária de certos metabólitos, também conhecidos como ficotoxinas. Em geral são compostos não protéicos, de baixo peso molecular (250-3500 Da), apresentam estruturas químicas e modos de ação bem diferenciados. Envolvidos em florações, mortandade de peixes e intoxicações de seres humanos, devido ao consumo de mariscos contaminados, tornaram alvo de diversas pesquisas. Atividade antifúngica, hemolítica e citotoxicidade contra células tumorais são alguns exemplos da variedade de compostos e modos de ação que podemos encontrar. Como exemplo do potencial de aplicação, a pectenotoxina é candidata a agente quimioterápico e a maitotoxina é um estimulante da síntese e secreção do fator de crescimento. Em alguns casos, estudos com compostos de dinoflagelados alcançam níveis de patente. O risco à saúde pública e as perdas econômicas causadas pelas florações levaram ao estudo do ciclo de vida e interações ecológicas, taxonomia e aspectos moleculares das microalgas envolvidas nesses eventos. Também levou a criação de programas de monitoramento que levam em consideração observações ambientais, amostras de fitoplâncton, mariscos ou peixes, análise das amostras, avaliação e divulgação dos resultados e planos de ação em caso de eventos tóxicos. Considerando os estudos já realizados com dinoflagelados, estudamos algumas espécies isoladas do litoral norte do Estado de São Paulo sob aspectos biológicos, moleculares, químicos e monitoramento. A abordagem biológica revelou a presença de compostos capazes de inibir a proliferação celular e de alterar de alguma forma o citoesqueleto das células tumorais T47D nos extratos polares de A. fraterculus, P. gracile e P. mexicanum. Observamos também um possível potencial genotóxico das espécies A. fraterculus e P. gracile. Os aspectos moleculares, biológicos e químicos foram utilizados como ferramenta para o estudo de uma espécie de Ostreopsis cf ovata. A biologia molecular associada a morfologia nos levou a identificar duas cepas, mostrando que são geneticamente idênticas entre si e entre os espécimes isolados do Rio de Janeiro e Mediterrâneo e diferente daqueles de origem asiática, contribuindo para a compreensão da taxonomia, biogeografia e filogenia deste gênero. Ambas as cepas mostraram atividade hemolítica, mas as frações obtidas por cromatografia líquida de alta eficiência não tiveram a hemólise inibida por ouabaína. A análise por espectrometria de massa também não foi conclusiva devido à falta de padrão da toxina estudada. Portanto, sugerimos que os compostos hemolíticos presentes nas amostras sejam distintos da palitoxina e de seus análogos. No entanto, analisando os cromatogramas de espectrometria de massa, verificamos que a atividade biológica encontrada para as nossas amostras estão relacionadas a um conjunto de compostos. O programa de monitoramento piloto na maricultura da Praia da Cocanha em Caraguatatuba, litoral Norte do Estado de São Paulo foi realizado durante um ano. As análises de toxinas paralisantes (PSP) em bioensaios com camundongos e espectrometria de massa não detectaram toxinas nos mexilhões em concentrações que poderiam provocar intoxicação ao homem. Mas confirmamos o alerta quanto à presença de espécies potencialmente tóxicas no ambiente durante o período de estudo. Os aspectos abordados mostram como os compostos produzidos por dinoflagelados podem interferir de alguma forma na vida humana. Por um lado encontramos as finalidades farmacológicas na busca de novas drogas por outro o risco à saúde através do consumo de mariscos contaminados. Em ambos os casos, a continuidade das pesquisas trará muitos benefícios ao Homem. / Dinoflagellates were the firs microorganisms recognized as a primary source of certain metabolites, also known as phycotoxins. In general, compounds are non proteic, with low molecular weight (250-3500 Da), and have different chemical structures and modes of action. Frequently involved in algal blooms, killing fish and poisoning of humans due to consumption of contaminated seafood, they became the target of several researchers. Antifungal, hemolytic and cytotoxic activities against tumor cells are representative of the variety and modes of action that can be found. As examples of potential applications, the pectenotoxin is considered promising candidate for cancer chemotherapy; and the maitotoxin is described as stimulant of the synthesis and secretion of growth factor. In some cases, dinoflagellates compounds reached patent levels. The need to protect human health and fisheries industry led to studies of life cycle, ecologic interactions and taxonomic and molecular aspects of microalgae involved in harmful blooms. These events led to the establishment of monitoring programs to detect phytotoxins and toxic microalgae in mariculture farms worldwide. Based on researches carried out with others dinoflagellate, we studied some species isolated in the North coast of the state of São Paulo, on biological, molecular, chemical and monitoring aspects. Biologic assays indicated the presence of compounds in the dinoflagellates extracts that are able to inhibit cell proliferation and to induce changes in T47D cells cytoskeleton. We suggest a genotoxic potential for the compounds in the polar extracts of A. fraterculus and P. gracile. Biologic, molecular and chemical aspects were used to study two strains of Ostreopsis cf ovata. Molecular biology showed that both are genetically identical to O. ovata isolated from the Mediterranean Sea and Rio de Janeiro, but different from O. ovata collected in Asian waters. This result allowed a better understanding of genetic diversity and the recognition of more reliable (stable) morphological characters. Using mouse erythrocytes assay, hemolytic activity was detected in both strains of O. cf ovata. However, the hemolytic component was not inhibited by ouabain. Analyses by mass spectrometry of polar extract were inconclusive due to the lack of toxins standards. Therefore, we suggest that the compounds in the samples are distinct from palytoxin. Mass spectrometry results indicate that the biological activity of our samples can be related to several substances. The monitoring program in the mussel farm at Cocanha Beach, Caraguatatuba, was carried during one year. Mouse bioassays for paralytic shellfish poisoning toxins (PSP) performed in mussels showed that concentrations were below regulatory levels for human consumption. These low levels of PSPs were also confirmed by mass spectrometry. However, potentially toxic species were detected, and a long-term monitoring program is proposed and highly recommended. Research shows that compounds produced by dinoflagellates can interfere in human life both in positive and negative ways. On one side is the search for new drugs for pharmacological purposes; on the other hand the health risk represented by the consumption of contaminated seafood. In both cases, the continuity of the research will bring many benefits to humans.

Orientadores: Paulo Mitsuo Imamura, Vera Lúcia Garcia Rehder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T08:25:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AdrianadaSilvaSantosde_M.pdf: 8021269 bytes, checksum: 306143b7220c2915586bf3c7c8c9d70e (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O câncer é uma das doencas que mais aflige a humanidade, principalmente pelo alto índice de mortalidade. Dados da OMS estimam 13,1 milhões de mortes em 2030. Aldama arenaria Baker, Asteraceae, é uma erva cespitosa a subarbusto, que mede 0,8 a 3 m de altura. Várias atividades farmacológicas foram atribuídas a esta espécie ou a compostos isolados desta, como por exemplo, ação vaso-relaxante, tripanossomicida, antimicrobiana e esquistossomicida. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antiproliferativa in vitro de óleos essenciais (OEfs) obtidos de diferentes órgãos vegetativos de A. arenaria em diferentes fases fenológicas, além do extrato clorofórmico das raízes (EC), frações e compostos isolados. As linhagens celulares tumorais utilizadas nos experimentos foram: K-562 (leucemia), MCF-7 (mama), NCI/ADR-RES (ovário com fenótipo de resistência a múltiplos fármacos), UACC-62 (melanoma), NCI-H460 (pulmão), PC-3 (próstata), HT29 (cólon), OVCAR-3 (ovário), U251 (glioma) e 786-0 (rim). Na fase de dormência o EC das raízes e OE dos xilopódios foram mais ativos frente às linhagens de melanoma, ovário resistente, pulmão, próstata e cólon. Já na fase de floração o OE dos caules foi mais ativo para as linhagens de glioma, mama, ovário resistente, rim, pulmão e próstata. O fracionamento químico dos OELs e EC revelou que as frações ricas em monoterpenos foram inativas enquanto as frações enriquecidas em sesqui e diterpenos apresentaram atividades moderada e potente. Nas frações mais ativas do EC (Fr 3 e 4) os compostos majoritários identificados foram dois derivados de pimarano: o ácido ent-pimara-8(14),15-dien-19-óico (1) e ent-8(14),15-pimaradien-3b-ol (3). Nas frações mais ativas dos OELs (Fr 3 e 4 ; R3, R5, R6, X5, F5, F6 E F7) foram os compostos: carotol, palustrol, espatulenol, pimaral e diterpeno (3). Os compostos 1 e 3, isolados e testados, apresentaram atividade fraca e moderada, respectivamente, demonstrando possível sinergismo com outros compostos. Os resultados demonstraram que 56% das 50 amostras avaliadas possuíam potencial atividade antiproliferativa in vitro e perfil concentração-dependente para a maioria das linhagens avaliadas. Dentre estas, 34% apresentaram atividade moderada e 22% potente para pelo menos uma linhagem, com valores de TGI (Total Growth Inhibition) menores do que 15 mg.mL-1. Estes resultados indicam que Aldama arenaria apresenta potencial atividade antiproliferativa in vitro e estudos posteriores de atividade anticâncer in vivo poderão comprovar sua ação antitumoral / Abstract: Cancer is a disease that afflicts people all over the world with a high mortality rate and World Health Organization (WHO) estimates that by 2030 cancer will be responsible for 13.1 million deaths. Aldama arenaria Baker (Asteraceae) is a medicinal plant that is known to contain several compounds with pharmacological properties including vasorelaxant, trypanocidal, antimicrobial and schistosomicidal activities. The aim of this study was to evaluate in vitro antiproliferative activity of the essential oils (EO's) obtained from vegetative organs of A. arenaria in differents phenological phases, chloroform extract (CE), fractions and isolated compounds. The tumor cell lines used in these experiments were: leukemia (K-562), breast cancer (MCF-7), multidrug resistant ovarian cancer (NCI/ADR-RES), melanoma (UACC-62), lung (NCI-H460), prostrate (PC-3), colon (HT29), ovarian (OVCAR-3), glioma (U251) and kidney (786-0). In dormant phase, CE (roots) and EO (xylopodium) were more actives against the strains of melanoma, resistant ovarian, lung, prostate and colon. At flowering, the stem EO was more active to the strains of glioma, breast, resistant ovary, kidney, lung and prostate cancer. The chemical fractionation of EO's and CE revealed that fractions rich in monoterpenes were inactive, while the fractions enriched in sesqui and diterpenes showed moderate and potent activities. In the most active fractions of EC (Fr 3 and 4), two major pimarane derivatives compounds were identified as: ent-pimara-8(14),15-dien-19-oic acid (1) and ent-8(14)15 pimaradien-3b-ol (3). From the the most active fractions of EO's (Fr 3 and 4; R3, R5, R6, X5, F5, F6 and F7) the following compounds were identified: carotol, palustrol, spathulenol, pimaral and diterpene 3. The compounds 1 and 3, isolated and tested, presented weak and moderate activity, respectively, suggesting a possible synergism with other compounds. These results showed that from 50 evaluated samples, 56% had potential in vitro antiproliferative activity and concentration-dependent for most strains evaluated. Among these, 34% had moderate activities and 22% had potent activities, with TGI (Total Growth Inhibition) values lower than 15 mg.mL-1 in at least one of the cancer cell lines. This study indicate that Aldama arenaria has, in vitro, a good antiproliferative activity and further evaluations of the in vivo anticancer activities are needed in order to validate this antitumor potential / Mestrado / Quimica Organica / Mestra em Química

Orientador: Ronaldo Aloise Pilli / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-23T10:20:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barcelos_RosimeireCoura_D.pdf: 15482677 bytes, checksum: f8abc41bb1731100795495890fe0c509 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Esse trabalho descreve a preparação de 48 compostos inéditos inspirados nas estruturas da goniotalamina (23) e da piplartina (210), bem como a avaliação da citotoxicidade in vitro desses derivados frente a uma variedade de linhagens de células tumorais humanas. Foram sintetizados 13 análogos da goniotalamina (23), os quais exibiram interessante perfil citotóxico, especialmente os compostos 144, 146 e 148 apresentando grupos metoxila no anel aromático da goniotalamina (23). Ainda, o análogo 164 com o grupo hidroxila em meta reduziu a viabilidade celular do câncer de pâncreas em 50% em uma concentração duas vezes menor em relação a goniotalamina (23). Também foi feita a substituição do anel lactônico por uma lactama, sendo observada uma diminuição significativa da atividade citotóxica dos 9 aza-análogos sintetizados. Em seguida, foi realizado um breve estudo de relação estrutura-atividade da piplartina (210), no qual se evidenciou a importância da carbonila a,b-insaturada endocíclica para a citotoxicidade dessa classe de compostos. Descreveu-se a preparação e a avaliação citotóxica in vitro de 21 derivados N-acilados dos aza-análogos. A N-acilação do nitrogênio lactâmico resultou em compostos ainda mais potentes do que a goniotalamina (23) e a piplartina (210) contra diversas linhagens de câncer, tal como o derivado 294 contendo o grupo N-crotonoila. Além disso, essas moléculas apresentaram um perfil citotóxico promissor contra as células tumorais PANC-1, uma vez que todos os análogos N-acilados foram mais ativos do que a goniotalamina (23). A piplartina (210) e os derivados 269 e 309 foram os mais potentes, sendo que o híbrido goniotalamina-piplartina 269 apresentou o menor valor de IC50, validando a estratégia de hibridação molecular / Abstract: This work describes the preparation of 48 novel compounds inspired on the structures of goniothalamin (23) and piplartine (210) as well as the in vitro assessment of their cytotoxicity against a variety of human tumor cell lines. Thirteen analogs of goniothalamin (23) were synthesized which exhibited interesting cytotoxic profiles, especially compounds 144, 146 and 148 bearing aromatic methoxyl groups. Analog 164 presenting a meta-hydroxyl group reduced the cell viability of pancreatic cancer by 50% at a concentration twice as low as the goniothalamin (23). Subsequently, the lactonic ring was substituted by a lactam, however leading to a significant reduction of the cytotoxic activity of the corresponding 9 aza-analogs. A brief structure-activity relationships study was performed, in which the importance of a,b-unsaturated endocyclic carbonyl group for cytotoxic activity of this class of compounds was demonstrated. The preparation and in vitro cytotoxic evaluation of 21 N-acylated aza-analogs derivatives is herein described. The N-acylation of the lactam nitrogen resulted in compounds that were more potent than goniothalamin (23) and piplartine (210) against diverse strains of cancer, such as compound 294 containing the N-crotonoyl group. Moreover, these molecules showed a promising cytotoxic profile against tumor cells PANC-1, since all the N-acylated analogs were more active than goniothalamin (23). Piplartine (210) and derivatives 269 and 309 were the most potent, and the goniothalamin-piplartine hybrid 269 displayed the lowest IC50 value of all, thereby validating the strategy of molecular hybridization / Doutorado / Quimica Organica / Doutora em Ciências