Submitted by Lucelia Lucena (lucelia.lucena@ufpe.br) on 2015-03-13T19:07:33Z No. of bitstreams: 2 dissertaçaofinalAndréa- COMPLETA.pdf: 1298422 bytes, checksum: 5c25bfcc0731b18f44f5b7703e5e752c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:07:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertaçaofinalAndréa- COMPLETA.pdf: 1298422 bytes, checksum: 5c25bfcc0731b18f44f5b7703e5e752c (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / Introdução: Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) são atualmente um grave problema de saúde pública. Este micro-organismo além de produzir diversos fatores de virulência tornando-o altamente patogênico, é resistente à quase todos os antimicrobianos utilizados na clínica médica, restando poucas alternativas terapêuticas. Diante deste fato, torna-se urgente a busca por novos agentes antimicrobianos e nesta perspectiva, os compostos de origem vegetal têm sido alvo de várias pesquisas em todo o mundo. Objetivos: Avaliar a atividade antimicrobiana da β-lapachona e sua ação inibitória sobre a biossíntese de catalase, hemolisinas e biofilme por 12 cepas MRSA. Métodos: A concentração inibitória mínima (CIM) da β-lapachona foi determinada frente às cepas MRSA através da técnica de microdiluição em caldo. A biossíntese de catalase foi avaliada semi-quantitativamente através do teste em tubo, colocando em contato o inóculo bacteriano exposto ou não exposto à β-lapachona com o peróxido de hidrogênio a 3% e em seguida foi realizada a aferição da altura da efervescência gerada pela liberação de oxigênio gasoso. Para determinação das hemolisinas extracelulares, foi realizado um teste utilizando hemácias de carneiro para avaliação da atividade hemolítica do sobrenadante das culturas expostas ou não expostas à β-lapachona. A formação de biofilme foi determinada em placas de microtitulação de poliestireno utilizando cristal violeta para coloração do biofilme formado e procedendo-se à leitura espectofotométrica da densidade óptica no comprimento de onda de 595nm. Resultados: A CIM de β-lapachona para as cepas MRSA avaliadas variou de 8μg/mL a 32μg/mL. A biossíntese dos fatores de virulência avaliados foi reduzida significativamente em todas as cepas MRSA. Conclusão: a β-lapachona possui atividade antiestafilocócica e que foi capaz de reduzir a biossíntese de fatores de virulência nas cepas MRSA avaliadas. Assim este composto pode ser incluído no arsenal de substâncias naturais bioativas com potencial de serem utilizadas como alternativa na terapêutica antimicrobiana contra MRSA após estudos de compatibilidade in vivo e toxicidade. Pode servir também como protótipo para produção de novas moléculas mais ativas e menos tóxicas.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-03-30T14:10:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Mestrado_Digitalizado.pdf: 1089011 bytes, checksum: 59c4dfb2b409c96a5b5f1a41ee6f478f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-30T14:10:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Mestrado_Digitalizado.pdf: 1089011 bytes, checksum: 59c4dfb2b409c96a5b5f1a41ee6f478f (MD5) Previous issue date: 2013-02-15 / Pseudomonas aeruginosa é um patógeno oportunista responsável por infecções nosocomiais graves e que cada vez ganha destaque pelo desenvolvimento de multiressistência. O objetivo deste trabalho foi avaliar o sinergismo da β-lapachona com antimicrobianos convencionais e sua atividade sobre fatores de virulência. Inicialmente foram testadas dez cepas de Pseudomonas aeruginosa com fenótipo de resistência previamente definido. Destas, quatro cepas (LFBM 01, LFBM 02, LFBM 16, LFBM 18) apresentaram um perfil de resistência a ciprofloxacino, meropenem e cloridrato de cefepima e por essa razão foram selecionadas para este estudo. Para verificar o efeito sinérgico entre a β-lapachona e os agentes antimicrobianos, foi utilizou-se o método de checkerboard. Os critérios utilizados para avaliar a atividade sinérgica foram definidos pelo Índice da Concentração Inibitória Fracionada (FIC índex). A partir dos melhores valores do FIC índex das associações β- lapachona/antimicrobiano foram avaliadas a atividade destas sobre a produção de biofilme e piocianina. Os valores do FIC índex variaram de 0,12 a 0,50 indicando uma interação sinérgica para a maior parte das associações. O percentual de redução na formação do biofilme foi acima de 70% para todas as associações, exceto para β-lapachona/meropenem frente cepa LFBM 18. O percentual de redução na produção de piocianina variou de 89,% a 98,9% e de 36 a 69,9% para a associação da β-lapachona com cloridrato de cefepima e meropenem respectivamente. / Pseudomonas aeruginosa is an opportunistic pathogen responsible for serious nosocomial infections and that time is highlighted by the development of multiressistência. The objective of this study was to evaluate the synergy of β-lapachone with conventional antimicrobial agents and their activity on virulence factors. Initially were assayed ten strains of Pseudomonas aeruginosa with predetermined resistance phenotype. Of these four strains (LFBM 01, LFBM 02, LFBM 16, LFBM 18) presented one to ciprofloxacin resistance profile, meropenem and cefepime hydrochloride and therefore were selected for this study. To verify the synergistic effect between the β- lapachone and antimicrobial agents, was used the checkerboard method. The criteria used to evaluate the synergistic activity were defined by the Index of Fractional Inhibitory Concentration (FIC index). From the top of the FIC index values for β- lapachone / associations antimicrobial activity of these were evaluated for the production of pyocyanin and biofilm. The FIC index values ranged from 0.12 to 0.50 indicating a synergistic interaction for most organizations. The percentage reduction in biofilm formation was above 70% for all associations, except for β-lapachone / meropenem front strain LFBM 18. The percentage reduction in pyocyanin production ranged from 89% to 98.9% and 36 to 69.9% for the association of β-lapachone with cefepime hydrochloride and meropenem respectively.

Submitted by Eduarda Figueiredo (eduarda.ffigueiredo@ufpe.br) on 2015-03-13T15:17:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Isabella_Macário_PPGCB..pdf: 6388985 bytes, checksum: 6a3fd45291a73e75d7f24cad53932d31 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:17:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE_Isabella_Macário_PPGCB..pdf: 6388985 bytes, checksum: 6a3fd45291a73e75d7f24cad53932d31 (MD5) Previous issue date: 2012-09 / CNPq e PROPESQ / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-13T19:54:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-IsabellaMacárioCavalcanti.pdf: 6443769 bytes, checksum: 35aa6520fbd61ba6ff2cc345144b62e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Tese-IsabellaMacárioCavalcanti.pdf: 6443769 bytes, checksum: 35aa6520fbd61ba6ff2cc345144b62e9 (MD5) Previous issue date: 2012-09 / CNPQ; PROPESQ - UFPE / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T14:37:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Isabella Macário.pdf: 3015806 bytes, checksum: 63e6ff18236b7e7305ce748227c373b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:37:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Isabella Macário.pdf: 3015806 bytes, checksum: 63e6ff18236b7e7305ce748227c373b9 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq PROPESQ-UFPE / O presente estudo objetivou desenvolver e avaliar a atividade antimicrobiana e antiproliferativa de lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lapachona (β-lap) ou complexos de inclusão β-lapachona:2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (β-lap:HPβ-CD). Os lipossomas foram preparados através da técnica de hidratação do filme lipídico seguida de sonicação. A cinética de liberação in vitro foi realizada pelo método da diálise. A atividade antimicrobiana in vitro das formulações frente à Staphylococcus aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA ATCC 33591), S. aureus sensível à meticilina/oxacilina (MSSA ATCC 29213), cepa hospitalar de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA), cepa comunitária de S. aureus resistente à meticilina/oxacilina (MRSA) e Cryptococcus neoformans foi determinada pelo método da microdiluição de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Ademais, a citotoxicidade dos lipossomas desenvolvidos foi avaliada frente a células de carcinoma de próstata (DU-145) utilizando o método do MTT, assim como as possíveis alterações celulares foram avaliadas através da microscopia confocal. Os lipossomas convencionais e furtivos contendo β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram tamanho médio de partículas variando de 88,7 ± 1,5 nm a 132,6 ± 3,3 nm, índice de polidispersão variando de 0,255 a 0,340 e eficiência de encapsulação variando de 97,4 ± 0,3 % a 99,2 ± 0,2 %. A cinética de liberação in vitro mostrou que as formulações neutras furtivas e as formulações convencionais contendo estearilamina encapsulando β-lap ou β-lap:HPβ-CD apresentaram um perfil de liberação semelhante, com efeitos burst em torno de 40% nas primeiras 4 h e velocidades de liberação em torno de 200 μg/h. Na atividade antimicrobiana evidenciou-se que a β-lap e β-lap:HPβ-CD apresentaram a mesma atividade com MIC variando de 1-2 mg/L e MBC variando de 1-16 mg/L frente às bactérias e MIC < 2 mg/L e MFC < 4 mg/L frente ao Cryptococcus neoformans. As formulações convencionais neutras mostraram-se inativas ou menos eficazes quando comparadas às demais formulações desenvolvidas. No estudo de citotoxicidade foi possível observar que a β-lap livre apresentou IC70 de 2,5 μM e os lipossomas apresentaram IC70 igual ou superior ao da molécula livre (2,5 μM, 3,3 μM ou 4,6 μM). A microscopia confocal revelou que a linhagem celular DU-145 exposta a β-lap apresentou alterações morfológicas como, por exemplo, figuras de mitose, condensação de cromatina, fragmentação nuclear, corpos apoptóticos e células gigantes. Neste contexto, a encapsulação de β-lap e complexo de inclusão β-lap:HPβ-CD em lipossomas pode futuramente permitir a utilização deste composto na terapia antibacteriana e antitumoral.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:32:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE MILENA FERRAZ.pdf: 2392331 bytes, checksum: 0f370019507d97e9bd0e3ba3f3322bda (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:32:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE MILENA FERRAZ.pdf: 2392331 bytes, checksum: 0f370019507d97e9bd0e3ba3f3322bda (MD5) Previous issue date: 2013-02 / MCTI; CNPq; CAPES; PROPESQ-UFPE / O presente estudo objetivou sintetizar um polímero sítio-específico de ácido d,l-láctico e glicólico (PLGA) conjugado ao polietileno glicol (PEG) e ao folato (FOL), desenvolver nanocápsulas furtivas e sítio-específicas contendo β-lapachona (β-lap), validar um método analítico simples, rápido e específico para quantificação da β-lapachona em plasma de ratos através da cromatografia líquida de alta eficiência e analisar o perfil farmacocinético da β-lap encapsulada em nanocápsulas em comparação ao fármaco livre. Primeiramente, o PLGA-PEG-FOL foi sintetizado com um percentual de conjugação de 97% e caracterizado por espectroscopia ¹H RMN e FTIR. A -lapachona foi encapsulada em nanocápsulas convencionais (NC/lap), PEGuiladas (NC-PEG/lap) e sítio-específicas (NC-FOL/lap), as quais foram preparadas pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado. As nanocápsulas foram caracterizadas por tamanho de partícula, índice de polidispersão, eficiência de encapsulação, potencial zeta e estudo de cinética de liberação in vitro. Os resultados demonstraram que o método de preparação permitiu a formação de nanocápsulas sítio-específicas nanométricas, monodispersas e com uma alta eficiência de encapsulação do fármaco. Uma redução do potencial zeta em módulo foi observada nas NC-PEG/lap e NC-FOL/lap em relação às NC/lap, provavelmente devido à presença do PEG e folato na superfície destes sistemas. Uma liberação de -lapachona em torno de 80% a partir das nanocápsulas foi alcançada em 24 h. No estudo de citotoxicidade celular frente às linhagens celulares KG-1 e HeLa, as nanocápsulas sítio-específicas exibiram um efeito antiproliferativo relevante quanto comparados ao fármaco livre. Para a validação do método analítico, empregou-se cromatografia em fase reversa com fase móvel constituída por mistura de metanol e água (80:20, v/v), a um fluxo de 0,9 mL/min. Os analitos foram detectados por UV a 256 nm. A β-lapachona foi extraída das amostras de plasma após adição de metanol. O tempo de retenção foi de 4,5 min. Este método apresentou linearidade na faixa de concentração entre 0,5-16 g/mL ( r = 0,9996), com limite de quantificação de 0,2 g/mL e exatidão de aproximadamente 100%. O método analítico desenvolvido neste trabalho demonstrou especificidade, linearidade, precisão e exatidão. O perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap foi avaliado e comparado ao da -lap livre, após injeção intraperitoneal (i.p.) em ratos. Os parâmetros farmacocinéticos foram estimados por uma abordagem não-compartimental utilizando equações clássicas. Neste estudo, as nanopartículas mostraram alterações significativas no perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap. Diante dos resultados obtidos, sugere-se que as nanocápsulas PEGuiladas e sítio-específicas contendo -lapachona poderão proporcionar um maior benefício terapêutico através de sistemas de longa duração e específico para células cancerosas.

Submitted by Heitor Rapela Medeiros (heitor.rapela@ufpe.br) on 2015-03-04T12:18:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação versão final para entrega maio.docx: 1590486 bytes, checksum: 617f0e398177213821335fd627d3a8fe (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T12:18:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação versão final para entrega maio.docx: 1590486 bytes, checksum: 617f0e398177213821335fd627d3a8fe (MD5) Previous issue date: 2012 / Este estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimicrobiana do lapachol, α-lapachona, β-lapachona e de cinco agentes antimicrobianos (ampicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, cefoxitina, ciprofloxacina e meropenem), frente a 12 cepas de Staphylococcus aureus, cujo fenótipo de resistência fora previamente determinado pelo método de difusão em meio sólido. Cinco cepas de S. aureus (LFBM 16, LFBM 26, LFBM 28, LFBM 31, LFBM 33) apresentaram resistência a todos os agentes antimicrobianos testados e foram selecionados para a segunda etapa do trabalho: avaliação da interação entre β-lapachona e agentes antimicrobianos, que foi realizado pelo método do tabuleiro de xadrez (checkerboard). Os critérios utilizados para esta avaliação, foram definidos pelos valores do Índice de Concentração Inibitória Fracionada (FICI). Entre as naftoquinonas avaliadas, a β-lapachona foi a mais eficaz. A combinação de β-lapachona com os agentes antimicrobianos resultou em uma redução ≥ 5 vezes o valor da CIM destes últimos. Os valores do Índice de Concentração Inibitória Fracionada (FICI) para as associações variaram de 0,07 a 0,5 sugerindo uma atividade sinérgica. A cinética bactericida da associação de β-lapachona e meropenem foi avaliada frente as cepas LFBM 01 e LFBM 26 de S. aureus multirresistentes. As drogas foram testadas sozinhas e em combinações de ½ e ¼ MIC para a β-lapachona e para o meropenem respectivamente. A associação dos antimicrobianos foi capaz de reduzir o crescimento das cepas de S. aureus LFBM 01 e LFBM 26 em 3,5 log10 UFC/mL após 12h; e esterilizou estas culturas em 24h. Este estudo demonstrou que a β-lapachona combinada com antimicrobianos beta lactâmicos, fluoroquinolonas e carbapenêmicos, agem sinergicamente, inibindo cepas de S. aureus multiresistentes.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-04-13T15:38:50Z No. of bitstreams: 1 versão final tese- versão da corrigida em 12-11-2014- para impressão e entrega.pdf: 3298946 bytes, checksum: 49c8459cd8f0cfb0e3f54792ca63367f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-05-10T16:19:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 versão final tese- versão da corrigida em 12-11-2014- para impressão e entrega.pdf: 3298946 bytes, checksum: 49c8459cd8f0cfb0e3f54792ca63367f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-10T16:19:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 versão final tese- versão da corrigida em 12-11-2014- para impressão e entrega.pdf: 3298946 bytes, checksum: 49c8459cd8f0cfb0e3f54792ca63367f (MD5) / CAPES / Medidas relativas aos espectros de Absorção da Albumina Sérica Bovina com variação do comprimento de onda de varredura entre 300 a 500nm demonstraram um aumento nas intensidades da banda de absorção da ASB, após adição de aliquotas dos ligantes (β- lapachonas, cumarinas e Rutinas), sobretudo em 280nm, que é o comprimento de onda de absorção característico dos dois resíduos de triptofano presentes na ASB. Medidas de Dicroísmo Circular confirmam a presença das bandas de absorção características dos resíduos de triptofano, cujos máximos de absorção estão em 208 e 222nm nas diferentes temperaturas estudadas. As modificações obtidas nos espectros de Dicroísmo Circular da ASB a partir da adição de alíquotas das espécies ligantes deram origem ao efeito ocorrido na disposição planar original da α-hélice presente na estrutura secundária da ASB. A emissão fluorescente de ASB nas temperaturas de 298K, 303K, 310K e para os sistemas ASB/β-lapachonas e ASB/rutinas e 288K, 293K, 298K para o sistema ASB/Cumarinas, mostrou um efeito supressivo sobre o espectro de emissão da ASB, sobretudo em 345 nm, emissão do resíduo de triptofano da ASB, após a adição dos ligantes. Os valores para os parâmetros termodinâmicos ΔGo, ΔHo, ΔSo para os sistema ASB/β-lapachonas, ASB/4-metil-7-hidroxicumarinas e ASB/Rutinas não sofreram grandes variações como uma função do ligante. A partir destes valores pode-se concluir que o tipo de interação predominante entre ASB/ligante foi hidrofóbica. A sobreposição entre os espectros de absorção do supressor e de emissão da ASB possibilitou determinar para cada par ASB/supressor a distância crítica de interação e o raio de Foster, os quais mostraram a probabilidade da existência do fenômeno de Transferência da Energia Ressonante de Fluorescência (FRET) em todos os casos. No sistema ASB/β-lapachona e ASB/3-Ácido sulfônico β-lapachona obtivemos respectivamente para um valor médio relativo as três temperaturas de trabalho, temos: R0= 2,69 nm em relação a r = 3,02 e R0 = 2,32nm em relação a r = 3,32. Já para o par 7-hidroxicumarina e 4-metil-7- hidroxicumarina, temos: R0= 3,53 e r = 3,83nm; R0= 3,70 nm e r = 4,33 nm. Por fim, no par ASB/Rutina e ASB/Rutina-metilada: R0= 3,43nm e r = 3,41nm; R0 = 3,14nm e r = 4,03nm. / Measurements relating to the absorption spectra in the wavelength range of 300 to 500nm scan demonstrated an increase in intensity of the absorption band of ASB upon addition of aliquots of ligands (β-lapachonas, coumarins and Rutinas), mainly 280nm, is the wavelength of the absorption characteristic of the two tryptophan residues present in the ASB. Circular Dichroism measurements confirm the presence of characteristic absorption bands of tryptophan residues, which are maximum at around 208nm and 222nm at different temperatures. The changes in the spectra obtained Circular Dichroism of ASB from the addition of aliquots of ligand species gave rise to the effect occurred in planar array of original α-helix present in the secondary structure of ASB. The fluorescent emission of ASB at temperatures of 298K, 303K, and 310K for the ASB / ASB and β-lapachonas / routines and 288K, 293K, 298K for the ASB / Coumarins system, systems showed a suppressive effect on the emission spectrum of ASB , especially at 345 nm, emission of the tryptophan residue of ASB, after the addition of binders. The values for the thermodynamic parameters ΔGo, ΔHo, ΔSo system for ASB / β-lapachonas, ASB / 4-methyl-7-hydroxycoumarins and ASB / Rutinas underwent no significant variations as a function of the ligand. From these values it can seconcluir that the predominant interaction between ASB / binder is hydrophobic. The overlap between the absorption spectra of the suppressor and issued by ASB allowed to determine for each pair ASB / suppressor critical distance the radius of interaction and Foster, that indicate the probability of the existence of the phenomenon Resonant Energy Transfer Fluorescence (FRET) in all cases. In ASB / β- lapachone and ASB / 3-sulfonic acid β-lapachone system obtained respectively for an average value for the three operating temperatures, we have R0 = 2.69 nm against air = 3.02 and R0 = 2, 32nm relative air = 3.32. As for the pair 7-hydroxycoumarin and 4-methyl-7- hydroxycoumarin, we have: r = R0 = 3.53 3,83nm; R0 = 3.70 and r = 4.33 nm nm. Finally, the pair ASB / rutin and ASB / Rutina-methylated: R0 = r = 3,43nm 3,41nm; R0 = 3,14nm and r = 4,03nm.

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Este bioativo apresenta múltiplos efeitos farmacológicos, como antibacteriano, antifúngico, antiviral, anti-inflamatório e anti-proliferativo. Segundo o sistema de classificação biofarmacêutica, a β-lapachona (BL ou β-lap) é classificada como classe II apresentando baixa solubilidade e alta permeabilidade. Desta forma, faz necessário um estudo de incremento de solubilidade aquosa. O objetivo deste trabalho foi caracterizar físico-quimicamente os complexos propostos utilizando dois polímeros: o dendrímero bis-MPA (DEN) e a cucurbit[6]urila (CUC). O presente estudo mostra duas metodologias para a formação de complexos entre a β-lapachona /dendrímero (BLD) e β-lapachona /cucurbiturila (BLC), visando o aumento da solubilidade deste fármaco através de interações intermoleculares e suas respectivas caracterizações físico-químicas. O complexo com o dendrímero foi preparado a partir de uma relação massa/massa de 3(fármaco):1 (carreador) variando o tempo de adsorção de 1, 3 e 7 dias. Para os complexos com a cucurbiturila uma relação molar 1:1 foi estabelecida para a formação dos complexos de inclusão com BL, variando o período de adsorção em 1, 3 e 7 dias. Após o período de agitação, os complexos BLD e BLC foram evaporados e secos a temperatura ambiente para posterior caracterização. Os complexos obtidos foram caracterizados por cromatografia líquida de alta eficiência, ultravioleta na região do visível, espectroscopia de absorção vibracional na região do infravermelho, espectrometria de ressonância magnética nuclear de hidrogênio, análise termogravimétrica, análise calorimétrica diferencial, difratometria de raio-X e microscopia eletrônica de varredura. Para o complexo BLD ficou evidente que a variação no tempo de adsorção não interferiu na quantidade de produto formado ou nas propriedades do complexo obtido. Os resultados das caracterizações mostram que o BLDD1 e o BLCD1 foram formados de acordo com os dados espectroscópicos e espectrométricos que demonstram variações nos sinais de BL quando complexado. Houve uma mudança na cristalinidade da BL, a qual era bastante cristalina, para um material mais amorfo com morfologia distinta do fármaco isolado. Os resultados das caracterizações térmicas exibiram, para os complexos, uma maior estabilidade térmica da β-lap complexada (BLDD e BLCD) e menor energia de fusão, quando comparado com β-lapachona livre. Essas informações também sugerem uma diminuição na cristalinidade do complexo o que é indicativo para o incremento de solubilidade. Desta forma propôs-se a caracterização físico-química como um indício de melhoria na solubilidade da β-lapachona através da formação de complexos entre BL e dois carreadores distintos e suas contribuições para estudos de uma possível formulação farmacêutica futura. / The β-naphthoquinone lapachol is a (3,4-dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphthol [1,2-b] pyran-5,6-dione) molecular weight of 243,3g / mol present in Tabebuia avellanedae Lor, tree known as purple ipe or pau d'purple bow. This naphthoquinone is a substance that can be obtained by semi-synthesis from lapachol well as lomatiol. This bioactive has multiple pharmacological effects such as antibacterial, antifungal, antiviral, anti-inflammatory and anti-proliferative. According to biopharmaceutical classification system, the β-lapachone (BL or β-LAP) is classified as class II presenting low solubility and high permeability. Thus, an increase aqueous solubility study is necessary. The aim of this study was to characterize chemically-physical proposed complexes using two polymers: the bis-MPA dendrimer (DEN) and cucurbit[6]uril (CUC). This study shows two methods for the formation of complexes between β-lapachone / dendrimer (BLD) and β-lapachone / cucurbituril (BLC), in order to increase the solubility of the drug through intermolecular interactions and their physicochemical characterizations. The complex with the dendrimer was prepared from a mass / mass 3 (drug): 1 (carrier) varying the time for adsorption of 1, 3 and 7 days. For cucurbituril complexes with a molar ratio of 1: 1 was established for the formation of inclusion complexes with BL varying the adsorption period at 1, 3 and 7 days. After the stirring period, the BLC and BLD complexes were evaporated and dried at room temperature for further characterization. The obtained compounds were characterized by high-performance liquid chromatography, ultraviolet into the visible region spectroscopy, vibrational absorption in the infrared, nuclear magnetic resonance spectrometry of hydrogen, thermogravimetric analysis, differential scanning calorimetry, X-ray diffraction and electron microscopy scanning. For BLD complex it was evident that the variation in the adsorption time not interfere in the amount of complex formed or the product properties obtained. The results of the characterizations show that BLDD1 and BLCD1 were formed in accordance with spectroscopic and spectrometric data showing variations in signals when complexed BL. There was a change in the crystallinity of the BL, which was very clear, to a more amorphous material with distinct morphology of the drug alone. The results showed the thermal characterizations for the complex, greater thermal stability of the complexed β-LAP (BLDD and BLCD) and less fusion energy, compared with β-lapachone free. This information also suggests a decrease in crystallinity of the complex which is an indication to increase solubility. Thus it was proposed to physicochemical characterization as a better indication of the solubility of β-lapachone by forming complexes between BL and two different carriers and their contributions to studies of possible future pharmaceutical formulation.

Quinones have been the subject of much interest due to their various biological activities, mainly as antitumor and as trypanocidal agents. Quinones are cytotoxic by two main mechanisms: the generation of ROS resulting in oxidative stress and alkylation of cellular nucleophiles, such as DNA and some enzymes such as topoisomerases. Their activity depends on bioreduction, similarly to what happens to nitroaromatic compounds. They also catalyze electron transfer reactions in biological processes and, after reduction generate radical anions (semiquinone radical anion and nitro), which depending on stability, can furnish their free electrons to acceptor molecules. In the present study, compounds with mixed functionalities derived from nor-β-lapachone, including a nitroaniline group were electrochemically studied in protic (acetate buffer) and aprotic (DMF+TBABF4, DMSO+TBAP and Acetonitrile+TBABF4) media, using glassy carbon and mercury as working electrodes. The compounds showed a complex redox behavior and the mechanism was elucidated using electron spin resonance. The electroreduced products of nor-β-lapachone and of the nitroquinones reacted with oxygen, indicative of the generation of reactive oxygen species, reactivity in the order of 2 > nor-β-lapachone > 3 > 1. We investigated their interaction with DNA, which was shown to be positive for nitroquinones and negative for the precursor nor-β-lapachone, in agreement with biological assays which had also shown that the nitroquinones cause DNA damage. The stability of the nitrosemiquinones, their half-life times were measured using mercury electrode, and the reaction rates for the electrochemical process-following-up-isproportionation reaction were measured. From these studies, a lower stability for the meta-substituted nitrophenylaniline (k2 = 5.188 x 103 L mol-1 s-1 and t1/2 = 0.06 s) was evidenced. Upon spectroelectrochemical reduction studies of the nitroquinones, the generation of radicalar intermediates (semiquinone radical anion and nitro radical anion) was observed, with differences between o- and m-derived compounds and the p-substituted one. To increase the solubility of the nitroquinones, in order to allow in vivo studies, the formation of inclusion complexes with β-cyclodextrin were evaluated. Positive results were obtained, leading to a viable formulation alternative for further biological studies with the compounds. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Quinonas despertam muito interesse devido às suas diversas atividades biológicas, principalmente como agentes antitumoral e tripanossomicida. A citotoxicidade de quinonas decorre de dois mecanismos principais: geração de EROs resultando no estresse oxidativo e alquilação de nucleófilos celulares, como o DNA e algumas enzimas, como as topoisomerases. Sua atividade depende de biorredução, similarmente ao que acontece com compostos nitroaromáticos. Eles também catalisam reações de transferência de elétrons biológicas e, após a redução geram ânions radicais (ânions radicais semiquinona e nitro), que dependendo da estabilidade, podem transferir seus elétrons livres a moléculas aceptoras. Neste trabalho, compostos de funcionalidade mista derivados da nor-β-lapachona, com um grupo nitroanilina, foram estudados eletroquimicamente nos meios prótico (tampão acetato) e aprótico (DMF + TBABF4, DMSO + TBAP e acetonitrila + TBABF4), utilizando carbono vítreo e mercúrio como eletrodos de trabalho. Os compostos apresentaram um comportamento redox complexo e o mecanismo elucidado por espectroeletroquímica. Os produtos da eletro-redução da nor-β-lapachona e nitroquinonas reagiram com oxigênio, indicativo da geração de EROs, na ordem de reatividade 2 > nor-β-lapachona > 3 > 1. Foi investigada a interação com DNA, que se mostrou positiva para as nitroquinonas e negativa para o precursor nor-β-lapachona, concordantes com ensaios biológicos que também evidenciou que as nitroquinonas causam dano ao DNA. A estabilidade do nitrosemiquinona, tempos de meia-vida e as taxas reacionais referentes à reação química de desproporcionamento acoplada ao processo eletroquímico para cada derivado foram determinadas usando eletrodo de mercúrio. A partir desses estudos, foi evidenciada a menor estabilidade para o nitrofenilamina meta-substituída (k2 = 15,188 x 103 L mol-1 s-1 and t1/2 = 0,06 s). Nos estudos por espectroeletroquímica das nitroquinonas, observou-se a geração de intermediários radicalares (ânions radicais semiquinona e nitro), com diferenças entre os nitroderivados o- e m-, assim como para o p- derivado. Com objetivo de aumentar a solubilidade das nitroquinonas, para posteriores estudos in vivo, foi avaliada a formação de complexos de inclusão com β-ciclodextrina. Foram obtidos resultados positivos, refletindo em alternativa viável para formulações posteriores com estes compostos e ensaios biológicos.